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2.1 to y Seleccion de Microorganismos

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TEMARIO

2 Métodos y tecnicas microbiologicas basicas 2.1 Aislamiento y seleccion de microorganismos 2.1.1 Reservorio de microorganismos 2.1.1.1 Agua, suelo y aire 2.1.1.2 Animales y plantas 2.1.1.3 Colecciones 2.1.2 Metodos y tecnicas de aislamiento y seleccion 2.1.2.1 Estria en placa 2.1.2.2 Vertido en placa 2.1.2.3 Extension en placa con varilla de vidrio 2.1.2.4 Enriquecimiento poblacional 2.1.2.5 Diluciones en serie 2.1.2.6 Micromanipulacion 2.1.2.7 Otros 2.1.3 Seleccion de microorganismos de interes industrial screening 2.2 Cultivo de microorganismos 2.2.1 Clasificacion de los microorganismos con base a sus requerimientos nutricionales 2.2.2 Tipos de nutrientes 2.2.2.1 Macronutrientes 2.2.2.2 Micronutrientes 2.2.2.3 Factores de crecimiento 2.2.3 Medios de cultivo 2.2.3.1 Evolucion y clasificacion de los medios de cultivo 2.2.3.2 Preparacion de medios de cultivo 2.2.4 Metodos de cultivo 2.2.4.1 Cultivo mixto 2.2.4.2 Cultivo puro o axénico 2.2.4.3 Cultivos en ambiente controlado 2.2.5 Esterilizacion y asepsia 2.2.5.1 Conceptos e importancia 2.2.5.2 Metodos de esterilizacion 2.2.5.3 Muerte termica valores D y Z 2.3 Criterios utilizados en la identificacion de microorganismos 2.3.1 Caracteres morfologicos y fisiologicos 2.3.2 Pruebas bioquimicas 2.3.3 Caracteres quimiotaxonomicos 2.3.4 Antigenos microbianos 2.3.5 Caracteres geneticos 2.4 Preservacion de microorganismos 2.4.1 Objetivos de la preservacion 2.4.2 Concepto y utilidad del cepario 2.4.3 Metodos de mantenimiento y preservacion y su viabilidad

1. Agua El agua es un amiente donde existen diferentes microorganismos y cada uno de ellos realizan diferentes actividades en el ambiente. Llamaremos por agua a los ambientes acuáticos a todas las extensiones de agua presentes en el globo terráqueo: mares.1. Cada especie de cada microorganismo se encuentra en diferentes ambientes donde existen las condiciones necesarias para su crecimiento: agua.1 RESERVORIO DE MICROORGANISMOS 2.2. Distribución de los Microorganismos Plancton Es una forma de vida flotante y a la deriva en extensiones de agua. También.1. que son todas las algas. Suelo y Aire Diversidad en Ambientes Raramente podemos encontrar a los microorganismos como cultivos puros. ríos. Son móviles debido a las características de flotación que presentas. así mismo. por lo que también las técnicas de aislamiento será diferente para cada ambiente y para cada especie de microorganismo. también son instrumentos en el proceso de reciclaje de elementos presentes en el agua. Microorganismos Bentónicos Esta clase de microorganismos habitan en el fondo de una masa grande de agua y ésta a su vez es la región más rica en microorganismos de un estuario marino puesto que contiene millones de microorganismos por gramo de agua. los microorganismos forman parte esencial en la cadena alimenticia. algunas de ellas están cubiertas por gotas de aceite o simplemente por la estructura que presenta. lo constituyen los protozoos y los animales vivos diminutos. . Existen dos grupos principales: fitoplancton.1 Agua.1 Aislamiento y Selección de Microorganismos 2. aguas residuales. aguas domésticas. y el zooplancton. El Papel de los Microorganismos Algas:    Son productores primarios Predominan en el fitoplancton Por fotosíntesis cambian energía radiante en compuestos químicos. etc. suelo y aire. arroyos.

Protozoos: • •  Se alimenta del fitoplancton Evita la luz y hace migraciones diurnas Presentes en la región del zooplancton Plancton: › › › › Fuente de alimento de peces. . ballenas. N2 orgánico y de compuestos de fósforo. Crecimiento dependiente de energía radiante. Capacidad de producir materia orgánica ”fertilidad delos océanos”. Producen color característico de algunos mares. calamares. CO2.

sin embargo.Suelo El suelo es otro de los ambientes donde abundan los microorganismos. al realizar un cultivo muestra sólo se puede recuperar un pequeño sector de todos los miles de microorganismos presentes. Es por ello que se requiere de muchos estudios para conocer y clasificar a los microorganismos. algas. . Los microorganismos principalmente realizan los cambios de materia mediante un proceso bioquímico: cambios químicos de compuestos orgánicos e inorgánicos y los procesos cíclicos del ciclo del nitrógeno y la fijación del nitrógeno. Bacterias. Esta es una labor extenuante porque. existe un gran número de microorganismos por cada gramo de suelo. protozoos y virus son abundantes y se presentan en cantidades de miles de millones de organismos por gramo de suelo. todos estos cambios. Debido a la gran diversidad de microorganismos. Debido a que en este medio se depositan diversos residuos. son modulados y controlados por diferentes clases de microorganismos. como ya mencionamos. ocurren cambios en la naturaleza y ambiente. hongos.

bacterias y nódulos= sistema de fijación.Fijación de Nitrógeno  Transformación del N2 atmosférico en nitrógeno de un compuesto.  Microorganismos no simbióticos: › Viven libres en independientes en el suelo › Microorganismos simbióticos: — Viven en raíces de algunas plantas — Bacterias del género Rhizobium — Se establecen en las células de hospedador (raíz) — Fijación Simbiótica del Nitrógeno  Células aumentan tamaño formando nódulos  Leguminosas. Aire .  Bacterias hacen el nitrógeno aprovechable por la planta  Bacterias utilizan nutrientes de los tejidos de la planta.

La cantidad de microorganismos presentes en el aire está en función de las fuentes de contaminación y la sobrevivencia de los microorganismos está definida por las condiciones atmosféricas. a mayor número de personar la cantidad de microorganismos también aumentará. pero también encontramos a los que están relacionados o qué la sobrevivencia depende de la relación microorganismo-animal. agrícolas y domésticas. humedad. ya sea en forma de gotitas o acompañadas de polvo. generalmente los microorganismos son depositados en el aire en pequeñas gotitas que fluyen de la nariz y la boca. Debido a la alimentación de cada animal. Atmósfera El contenido microbiano estará definido por partícula de polvo proveniente del suelo. Contenido microbiológico del Aire Dentro de los edificios Está influido por las corrientes de ventilación.1. agentes contaminantes generados por actividades industriales. alguna curables y otras no. luz solar y temperatura. Acá los microorganismos no cuentan con las condiciones necesarias para su crecimiento ni reproducción sino sólo servirá como vehículo o medio de transporte que las esparcirá por los diferentes ambientes. 2. También dependerá del número de personas dentro del edificio. gotas de agua provenientes de masas de agua. algunos son dañinos para la salud produciendo enfermedades.2 Animales y Plantas Animales En los animales también podemos encontrar diferentes microorganismos. estas partículas micrométricas quedan en el aire que posteriormente se desplazarán por la presencia de corrientes de aire y las partículas más grandes quedarán fijadas en el. se dice que estos no pueden sobrevivir con preses pequeñas en relación a su tamaño: microorganismos. Las esporas de hongos son las más abundantes en este ambiente.Este ambiente es distinto de los anteriores. Los microorganismos que habitan en los animales generalmente son hospedadores de los tractos intestinales donde estos microorganismos contribuyen a la digestión y algunos a la producción de vitaminas y los desechos de los animales forman parte del ciclo del nitrógeno donde nuevamente los microorganismos desempeñan un papel importante. poco número de personas indica que también habrá poco número de microorganismos. .

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algunos tienen interacciones negativas. las plantas también tienen influencia de los microorganismos: el reciclado y la solubilización de los nutrientes minerales. Plantas Las plantas son un habitad microbiano que varia dependiendo de la temperatura de las plantas a lo largo del día como del año. citoquinas y giberelinas.No todos los microorganismos son benéficos para los animales. Los microorganismos no se transfieren fácilmente de planta a planta y éstos se hospedan principalmente en las raíces de la misma donde realizan las funciones simbióticas. aminoácidos. así como los microorganismos se benefician con las plantas. síntesis de sustancias alelopáticas (antagónicas) inhiben crecimiento de otras plantas. Los microorganismos satisfacen sus requerimientos básicos para su crecimiento y reproducción. alteraciones en los alimentos (bioacumulación). las que alteran el habitad: Eutroficación: agota el oxígeno disuelto y puede provocar la muerte de los peces. síntesis de vitaminas. auxinas. . Existen las depredaciones por hongos y nematodos. la producción de toxinas y las que causan infecciones.

1.1. . al aislamiento de un microorganismos en un medio de cultivo se le conoce como cultivo puro. Los cultivos puros se pueden lograr por diferentes técnicas de muestreo y aislamiento. etc.2 MÉTODOS Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO Y SELECCIÓN Una vez conocidos los habitad de los microorganismos. nutrientes requeridos. haciendo estrías con una aguja enmangada o con una asa bacteriológica.1 Estría en Placa. temperatura para el crecimiento y reproducción.2. 2. El inóculo se siembra sobre la superficie de un medio del tipo del agar nutritivo.2. El método más utilizado es por cuadrantes (ya sea por dilución o conservación). También es menester mencionar que se debe tener cuidado en contar con las condiciones adecuadas para el crecimiento de las bacterias: pH. en una caja Petri. podemos extraer algunos de ellos para su estudio.

2.2. . Puede utilizarse la misma varilla de vidrio para inocular una segunda placa para asegurar una adecuada “dispersión” de las células.3 Extensión en Placa con Varilla de Vidrio Se coloca una gota de inóculo en el centro de una caja petri con un medio del tipo agar nutritivo y utilizando un tubo de vidrio doblado o con un asa Diralsky se extiende el inóculo sobre la superficie del medio.1. posteriormente son vaciadas en cajas petri. Algunas de las colonias crecerán en la superficie del medio después del periodo de incubación. 2.1.2 Vertido en Placa El inóculo se deposita en mezclas de agar fundido.2. En algunas cajas aparecerán colonias aisladas.

por extensión en placa o en masa. pasando el inóculo a través de una serie de transferencias.2.1. se puede sembrar por estría.2. El procedimiento de enriquecimiento aumenta en efecto la proporción del organismo deseado en relación con la que estaba presente en el inóculo inicial. mientras se .2.6 Micromanipulación Mediante un micromanipulador se puede usar una micropipeta para obtener un solo microorganismo de una suspensión de células en un líquido.1.5 Diluciones en Serie Esté método permite reducir la concentración de los microorganismos cuando éste crezca demasiado. 2.1.2. Este es uno de los métodos mas sencillo y barato y se pueden obtener un número definido de colonias.4 Enriquecimiento Poblacional Para mejorar la probabilidad de aislar un organismo que posee una característica fisiológica o bioquímica única. a un medio de una composición (y condiciones de incubación) que favorezcan el desarrollo del microorganismo deseado. 2.

  Screening Primario: potencialmente útiles. Por ejemplo. fermentaciones naturales. aireación.3 SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL: SCREENING Detección y aislamiento de microorganismos de interés industrial de entre una población compleja de organismos utilizando procedimientos selectivos. fuente de nitrógeno. A este medio se le pueden añadir inhibidores para eliminar los que no nos interesan. pH e inhibidores. antibiótico que actúa frente a bacterias pero que no afecta a los hongos. Posteriormente se reaíslan en cultivo puro aquellos microorganismos que hemos aislado para su posterior estudio. temperatura. Para llevar a cabo un screening primario generalmente se parte de una población mixta (suelo. Micromanipulador 2.1. Para ello lo primero que hacemos es utilizar medios selectivos donde crezca el tipo de microorganismo que nos interesa aislar.examina la preparación con el microscopio. añadiríamos cloranfenicol. La célula aislada es luego transferida a un medio estéril. . Los parámetros generales que tenemos que tener en cuenta son la fuente de carbono. si queremos obtener un microorganismo aerobio lo creceríamos en presencia de O2 con lo que los anaerobios no crecerían. Detección y aislamiento de microorganismos Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening primario para separar los que tienen interés potencial de los que tienen interés real y mejorar estas cepas seleccionadas. etc.) donde existe tanto una gran cantidad como variedad de microorganismos potencialmente útiles que debemos seleccionar. o bien si queremos seleccionar hongos.

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