ENZIMATICA

T
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m
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1
0

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c
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E
n
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c
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s
1
OCW Rubn Lpez Fonseca Departamento de Ingeniera Qumica Universidad del Pas Vasco/EHU
TEMA 10.
REACCIONES ENZIMTICAS
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1
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c
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s
2
FUNDAMENTOS DE LAS
Enzimas: protenas de elevado peso molecular (10
4
-10
6
g mol
-1
)
sintetizados por los organismos vivos
Catalizadores efectivos a concentraciones bajas (10
-5
-10
-10
mol l
-1
)
Son capaces de catalizar reacciones bioqumicas/biolgicas
Elevadas velocidades de reaccin 10-10.000 molculas enz
-1
s
-1
)
Elevada selectividades 100% (controlan la formacin de
productos no deseados)
Son sintetizadas in vitro o extradas de su fuente biolgica
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s
3
FUNDAMENTOS DE LAS
Oxireductasas catalizan reacciones redox
Transferasas transfieren grupos funcionales
Hidrolasas catalizan reacciones de hidrlisis
Liasas rompen enlaces C-O, C-C y C-N
Isomerasas reagrupan grupos funcionales
Ligasas juntan dos molculas
Se nombran en trminos de la reaccin que catalizan. Se aade el
sufijo asa al nombre del sustrato sobre el que la enzima acta
(ureasa) o al nombre del tipo de reaccin que cataliza (hidrolasa))
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s
4
FUNDAMENTOS DE LAS
Funcionan en condiciones suaves de temperatura (25-70 C) y pH (4-9)
En condiciones severas pueden desnaturalizarse (alteracin o
modificacin de los centros activos)
Difcil y cara separacin del producto heterogeneizacin del proceso
Tipos de especificidades enzimticas
De accin cada enzima slo puede llevar a cabo un tipo de
transformacin qumica
De sustrato
Absolutamente especficos Slo reaccionan con un nico substrato
Especficos funcionales Actan sobre molculas similares que tienen el
mismo grupo funcional
Especficos de enlace Transforman un tipo especfico de enlaces
Especficos estereoqumicos Distinguen entre ismeros pticos (D L)
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s
5
MECANISMO DE LAS
En una reaccin catalizada por un enzima:
1. La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato
2. El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada
centro activo
3. Se forman los productos y el enzima ya puede comenzar un nuevo
ciclo de reaccin
Enzima + Sustrato
Enzima-Sustrato
Producto + Enzima
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s
6
I. ENZIMA SOLUBLE SUSTRATO SOLUBLE
CATLISIS ENZIMTICA HOMOGNEA
II. ENZIMA INSOLUBLE SUSTRATO SOLUBLE
CATLISIS ENZIMTICA HETEROGNEA
(unin de grupos enzimticos a superficies slidas)
TIPOS DE REACCIONES ENZIMTICAS
Cintica de
Reacciones
Biolgicas
Orden cero
independiente de la concentracin de sustrato
Orden uno
directamente proporcional a la concentracin de sustrato
Combinacin de ambas
ecuacin de Michaelis-Menten
T
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0

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s
7
CINTICA ENZIMTICA HOMOGNEA
CINTICA DE MICHAELIS MENTEN
Las reacciones enzimticas pueden considerarse como no elementales
1
-1
k
k
Z + S ZS

2
k
ZS Z + P
enzima Z
S P
S: sustrato
Z: enzima
P: producto
1
-1
k
k
Z + S ZS

2
k
ZS Z + P
ZS
1 Z S -1 ZS 2 ZS
dC
= 0 = k C C - k C - k C
dt
1 S Za
ZS
1 S -1 2
k C C
C =
k C + k + k
Concentracin total de enzima activa
Za Z ZS
C = C + C
T
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1
0

R
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8
1 2 S Za 2 S Za
2 ZS
1 S -1 2 M S
k k C C k C C
r = k C = =
k C + k + k K + C
-1 2
M
1
k + k
K =
k
CONSTANTE DE
MICHAELIS-MENTEN
2 Za S
M
k C C
r =
K
S m
C << K
Si Orden 1
2 Za
r = k C
Si
S m
C >> K
Orden 0
2 S Za
m S
k C C
r =
K + C
S
C
mx
r = r
2 Za mx
r = k C
S mx
M S
r C
r =
K + C
ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
T
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m
a

1
0

R
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c
c
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n
e
s

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n
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m
t
i
c
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s
9
DETERMINACIN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN
S mx
M S
S mx
S
m
m x S
x
r C
K = - C =
r
r C
= - C
(para r = r
=
r 2
= C 2)
tiempo
v
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n
r
mx
r
mx
/2
K
m
Orden 1
Orden 0
tiempo
v
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n
r
mx
r
mx
/2
K
m
Orden 1
Orden 0
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a

1
0

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c
c
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s

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s
10
S mx
M S
r C
r =
K + C
M
S mx mx
K 1 1
= +
r r C r
Representacin de
Lineweaver-Burk
S S M
mx mx
C C K
= +
r r r
Representacin de
Hanes
mx
S M M
r r r
= -
C K K
Representacin de
Eadie-Hofstee
r
mx
Es la mxima velocidad que puede alcanzar esta reaccin
K
M
Es la concentracin de sustrato para la cual la reaccin alcanza la
mitad de la velocidad mxima (velocidad semimxima)
Es caracterstica para cada enzima y cuanto menor sea su valor,
mayor afinidad tendr la enzima por el sustrato, ya que
alcanzar antes la velocidad semimxima
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m
a

1
0

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c
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11
1
/
r
1/C
S
pdte.=K
M
/r
mx
1/r
mx
-1/K
M
1
/
r
1/C
S
pdte.=K
M
/r
mx
1/r
mx
-1/K
M
M
S mx mx
K 1 1
= +
r r C r
Representacin de
Lineweaver-Burk
T
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1
0

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c
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c
a
s
12
S S M
mx mx
C C K
= +
r r r
Representacin de
Hanes
C
S
/
r
C
S
pdte.=1/r
mx
r
mx
K
M
/r
mx
-K
M
T
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m
a

1
0

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c
c
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s

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s
13
mx
S M M
r r r
= -
C K K
Representacin de
Eadie-Hofstee
1
/
r
C
S
pdte.=-K
M
r
mx
r
mx
/K
M
T
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m
a

1
0

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c
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s
14
Constantes de Michaelis-Mentes para algunos sistemas enzima-sustrato
0,049 Bencilpenicilina
Bacillus
licheniformis
Penicilinasa
6,1 Sacarosa Neuspora crassa
9,1 Sacarosa
Saccharomyces
cerevisiae
Invertasa
9,6 D-Glucosa
Penicillium
notatum
33,0 D-Glucosa Aspergillus niger
Glucoxidasa
3,85 Lactosa Escherichia coli B-Galactosidasa
0,07 Amilosa Patata B-Amilasa
13,0 Etanol
Saccharomyces
cerevisiae
Deshidrogenasa
K
M
, mmol l
-1
Sustrato Fuente Enzima
T
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m
a

1
0

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c
c
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n
e
s

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m
t
i
c
a
s
15
a
0
E 1
lnk = - + lnA
R T
a
0
E
k(T) = A exp -
RT
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
Dependencia de la velocidad de reaccin con la temperatura
l
n
k
1/T, K
-1
Desnaturalizacin de
la enzima a temperaturas altas
Relacin de Arrhenius
l
n
k
1/T, K
-1
Desnaturalizacin de
la enzima a temperaturas altas
Relacin de Arrhenius
A
c
t
i
v
i
d
a
d

e
n
z
i
m
t
i
c
a
Temperatura
Temperatura ptima
Desnaturalizacin
de la enzima
A
c
t
i
v
i
d
a
d

e
n
z
i
m
t
i
c
a
Temperatura
Temperatura ptima
Desnaturalizacin
de la enzima
T
e
m
a

1
0

R
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c
c
i
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n
e
s

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n
z
i
m
t
i
c
a
s
16
Para producir una crema de proteccin solar se utiliza una reaccin
enzimtica llevada a cabo en un reactor discontinuo, en el que se
mide la concentracin de sustrato como funcin del tiempo en un
ensayo en el que C
S
0
= 40 mmol l
-1
. Determinar la ecuacin cintica.
enzima Z
S P
0 40
1 32,7
2 25,9
4 13,6
6 4,8
8 0,98
t, h C
S
, mmol l
-1
10 0,15
EJEMPLO (I)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
17
Supongamos que n = 0
0
0
S
S
S S
dC
- = kC = k
dt
C = C - kt
Supongamos que n = 1
0
S
S
S S
dC
- = kC
dt
ln(C C ) = kt
tiempo, h
5
15
25
35
45
2 4 6 8 10
C
S
,

m
m
o
l
l
-
1
No orden 0
l
n
(
C
S
0
/
C
S
)
1
2
3
4
5
6
2 4 6 8 10
tiempo, h
No orden 1
EJEMPLO (I)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
18
Supongamos cintica de Michaelis-Menten
S mx
M S
r C
r =
K + C
S S M
mx mx
C C K
= +
r r r
C
S
, mmol l
-1
(-r
S
), mmol l
-1
h
-1
40 7,49
32,7 7,13
25,9 6,66
13,6 5,19
4,8 2,80
0,98 0,74
0,15 0,12
EJEMPLO (I)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
19
1
2
3
4
5
6
10 20 30 40
C
S
, mmol l
-1
C
S
/
(
-
r
S
)
,

h
0
SOLUCIN
pdte. = 1/(r
mx
) =
= 0,103 h
-1
l mmol
1
r
mx
= 9,67 mmol h
-1
l
-1
o.o. = 1,222 h = K
M
/(r
mx
)
K
M
= 11,82 mmol l
-1
0 10 20 30 40
C
S
, mmol l
-1
(
-
r
S
)
,

m
m
o
l
l
-
1
h
-
1
1
3
5
7
9
r
mx
= 9,67 mmol h
-1
l
-1
K
M
= 11,82 mmol l
-1
r
mx
/2
S S M
mx mx
C C K
= +
r r r
S mx
M S
r C
r =
K + C
EJEMPLO (I)
T
e
m
a

1
0

R
e
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c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
20
DESACTIVACIN (INHIBICIN) ENZIMTICA
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima, se
denominan inhibidores
Existen dos tipos de inhibicin
Irreversible Cuando el veneno metablico se une
covalentemente a la enzima alterando su
estructura e inutilizndola de forma permanente
Reversible Es una inhibicin temporal. Una vez retirado el
inhibidor la enzima recupera su actividad. El inhibidor
se une por enlaces no covalentes y puede ocupar el
centro activo por semejanza estructural con el
sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alterar
la conformacin espacial del enzima, impidiendo su
unin al sustrato (inhibidor no competitivo)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
21
CINTICA DE DESACTIVACIN (INHIBICIN) ENZIMTICA
Velocidad de
desactivacin
No depende de
S depende de
Estructura de la enzima
Naturaleza de la reaccin
pH y temperatura del medio
Fuerza inica
Presencia de agentes desnaturalizantes
(metales, disolventes)
Modelo de desactivacin
activa inactiva
Z Z primer orden
Za
d d Za
dC
r = - = k C
dt
0
Za Za d
C = C exp(-k t)
0 0
2 Za 2 Za d d mx mx
r = k C = k C exp(-k t) = r exp(-k t)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
22
En determinadas condiciones, la enzima del ejemplo anterior se
desactiva, siendo su vida media de 4,9 horas. Determinar el tiempo
necesario para lograr una conversin del 85% y comparar este
resultado con el correspondiente en ausencia de desactivacin.
0
Za Za d
C = C exp(-k t)
0
1/2 Za Za
t =T C = C 2
-1
d 1/2
k = ln2 T = 0,141 h
S S mx
S
m S
r C dC
-r = - =
dt K + C
0
d mx mx
r = r exp(-k t)
0
d S mx
S
m S
r exp(-k t)C
dC
- =
dt K + C
0 0
0 0
S S S
m
d
d S mx mx
C C - C
K 1
t = - ln 1 - k ln +
k r C r
( ( ( (
| | | | | | | |
( ( ( (
| | | |
| | | |
( ( ( (
\ \ \ \

EJEMPLO (II)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
23
S
X = 0,85
0
S S S
C = C (1- X )
-1
S
-1
C = 40 mmol l (1 - 0,85) =
= 6 mmol l
0 0
0 0
S S S
m
d
d S mx mx
C C - C
K 1
t = - ln 1 - k ln +
k r C r
( ( ( (
| | | | | | | |
( ( ( (
| | | |
| | | |
( ( ( (
\ \ \ \

r
mx
= 9,67 mmol h
-1
l
-1
K
M
= 11,82 mmol l
-1
t = 12,7 horas
5
15
25
35
45
2 4 6 8 10
tiempo, h
C
S
,

m
m
o
l
l
-
1
Sin desactivacin
6 mmol l
-1
5,6 horas
EJEMPLO (II)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
24
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
COEFICIENTES o FACTORES DE PRODUCCIN
La estequiometra del crecimiento celular es muy compleja y vara en
funcin de: sistema microorganismos/nutrientes, pH, temperatura, ...
En las reacciones
biolgicas
Sustrato Productos
Clulas + Sustrato Ms Clulas + Productos

C/S P/S
Sustrato Y + Y
C/S
masa de nuevas clulas formada
Y =
masa de sustrato consumida para producir clulas nuevas
P/S
masa de producto formado
Y =
masa de sustrato consumida para formar producto
C/S
P/S
Y
Y
Coeficientes o Factores
de produccin
Anlogos al concepto de selectividad
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
25
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
COEFICIENTES o FACTORES DE PRODUCCIN
EVALUACIN DE LOS COEFICIENTES DE PRODUCCIN
C/S P/S
Sustrato Y + Y
C
S
P
C
P
S
P/C
masa de producto formado
Y =
masa de nuevas clulas formada
C/S
dC
Y =-
dS
P/C
dP
Y =
dC
P/S
dP
Y =-
dS
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
26
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
CINTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR
Evolucin de la
concentracin de
clulas vivas
(reactor discontinuo)
tiempo
l
n
(
c
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
d
e

c
l
u
l
a
s
)
INICIACIN
CRECIMIENTO
ACELERADO
CRECIMIENTO EXPONENCIAL
CRECIMIENTO
DECELERADO
CRECIMIENTO ESTACIONARIO
MUERTE
tiempo
l
n
(
c
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
d
e

c
l
u
l
a
s
)
INICIACIN
CRECIMIENTO
ACELERADO
CRECIMIENTO EXPONENCIAL
CRECIMIENTO
DECELERADO
CRECIMIENTO ESTACIONARIO
MUERTE
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
27
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
El metabolismo de las clulas
depende de la accin conjunta de
una multitud de enzimas
La ecuacin del crecimiento de las
clulas similar a la de procesos
enzimticos
Fase I: Iniciacin o Latencia
Adaptacin de las clulas al medio
Sntesis de enzimas
Comienza la reproduccin
Velocidad de crecimiento nulo
Fase II: Crecimiento Exponencial
Divisin de las clulas con rapidez
mxima
Aprovechamiento ptimo de los
nutrientes
Velocidad de crecimiento es proporcional
a la concentracin de las clulas
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
28
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
Fase III: Estacionaria o de
estancamiento
Limitacin del crecimiento celular
por escasez de nutrientes
Acumulacin de inhibidores
Velocidad de crecimiento nulo
Fase IV: Fase de Muerte
Formacin de subproductos txicos
Agotamiento de nutrientes
Disminucin en la concentracin de
clulas vivas
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

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n
z
i
m
t
i
c
a
s
29
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
CINTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR (Fase II)
Clulas + Sustrato Ms Clulas + Productos
biomasa
biomasa biomasa
dC
r = = kC
dt
0
biomasa biomasa
C = C exp(kt)
k: constante de velocidad de
crecimiento
S
mx
s S
C
k = k
K + C
k
mx
: constante de velocidad de crecimiento en exceso de nutrientes
C
S
: concentracin de sustrato (limitante)
K
S
: constante de Monod
S S mx
biomasa biomasa mx
s S s S
r C C
r = k C =
K + C K + C
ECUACIN DE
MONOD
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
30
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
S S mx
(r = r K = C 2)
DETERMINACIN DE LA CONSTANTE DE MONOD
En muchas ocasiones K
S
(K
S
<<C
S
)
mx
k = k
biomasa
biomasa
biomasa mx
dC
r = - =
dt
= k C
0
biomasa biomasa mx
C = C exp(k t)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
31
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
Constantes de Monod para algunos microorganismos
Potsio
Oxgeno
1,410
-7
Tiamina Cryptococcus
0,39
0,4 Dixido de carbono
Klebsiella
0,042-0,045
4,5 Glicerol
Cundida
5,0 Glucosa Aspergillus
4,0
1,6
Glucosa
Fosfato
Escherichia
25 Glucosa Saccharomyces
K
S
, mg l
-1
Sustrato limitante Microorganismo
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
32
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
CINTICA DE LA MUERTE DE CLULAS (Fase IV)
Importancia de la determinacin
de la cintica de muerte de clulas
Procesos de esterilizacin
Procesos biotecnolgicos en medios letales
Procesos de muerte natural
Procesos de muerte debido a un sustancia txica
C
d d t t C
dC
r = - = (k + k C )C
cintica de primer
dt
orden
C
C
: concentracin de clulas (biomasa)
k
d
: constante de velocidad de muerte
natural
k
t
: constante de velocidad de muerte
provocada
C
t
: concentracin de sustancia txica
En muchas ocasiones k
d
<< k
t
C
t
C
d t t C
dC
r = - = k C C
dt
0
C C t t
C = C exp(-k C t)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
33
CINTICA EN CULTIVOS
DE CLULAS BIOLGICAS
CINTICA DE LA MUERTE DE CLULAS (Fase IV)
Energa de activacin 250-290 kJ mol
-1
Elevada dependencia de k
t
con la temperatura
( (( ( ) )) )
0
C C t t
ln C C = -k C t
l
n
(
C
C
/
C
C
0
)
tiempo
Temperatura
l
n
(
C
C
/
C
C
0
)
tiempo
l
n
(
C
C
/
C
C
0
)
tiempo
Temperatura
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
34
CINTICA DE REACCIONES
ENZIMTICAS HETEROGNEAS
PREPARACIN DE CATALIZADORES HETEROGNEOS ENZIMTICOS
(BIOCATALIZADORES INMOVILIZADOS)
Consiste en atrapar las clulas o enzimas dentro de un slido poroso
(gel, cermica, vidrio, resina)
CLULAS/ENZIMAS
ATRAPADAS EN UN GEL POROSO
Enzima/clula
inmovilizada
Partcula de
gel
Enzima/clula
inmovilizada
Partcula de
gel
CLULAS/ENZIMAS SOPORTADAS
SOBRE UN SLIDO POROSO
Matriz slida
del soporte
Poro
Enzima/clula
Matriz slida
del soporte
Poro
Enzima/clula
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
35
CARCTERSTICAS DE LOS CATALIZADORES
HETEROGNEOS ENZIMTICOS
Su actividad est relacionada con la cantidad de clulas o enzimas
por unidad de volumen de catalizador
Importancia de los procesos de transferencia de materia en el
exterior e interior de las partculas
Permite operar en continuo
Mejora de la estabilidad de las enzimas
Facilita la separacin de los productos
Similitud de su estudio con respecto a los catalizadores slidos
heterogneos
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
36
ETAPAS EN EL MECANISMO
Son etapas en serie (consecutivas)
1. Los reactivos pasan desde la fase fluida hasta la superficie
externa del slido, por difusin
2. Los reactivos pasan desde la superficie de la partcula hasta el
interior de los poros, por difusin
3. Etapas de reaccin bioqumicas
4. Los productos salen por difusin desde el interior de los poros
hasta la superficie exterior de la partcula
5. Los productos se difunden desde la superficie externa de la
partcula hasta la fase fluida
Ntese que las etapas de este tipo de reacciones son muy similares que las etapas de las
reacciones heterogneas con un catalizador soportado inorgnico, analizadas en el Tema 7.
Adems de las peculiaridades intrnsecas de los catalizadores biolgicos descritas anteriormente,
las reacciones enzimticas heterogneas son reacciones fluido-slido (enzimas soportadas) en las
que el fluido (reactivos) generalmente es un lquido.
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
37
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

d
e

l
a

p
e
l
c
u
l
a

e
s
t
a
n
c
a
d
a
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

e
x
t
e
r
i
o
r

d
e

l
a

p
a
r
t
c
u
l
a
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

i
n
t
e
r
n
a

d
e

l
a

p
a
r
t
c
u
l
a
Flujo principal
Difusin
externa
Difusin
externa
Capa lmite
Difusin
interna
Difusin
interna
Partcula
1 2
Centro activo
R
e
a
c
c
i
n
3
4 5
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

d
e

l
a

p
e
l
c
u
l
a

e
s
t
a
n
c
a
d
a
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

e
x
t
e
r
i
o
r

d
e

l
a

p
a
r
t
c
u
l
a
S
u
p
e
r
f
i
c
i
e

i
n
t
e
r
n
a

d
e

l
a

p
a
r
t
c
u
l
a
Flujo principal Flujo principal
Difusin
externa
Difusin
externa
Capa lmite
Difusin
interna
Difusin
interna
Partcula
1 2
Centro activo
R
e
a
c
c
i
n
3
Centro activo
R
e
a
c
c
i
n
3
R
e
a
c
c
i
n
3
4 5
ETAPAS 1 / 2 / 4 / 5 etapas fsicas (transferencia de materia)
difusin externa e interna de reactivos y productos
ETAPA 3 etapas (bio)qumicas
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
38
GAS
CATALIZADOR
PORO
1
2
3
5
6
CAPA LMITE
DE DIFUSIN
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
posicin
REACTIVOS
PRODUCTOS
GAS
CATALIZADOR
PORO
1
2
3
5
6
CAPA LMITE
DE DIFUSIN
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
posicin
REACTIVOS
PRODUCTOS
DE LA REACCIN
ENZIMTICA HETEROGNEA
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
39
De acuerdo con las etapas que conforman el mecanismo de una
reaccin enzimtica heterognea, la ecuacin cintica de la reaccin
ser la ecuacin cintica de la etapa ms lenta (etapa controlante),
de forma anloga a las reacciones catalticas heterogneas
A la hora de deducir la ecuacin cintica se asume que:
Las etapas fsicas (de difusin) son
suficientemente rpidas, es decir,
mucho ms rpidas que cualquier
etapa qumica
Esto permite considerar que la
concentracin de reactivos (y
productos) en las proximidades de un
centro cataltico son aproximadamente
iguales a las concentraciones de
reactivos (y productos) en el seno de
la fase fluida
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
posicin
REACTIVOS
PRODUCTOS
FASE
FLUIDA
PORO DEL
CATALIZADOR
CAPA LMITE
DE DIFUSIN
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n
posicin
REACTIVOS
PRODUCTOS
FASE
FLUIDA
PORO DEL
CATALIZADOR
CAPA LMITE
DE DIFUSIN
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
40
Por tanto, si las etapas fsicas son mucho ms rpidas que las etapas
qumicas se puede suponer que:
reactivo reactivo
reactivo
C (fase fluda) C (en la capa lmite)
C (en el interior de los poros)

Ntese que nicamente las concentraciones de las especies qumicas en la fase fluida
pueden ser medidas experimentalmente, a diferencia de las concentraciones en la capa
lmite o en el interior del poro
producto
producto producto
C (en el interior de los poros)
C (en la capa lmite) C (fase fluda)

A continuacin se analizar el estudio y modelado de las etapas de
difusin tanto externa como interna (Fenmenos de Transporte), para
poder establecer el modo de realizacin de los experimentos de tal
forma que se pueda considerar que la ecuacin cintica de una
reaccin enzimtica heterognea es la ecuacin cintica de una etapa
(bio)qumica biolgica anlogamente a lo descrito en el Tema 7
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
41
GRADIENTES DE CONCENTRACIN
DIFUSIN EXTERNA
Suposiciones
la difusin interna y la transferencia de energa son rpidas
no existen gradientes de concentracin en el interior de los
poros y que la partcula es isoterma
S
'
S L P S S
N = k S (C - C )
Concentracin de sustrato en la superficie externa
N
S
, mol s
-1
Flujo de S desde el exterior hasta la superficie de la partcula
k
L
, cm s
-1
Coeficiente de transferencia de materia por conveccin
C
S,
mol cm
-3
C
S
S
, mol cm
-3
Concentracin de sustrato en la fase lquida
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
42
DIFUSIN EXTERNA
Balance de materia (estado estacionario) en el exterior de la partcula
( (( ( ) )) )
S
L P S S P P
S
k S (C - C ) = r V
La cantidad de S que llega La cantidad de S que
=
a la superficie de la partcula desaparece por reacci n
| | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | |
\ \ \ \ \ \ \ \
La resolucin del balance de materia permite determinar la
concentracin en la superficie del catalizador
(r
P
)
S
, mol cm
-3
s
-1
Velocidad de reaccin evaluado para la concentracin
en la superficie del catalizador
k
L
, cm s
-1
Coeficiente de transferencia de materia por conveccin
(fenmenos de transporte)
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
43
( (( ( ) )) )
2/3
2
3
L p p C F
e F e
k d gd -
= 16 + 4,84
D 18 D

| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | |
| | | |
| | | |
\ \ \ \
\ \ \ \
Correlacin de Brian y Hales (corregida)
L p
e
V d
Pe =
D
( (( ( ) )) )
2
p C F
L
F
gd -
V =
18

DIFUSIN EXTERNA
Si k
L
menor resistencia a la difusin L-S
2
L p
2/3
e
k d
= 4,0 + 1,21Pe
D
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
Pe: nmero de Peclet
Difusividad del sustrato
en la mezcla
D
e
, cm
2
g
-1
F
, g cm
-3
Densidad del fluido
F
, g cm
-1
s
-1
Viscosidad cinemtica
d
p
, cm Dimetro de partcula v
L
, cm s
-1
Velocidad del fluido
C
, g cm
-3
Densidad del catalizador
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
44
El clculo terico de los gradientes es laborioso
Estimacin de numerosas propiedades de transporte
Errores asociados en la estimacin
Se realizan una serie de ensayos
variando la velocidad de agitacin
de la mezcla sl.-lq. (relacionada
con la V
L
) manteniendo
constantes el resto de las
variables de operacin
Es necesaria una comprobacin
experimental de la ausencia de
controles de difusin externa
DIFUSIN EXTERNA
Velocidad de agitacin
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n

(
-
r
A
)
Velocidad de reaccin
limitada por
difusin externa
limitada por la
reaccin biolgica
Sin control de
la difusin externa
C
S
(en el fluido)
C
S
S
(en la superficie
del cat.)
=
Velocidad de agitacin
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n

(
-
r
A
)
limitada por
difusin externa
limitada por la
reaccin biolgica
Sin control de
la difusin externa
C
S
(en el fluido)
C
S
S
(en la superficie
del cat.)
=
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
45
DIFUSIN INTERNA
Balance de materia (estado estacionario) en un elemento de volumen
del interior de la partcula
La cantidad de S La cantidad de S La cantidad de S
que desparece que entra por la que sale por la
- =
superfice exterior superfice interior por reaccin
(r+ r) (r) dentro de r
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |

\ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \
| || |
| || |
| || |
2
S
e P S 2
dC 1 d
r D = r (C ,T)
r dr dr
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
2
S S mx
e 2
M S
r C dC 1 d
r D =
r dr dr K + C
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
46
FACTOR DE EFICACIA ()
La velocidad de reaccin puntual es un parmetro de difcil clculo
Se utiliza la velocidad media en la partcula de catalizador
( (( ( ) )) )
( (( ( ) )) )
P
S S
P
P
S
V
R
2
P S
P S
0
0
3
P S P P S
r
velocidad de reaccin real media en la particula
= =
velocidad de reaccin en condiciones de superficie r
1
r (C ,T) dV
r (C ,T) r dr
3
V
= =
r (C ,T) R r (C ,T)

( ( ( (
( ( ( (

= 1 No control difusional (gradientes internos despreciables)
0 Fuerte descenso de la concentracin con la posicin
Control difusional (interno) importante
Partcula esfrica
DIFUSIN INTERNA
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
47
DIFUSIN INTERNA
2
S
e 2
dC 1 d
r D = k
r dr dr
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
2
S
e S 2
dC 1 d
r D = k'C
r dr dr
| | | | | | | |
| | | |
\ \ \ \
ORDEN 0 ORDEN 1
S
p
e
= mdulo de Thiele
R
k
=
3 D

S
p
S e
= mdulo de Thiele
R
k
=
3 2C D

S S S
1 1 1
= -
tanh(3 ) (3 )

| | | | | | | |
| | | |

\ \ \ \
3
2
S
2
S
3 -2 1 1
= 1- +sen arctg
2 3
2 3 -1

( ( ( (
( ( ( (
| | | | | | | |

( ( ( (
( ( ( (
| | | |
| | | | ( ( ( (
( ( ( (

\ \ \ \

El factor de eficacia
ser ms bajo
Cuanto mayor sea el tamao de partcula
Cuanto ms rpida sea la reaccin
Cuanto menor sea la difusividad efectiva
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
48
0,1 1 10
Mdulo de Thiele,
s
0,01
0,1
1
F
a
c
t
o
r

d
e

e
f
i
c
a
c
i
a
,

0,1 1 10
Mdulo de Thiele,
s
0,01
0,1
1
F
a
c
t
o
r

d
e

e
f
i
c
a
c
i
a
,

S
< 1/3 1
Ausencia de control difusional interno
La concentracin del reactivo en la
superficie del catalizador y el interior de los
poros es la misma
S S
> 5 1/
Fuerte control difusional interno
Existe de un gradiente de concentracin
entre el exterior y el interior de la partcula
DIFUSIN INTERNA
orden 1
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
z
i
m
t
i
c
a
s
49
DIFUSIN INTERNA
Tamao de partcula (R
p
)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n

(
-
r
A
)
limitada por
difusin interna
limitada por la
reaccin biolgica
Sin control de
la difusin interna
=1
C
S
(en la superficie
del cat.)
C
S
(en el interior
de los poros)
=
Tamao de partcula (R
p
)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i
n

(
-
r
A
)
limitada por
difusin interna
limitada por la
reaccin biolgica
Sin control de
la difusin interna
=1
C
S
(en la superficie
del cat.)
C
S
(en el interior
de los poros)
=
El estudio terico indica que disminuyendo el tamao de partcula
aumenta el valor de eficacia
Se realizan una serie de
experimentos variando el tamao
de partcula manteniendo el resto
de las variables de operacin
constantes
La velocidad media en el
interior de la partcula es igual
a la velocidad de reaccin en
la superficie
T
e
m
a

1
0

R
e
a
c
c
i
o
n
e
s

E
n
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i
m
t
i
c
a
s
50
TEMA 10.

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