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Apuntes-de-cromatografia-02-15-20111

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1

Introducción

2

El presente material docente denominado apuntes de clase sobre algunas técnicas cromatográficas para
los estudiantes de la asignatura Análisis Instrumental II de los Programas en Tecnología Química y Química
Industrial de la Escuela de Tecnología Química de la Facultad de Tecnología de la Universidad Tecnológica de
Pereira; no pretende ser una obra original del profesor con relación a sus contenidos, es sencillamente un
resumen y ordenamiento didáctico sobre las técnicas cromatográficas enfatizando en la cromatografía de gases .

En los temas tratados se encuentra una adaptación personal para su desarrollo, llevando una secuencia que le
permita al estudiante ver objetivamente la relación de los mismos para su estudio y aprendizaje. Algunos son
transcripciones mientras que otras son cortas traducciones y adaptaciones de muchos textos, catálogos y
artículos, de diferentes autores y casas productoras de equipos cromatográficos.

El profesor espera con la preparación de este material facilitar al estudiante y a otras personas que les pueda
ser de utilidad, una información y metodología que fundamente los conceptos, principios, leyes, instrumentación
y aplicaciones de las técnicas analíticas tratadas.

La complejidad de la gran cantidad de información existente sobre los temas tratados en diferentes publicaciones
y textos con distintos enfoques, hace que el estudiante no tenga acceso a unos contenidos básicos de las
técnicas cromatográficas; se estima que con base en estos fundamentos pueda posteriormente analizar los
temas con mayor profundidad en los diferentes documentos de estudio.

También pretende el profesor que con el desarrollo de estos contenidos temáticos, el estudiante pueda dedicar
mayor tiempo de su atención en la clase a las explicaciones que a la toma de apuntes y a la elaboración de
esquemas y gráficas.

Los Temas tratados están ordenados en Unidades siguiendo la misma secuencia del programa y la extensión y
profundidad de los contenidos de la cromatografía gas líquido adaptados a los objetivos, metodología,
intensidad horaria de la asignatura y a la valoración académica en horas crédito.

Además, si se presentaran imprevistos en el desarrollo normal del curso por situaciones de anormalidad
académica durante el semestre, no pudiéndose cumplir con el programa en el cien por ciento, el estudiante tiene
disponibilidad de los materiales que le permiten apropiarse de estos conocimientos.

Los diagramas de los cromatógrafos y sus instrucciones de manejo corresponden a algunos de los equipos
existentes en los laboratorios de la escuela de tecnología química de la UTP.

Al final se informa la bibliografía consultada. Dado que todos los temas son tratados en la mayoría de l os libros
de Química Analítica, análisis Instrumental, y específicos de cromatografía, no se hace uso de bibliografía
indexada.

El profesor agradece a sus compañeros profesores y alumnos sus comentarios y aportes para el mejoramiento
del material.


Cordialmente
Federmán Castro E
Profesor Febrero 2011


3

PRIMERA UNIDAD


1. GENERALIDADES DE LA CROMATOGRAFIA

OBJETIVO GENERAL

Presentar al estudiante una visión general sobre los orígenes, desarrollo, fundamentos, procesos,
clasificación, semejanzas, aplicaciones y limitaciones de las diferentes técnicas de separación
cromatográficas sólido líquido, líquido líquido, intercambio iónico y electrocromatografía; para que haga uso
adecuado de ellas en el trabajo de laboratorio.

Objetivos específicos

1. Terminada la unidad, el estudiante será capaz de:

1. Determinar los principios físicos que gobiernan los procesos de separación por cromatografía sólido
líquido, líquido líquido, cromatografía de intercambio iónico y electrocromatografía.

2. Reconocer las técnicas cromatográficas sólido líquido: en papel, capa fina y columna.

3. Reconocer los términos utilizados en cromatografía sólido líquido, líquido líquido, líquido al vacío,
intercambio iónico y electrocromatografía.

4. Describir las aplicaciones en la separación por medio de las técnicas de cromatografía en papel, capa
fina y columna, como también en las técnicas cromatográficas: líquido líquido, líquido al vacío,
cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía.

5. Conocer las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de las técnicas cromatográficas sólido líquido,
liquido líquido, líquido al vacío, cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía.

6. Conocer las limitaciones de las técnicas cromatográficas sólido líquido, líquido líquido, líquido al vacío,
cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía.






4
1.1 RESEÑA HISTORICA
1


La química analítica desde sus inicios, ha requerido de técnicas de separación para aislar los compuestos
de interés objeto de estudio en una muestra, tanto para su cualificación como para su cuantificación.

Las técnicas tradicionales de separación para los diferentes constituyentes de una muestra varían
dependiendo del estado en que se encuentra. Para la separación de sólidos de líquidos se utilizan técnicas
como: La filtración, centrifugación, evaporación, cristalización, decantación. Y en la separación de mezclas
líquidas se han usado comúnmente las técnicas de extracción, destilación. Mientras que en la separación
de gases, tanto de sólidos como de líquidos se cuenta con la sublimación, la adsorción y la absorción.

Pues bien, muchos componentes de diferentes mezclas, era difícil separarlos, haciendo uso de las técnicas
anteriores, como es el caso de algunos líquidos que forman azeotropos, o tienen puntos de ebullición muy
cercanos, o se descomponen por el calor; para cuya separación la destilación es inadecuada. Así como,
para la situación anterior, las otras técnicas también presentaron sus limitaciones en la separación de
compuestos; por lo cual, se hizo necesario encontrar otras técnicas de separación más apropiadas.

En el desarrollo de nuevas técnicas, surgieron los procedimientos en múltiples etapas y con ellas la
cromatografía, nombre con el que se designan a varias técnicas de separación.

Estas técnicas cromatográficas se consideran como iniciadas en el año de 1834, con los trabajos realizados
por RUNGE, F.F. en la separación de mezclas de tinturas y extractos de plantas, usando tiras de papel.

A partir de este año, suceden cronológicamente, los siguientes avances de interés en el desarrollo de la
cromatografía:

GOPPELSROEDER, F. en 1868, realizó separación de: tinturas, hidrocarburos, alcoholes, leche, cerveza,
coloides, aguas, minerales y pigmentos de plantas y animales a través de análisis capilar utilizando tiras de
papel.

En 1878 SCHONBEIN, usó tiras de papel para el análisis de soluciones. DAY, D.T. en 1897 analizó
muestras de petróleo crudo en columnas empacadas finamente con tierra de fulleres (silicatos de aluminio y
magnesio), haciendo pasar la muestra completamente mediante un flujo ascendente.

Una correcta interpretación de los trabajos realizados hasta el momento fue dada por el botánico ruso
MIKAHIL, TSWETT. En 1901 Tswett describió la absorción de pigmentos de plantas sobre proteínas y en
1906, él explicó con todo detalle este método, dando sus principios y procedió a nombrar este proceso.

Así, este investigador ruso se conoce como Padre de la Cromatografía. Tswett, realizó su experimento

1
Información recopilada y organizada por el profesor Federmán Castro E para la asignatura Análisis Instrumental II.

5
como sigue: Utilizó una columna empacada con carbonato de calcio, para separar las sustancias colorantes

de las hojas verdes de las plantas.

Para su experimento, sometió las hojas desecadas a extracción con éter de petróleo y produjo un extracto
de color intenso que puso en la parte superior de un tubo de vidrio colocado en posición vertical y el cual
estaba relleno con carbonato de calcio en polvo. Los colorantes fueron absorbidos por el carbonato de
calcio y quedaron formando una banda de color oscuro en la parte superior de la columna. Luego introdujo
más éter de petróleo el cual, al descender por el tubo fue lavando gradualmente y arrastrando a los
colorantes, pero cada uno a una velocidad diferente, produciendo al avanzar por delante de las otras
sustancias una banda de color característico. Por encima de esta sustancia desplazándose más
lentamente, apareció una banda amarilla de xantofila, y más atrás dos bandas verdes de clorofila. El
conjunto de las zonas o bandas coloreadas se denominó "CROMATOGRAFIA".

TSWEET, encontró que el desplazamiento de las zonas era más rápido si se mezclaba algo de etanol con
éter de petróleo. Si se continuaba agregando más disolvente, los colorantes salían más separados, de uno
en uno, por el extremo inferior de la columna, emergiendo en primer lugar el caroteno rojo anaranjado,
seguidamente la xantofila de color amarillo y posteriormente la clorofila de color verde. De modo que se
podían recoger aisladamente en diferentes recipientes.

De allí deriva el nombre de cromatografía que viene del griego KROMATOS (color) y GRAPHOS
(escritura); por lo cual etimológicamente significa escritura en color.
La técnica cromatográfica toma verdadero interés en 1931, cuando fue utilizada por KUHN y LEDERER, en
análisis orgánico y bioquímico para la separación de la xantofila de la yema de huevo utilizando silicagel y
alúmina como materiales absorbentes.

En 1940 el científico sueco TISELIUS aplicó la cromatografía en el análisis de proteínas y propiedades
electroquímicas de las enzimas haciendo uso de la electrólisis. En 1948 recibió el premio NOBEL de
química por los trabajos realizados.

WILSON, J.N. presenta en 1940 la primera teoría sobre cromatografía de papel, asumiendo un equilibrio
completo y una isoterma de absorción lineal.

En 1941 el científico inglés A.J. MARTIN y su colaborador R.L.M. SYNGE, desarrollaron la cromatografía
de partición líquido; presentaron el primer modelo que puede describir la eficiencia de una columna y
sentaron las bases de la cromatografía de gases. En 1952 les fue otorgado el premio NOBEL de química.
CONSDEN, R.; GORDON, A.H.; MARTIN, A.J.P., desarrollaron en 1944 la técnica cromatográfica en
papel.

En 1949 MARTIN contribuye con la relación de transporte entre la retención y la constante de equilibrio
termodinámica.

6

CREMER, en 1951 desarrolló la cromatografía gas sólido por elución. En 1952 JAMES, A.T. y MARTIN,
A.J.P; introducen la cromatografía gas líquido.

VAN DEEMPTER, en 1956 plantea las teorías sobre la eficiencia de las columnas cromatográficas a través
de una ecuación y la distribución gaussiana.

En 1965 GIDDINGS, J.C., revisa y extiende las teorías cromatográficas.

Las técnicas cromatográficas en sus diferentes formas, han sido aplicadas para la separación de un gran
número de compuestos, no sólo con fines analíticos, sino también en la separación y purificación de
solventes orgánicos a nivel industrial.

Se han escrito gran cantidad de artículos en las revistas y publicaciones científicas sobre la aplicación de la
cromatografía en el análisis de la más diversa variedad de muestras.

La técnica ha tenido un desarrollo vertiginoso y se han diseñado gran cantidad de equipos, aplicando en
ellos las formas más funcionales y simplificadas, mediante los avances de la electrónica y los
microcontroladores para automatizarlos y manejar los datos.

El desarrollo la cromatografía líquida de alta eficiencia, ha ofrecido ciertas ventajas sobre la cromatografía
de gases para determinados análisis. También se ha venido desarrollando la cromatografía de intercambio
iónico obteniéndose una gran sensibilidad y rapidez en la separación selectiva y simultánea de aniones y
cationes en el rango de microgramos por litro.

Durante las dos últimas décadas el trabajo sobre nuevas y prometedoras técnicas de separación
cromatográfica ha tomado como base el empleo de fluidos supercríticos para el análisis de muestras
ambientales, biomédicas y de alimentos dando origen a la cromatografía de fluidos supercríticos y la
extracción con fluidos supercríticos.

A nivel latinoamericano, se ha organizado la Federación de Usuarios de la cromatografía (COLACRO), que
reúne los más prestigiosos profesionales de la cromatografía y ciencias afines de Latinoamérica y el
mundo; la cual ha realizado periódicamente hasta el presente 11 congresos en diversos países: El I en
1.988 en Buenos aires Argentina y el XI en junio de 2006 en Yucatán México; Teniendo estos encuentros
como objetivo principal proporcionar actualización y mostrar el estado de las distintas técnicas
cromatográficas, así como sus diferentes aplicaciones. El XII, último congreso celebrado se realizó en
Florianópolis (SC), Brasil del 28 al 30 de octubre del 2008 cumpliéndose así 20 años de sus
celebraciones.

En Colombia, existe el Comité Colombiano de Cromatografía, integrado por profesionales de la química,

7
quienes coordinan y organizan encuentros técnicos y cursos a fin de consolidar el intercambio y
actualización de conocimientos tanto de sus miembros como de todo el personal que hace uso de esta
valiosa técnica; Permitiendo que las técnicas cromatográficas puedan ser usadas en conjunto con otras
técnicas analíticas, como las fotométricas; mediante el acople con equipos de RMN., IR., UV, y
espectrómetros de masas, refractómetros, conductímetros, etc. dándole especial importancia en el análisis
químico tanto a nivel investigativo como del control de calidad, y poder detectar e identificar sustancias
presentes en diferentes tipos de muestras hasta el nivel de pico y nano gramos. Son múltiples sus
aplicaciones en el análisis de los contaminantes del medio ambiente, en el control de calidad de
medicamentos y diagnósticos en medicina forense, estudio de aromas tales como los del café detectados
por esta técnica alrededor de 350, control de calidad de aceites esenciales, perfumes, solventes
industriales, alimentos, productos agroquímicos, el petróleo y sus derivados, etc.

La Universidad Industrial de Santander (UIS),en su Escuela de Química ha creado la Escuela Nacional
de Cromatografía para ofrecer un soporte científico y práctico a los usuarios de cromatografía en Colombia
a través de la realización de pasantías para entrenamiento personalizado, cursos teórico prácticos a
diferentes niveles, asesorías, montaje de métodos y servicios de análisis.
























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1.2 FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS DE SEPARACION POR CROMATROGRAFIA

La separación se consigue a través de una gran variedad de técnicas cuyas bases moleculares tienen
diferencias muy diversas, se pueden separar moléculas en función de sus cargas moleculares, sus
tamaños moleculares, sus masas moleculares, sus potenciales redox, sus constantes de ionización,
disposición de sus enlaces, que determina su estructura isómera o su quiralidad y en función de su
polaridad, por lo cual resultan una gran variedad de técnicas para efectuar la separación de una
sustancia. Se considerarán las separaciones que tienen lugar en función de la polaridad en la cual se
fundamenta la solubilidad, según la ley los semejantes disuelven a los semejantes.

Los procedimientos de separación en múltiples etapas tienen en común la distribución de los componentes
de una mezcla entre dos fases que posteriormente pueden separarse mecánicamente cuando la razón de
la cantidad de un compuesto dado presente en cada fase difiere considerablemente de la otra, siendo
posible potencialmente una separación. La complejidad del procedimiento depende entonces, de la
diferencia de las razones de distribución de los componentes.

Una separación cromatográfica puede verse como una sucesión de extracciones, una tras de otra. Es
de importancia recordar y comprender el proceso de extracción para entender desde este punto de vista
la base química de la cromatografía así como el origen de la terminología cromatográfica.




Diagrama 1.1

Una extracción líquido - líquido es una técnica que tiene como base la utilización de dos líquidos que no
son solubles entre sí, son inmiscibles, suponiendo que los dos líquidos utilizados en la ilustración del
diagrama 1.1 son agua (H2O) y tetracloruro de carbono (CCl4). Como el CCl4 es más denso, compone
la capa más baja. En el agua hay un soluto disuelto: en este caso se trata de ioduro. La mezcla se

9
agita vigorosamente y luego reposa mientras los dos líquidos forman las dos capas separadas como se
observa en el diagrama 1.1. Si la concentración de ioduro es suficientemente alta, se puede ver su
color morado en la fase orgánica. Después de la extracción, se puede determinar las concentraciones
de ioduro en la fase acuosa y orgánica. Por ejemplo, el ioduro de cada fase se puede determinar
mediante una valoración redox). Si repetimos este experimento varias veces utilizando diferentes
concentraciones iniciales de ioduro, pero a una misma temperatura, se observa que los resultados
vienen descritos por la siguiente expresión:

| |
| |
2
2
2
10 7
2
4
× = =
O H
CCl
D
I
I
K ,
D
K es la constante de equilibrio denominada coeficiente de partición o
coeficiente de distribución y algunas veces factor de reparto.

También se puede escribir como
2
1
2 , 2
4 , 2
C
C
C
C
K
O H I
CCl I
D
= =

Donde C es la concertación expresada en mol / unidad de volumen en las respectivas fases. Por
convenio la fase orgánica es la 1. Así el coeficiente de distribución es una relación de
concentraciones, el cual es constante a unas determinadas condiciones de temperatura y presión.

Para determinar la cantidad de materia contenida en cada fase es necesario conocer el volumen de
cada fase. Suponiendo que el volumen de la fase i es Vi para el caso de ioduro que se reparte entre el
H2O y el CCl4,

el número de moles totales es =moles en el H2O + moles en el CCl4 = | | | |
4 4 2 2
2 2 CC CCl O H O H
V I V I + ,
generalizando el reparto de un soluto entre dos fases tenemos:
número de moles totales =
2 2 1 1
V C V C + .

En las separaciones cromatográficas un, coeficiente de distribución es útil incluso si una de las
fases es un sólido con el analito absorbido en su superficie, esto es, incluso cuando el volumen es
extremadamente pequeño. El producto matemático entre las concentración de la superficie y el
volumen de la superficie,
s s
V C , se supone definido incluso si el volumen y la concentración por
separado no se pueden determinar. En otros términos, se utiliza el mismo análisis para la distribución
de solutos en interfases entre cualquier combinación de gases, líquidos y sólidos.

En las ecuaciones anteriores se considera que los volúmenes de las dos fases son suficientemente
grandes para ser capaces de disolver todo el ioduro que se les añade. Si se añadiere demasiado
ioduro, las soluciones en las dos fases se pueden saturar o sobre saturar quedando algún residuo
sólido. En esta situación, el número total de moles de ioduro ya no estaría definido por la expresión
2 2 1 1
V C V C + . Cuando en cromatografía ocurre una situación similar, se dice que el sistema esta
sobrecargado (columna sobre cargada), por lo cual en cualquier sistema cromatográfico la carga
correcta de la muestra es muy importante para obtener una buena separación cromatográfica. La
masa total de muestra sometida a una separación cromatográfica debe ser limitada para que las

10
fases no se saturen y se sobre carguen; esto es, su capacidad no se exceda.

Todas las técnicas de separación consideradas en la clasificación del cuadro 1.1, presentan como
característica una interacción entre los compuestos a separar con una fase fija y una fase móvil.

La fase fija denominada también fase estacionaria, puede ser un sólido o un líquido dispuesto en forma
de una película sobre un soporte sólido. La fase móvil puede ser un líquido, un gas o un fluido
supercrítico.

El aspecto fundamental considerado en el proceso de separación seguido por estas técnicas, radica en la
distribución de los solutos (componentes de las mezclas), en las diferentes fases. Esta razón conocida
como coeficiente de distribución o factor de partición (K) viene expresado matemáticamente por la
ecuación:


m
s
C
C
K =

Donde
s
C es la concentración del soluto en la fase estacionaria y
m
C la concentración del mismo soluto
en la fase móvil; podemos decir que si
S
C es directamente proporcional a Cm, (Cs o Cm), tendríamos el
comportamiento ideal. K aparece como constante de proporcionalidad Cs = KCm y despejando
obtenemos K = Cs/Cm. Por lo tanto K puede ser igual, mayor o menor que la unidad (K =1, K>1, K<1).

En el caso ideal, una representación gráfica (isoterma) de la concentración del soluto en la fase
estacionaria, versus la concentración del soluto en la fase móvil, nos daría una línea recta C, en la Figura
1.1.

1.3. PRINCIPIOS DE LA CROMATOGRAFIA

Bajo el término cromatografía, se designan procedimientos y/o técnicas de separación que se fundamentan
en los mismos principios pero difieren en la forma como la fase estacionaria se encuentre dispuesta y el
estado físico tanto de la fase fija como de la fase móvil.

Todas las técnicas cromatográficas se fundamentan en principios físicos, exceptuando la cromatografía
de intercambio iónico que se encuentra gobernada más por un principio químico que físico. Definir
entonces, cromatografía es difícil por la cantidad de procedimientos y/o técnicas que existen. Sin
embargo, en un sentido amplio designa procesos basados en diferencias de velocidades con las
cuales los componentes individuales de una mezcla migran por un medio estacionario bajo la
influencia de una fase móvil.


11



Figura 1.1. Curvas típicas de distribución

La cromatografía, en general, es una técnica analítica de separación y con la cual, además se puede,
cualificar y cuantificar los componentes de una mezcla. La cualificación se puede realizar mediante el uso
de la misma técnica o utilizando otras como las técnicas espectroscópicas. La R.M.N. y la espectrometría
de masas.

1.4. CROMATOGRAFIA SÓLIDO-LIQUIDO

La cromatografía sólido-líquido comprende un conjunto de técnicas de separación en las cuales la fase
estacionaria es un sólido y la fase móvil un líquido. Lo que hace diferentes estas técnicas, es la forma en
que la fase estacionaria se encuentra dispuesta, bien sea en papel, superficie plana o columna. Estas
disposiciones permiten trabajar con mayor o menor cantidad de muestra, usar los recolectores apropiados
según el caso, como también, utilizar otras propiedades físicas para acelerar el proceso o detectar los
compuestos, como en los casos de aplicar una diferencia de potencial en la electrocromatografía o medir
una conductividad en la cromatografía de intercambio iónico.

El uso frecuente de estas técnicas en el laboratorio, deriva de la facilidad con la cual se pueden separar
compuestos de peso molecular o puntos de ebullición bastante elevados los cuales es difícil
transformarlos en vapores bien sea porque son inestables, se isomerizan o se descomponen por
efectos de la temperatura para ser separados por otras técnicas.

1.4.1 Cromatografía en papel. En la Figura 1.2. se muestra una ordenación típica para una cromatografía
de papel. El papel es la fase estacionaria y el disolvente que fluye sobre él, la fase móvil. Como en casos



12
Cuadro 1.1 Clasificación de las técnicas cromatográficas.

anteriores el fundamento de la separación es el distinto tiempo que cada compuesto gasta entre la fase
móvil y en la fase estacionaria.

En la práctica, se suspende por un extremo una tira de papel de espesor uniforme y el otro extremo se
introduce en el disolvente. Llámese a esta cromatografía, cromatografía ascendente. En estas
condiciones el disolvente fluye hacia arriba, a velocidad constante, por la acción capilar de las fibras de
papel. En este movimiento, el disolvente entra en contacto con la muestra, cuyos componentes se
disolverán y se desplazarán a lo largo del papel con una velocidad proporcional a la velocidad de fluj o
del disolvente y al tiempo que cada componente gasta en la fase estacionaria. En definitiva, los
distintos componentes fluyen a diferentes velocidades y se separan.



Figura 1.2. Separación por cromatografía de papel.
También es posible disponer el sistema de tal forma que el disolvente fluya hacia abajo. Esta ordenación
no siempre es aconsejable ya que, por acción de la gravedad, el flujo es más rápido. (Se conoce esta
cromatografía como descendente).
Nombre del proceso Tipo de fases Fase fija Fase móvil
Cromatografía de absorción Sólido –líquido Absorbente sólido Solvente o mezcla de solventes
Cromatografía en capa delgada Sólido –líquido Polvo fino sostenido Sobre placa de
vidrio o metal
Solvente o mezcla de solventes
Cromatografía de intercambio de iones Sólido –líquido Resina de intercambio iónico Solución
Cromatografía de partición líquido -líquido Líquido absorbido en un sólido poroso Solventes inmiscibles
Cromatografía en papel líquido -líquido Disolvente inmiscible sobre matriz de papel
Cromatografía de gel líquido -líquido Liquido sostenido en los intersticios de un
polímero Sólido
Solvente
Cromatografía gas sólido Sólido- Gas - Adsorbente sólido Gas inerte
Cromatografía gas Liquido Liquido-gas Disolvente sobre matriz sólida Gas inerte
Cromatografía de fluidos supercríticos Líquido-fluido
supercrítico
liquido Fluido supercrítico

13
En ambos la posición de cada componente se pone de manifiesto por teñido de la muestra, esto es,
tratándola con un reactivo que la coloree y, de esta forma, revele su posición.




Figura 1.3. Esquema de la situación de los componentes (a) antes de la separación (b) después de la separación
cromatográfica

La identidad de cada componente se obtiene comparando la velocidad de flujo con la de muestras
conocidas. Por ejemplo, si se sabe que una muestra contiene tres componentes, A, B y C, para
identificarlos se añaden al papel muestras separadas de A, B y C, como muestra la Figura 1.3. y se
procede al revelado una vez conseguida la separación. El componente A de la muestra será aquel que
haya recorrido la misma distancia que la muestra conocida, A. El mismo razonamiento sirve para la
identificación de los otros componentes.

Si no se conoce la identidad de los compuestos de la muestra, deben ser identificados después de su
separación por técnicas espectroscópicas (IR. UV, RMN y/o EM), o por medio de reacciones químicas.

1.4.2. Cromatografía en Capa Fina. Es similar a la cromatografía de papel excepto que en lugar de
papel utiliza como substrato una fina capa (2.5 mm de espesor) de un material inerte, tal como Al2O3, MgO
o SiO2. Estas capas se preparan manualmente. Para ello, se forma una pasta con el óxido y un disolvente
adecuado, se extiende uniformemente sobre una superficie plana (generalmente vidrio o aluminio) y se
seca. La operación de extender la pasta sobre el vidrio o aluminio puede hacerse manual o
mecánicamente. La ventaja de operar con un substrato inerte es que pueden utilizarse para el revelado
sustancias químicamente más reactivas, tales como ácidos fuertes, que destruirían el papel.

El revelado de moléculas o iones en cromatografía de papel o de capa fina puede ser un problema. Si las
moléculas son coloreadas la detección se hace por su observación directa. Sin embargo, es el caso menos
frecuente. Para algunos compuestos, existen reactivos específicos que reaccionan para dar un compuesto
coloreado de observación directa.

14
En la mayoría de los casos, el compuesto muestra es transparente y no puede localizarse visualmente. En
esta circunstancia se utiliza un reactivo común que es el ácido sulfúrico, el cual carboniza el compuesto
dejando una mancha marrón. La posición de las manchas indica la situación de los distintos compuestos.

La desventaja del método es que se destruye el compuesto. Se utiliza en cromatografía de capa fina,
donde el substrato es inerte frente al ácido sulfúrico, pero no en la de papel, que se descompondría. Existen
compuestos orgánicos cuyas moléculas fluorescen bajo la luz UV.

Algunos compuestos de peso molecular elevado no fluorescen ni pueden ser detectados con reactivos
específicos. En este caso, se emplea un soporte modificado, que contiene un material fluorescente de
forma que toda la placa produzca fluorescencia al irradiarla con luz UV. Si sobre la placa así preparada se
coloca la muestra y se provoca la separación, la fluorescencia del material base es absorbida o bloqueada
físicamente en aquellas zonas donde no existen compuestos fluorescentes. En definitiva, los distintos
componentes de la muestra ocuparán las zonas no fluorescentes. Un material adecuado para este fin es la
1, 2, 3 indantina monohidrato, conocido comercialmente bajo el nombre de Ninhydrin.

El mayor interés de la cromatografía de capa fina reside en la determinación cualitativa de compuestos de
peso molecular elevado, especialmente en los campos de la investigación médica y biológica. El
fundamento de la investigación cualitativa es la velocidad a la que el compuesto fluye a lo largo de la placa.

Si no se conocen los componentes de la muestra su identificación se consigue como se indicó
anteriormente (Observar Figura 1.3.). Un método consiste en utilizar el valor
f
R (factor de retardo) de la
muestra. El
f
R de un compuesto, para un disolvente y substrato determinados, es constante (a
temperatura constante) y se define como la relación de la velocidad del compuesto a la del disolvente.

vente daporelsol ciarecorri Dis
puesto daporelcom ciarecorri Dis
t
D
t
D
V
V
R
Solvente
Compuesto
Solvente
compuesto
f
tan
tan
= = =

Determinado, pues, el valor
f
R de un compuesto desconocido se reduce considerablemente el número de
compuestos que pueden presentarlo y, en consecuencia, su identificación es mucho más fácil.

En cromatografía de capa fina, el análisis cuantitativo se lleva a cabo midiendo el área de la zona ocupada
por cada componente separado; con este dato y un calibrado previo, se obtiene la cantidad de compuesto
en la zona. Si se pretenden resultados más seguros, se retira cuidadosamente de la placa la zona del
compuesto (con substrato); éste se separa del substrato por disolución en un volumen conocido de un
solvente adecuado y posteriormente se hace la determinación cuantitativa por absorción al UV.; IR y/o
cualquier otro método analítico.

1.4.3. Cromatografía en Columna. La separación de muestras grandes exige la utilización de una

15
columna de substrato. Las dimensiones de una columna normal son del orden de 90 cms de largo. por 1.5
cms de diámetro, aunque pueden variar considerablemente según las necesidades. La muestra
(aproximadamente, 1 gramo) se disuelve en el disolvente adecuado y se vierte sobre el substrato
(generalmente 30g) por la parte superior de la columna. A continuación, se añade disolvente y los
componentes descienden, a través de la fase estacionaria, a distintas velocidades, que dependen del
tiempo gastado en la fase móvil y en la estacionaria. De esta forma se separan y se recogen, a la salida, las
distintas fracciones. La gran cantidad de disolvente utilizado puede evaporarse de cada una de las
fracciones y obtenerse así los componentes en estado puro de la muestra (Observar Figura 1.4.)

Para recoger el disolvente y la muestra disuelta que salen de la columna puede utilizarse un colector de
fracciones. Consta de un gran número (hasta 100) de pequeños tubos situados en la periferia de un disco
circular. Se coloca uno de los tubos debajo de la columna y se recogen unos 5 ml. de eluyente (este
volumen puede ser distinto); se gira el disco y recogen otros 5 ml. en el tubo siguiente. Esta operación se
repite hasta que todo el eluyente se ha recogido en numerosas fracciones pequeñas.

Posteriormente, se examinan por separado cada una de estas fracciones para identificar los distintos
componentes de la muestra. A veces, es conveniente mezclar todas las fracciones que contienen el
mismo componente para recuperarlo en estado puro.

Otra posibilidad es hacer pasar el eluyente de la columna a través de un aparato IR. o UV. De esta forma
se ejerce un control continuo sobre el eluyente, que puede separarse en distintas fracciones conteniendo
cada una de ellas un componente de la muestra. Cada fracción será posteriormente, examinada de la
forma más adecuada.

Entre los materiales que se han utilizado como fase estacionaria pueden citarse: Al2O3, SiO2, MgO,
silicagel y resinas. Solventes típicos son, Hexano, Benceno, Cloroformo, Acetato de Etilo, agua, Éter o
mezcla de solventes. La solubilidad de los componentes de la muestra debe ser distinta, con objeto de
obtener una buena separación.

Con mezclas complejas puede ser necesario utilizar varias mezclas de solventes. Así por ejemplo, un
determinado solvente actúa solamente sobre un grupo de compuestos tales como hidrocarburos, dejando
el resto de compuestos, sin disolver, en la superficie de la columna. Cuando los compuestos solubles han
eluído de la columna, puede añadirse un nuevo solvente para separar un segundo grupo de compuestos.

El primer solvente a utilizar debe ser el hexano, que separa las parafinas de la muestra. A su vez, estas
parafinas se separan mediante una segunda columna cromatográfica por cromatografía gaseosa o por
alguna otra técnica adecuada. Una vez separadas las parafinas se puede proceder a eluir los compuestos
aromáticos, con benceno como disolvente. Después puede tratarse con otro disolvente de características
distintas, como el éter dietílico. Cada solvente provoca la elución de un grupo distinto de compuestos
orgánicos, lo que hace posible la separación de la muestra en compuestos con grupos funcionales
comunes. También puede utilizarse, mezclas de solventes, con incremento de la polaridad de éstos. Cada
una de las fracciones separadas puede estudiarse por una nueva cromatografía, espectroscopía de

16
absorción IR. o UV., o bien por RMN (resonancia magnética nuclear) o E.M. (espectrometría de masas). De
esta forma se llevan a cabo los análisis cualitativo y cuantitativo de los componentes de la muestra.




Figura 1.4. Partes de una cromatografía de columna (forma abierta)


En general, los solventes se añaden en orden creciente de polaridad o constante dieléctrica para disolver
los compuestos en orden de polaridad también, creciente, como los que ilustra la Tabla 1.1.

Este método es muy utilizado en la identificación de mezclas complejas de compuestos orgánico de
elevado peso molecular. Es frecuente operar en conjunción con alguna otra técnica que permita la
identificación de los compuestos eluídos.

No siempre es conveniente o necesario llevar a cabo una cromatografía en los términos descritos. A
veces, es suficiente realizar un análisis frontal. Para ello, se elige un solvente que disuelva fácilmente a la
muestra y la disolución formada se añade por la parte superior de la columna. Los componentes de la
muestra serán retenidos, junto con algo de solvente en las zonas superiores de la fase estacionaria, el
resto del solvente es recogido por el extremo inferior de la columna. A continuación, se añade un segundo
solvente que posea una elevada afinidad hacia la fase estacionaria para que desplace todos los
componentes de la muestra de la superficie de la fase estacionaria. Los compuestos que muestren menos
afinidad por la fase estacionaria descenderán más rápidamente por la columna y formarán el frente de la
muestra; los de más afinidad y, por tanto, de movimiento más lento constituirán la última fracción. La
muestra en conjunto no es separada pero sí ordenada en el sentido de que los componentes emergen en
orden inverso a su afinidad por la fase.

Este método hace posible la manipulación de muestras de gran tamaño, evita la necesidad de grandes
cantidades de solventes y asegura la separación en un corto período de tiempo. Aunque la separación de
componentes no es completa, permite un rápido análisis semicuantitativo.


17
La diferencia fundamental entre la cromatografía líquida clásica de columna abierta (C.C), y la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), es únicamente de tecnología, conocimiento y aplicación de
los parámetros que gobiernan la separación:

a. En la cromatografía clásica, C.C;el relleno de la columna se utiliza una vez por análisis. Esto representa
una gran perdida de material y tiempo. En HPLC la columna se puede utilizar muchas veces.

b. En cromatografía C.C. El solvente fluye por gravedad, por lo tanto para separar una mezcla de
compuestos se pueden gastar varias horas.

En la HPLC el solvente pasa por presión a través de una bomba, manteniendo un flujo constante,
lograndose la separación en pocos minutos.

c. El problema principal de la cromatografía de la C.C. Es la detección y cuantificación de los compuestos
que eluyen de la columna. En general, se usa alguna técnica auxiliar, como espectrofotometría, análisis
químico o, simplemente, un registro gravimétrico, para evaluar el contenido de cada componente en las
fracciones recolectadas.

La HPLC realiza los dos procesos automáticamente, presentando los resultados en un registrador.

Existen además otras diferencias, tales como la dimensión de la columna, el material de relleno, el sistema
de aplicación de las muestras y el sistema de recolección de fracciones entre otras.

















18
Tabla 1.1. Solventes para cromatografía.


Solvente Polaridad Peb°c D
20
Viscosidad

Isooctano 7.0 99.2 0.692 0.54
Eter Isopropílico 7.0 68.5 0.724 3.37
n-Pentano 7.5 36.0 0.626 0.23
n-Hexano 7.3 68.7 0.659 0.32
Eter etílico 7.4 34.6 0.713 0.32
Cicloexano 8.2 80.7 0.779 1.00
Tetracloruro de carbono 8.6 76.7 1.594 0.97
Acetato de etilo 8.6 76.1 0.900 0.45
m-Xileno 8.8 139.0 0.864 0.61
Tolueno 8.9 110.6 0.867 0.52
Cloroformo 9.1 61.2 1.481 0.57
Acetato de metileno 9.2 57.0 0.928 0.37
Benceno 9.2 80.1 0.879 0.65
Acetona 9.4 56.1 0.791 0.32
Cloruro de Metileno 9.6 39.8 1.325 0.44
Alcohol n-propílico 10.2 97.1 0.804 2.30
Piridina 10.4 115.2 0.982 0.94
Etanol ahihidro 11.2 78.5 0.789 1.20
Acetonitrilo 11.8 81.6 0.783 1.26
Acido acético glacial 12.4 118.5 1.050 0.37
Metanol 12.9 64.6 0.791 0.60
Agua 21.0 100.0 1.000 1.00


1.4.4. Cromatografía de Intercambio Iónico. Desde hace muchos años se sabe que las arcillas
(Al2O3SiO2xH2O) contienen iones metálicos capaces de intercambiarse con otros iones situados en sus
proximidades. Esta observación ha sido de gran importancia para el conocimiento de la Química del Suelo.

Con este fundamento, las zeolitas naturales y artificiales han sido muy utilizadas en el ablandamiento de
aguas por intercambio de Ca
2+
y Mg
2+
del agua con Na
+
de la zeolita.

Las zeolitas (silicatos de aluminio y sodio) tienen propiedades similares a las arcillas. Recientemente se
han desarrollado cambiadores iónicos de propiedades parecidas a las zeolitas, con una estructura de
polímero y un grupo funcional. Pueden ser catiónicos o aniónicos; en ambos casos, se utiliza una resina
como soporte inerte insoluble, aunque distinto grupo funcional.

1.4.4.1 Estructura de la resina. Como ejemplo de resina puede citarse la que se obtiene en la

19
polimerización del estireno con divinilbenceno:


El polímero contiene cientos de átomos de carbono que forman una rígida matriz molecular tridimensional
sobre la que se añaden, posteriormente, los grupos funcionales tal como se indica a continuación:

1.4.4.2. Resina de intercambio catiónico. En estas resinas el grupo funcional suele ser un ácido. Por
sulfonación, se puede introducir un grupo ácido, generalmente: SO3H en todos los anillos bencénicos de la
resina. Se obtiene así un cambiador catiónico de fórmula RES-SO3H, donde RES representa la matriz y
(SO3H) el grupo ácido introducido. También con ácidos carboxílicos, pueden obtenerse resinas similares
de fórmula RES-COOH.

En los dos casos, el catión intercambiable es el hidrógeno ácido (H
+
), débilmente unido al grupo funcional
que, a su vez, está químicamente unido a la resina. Si una disolución que contiene iones sodio se hace
pasar a través de una resina ácida se produce el desplazamiento de los H
+
de la resina por Na
+
. El efecto
neto sería:

RES-COOH + Na
+
-----> RES-COONa + H
+


Si el grupo ácido fuera el sulfónico, la reacción de intercambio sería:

RES-SO3H + Na
+
----> RES-SO3

Na + H
+


En las mismas condiciones, la casi totalidad de iones metálicos experimentarían las mismas reacciones. Es
evidente que, al producirse el intercambio, la disolución se va haciendo más ácida. Si el ión intercambiable
es el hidrógeno, se dice que la resina está en forma ácida; si es el sodio, en forma sódica.

El proceso de intercambio de iones entre la resina y la solución es general cualquiera que sea la forma de
la resina. Eligiendo una resina en forma correcta pueden llevarse a cabo intercambios selectivos. Así por
ejemplo, una resina en la forma sódica puede utilizarse para intercambiar otros metales pero no iones
sodio. En este sentido, una resina en la forma sódica podría utilizarse para extraer iones metálicos del
agua del mar sin que interfirieran los iones sodio que se intercambian por estar contenidos en el agua
original. El intercambio de ión cobre se produce según la reacción:

Res(SO3Na)2 + Cu
2+
----> Res(SO3)2 Cu + 2Na
+


20

donde el cobre que se fija en la resina es sustituido por iones sodio en la disolución.

1.4.4.3. Resinas aniónicas. Se rige por el mismo mecanismo que las de intercambio catiónico. En
general, los grupos funcionales son aminas o sales de amonio cuaternario. La fórmula de una resina
aniónica puede ser RES-NH3OH y la reacción de intercambio.

RES NH3OH + Cl
-
÷

RES-NH3Cl

+ OH
-

de esta forma se eliminan aniones de soluciones acuosas, que son sustituidas por OH
-
Utilizando una
resina que sea una mezcla de resinas catiónica y aniónica es posible intercambiar los cationes y aniones
del agua por H
+
y OH
-
respectivamente. De esta forma se obtiene agua, con frecuencia, más pura que la
destilada.

1.4.4.4 Principios que gobiernan el intercambio. La velocidad del intercambio de un ión está
controlada por la ley de la acción de masas. Así por ejemplo, si a través de una resina en forma sódica
(total o parcialmente) se hace pasar un ácido muy fuerte, la elevada concentración de H
+
provoca la
eliminación de Na+ que son sustituidos por H
+
. Este proceso se ajusta al concepto de la ley de acción de
masas.

Todos los iones presentes en la columna compiten por los grupos funcionales; a igualdad de
concentración, los grupos funcionales son saturados por aquellos iones que poseen más afinidad por el
grupo. La afinidad de los distintos iones puede obtenerse de las reglas siguientes: El ión de carga más
elevada posee la mayor afinidad, es decir, Na
+
< Ca
2+
< La
3+
. El ión de mayor tamaño tiene la afinidad
más elevada; esto es, Li
+
< Na
+
< K
+
< Cs
+
< Be
2+
<Mg
2+
< Sn
2+
. Si el ión fuera demasiado grande
podría distorsionar la estructura y la regla deja de cumplirse.

1.4.4.5. Resinas de intercambio iónico como método de separación cromatográfica. La separación
de iones en una columna de resina de intercambio iónico sigue reglas similares a las que se aplican a la
cromatografía en general (cromatografía de columna). La diferencia fundamental entre los dos procesos es
que así como en cromatografía existe un equilibrio en la distribución de la muestra entre la fase estacionaria
y la fase móvil: que es controlado por las propiedades físicas de los componentes, en una columna de
intercambio iónico, la distribución entre las dos fases depende de propiedades químicas.

A
-
(estacionaria) + B
-
(móvil) ------> A
-
(móvil)+B
-
(estacionaria)
<------
[A
-
móvil] x [B
-
estacionaria]
K = --------------------------------------------------
[A
-
estacionaria] x [B
-
móvil]
K: Constante de equilibrio

21
A: Ión en fase móvil-muestra
B: Ión Inicialmente en fase estacionaria

La separación de dos componentes iónicos en una columna de resina se ajusta a la ecuación de Van
Deempter. Las bandas anchas son debidas a efectos (tales como difusión y corrientes turbulentas)
similares a los encontrados en cromatografía gaseosa. De las principales ventajas de esta cromatografía,
es la regeneración de la resina, se puede regenerar empleando ácido o base según el tipo de resina usada
(catiónica o aniónica).

1.4.4.6 Aplicaciones analíticas de la cromatografía de intercambio iónico. Anteriormente se citó
como ejemplo de aplicación la eliminación en el agua de cationes y aniones utilizando una mezcla de
resinas de intercambio catiónica y aniónica. Este método, que es bastante barato, rápido y que requiere
poca atención, suministra un agua muy pura y es ampliamente utilizado en Química Analítica; presenta el
inconveniente de que no elimina las impurezas orgánicas (no iónicas). Si desea un agua de elevada
pureza deben eliminarse por otro método.

Las columnas de intercambio iónico pueden utilizarse para concentrar los componentes iónicos que
interesan de una muestra. Así por ejemplo, si un agua que contiene 10 partes por millón de iones oro se
hace pasar a través de una columna adecuada, los iones oro son retenidos. Si las disponibilidades de esta
agua son grandes, pueden tratarse varios galones con la misma columna. Para recuperar el oro, se trata
la columna con una pequeña cantidad de ácido fuerte como el HCl. Así pues, el oro que inicialmente se
encontraba disuelto en varios galones de agua, se encuentra ahora concentrado en 100 ml. de ácido. En
estas condiciones, el oro concentrado puede determinarse por algún método adecuado.

El contenido total catiónico de la muestra puede conocerse con un cambiador en forma ácida valorando los
H
+
que intercambian con los iones metálicos presentes. Igualmente puede conocerse el contenido aniónico
total con un cambiador que libere OH
-
y posterior valoración de los mismos.

En el área de la Química Orgánica, es de destacar la posibilidad de separar aminoácidos utilizando una
resina apropiada. Añadiendo ácido o base se ajusta el pH de la disolución de cada grupo. De esta forma
se cambia la carga de las moléculas y, por tanto, la afinidad de los aminoácidos hacia la resina. Tratando
de nuevo cada una de las disoluciones con resina, pueden separarse los grupos y obtener los aminoácidos
individuales.

En la práctica, las resinas se regeneran rápida y fácilmente. Así por ejemplo, una resina catiónica (ácida)
puede llegar a saturarse con otros iones metálicos según la reacción:

RES-SO3H + M
+
----> RES-SO3 M
+
+ H
+


Si una vez agotada la resina (RES-SO3M) se hace pasar un ácido fuerte, la resina se regenera y los iones
metálicos pasan a la solución ácida de acuerdo con la ecuación:

22
RES-SO3M + H
+
÷ RES-SO3H + M
+


De forma similar, las resinas aniónicas se regeneran añadiendo NaOH para provocar la reacción:

RES NH3X + OH
-
------> RES NH3OH + X
-


Los aniones X
-
se encuentran en la solución que emerge de la columna.

Si se trata de una mezcla de resinas catiónicas y aniónica, la última debe separarse (por ejemplo, por
flotación) antes de proceder a la regeneración. Si ésto no es posible, se pierde la mitad de la resina. Por
ejemplo, si la mezcla se trata con un ácido fuerte, se regenera la resina catiónica pero no la aniónica, que
permanece saturada. Sin embargo, si previamente se ha separado por flotación o por algun otro método,
las resinas pueden tratarse individualmente y, posteriormente, mezcladas, para nuevo uso.



Figura 1.5. Equipo para cromatografía de intercambio iónico.

Instrumentación: Un equipo para análisis mediante cromatografía de intercambio iónico (C.I.I.) está
constituido básicamente por los componentes siguientes: Un inyector, una válvula para la inyección, un
compartimiento para la columna, una o varias columnas, una bomba un sistema de detección
conductimétrico, un sistema de registro o de integración, un automuestrador, un microprocesador para
automatizar operaciones y un computador para manejar y almacenar información (observar Figura 1.5.).

El diseño de un equipo con estas características, permite aplicaciones analíticas cualitativas y cuantitativas
rápidas, selectivas y simultáneas principalmente de especies iónicas inorgánicas en el rango de
microgramos por litro en muestras de aguas, contaminantes ambientales, industria de alimentos, bebidas,
productos farmacéuticos, recubrimientos, productos agrícolas, laboratorios clínicos, laboratorios de
control de calidad y análisis en general.

Las determinaciones de aniones y cationes más frecuentes son: Cloruros, bromuros, fluoruros, nitritos,

23
nitratos , sulfatos, fosfatos, boratos, sulfocianuro, silicatos, litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, estroncio,
bario, zinc, cobalto, manganeso, amonio, ácidos carboxílicos (tartratos, lactato, acetato) y aminas (metil
amina, dimetil amina, trimetil amina).

1.5. Cromatografía Líquido-líquido

La cromatografía líquido-líquido (CLL) pertenece al grupo de las cromatografías de partición, ya que los
componentes de la muestra se separan por desintegración entre las fases móviles y estacionarias (la cual
está ligada a un soporte por adsorción) y difiere poco de la tradicional cromatografía líquida (CL); como se
explicó anteriormente para el caso de las cromatografías líquidas y se ilustró en el Cuadro 1.1.

La separación de la muestra se efectúa según como la fase estacionaria sea presentada; y hay dos formas
generalmente. La primera se desarrolla en forma análoga a la de cromatografía de gases-líquido, que será
ampliamente presentado en este tratado, en la próxima unidad, la cual es su propósito central: Adicionando
una solución de la fase estacionaria a un soporte y luego evaporando el solvente, distribuyéndose así, la
fase estacionaria sobre el soporte. Y la segunda se conoce como de fase ligada o enlazada (CFL y/o CFE),
donde la fase estacionaria ha sido ligada a una matriz, que comúnmente es el octadecilsileno -ODS-, como
se muestra seguidamente:
R
|
---- Si ---- o ---- Si -C18H37
|
R
Enlace silileter -ODS-

De acuerdo a lo anterior, la cromatografía líquido- líquido, se clasifica en normal y en fase inversa.

El uso de la fase ligada, como fase estacionaria, le permitió a la CLL, más utilidad, ya que tiene varias
ventajas sobre la normal, como las siguientes:

- Mayor estabilidad entre la fase estacionaria y el soporte.
- Utilizar solventes polares.
- Reproducibilidad de las cromatografías.
- Aún así, las limitaciones de utilizar la CLL, con respecto a otras técnicas cromatrográficas siguen
siendo grandes.
Todavía no se ha eliminado:
- La saturación de la fase móvil por la fase estacionaria.
- El no poder efectuar gradiantes de elución.


24
1.6. Técnicas Especiales.

El desarrollo de las técnicas especiales ha surgido por la necesidad en tener una mayor rapidez de
separación, utilizar solventes polares y separar cantidades grandes de muestras, buscando alternativas y/o
variantes de las técnicas normales cromatográficas. Es así, como hoy, se emplean en diversas actividades
industriales e investigativas, técnicas como la cromatografía flash, delgada en fase inversa, flujo
contracorriente (Droplet countercurrent chromatography)
*
y cromatografía líquida al vacío.

1.6.1. Cromatografía FLASH. Este método de cromatografía fue descrito por Still y colaboradores en
1978. Es una alternativa, de la cromatografía normal de columna, para separar rápida y eficientemente
compuestos orgánicos no volátiles.

En este procedimiento, se necesita básicamente, la utilización de aire o un gas inerte a presión, con el
objeto de aumentar el flujo y dar rápidas separaciones, usando silica gel 40 de diámetro y eluyendo con
solventes no polares (0.1 s Rf s 0.35).

La Figura 1.6. ilustra el equipo diseñado por Still y colaboradores para hacer la separación, de dos
alcaloides 2 epinúricos:
-----------


Figura 1.6. Equipo paralizar cromatografía FLASH.


Un equipo semejante hoy se consigue comercialmente* y con el objeto de que este procedimiento, pueda
hacerse a bajo costo y utilizar en los cursos de química orgánica general, THOMPSON Y HANSON (1984)
y JACOBSON (1988) han presentado modificaciones que lo facilitan.
Usando este procedimiento, se pueden separar muestras con peso entre 0.1 a 10 gr. consumiendo poco

2 Scince,167, 1970. p. 281

25
solvente y silica en un tiempo de 10-30 minutos

1.6.2 Cromatografía de capa delgada en fase inversa. (CCD-FI ). La cromatografía de capa delgada o
de papel, fué la técnica cromatográfica más difundida, en los primeros años de estudios de la ciencia
química y afines, dada su versatilidad e información sobre los compuestos de una mezcla.

En esta técnica también los compuestos podemos decir que se separan por partición, ya que la silica gel
utilizada contiene agua, por lo cual la separación ocurre por partición líquido-líquido (CLL). Con la
introducción de las fases ligadas (se origina la técnica cromatográfica en fase inversa), esta técnica amplió
su radio de acción, denominándose cromotagrafía de capa delgada en fase inversa. Y si junto con la fase
estacionaria (fase ligada) usamos solventes polares se logra que los compuestos polares migren más
rápidamente que los no polares de una muestra: Principio semejante al de la cromatografía HPLC.

La ventaja que se obtiene con la CCD-FI, es su facilidad de operación, ya que la fase ligada se puede
obtener fácilmente, tratando la silica gel con aceite de parafina al 10% en éter, se obtiene una buena fase
estacionaria ligada.

1.6.3. Cromatografía líquida al vacío (CLV).

Procedimiento descrito por COLL y BOWDEN3, es más una técnica cromatográfica preparativa, donde la
elución es ayudada por vacío. En la aplicación más generalizada de esta cromatografía, se hace
empleando el equipo que se muestra en la Figura 1.7, Usando como adsorbente silica gel 60H o





Figura 1.7. Equipo para la cromatografía líquida al vacío.

Alúmina 60H (en relación 1/50; muestra adsorbente, hasta una altura de 5 cms. del adsorbente) y eluyendo

3 Chem,j. ED. 58, 1981 p.997-1003
a.Adsorbente
b.Vidrio sinterizado
c. Tapón de caucho perforado
d.Erlenmeyer de filtración
e. Tubo de ensayo
F. Algodón
g. Vacio


a. Adsorbente
b. Vidrio sinterizado
c. Tapón de caucho perforado
d. Erlenmeyer de filtración
e. Tubo de ensayo
F. Algodón
g. Vacío

26
en orden creciente de polaridad con los solventes más comunes para los trabajos en cromatografía de capa
delgada: Hexano, éter de petróleo, diclorometano, acetato de etilo, acetona y metanol.

Procedimiento que ha dado resultados satisfactorios para fragmentación de extractos brutos en trabajos
fitoquímicos recientes de extracción de metabolitos secundarios en pasto Braquiaria decumbus y altamisa
(Partheniun hysterophorus).

1.6.4. Electrocromatografía: Es una combinación de la cromatografía sólido-líquido y del efecto de un
campo eléctrico sobre una partícula cargada. Como soporte para la muestra y el disolvente se emplea una
lámina de papel y una fase estacionaria. Los componentes de la muestra se separan por desplazamiento
hacia abajo, como en una cromatografía normal. Simultáneamente, se aplica un campo eléctrico
perpendicular a la dirección de desplazamiento. El efecto neto resultante es que los componentes
describen trayectorias como las que se muestran en el esquema de la Figura 1.8. Estas trayectorias
dependen de las velocidades de desplazamiento lateral y hacia abajo. Así por ejemplo, supongamos que
en el equipo de la Figura 1.8. los componentes han de recorrer una distancia de 40 cm. en sentido
descendente: El tiempo que tardará cada uno de ellos en alcanzar el colector dependerá de su velocidad
en este sentido.

Así el componente A recorre 10 cm. hacia el ánodo mientras recorre 40 cm. hacia abajo; el B, 7.5 cm.
hacia el ánodo y 40 cm. hacia abajo; C no se desplaza lateralmente y el D, 10 cm. hacia el cátodo durante
un recorrido de 10 cm. en sentido descendente. En definitiva, el resultado neto es una separación clara de
los componentes cuando alcanzan la base del papel.

- Análisis electrocromatográfico continúo. En un análisis electrocromatográfico, la velocidad de
flujo descendente de cada componente depende de los mismos factores que controlan la separación
en una cromatografía sólido-líquido.



Figura 1.8. Esquema del equipo utilizado para electrocromatografría.
Estos factores, que se han considerado anteriormente (1) la solubilidad de cada componente en el

27
disolvente que se desplaza y (2) la tendencia de éstos a ser retenidos en la superficie del substrato. Si las
fuerzas atractivas entre el componente y la fase estacionaria son importantes (fuerza de absorción), la
velocidad de flujo descendente por el papel será pequeña.

El mismo efecto se observa si se aumenta el área superficial de la fase estacionaria. El movimiento lateral
de los componentes depende del campo aplicado. Según que el componente esté cargado positiva o
negativamente, el desplazamiento lateral será hacia el cátodo o hacia el ánodo, respectivamente; si no
posee carga eléctrica no experimentará desviación alguna. Así pues, la carga del componente controla el
desplazamiento horizontal. La distancia lateral recorrida por cada componente depende del tiempo que
tarde en alcanzar la base del papel, la velocidad del movimiento lateral depende del campo aplicado y de la
carga eléctrica. Cuanto mayores son la carga y el campo aplicado, mayor es la fuerza atractiva y más
rápido el movimiento. Así mismo, cuanto mayor es el tamaño de la molécula más lento es el movimiento,
ya que las moléculas grandes gastan más tiempo en la superficie de la fase estacionaria. El efecto neto de
este factor es variable.

1.6.4.1. Aplicaciones analíticas. La aplicación más importante de la electrocromatografía, al igual que
todas las formas de cromatografía, es la separación de los componentes de una muestra. Una vez
separados, los componentes pueden ser identificados y determinados por algún método adecuado (tal
como espectroscopía de absorción IR, o atómica). En general, la electrocromatografía es más utilizada con
muestras acuosas aunque también ha encontrado aplicaciones con disolventes orgánicos. El método es
continuo; una vez en marcha el equipo. La muestra puede ser añadida de forma continua a la superficie del
papel y recogida en la base. Por otra parte, el proceso de separación no es destructivo y los componentes
se recogen inalterados.

Con esta técnica pueden detectarse cambios en la composición del suero humano (que se altera en una
persona enferma). También puede utilizarse para separar colorantes o purificarlos.

La electrocromatografía permite la separación de mezclas de iones metálicos así como de aniones. Es
necesario un cuidadoso control de pH, ya que los cambios de pH afectan sensiblemente la carga sobre los
iones metálicos.

Por otra parte, los agentes acomplejantes modifican las características de flujo de los componentes. Así
por ejemplo, la separación de dos metales que en condiciones normales, sean difíciles de separar puede
lograrse acomplejando uno de ellos y dejando el otro en su estado normal. Aunque el método no está muy
divulgado, para algunas aplicaciones especiales, es superior a cualquiera otro.

Electroforesis capilar: La investigación y aplicación de la electroforesis en tubos capilares al final de la
década de los años ochenta del siglo pasado, dio origen a varios instrumentos comerciales para producir
separaciones a altas velocidades y gran resolución con volúmenes de muestras extremadamente pequeñas
por el orden de 0.1 a 10 nanolitros (nL), en contraste con la electroforesis ordinaria que emplea volúmenes
por el orden de microlitros (μL). Las especies separadas son eluidas desde uno de los extremos del capilar,
por lo cual se puede hacer uso de detectores cuantitativos como los utilizados en cromatografía líquida de

28
alta resolución en lugar de las técnicas de coloración de la electroforesis común.

La electroforesis capilar ha permitido solucionar una gran cantidad de problemas analíticos mediante su
aplicación en varias modalidades como la electroforesis capilar en gel utilizada en las separaciones de
macromoléculas, como proteínas, fragmentos de ADN y ologonucleótidos que tienen en esencia la misma
carga pero distinto tamaño. Una de sus mayores aplicaciones ha sido en la investigación del genoma
humano en la secuencialización del ADN.

2. Cromatografía de Gases: En la cromatografía de gases los componentes de una muestra vaporizada
se separan como consecuencia del reparto entre una fase gaseosa y una fase estacionaria Contenida en
una columna. Al efectuar una separación cromatográfica de gases, la muestra se vaporiza y se inyecta en
la cabeza de la columna. La elución se lleva a cabo mediante el flujo de una fase móvil de gas inerte. A
diferencia de la mayoría de las otras técnicas cromatográficas la fase móvil no interactúa con las moléculas
de los compuestos a separar su única función es transportar los compuestos a través de la columna. La
cromatografía de gases en sus modalidades gas sólido, gas liquido es aplicada en la separación y análisis
químico de compuestos volátiles. La cromatografía gas sólido se basa en una fase estacionaria sólida en la
cual la retención de los analitos ocurre por que hay adsorción y su aplicación es limitada a la separación
de ciertos compuestos gaseosos de bajo peso molecular.

La adsorción es la adherencia de los átomos iones o moléculas de un gas o líquido a la superficie de otra
sustancia denominada adsorbente, los sistemas más comunes son gas sólido y líquido sólido. Los
materiales finamente divididos (carbón activado, alúmina activa, silicagel) o microporosos con una gran
área de superficie activa son fuertes adsorbentes por lo cual son utilizados como fases estacionarias en la
cromatografía gas sólido ya que cuando están presentes las moléculas de dos o más sustancias, las de
una sustancia pueden ser adsorbidas más fácilmente que las de las otras, fenómeno conocido como
adsorción preferente. También son usadas como soportes de de la fase líquida estacionaria en la
cromatografía gas líquido.

La quimioadsorción es la formación de enlaces entre las moléculas superficiales de una sustancia con
gran energía superficial y otra sustancia gaseosa o líquida que entra en contacto con ella. Los enlaces así
formados son comparables, en fuerzas a los enlaces químicos corrientes y mucho más fuertes que los
enlaces de Vander Waals que caracterizan la adsorción física. La quimiadsorción es aprovechada en la
cromatografía gas líquido en el desarrollo de fases líquidas estacionarias enlazadas o ligadas al soporte
sólido.

La absorción es la penetración de una sustancia en la estructura interna de otra. Puede ser fisicoquímica
como, en el caso de un líquido que toma moléculas de un gas o vapor y es muy importante en el proceso
de separación por cromatografía gas líquido.

La cromatografía Gas líquido tiene gran aplicación en todos los campos de la ciencia, es de las más
utilizadas en la química analítica por ser una técnica donde se trabaja con cantidades de muestra muy
pequeñas, por el orden de décimas de microlitros y menores, es una Técnica de alta sensibilidad, bajos

29
límites de detección y cuantificación ( por el orden de 10
-14
g), gran exactitud y precisión, es muy selectiva
con pocas interferencias permitiendo la separación de mezclas muy complejas, se obtienen datos analíticos
reproducibles de alta confiabilidad, por lo cual es objeto de estudio en la segunda unidad de estos
apuntes.

3. Cromatografía de fluidos supercríticos: Es un hibrido de la unión de la cromatografía de gases y
cromatografía de líquidos, en la cual se tienen en cuenta algunas de las mejores características de cada
una.

En ciertas aplicaciones es superior a la cromatografía de gases y a la cromatografía líquido líquido de alta
eficiencia o HPLC. La cromatografía de fluidos supercríticos es importante por que permite la
separación y determinación de un grupo de compuestos que no son manejados convenientemente ni por la
cromatografía de gases ni por la de líquidos. Estos compuestos son 1) no volátiles o térmicamente
inestable por lo cual la cromatografía de gases es inaplicable 2) no contienen grupos funcionales que
permitan la detección mediante técnicas espectroscópicas o electroquímicas que se utilizan en
cromatografía de líquidos de alta resolución.

En la cromatografía de fluidos supercríticos la fase estacionaria es líquida y la fase móvil es un fluido
supercrítico. Un fluido supercrítico se forma siempre que una sustancia se calienta por encima de su
temperatura crítica. La temperatura crítica de una sustancia es aquella por encima de la cual no puede
existir en fase líquida independientemente de la presión. La presión de vapor de una sustancia a su
temperatura crítica es una presión crítica. Una sustancia a temperaturas y presiones por encima de su
temperatura y presión críticas (punto crítico) se denomina fluido supercrítico. La densidad, viscosidad y
otras propiedades de los fluidos supercríticos son intermedias entre las propiedades de esa sustancia en
estado gaseoso y en estado líquido. Una propiedad de los fluidos supercríticos que está relacionada con
sus densidades elevadas (0.2 a 0.5 g/cm
3
, es su capacidad para disolver moléculas grandes no volátiles.
El dióxido de carbono (Co2) supercrítico por su capacidad de disolver fácilmente hidrocarburos alifáticos
con un gran número de átomos de carbono es una de las fases móviles más utilizada en esta técnica
cromatográfica y procesos industriales de extracción.












30







UNIDAD 2

2. CROMATOGRAFIA DE GASES
4


Objetivo General

Presentar al estudiante los principios generales de la cromatografía gas líquido, para su aplicación en el
análisis cualitativo y cuantitativo de mezclas de líquidos orgánicos.

Objetivos Específicos

Terminada la unidad, el estudiante será capaz de:

1. Determinar los principios físicos que gobiernan los procesos de separación por cromatografía gas líquido.

2. Definir los términos utilizados en cromatografía gas líquido.

3. Reconocer, clasificar y describir la función de cada uno de los componentes de una columna
cromatográfica y medir su eficiencia.

4. Reconocer y describir la función de cada una de las partes que integran un cromatógrafo de gases.

5. Diferenciar la cromatografía gas-líquido de la cromatografía líquida de alta eficiencia.













4 Materiales didácticos recopilados y organizados por el profesor Federmán Castro Eusse para la
asignatura análisis Instrumental II.

31





2. Cromatografía de gases

2.1. Cromatografía Gas-sólido

En cromatografía Gas-Sólido la fase estacionaria es un sólido y la fase móvil un gas, el proceso de partición
se opera en equilibrios de adsorción gaseosa.

La cromatografía Gas Sólido ha sido de limitada aplicación debido a las dificultades que presenta para
reproducir las áreas superficiales, por dejar colas en los picos de elución y por la retención semipermanente
de gases activos sobre la superficie sólida.

En la cromatografía Gas Líquido la fase fija está constituida por un líquido, sostenido sobre una matriz
sólida inerte y el proceso de separación se da mediante equilibrios líquido-vapor. Es el proceso de
separación por fraccionamiento más importante y de mayor uso por los químicos.

2.2. Cromatografía Gas-líquido. La cromatografía Gas-Líquido puede definirse como una técnica
analítica útil en la separación, identificación y cuantificación de los compuestos de una mezcla. Se
fundamenta en la diferencia de velocidades de migración de sus compuestos individuales al ser arrastrados
por un gas inerte a través de un tubo relleno de un material adecuado que soporta un medio líquido fijo o
estacionario.

2.2.1 Descripción del proceso de separación por cromatografía gas líquido.

1) se inicia con la introducción de la muestra en fase gaseosa por la parte superior de la columna, cuando la
muestra es líquida se debe pasar a la fase de vapor.

2) Los componentes que tienen buena solubilidad en la fase estacionaria se distribuyen entre ésta y la fase
móvil gaseosa según la ley del equilibrio (liquido- vapor).

3) La elución se hace por medio de un gas inerte que se hace pasar a través de la columna denominado
gas de arrastre o portador.

4) La velocidad de movimiento de los distintos compuestos de la mezcla a lo largo de la columna depende
de su tendencia a disolverse en la fase líquida estacionaria, la diferencia en la energía libre de Gibbs
RT
G
K
g
0
ln
A
= para la evaporación de los diferentes compuestos de la fase estacionaria, da como
resultado tiempos de retención diferentes para cada compuesto.

5). Si el coeficiente de partición favorece la fase líquida estacionaria la cual es el disolvente, se obtendrá

32
una baja velocidad, pero para aquellos compuestos cuya solubilidad es baja en la fase líquida la velocidad
de desplazamiento a lo largo de la columna será más rápida.

6) Cada componente de la muestra gasta una parte de su tiempo en la fase estacionaria ( debido a las
fuerzas de retención) y otra en la fase móvil ( debido a las fuerzas de elución),que es cuando se desplaza
hacia la parte final de la columna. (Si en una columna se colocan dos tipos de moléculas diferentes como
un hidrocarburo alifático y un compuesto aromático, es muy probable que el tiempo que permanezcan en la
fase móvil sea distinto).

7) El compuesto que tiene menor afinidad por la fase estacionaria llegará más rápidamente al final de la
columna de tal manera que es detectado por un instrumento que convierte la presencia del compuesto en
una señal eléctrica proporcional a la cantidad o concentración del mismo.

8) La señal análoga dada por el detector es amplificada y convertida en una señal digital la cual es
procesada para dar un registro gráfico.

9) El registro gráfico de la elución de cada compuesto viene dado por curvas en forma de campana de
Gauss o picos, recibe el nombre de cromatograma; usado para el análisis cualitativo y cuantitativo.

10) La identidad de los compuestos se hace con base en el tiempo que cada compuesto es retenido por la
fase estacionaria de la columna y en términos cromatográficos se denomina tiempo de retención
simbolizado como tr .La identificación también puede hacerse acoplando el cromatógrafo con otras técnicas
analíticas como la E.IR, E.UV, EM, RMN. Etc.

11) La cuantificación se hace midiendo el área bajo la curva o pico correspondiente a cada compuesto y
relacionándola con la cantidad o la concentración; tomando como base que el área es directamente
proporcional a la cantidad o a la concentración del compuesto. Dependiendo de la forma de los picos
(simetría) también se puede cuantificar mediante una relación directa de la altura del pico con la cantidad o
la concentración.

2.2.2 Mediante algunos datos supuestos se tratará de ilustrar el análisis cromatográfico.

Tomemos un gas Z y supongamos que fluye con una velocidad constante de 30 cm/minuto a determinadas
condiciones de temperatura y presión a través de un tubo vacío de 120 cm de largo y 1 cm de diámetro,
tardaría 4 minutos en pasar. ¿Si el tubo lo llenamos de arena y hacemos pasar nuevamente el gas Z que
sucederá? Por supuesto que fluiría más lentamente, si su velocidad fuera de 20 cm/minuto, tardaría 6
minutos para atravesar el tubo.

En estas condiciones el tubo con arena es similar a una columna de cromatografía gaseosa, en la cual la
arena será la fase estacionaria y el gas que fluye la fase móvil.

Complementemos esta analogía considerando algunas propiedades de los gases y vapores solubles:

Coloquemos en un recipiente un líquido no volátil A, a condiciones constantes de temperatura y presión, se
introduce en el recipiente el gas Z que hemos considerado anteriormente y que es soluble en el líquido no

33
volátil A. Cerremos herméticamente el recipiente. ¿Qué sucederá después de transcurrido algún tiempo?
Lógicamente que el gas sobre el líquido se encuentra en equilibrio con el gas disuelto, es decir, se ha
establecido un equilibrio, lo que indica que la distribución de moléculas gaseosas en el líquido y en el gas
permanece constante. No obstante, se presenta un equilibrio dinámico dándose un intercambio entre las
moléculas gaseosas en los dos estados, así pues, las moléculas gaseosas se disuelven a la misma
velocidad con la cual las moléculas de gas disuelto abandonan el líquido. Cada molécula del gas Z gasta
una parte constante de su tiempo en el líquido A y el resto en la fase gaseosa.

Saquemos la arena del tubo, empapémosla con el solvente A en una forma homogénea y volvamos a
ubicarla en el tubo. Aquí ya existe una mayor analogía con una columna para cromatografía Gas Líquido.

La arena será el soporte de la fase estacionaria, el líquido no volátil A será la fase líquida y el gas Z será la
fase móvil.

Supongamos que el Gas Z pasa un 40% de su tiempo en el líquido A y un 60% en estado gaseoso.

Hagamos pasar nuevamente el gas Z a través del tubo, ¿Qué sucederá con el tiempo que gasta para
atravesarlo? ¿Aumentará? ¿Disminuirá? Evidentemente aumenta, pues el gas será retenido por la fase
estacionaria y sólo se moverá cuando se encuentre en estado gaseoso. El tiempo que demora el gas en
atravesar la columna se denomina en términos cromatográficos tiempo de retención y se simboliza por
r
t .
Anteriormente hicimos el supuesto de que el gas Z cuando el tubo se encontraba lleno de arena lo
atravesaba con una velocidad de 20 cm/min demorándose 6 minutos, ahora el gas en presencia del líquido
no podrá hacerlo con el 100% de su velocidad sino que lo hará con una velocidad media de:
60/100 x 20 cm/min = 12 cm/min, denominada velocidad lineal Demorándose para atravesar el tubo 10
minutos.

Si sustituyéramos el gas Z por un segundo gas Y observamos que en igualdad de condiciones el gas Y
gasta sólo un 20% de su tiempo en el líquido, y un 80% de su tiempo en estado gaseoso si lo hacemos fluir
a través del tubo con arena humedecida con el líquido A, su velocidad media sería:
80/100 x 20 cm/min = 16 cm/min y tardaría para atravesar el tubo 7.5 minutos.

Si hiciera pasar a través del tubo lleno de arena embebida en el líquido A una mezcla del gas Z y Y, en
igualdad de condiciones a los casos anteriores, ¿Qué sucederá? Que el gas Y saldría a los 7.5 y el Z a los
12 minutos obteniéndose su separación. Usando un gas inerte como fase móvil para arrastrar el gas Z y el
gas Y se logra más rápida y mejor la separación.

Qué fracción de tiempo pasa un compuesto en la fase móvil?. Cuando se encuentran en la fase móvil,
las moléculas de soluto se transportan a la velocidad de la fase móvil. Cuando una molécula se asocia
a la fase estacionaria, no se mueve. Por tanto se puede enunciar una ley como base de todas las
separaciones cromatográficas: La velocidad media de una sola molécula depende del tiempo
medio que permanece asociada a la fase estacionaria comparado con el tiempo en que se mueve
con la fase móvil

Esta ley puede expresarse por medio de una ecuación. La ecuación contiene la velocidad lineal la cual

34
representa la velocidad media a la que fluye la fase móvil a lo largo de la columna.

Por lo tanto: Velocidad media de desplazamiento = velocidad de la fase móvil X fracción de tiempo de la molécula
en la fase móvil + velocidad lineal de la fase estacionaria X fracción de tiempo de la molécula en la fase estacionaria.

Debido a que la velocidad lineal de la fase estacionaria es cero, el segundo término no contribuye a la
medida. Si se llama V a la media de la velocidad lineal de la fase móvil, entonces: velocidad media de
desplazamiento = V X fracción de tiempo de la molécula en la fase móvil.

Podemos relacionar el coeficiente de partición
g
K con el tiempo de retención
r
t considerando la
fracción de tiempo que la molécula está en la fase móvil es igual a la fracción de especies que se
encuentran en la fase móvil. Escrito en forma de ecuación para un compuesto la idea se puede
expresar así:

Número de moles del compuesto en la fase móvil
Fracción de tiempo de un compuesto en la fase móvil = __________________________________________________________________

Número total de moles del compuesto en la fase móvil y en la fase estacionaria


El número de moles del compuesto es igual al producto algebraico de la concentración molar y el
volumen por lo tanto los subíndices m y s, se refieren a la fase móvil y estacionaria respectivamente:

Fracción de tiempo en la fase móvil=
s s m m
m m
V C V C
V C
+
La ecuación anterior se puede expresar en
términos de coeficiente de distribución,
m
s
g
C
C
K = , haciendo las respectivas sustituciones.
En la gráfica de la figura 2.1 , la extracción sucede a medida que la fase móvil se mueve a través de la
fase estacionaria, la idea de que la separación es equivalente a una extracción de un único equilibrio,
ocurre a través de una longitud específica entre dos fronteras conceptuales, está incluida en este
modelo. La longitud (o altura) entre estas fronteras conceptuales es un plato teórico.




35

Figura 2.1 Grafica que muestra la idea de la cromatografía como una extracción.




2.2.3. Glosario de términos y fórmulas
5
.

Cromatograma: Representación gráfica de los picos de elución de una mezcla en un plano de
coordenadas, en cuya abscisa se encuentra el tiempo o el volumen de retención y en ordenadas la señal
del detector en mv. Es el registro obtenido al representar gráficamente la salida de los distintos
componentes de la mezcla.

Línea Base: Línea dibujada por el registrador o monitor de un Cromatógrafo en ausencia de muestra.

Punto de Inyección: Momento en que se introduce la muestra al sistema cromatográfico.




5
Stanbuk,Jorge
Walter,J.Q. Jackson, Jr.M.T. And MaynardJ.B. Ed Chromatographic System.maintenance and
troubleshooting. 2a. Edition, Academic press. New York.


36


Figura 2.2. Representación gráfica de un pico cromatográfico y un cromatograma de tres compuestos.
Campana de Gauss: Curva normal, forma ideal de un pico cromatográfico de elución. La base del
triángulo obtenido al trazar tangentes a los puntos de máximo pendiente, tiene una longitud de cuatro
veces la desviación típica estándar. La cual tomada como longitud o como tiempo es la base para los
cálculos cuantitativos y relacionados con la eficiencia de la columna y tiempo de retención.

Altura h: Altura del pico, la distancia perpendicular desde la línea base y la máxima deflexión del pico.

Ancho de la base W: La distancia entre las intersecciones de las tangentes a los puntos de inflexión con la
línea base.

Wh: Ancho a la mitad de altura.

Tiempo de retención tr: Tiempo requerido para que el máximo de un pico de soluto llegue al detector en
una columna cromatográfica.

Tiempo muerto tg: Tiempo de retención de un gas o de un componente cuya solubilidad en la fase líquida
es muy baja, (ejemplo: oxígeno, aire), y su velocidad se aproxima a la velocidad del gas portador.

Tiempo de retención corregido
°
r
t : Equivale al tiempo de retención menos el tiempo muerto (tiempo de
retención del aire).

Volumen de retención Vr: Volumen de gas requerido para llevar un máximo de componente a través de la
columna.

Volumen muerto Vg: Volumen de retención para un componente que no interactúa con la fase líquida.

Volumen de retención corregido a la presión media de la columna
°
r
v : Corresponde a Vr - Vg .

37

Resolución R: Es el grado de separación entre dos picos. Es función del ancho y la distancia entre los
picos.


2 1
2
W W
d
R
+
=


d : Distancia entre dos picos adyacentes.

1
W : Ancho de base del pico 1

2
W : Ancho de la base del pico 2

Cuando R = 1.5, la separación es completa.

Factor de retención o: Medida de la capacidad de una fase estacionaria de separar dos compuestos.

Esta es la relación de los tiempos de retención corregidos (relativos) entre los componentes, o la relación
entre los coeficientes de partición.


y
x
K
K
= o ó
ry
rx
t
t
= o

Factor de capacidad k': Es un término que depende de las propiedades de la columna y del soluto. Es la
relación entre tiempo de retención corregido de un compuesto y el tiempo muerto.

K'
g
g r
t
t t ÷
=
Factor de retardo Rf: Razón entre las velocidades de movimiento de un compuesto y el gas portador, a
través de la columna.

Coeficiente de partición Kg: La relación de concentración de soluto en la fase estacionaria con relación a
la concentración de soluto en la fase móvil (Gas de arrastre o gas portador).

Concentración de soluto en la fase líquida (peso/ml)
Kg = ----------------------------------------------------------------
Concentración de soluto en la fase gaseosa (peso/ml)

Columna: Tubo de (metal, vidrio teflón o sílice) que contiene la fase estacionaria.

Columna rellena empacada o analítica: Tubo de vidrio o metal que contiene en su interior tanto el
soporte sólido como la fase líquida o estacionaria.

Columna capilar: Columna de diámetro pequeño (0.5 a 0.25 mm de diámetro), de longitud relativamente

38
apreciable (45 a 90 metros), puede contener únicamente la fase estacionaria depositada sólo en las
paredes internas. (WCOT - wall coat open tubuler) y la fase estacionaria químicamente ligada a la pared
(WBOT - wall bond open tubular). Se denomina también columna de Golay.

Eficiencia N: La capacidad de una columna para mantener la forma aguda de los picos. Este es el primer
criterio para evaluar la calidad de una columna.



2
16 |
.
|

\
|
=
Y
X
N o
2
16
|
|
.
|

\
|
=
°
W
t
N
r



°
r
t = Tiempo de retención corregido
W = Anchura del pico en la base. Tiempo que gasta el compuesto en atravesar el detector.
N = Número de platos

Soporte sólido: Sólido poroso e inerte que va dentro de la columna y en el cual se empapa o se liga
químicamente la fase líquida o estacionaria.

Sustrato: Superficie recubierta por la fase líquida.

Fase líquida: Llamada también fase estacionaria; es un líquido poco volátil a la temperatura de operación
de la columna, el cual se encuentra distribuido uniformemente sobre el soporte sólido.

Fase ligada: Fase estacionaria unida químicamente al soporte

Gas de arrastre: Gas inerte que lleva a través de la columna los componentes de la muestra. Los más
comunes son: Helio, Nitrógeno, Argón y Argón/Metano.

Flujo Fc: Es el flujo volumétrico del gas de arrastre medido a la temperatura de la columna y a la presión de
salida. Determinado en volumen por unidad de tiempo (mL/s)

Velocidad lineal de flujo: relación entre la longitud de la columna y el tiempo que demora un compuesto
para recorrerla.

Rotámetro: Medidor del flujo de gas, consistente en una esfera pequeña contenida en un tubo de vidrio.
La velocidad de flujo es función del peso de la esfera en el tubo.

Medidor de flujo de burbuja: Es un medidor de flujo de gas conformado por un tubo de vidrio graduado,
una pera de caucho y una solución de jabón. El flujo se determina midiendo el tiempo que gasta una
burbuja en desplazarse un rango seleccionado de la graduación.

Elución: Es la salida al final de la columna de un componente de la muestra.

Splitter: Divisor fijo o variable del volumen de muestra inyectada.

39

Teoría de platos
1
: De acuerdo con la definición de coeficiente de partición una sustancia que entra en
una columna junto con el gas de arrastre se disolverá en la fase líquida hasta que se establezca un
equilibrio de acuerdo con los valores de la concentración en la fase estacionaria y en la fase móvil.

Durante el paso de la sustancia a lo largo de la columna, este equilibrio se rompe por efectos del transporte
y debe restablecerse consecutivamente. Desde el punto de vista teórico es conveniente considerar este
proceso en varios pasos continuos de equilibrio, es como si se dividiera la columna en un número de
secciones iguales entre sí; en cada una de estas secciones el equilibrio vapor líquido debe restablecerse.

Se ha denominado a cada una de estas secciones plato teórico; en forma similar al término empleado en
la destilación (Equilibrio líquido-Vapor en las columnas de destilación).

Ln Kg = -AG°/RT: Expresión general matemática que describe que la retención es función de la
temperatura columna y la volatilidad del soluto mientras esta disuelto en la fase estacionaria, las diferencias
en la energía libre de Gibbs para la evaporación de los solutos de la fase estacionaria, resulta en tiempos
de retención diferentes para los distintos solutos. Donde:
KD: Constante de distribución, factor de reparto o coeficiente de distribución.

AG°: Cambio en la energía libre de Gibbs para la evaporación del compuesto en la fase estacionaria.

T: Temperatura de la columna en grados Kelvin.

R: Constante de los gases ideales.

Detector: Dispositivo que convierte la presencia de un componente de la muestra en una señal eléctrica al
final de la columna. Los detectores monitorean por medio del cambio en alguna de las propiedades físicas
de los gases.

Amplificador: Parte del sistema electrónico que amplifica la señal producida en el detector cuando un
componente de la muestra es eluído.

Selectividad: Es la tendencia de un detector o columna a responder o separar más a cierta clase de
compuestos que a otros.
Sensibilidad: cambios en la señal producidos por cambios en la concentración.

Atenuación: Parte del sistema electrónico que atenúa o reduce la señal ha ser llevada al registrador o
monitor.

Monitor: Parte del hardware del computador donde se presenta el cromatograma y demás información.

Registrador: Instrumento que grafica los picos de los componentes eluídos de una muestra conformando
el cromatograma.


40
Integrador: Instrumento usado para determinar el área bajo la curva de cada pico cromatográfico. Se
puede hacer en forma mecánica o electrónica.

Pico: Representación gráfica de la elución de un compuesto de la muestra.

Pico principal: Pico caracterizado por una gradual elevación y por un rápido regreso a la línea base.

Pico fantasma: Picos inesperados en el cromatograma, generalmente causados por la contaminación en
el sistema y/o la muestra.

Software para cromatografía: Conjunto de programas que facilitan la programación de parámetros, la
cualificación, cuantificación, reporte de datos y resultados en los análisis cromatográficos.

Relación entre TR', VR', RF' Y KG

(1) Vr= trFC

(2) VG = tg FC

Tc
(3) FC = F'C ---
Ta

F'C = Velocidad de flujo del gas medido a la temperatura de la columna y a la presión de salida
FC = Velocidad observada
Tc = Temperatura de la columna
Ta = Temperatura ambiente

(4) V
o
r = J tr FC

(5) V
o
g = J tG FC

3 [(P1/P0)
2
- 1]
(6) J = -------------------
2 [(P1/P0)
3
- 1]

P1 = Presión de entrada del gas a la columna
P0 = Presión del gas a la salida de la columna

L/tr tG
(7) Rf = -------- = ------
L/tg tr

Velocidad del componente = L/tr
Velocidad del gas portador = L/tg

41


V
o
r V
o
g
Despejando la ecuación (4) y (5) tr = ------ y tg = -------
J FC J FC

Reemplazando estos valores en la ecuación (7)


tg V
o
g/J FC J FC (V
o
g) V
o
g
Rf = ----- = ---------------- = ------------------ = --------
tr V
o
r/J FC J FC (V
o
r) V
o
r
Luego,

V
o
g
(8) Rf = --------
V
o
r
Para un sistema líquido, puede aplicarse la ecuación (9):

Para relacionar V
o
g y V
o
r con el coeficiente de partición (Kg)

Am
(9) Rf = ---------------
Am + Kg As

Con las bajas concentraciones utilizadas en la cromatografía gas líquido Kg es a menudo independiente
de la concentración. Para la cromatografía gas líquido es conveniente expresar Rf en volúmenes de fase
gaseosa y fase líquida, de donde en la ecuación (9):

Am = Área transversal de la fase gaseosa

As = Área transversal de la fase líquida

Kg = Coeficiente de partición

Siendo:

Vl = Volumen total de líquido contenido en la columna

V
o
g = Volumen corregido de la fase gaseosa

L = Longitud de la columna Luego:

V
o
g
V
o
g = AmL entonces, Am = -----

42
L
Vl
Vl = AsL As = -----
L

Sustituyendo estos valores en la ecuación (9),

V
o
g
(10) Rf = ----------------
V
o
g + Kg Vl

Observando la ecuación (8)

V
o
g
Rf = ------ y comparándola con (10), tenemos:
V
o
r


V
o
g V
o
g
---- = ---------------- Se puede decir que:
V
o
r V
o
g + Kg Vl



V
o
g (V
o
g + Kg Vl)
V
o
r = ----------------------- simplificando V
o
g, tenemos:
V
o
g

(11) V
o
r = V
o
g + Kg Vl V
o
r en la ecuación (4) es igual a Jtr FC Reemplazando este valor en la ecuación

(11) JtrFC = V
o
g + Kg Vl

V
o
g + Kg Vl
Luego: (12) tr = ----------------
JFC

El tiempo de retención depende del volumen de la fase líquida y gaseosa (Vl y V
o
g), contenidas en la
columna rellena; y del coeficiente de partición. Como puede verse tr se hace menor al aumentar el flujo FC
del gas eluyente.

Para los tiempos de retención relativos de una mezcla de dos componentes b, c se tiene:

V
o
g + Kgb Vl V
o
g + Kgc Vl
trb = --------------- trc = -------------------
JFC JFC

43

Dividiendo miembro a miembro obtenemos:

trb V
o
g + Kgb Vl
---- = ---------------
trc V
o
g + Kgc Vl

Que es el tiempo de retención relativo denominado también factor de separación o selectividad:

trb
o = -----
trc

Ejercicio: En un análisis cromatográfico, se obtuvieron los siguientes datos para una columna (gas-líquido):

1. Temperatura de la columna 40
o
C
2. Presión del gas a la entrada de la columna 1.120 mm Hg
3. Presión del gas a la salida de la columna 620 mm Hg
4. Volumen de fase líquida estacionaria a 40
o
C 3.5 C.C.
5. Velocidad de flujo del gas a 22
o
C 14.2 CC/min
6. Tiempo de retención del aire 0.25 minutos
7. Tiempo de retención para el N-Hexano 2.75 minutos
8. Tiempo de retención para el N-Heptano 3.9 minutos

Calcular:

1. Volumen de retención del aire

2. Volumen de retención corregido del N-Hexano

3. Volumen de retención corregido del N-Heptano

4. Rf para n-Hexano
Rf para n-Heptano

5. Coeficiente de partición a 40
o
C para el n-Hexano y para
el n-Heptano

6. Factor de capacidad K
,


7. Factor de separación o

Nota: Considerar la temperatura absoluta.


44


















2.2.4 Partes básicas de un cromatógrafo gas líquido.

La cromatografía de gas permite una rápida separación de mezclas complejas en compuestos individuales
y permite una identificación y determinación cuantitativa de cada compuesto como se indica en la Figura
2.3, se inyecta una muestra (1) a una cámara de inyección calorífica (2) y a través de una corriente
constante de un gas inerte (Nitrógeno, Helio, Argón) (3) fluye a través del inyector, llevando la muestra a la
columna (4) que puede ser rellena o capilar, la rellena está empacada con un material de revestimiento
polvoroso que soporta un líquido, la capilar solo contiene el líquido como revestimiento en las paredes,
ubicada en un recinto termostato u horno (5).



45


Figura 2.3 Diagrama de un cromatógrafo de gases

La muestra se separa en la columna, y el gas portador y componentes separados emergen de la columna y
entran al detector (6) Señales emitidas por el detector y amplificadas (7) activan al registrador (8) el que
deja un registro permanente de la separación al trazar una serie de picos, cromatograma (9) con el tiempo
de retención tr se identifica el compuesto y con el área bajo el pico se determina la cantidad o
concentración. Si la señal es digitalizada por el convertidor análogo digital (10), se lleva a un procesador
(11) para ser exhibida en un monitor o una pantalla de cristal liquido.

2.2.4.1. Muestra: Técnica de la jeringa e inyección. La introducción de la muestra se hace mediante una
Microjeringa graduada en microlitros (1 micro-litro= 10
-6
litros) provista de una aguja hipodérmica con la cual
se atraviesa un tapón de caucho (septum). Al presionar el émbolo la muestra es depositada en la cámara
de inyección, la muestra se puede introducir mediante válvulas, circuitos cerrados y en forma automatizada
para minimizar errores en la cantidad inyectada.

Para hacer una buena inyección deben seguirse los siguientes pasos:

a. Se toma en la jeringa un poco de la muestra a analizar y se eliminan las burbujas de aire.

b. Se mide la cantidad de muestra a inyectar

c. Se limpia la aguja y se introduce en la cámara, perforando el septum.

46



Figura 2.4. Diferentes modelos de microjeringas.


d. Se presiona el émbolo, de tal manera que el vaciado sea rápido.
e. Se marca el punto de inyección en la carta o se oprime el botón start al mismo tiempo que se retira la
aguja de la cámara.

Para uso posterior de la Microjeringa, ésta se lava con éter preferiblemente, o con otro solvente volátil.


Precauciones en el uso de las Microjeringas:

a. Evitar que la aguja o el émbolo de la microjeringa se doble. Esto hace que la inyección no sea precisa y
se dificulte o se haga imposible la inyección.

b. Ni la aguja ni el émbolo se deben tocar con las manos, la mugre y la grasa de los dedos contaminan la
aguja y crean dificultad para la introducción del émbolo en el cuerpo de la jeringa.

c. La jeringa se debe guardar siempre en su estuche para evitar que se contamine con el polvo y los

47
reactivos químicos.

2.2.4.2. Inyector: El inyector es un pequeño recinto Calentado eléctricamente y forrado en material
refractario que lo mantiene a una temperatura elevada, por lo cual la muestra se vaporiza inmediatamente,
conectado en serie con el circuito del gas portador que se encuentra separado del exterior por un tapón de
un material perforable (caucho) denominado septum el cual recupera su impermeabilidad inicial después de
la perforación ocasionada por la aguja de la Microjeringa, una vez ésta ha sido retirada.

La cámara de inyección está constituida por un bloque metálico, Además se puede ubicar en su interior un
tubo capilar de vidrio, para la retención de los sólidos que pueda poseer la muestra y así proteger la
columna de posibles contaminantes. A la salida del sistema de inyección, la muestra en fase de vapor,
encuentra el gas portador y junto con él entra en la columna.

Tabla 2..1. Sistema de muestreo.
6

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tipo Tipo Para columnas rellenas usar un sistema de muestreo
de muestreo, con con volumen pequeño y flujo laminar.

Para columnas capilares usar inyector con
sistema divisor de flujo y flujo turbulento.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tama Tamaño de muestra Detector de conductividad:
1 - 10 ul (liq)
1 - 10 ml (gas)
---------------------------------------------------
Ionización: 0,1 - 1 ul (liq)
--------------------------------------------------
Captura de electrones: 0,1 - 1 ul, (liq)
-------------------------------------------------------------
Temp Temperatura

Ligeramente superior Ligeramente superior a la temperatura de ebullición
del compuesto menos volátil de la muestra.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2.2.4.3. Gas Portador: Es necesario disponer de una fuente de gas portador, que puede ser un cilindro,
un depósito o un gasómetro. Generalmente los gases que cumplen este fin son suministrados
comercialmente en cilindros a alta presión (de 1500 a 1800 PSI. libras por pulgada cuadrada).

Disponen de manómetros y reductores para bajar la presión. Generalmente uno de dichos manómetros
marca la presión interna del cilindro y en el otro se selecciona la presión de salida. Las escalas graduadas
de estos medidores usualmente vienen en P.S.I (libras por pulgada cuadrada).

Para medir la velocidad de flujo del gas de arrastre, se dispone en algunos equipos de un fluxímetro que

6
Stambuck, j obra citada

48
suele ser del tipo "Rotámetro", constituido por un tubo de vidrio dispuesto verticalmente, de sección en
forma de V, más amplia hacia la parte superior que hacia la parte inferior, dentro del cual hay una esfera o
una pequeña pieza metálica en forma cónica que es arrastrada por la corriente gaseosa, la cual la eleva a
lo largo del tubo tanto más cuanto más rápida es dicha corriente. El nivel al que flota la esfera indica la
velocidad del gas. Un instrumento sencillo para medir el flujo es el medidor de pompas jabón observar
figura 2.3.

Los gases de mayor uso como portadores son: N2, He, Ar, Ar más metano, CO2, H2. El gas portador para
cumplir su función debe reunir los siguientes requisitos:

a. Pureza: Cualquier impureza presente en el gas de arrastre
equivale a la presencia de una muestra adicional, distinta a la deseada y viene a producir una señal
más en el detector.

Tabla 2..2.
7
Velocidades lineales promedios aconsejables.

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tipo de columna Gas de arrastre
-------------------------------------------------------------
Argón Helio
Nitrógeno Hidrógeno
cm/sg. cm/sg con
-------------------------------------------------------------
Columna rellena 1/4" ó 1/8" 3-4 6-7
Columna Gollay 0.010
Columna Scot 5-7 18-20
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

b. Sensibilidad: Dado que el gas de arrastre fluye constantemente por el sistema, producirá una señal de
fondo la cual influirá sobre la sensibilidad de acuerdo con el detector empleado.

c. Velocidad: La velocidad del análisis depende de la velocidad de difusión de los componentes de la
mezcla en el gas portador.

Para mejorar la pureza del gas portador se recomienda un filtro en la tubería, el cual, está compuesto por
silicagel y un tamiz molecular. La sílica elimina la humedad del gas y el tamiz los contaminantes orgánicos
para el caso del Nitrógeno, que es el más utilizado por su fácil adquisición y bajo costo, el contenido de
oxígeno no debe superar las 20 p.p.m. ya que existe el peligro de que éste al estar en contacto con la
muestra durante un tiempo y a una temperatura alta, se pueda producir descomposición o combinación de
la muestra.

Tabla 2..3. Selección del gas de arrastre.


7
Stambuck, j obra citada

49
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Pureza Pureza Usar siempre gas de arrastre de 99% pureza y se aconseja el empleo de un
empleo de un filtro antes de la entrada del gas al instrumento.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Detectores:

Conductividad térmica (H.W.D.)

Use helio o hidrógeno con excepción de los análisis en los cuales debe determinarse
hidrógeno o helio. Para determinar hidrógeno use helio con hidrógeno (8 a 10% de
. hidrógeno)
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Ionización por llama (F.I.D.)


Use helio, nitrógeno o argón. El helio permite análisis más rápidos. Con nitrógeno o
argón a igual eficiencia que con helio la velocidad del análisis será menor.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Captura de electrones (E.C.D.)

Al trabajar en corriente continua use N2. Trabajando en modal de corriente pulsante usar
con 5% de metano.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Veloci Velocidad del gas
Seleccione la velocidad lineal del gas (o el flujo) según el gas, columna y problema.
Se debe tener en cuenta que al no trabajar a la velocidad óptima se aumenta la
velocidad pero se disminuye la eficiencia. Con nitrógeno o argón la eficiencia disminuye
más rápidamente que con helio.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Control Control

En trabajos isotérmicos o con columnas capilares usar simplemente regulación isobárica

Trabajando con temperatura programada usar control de flujo.



Propiedades del gas:

a. Debe ser inerte respecto a la fase estacionaria y los componentes de la muestra.

b. Debe ser térmicamente estable.

c. La escogencia del gas de arrastre dependerá de:

a. Disponibilidad del gas
b. Pureza del gas
c. Consideraciones respecto al tiempo del análisis y al detector empleado.


2.2.4.4. Columna. Es el corazón del cromatógrafo y en la cual se realiza la separación. Dentro de ella se

50
encuentra la fase estacionaria líquida, dispuesta bien sea sobre un relleno sólido denominado soporte o
sobre el lado interior de la pared del propio tubo. El tubo de la columna puede ser vidrio o metal que sea
inatacable por los componentes de la mezcla. Las columnas son a menudo de diferentes longitudes (de 2 a
6 m) y (diámetros variados de 3 a 6 mm), el metal de mayor uso para la construcción de columnas
cromatográficas es el acero inoxidable pero también es utilizado el Cobre y el Aluminio; acero y silicio en
columnas capilares.

Las columnas de vidrio se pueden disponer en varios tramos conectados convenientemente para reducir el
espacio de la cámara donde se alojan, las columnas metálicas, presentan la ventaja que se pueden plegar
o enrollar una vez rellena con el soporte y la fase estacionaria, con lo cual pueden ser colocadas en un
espacio de pequeñas dimensiones. La columna se encuentra ubicada dentro de un horno o recinto
termostatado, ya que la temperatura influye de modo importante en la retención de los componentes por la
columna, y por tanto en la separación de los mismos; por ello, interesa que la temperatura sea constante a
lo largo de toda la columna, por lo cual la temperatura debe ser fácilmente controlable. Se consigue que la
temperatura sea uniforme en el interior de la cámara donde se encuentra la columna, haciendo circular aire
caliente por medio de un ventilador. En la mayoría de los equipos la temperatura se puede regular de un
modo continuo a cualquier valor deseado, pero en algunos equipos de precio más reducido sólo existen
algunas pocas posiciones de ajuste a ciertos valores prefijados de temperatura.

Igualmente existen equipos a los cuales se puede acoplar un programador lineal de temperatura, el cual
permite calentar la columna con una o varias ratas o rampas de calentamiento predeterminada.

2.2.4.4.1. Soporte Sólido: Las sustancias usadas como soportes sólidos inertes son muy diversas, entre
las cuales se pueden citar desde pequeñas esferas de vidrio, resinas plásticas, grafito o metal, hasta
diferentes clases de sustancias silicadas entre las que tienen mayor importancia son las tierras
diatomáceas.

El soporte sólido tiene como finalidad la de aumentar la superficie efectiva de contacto entre el vapor
de la muestra y la fase estacionaria a la cual sirve de apoyo.

Un soporte sólido debe tener las siguientes características:

a. Superficie específica grande (de 1 a 20 m
2
/g)

b. Estructura porosa con diámetro uniforme igual o inferior a 10 um por poro.

c. Debe ser inerte, no tener interacción química absorción por la muestra.
d. Las partículas deben ser de tamaño y forma uniforme

e. Debe tener resistencia mecánica y no romperse fácilmente.

El soporte sólido ideal que cumpla todos estos requisitos no se ha encontrado; generalmente habrá una de
las características que determine finalmente el tipo de soporte a emplear.

Las sustancias empleadas como soporte sólido en cromatografía son de tres tipos: Tierra de diatomáceas,

51
esferas de vidrio y teflón.

La tierra de diatomáceas es el soporte más empleado, recibe varios nombres según el fabricante así:
Chromosorb, Gas-Chrom, Anakrom, Celite, etc. llevando además un sufijo que indica el tipo de tratamiento
que ha recibido con objeto de mejorar alguna de las características antes mencionadas. Los tratamientos
químicos pueden ser: Lavado con ácido (AW), silanizado (HMDS) o (DMCS); o ambos.




Figura 2.5 Diferentes modelos de columnas rellena y capilares.









Tabla 2.4. Selección de columnas.

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Material
Para muestras biológicas y pesticidas: VI DRIO.
En general: METAL
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Diámetro
3 mm Para aplicaciones generales

52
6 mm Análisis de trazas
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
L Longitud
Hasta 6 m para columnas rellenas y dependiente de
la resolución deseada.


Fase estacionaria
De acuerdo con la Tabla 2.6 Similar en características a la
muestra.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
S Soporte sólido

Análisis generales Chromosorb W. Pesticidas
y esteroides Chromosorb G. Hidrocarburos:
Chromosorb P. Muestras polares:
Tratamiento de lavado con ácido y silanizado.
Muestras semipolares lavado con ácidos.
Muestras no polares sin tratamiento

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tamaño de las Partículas del soporte
Columnas de 3 mm: 80-100 mesh. (mallas)
Columnas de 6mm: 60-80 mesh (mallas)
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Porcentaje de fase estacionaria

Columnas de 3 mm: Hasta 10%
Columnas de 6mm: Hasta 20%
Muestras poco volátiles: Hasta 3%
Muestras muy volátiles: Hasta 30%
Soportes tratados: Hasta 3%
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Columnas capilares
Alta resolución - poca caída de presión, rápidas - análisis de muestras reducidas.
Usar columnas SCOT para muestras con tiempos de retención cortos o para
análisis muy rápidos.

Silanizado: La tierra de diatomáceas es una forma de sílice hidratada que contiene muchos grupos
Hidroxilos libres en su superficie. Estos pueden servir de sitios donde las moléculas de soluto se absorben,
este efecto es indeseable porque retarda el paso de soluto de la película líquida al gas portador, observable
en la asimetría de los picos presentados en el cromatograma. Sin embargo se reduce al usar una fase
líquida polar que sea fuertemente absorbida en la superficie del sólido, pero es más efectivo el tratamiento
del sólido con un agente silanizante como el HMDS (Hexametil disilizano)[(CH3)3Si]2 NH que convierte a los
grupos Si - o - H en compuestos inactivos Si - o - Si (CH3)3 mediante la siguiente reacción:



53
[(CH3)3 Si]2 NH
─ Si ─ O ─ Si + ---------------------> Si ─ O ─ Si + NH3
¦ ¦ HMDS │ │
OH OH │ │
O O
│ │
Grupo activo de Si Si
silice hidratado


CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3


compuesto inactivo Con la cual se
reemplaza el H del OH por:


Si



CH3 CH3 CH3


Las recomendaciones en cuanto a la selección del soporte son las siguientes: Si se emplea el soporte para
recubrirlo con una fase estacionaria no polar (muestras no polares), el soporte no precisa tratamiento pero
sí la silanización. Así mismo si el % de fase estacionaria es inferior al 5% se recomienda silanizar la
columna.

Si se va a recubrir el soporte con fase estacionaria semipolar se recomienda el tratamiento con ácido y si el
porcentaje de recubrimiento es inferior al 5% se recomienda además el silanizado.

Cuando el recubrimiento es con fase estacionaria polar se recomienda el empleo de soporte lavado con
ácido y silanizado.

Chromosorb A: - Se usa en cromatografía preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase
estacionaria, no es frágil ni absorbente.

Características de algunos soportes sólidos:

Chromosorb G: - Para compuestos polares, tiene más resistencia mecánica que el Chromosorb W. El
área específica no es muy grande, se emplea con un porcentaje muy bajo de fase líquida.

Chromosorb P: - Tiene mayor absorción que los demás, se emplea sobre todo para hidrocarburos, área
específica grande.

54

Chromosorb T: - Muy inerte, se recomienda para compuestos muy polares o reactivos como agua, SO2,
hidrazína, halógenos. Es poco eficiente y sólo se debe usar cuando se requiere un soporte inerte.

Chromosorb W: - Similar al Celite 545, es frágil pero de muy alta eficiencia. Uso general.

Teflón: - Se emplea sobre todo con detectores de conductividad térmica para separaciones de H2O,
amoníaco, etc. Es muy difícil de recubrir y el porcentaje de fase estacionaria no debe ser mayor al 10%.
Está siendo reemplazada por polímeros porosos.

Esfera de vidrio - Debido a que el vidrio es prácticamente inerte, se ha empleado para compuestos muy
polares. El recubrimiento es muy bajo (máximo 3%).

Al seleccionar el tamaño de las partículas del soporte se debe llegar a un compromiso entre eficiencia
(tamaño pequeño de partículas) y baja caída de presión (tamaño grande de partículas). El diámetro
promedio de las partículas se da en unidades de malla (mesh) correspondiendo números mayores a
diámetros menores. Para columnas de 1/8" se recomienda 80-100 mesh, en tanto que para columnas de
1/4" se recomienda 60-80 mesh. Al no disponerse de soporte con estas características de tamaño de
partícula se puede aplicar la regla de Purnell: El diámetro interno de la columna debe ser por lo menos 8
veces mayor que el diámetro de las partículas del soporte sólido.

El porcentaje de fase estacionaria con que se va a recubrir el soporte indica la relación en peso de fase
estacionaria con relación al relleno. Así, para 15% de fase estacionaria se necesitará 15g. de fase
estacionaria y 85 gramos de soporte sólido. La cantidad de recubrimiento en la columna influirá sobre la
eficiencia de la columna y capacidad de muestra. También al seleccionar el porcentaje adecuado se debe
llegar a un compromiso entre estas dos variables. Aumentando la proporción de fase líquida se aumenta la
capacidad de muestra y por tanto se baja la concentración mínima detectable, pero al mismo tiempo el
espesor del recubrimiento para un soporte sólido dado aumentará la transferencia entre vapor de muestra y
fase líquida disminuyendo eficiencia.

Algunas reglas son las siguientes:

Columnas de 1/8" con soporte 80-100 mesh (excepto en los casos indicados posteriormente) usar 8-10%
de fase líquida.
Columnas de 1/4" con soporte 60-80 mesh usar 15-20%.

Análisis de esteroides (exceptuando como soporte el Chromosorb G usar 3-4%)

Columnas con Teflón: Usar menos del 10%.

Columnas con esferas de vidrio, menos del 3%, los valores típicos con este soporte son de 0.05 - 0.2%

Para columnas preparadas con Chromosorb G se deben reducir los valores dados anteriormente a la mitad.

Chromosorb A: - Se usa en cromatografía preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase

55
estacionaria, no es frágil ni absorbente.

Tabla 2..5. Relación de solventes/soporte sólido.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Soporte ml. de solventes/gramo de soporte
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Chromosorb p 1.5
Chromosorb w 2.0
Chromosorb g 0.5
Chromosorb t 1.0
Fluoropack 0.8

Chromosorb A: - Se usa en cromatografía preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase
estacionaria, no es frágil ni absorbente. Se han empleado un sin número de sustancias como fase
estacionaria y la literatura al respecto es una de las más abundantes dentro del tema de cromatografía de
gases.

2.2.4.4.2 Fase líquida

La regla de oro en cuanto a la selección adecuada del material es: "La fase líquida debe tener
características fisicoquímicas semejantes a la muestra a analizar". Así para analizar hidrocarburos
saturados escogeremos un hidrocarburo saturado como fase líquida, un ester orgánico se podrá analizar en
un poliéster. Es conveniente relacionar esta semejanza con base a polaridades, analizando una muestra
polar en una fase líquida polar, una muestra semipolar en una fase semipolar.

La fase líquida además de ser semejante a la muestra debe tener una composición química definida deben
ser líquidas y lo menos viscosa posible; no deben reaccionar químicamente con: el soporte, con los
componentes a separar, ni con el gas de arrastre; no debe descomponerse térmicamente ni evaporarse;
deben formar una película que se adhiera uniformemente y deben garantizar una selectividad
suficientemente alta y por tanto propiedades separadoras altas.

Entre las más importantes de estas cualidades están:

a. Viscosidad: No deberá ser muy alta a la temperatura de operación, para facilitar la velocidad de
establecimiento de los equilibrios de reparto entre las fases.

b. Tensión Superficial: La fase estacionaria líquida deberá mojar bien el soporte, sea relleno o sea pared
interior de tubo, asegurándose en lo posible que la adherencia soporte-liquido sea suficiente para evitar que
la fase móvil arrastre a la fase estacionaria, provocando una mala distribución de la misma en la columna.

c. Tensión de Vapor: Deberá ser mínima, con el fin de que una evaporación de la fase estacionaria líquida
no provoque el paso de la misma a la fase móvil, lo cual presentaría perturbaciones en la separación y en
el análisis posterior.

d. Selectividad respecto a los componentes de la fase móvil: Esta condición es la que define en sí a la

56
cromatografía de gases. Las constantes de reparto de los componentes a separar entre la fase móvil y la
estacionaria deberán ser suficientemente diferentes para que la fase estacionaria oponga resistencias
distintas al paso de cada componente a través de la columna, proporcionando así una buena separación de
los componentes a la salida de la misma.

e. Reversibilidad del reparto: El reparto de cada componente entre las fases deberá ser reversible, para
favorecer que los procesos consecutivos de absorción y desabsorción, que se realizan a lo largo de la
columna, sean rápidos y completos en alcanzar el equilibrio. Esta condición excluye implícitamente
cualquier reacción química entre los componentes a separar y la fase estacionaria.

f. Estabilidad Térmica: Es de gran importancia que la fase estacionaria sea estable, en sí misma y
respecto de los componentes de la mezcla a resolver, a la temperatura de trabajo. Esta condición limita
algunas veces la aplicación de un líquido dado como fase estacionaria.

División de las fases estacionarias líquidas según su polaridad:

a. No polares: Parafinas (escualeno, grasa Apiezon L y M, metil siliconas, etc.), hidrocarburos de alto peso
molecular, dialquilsiloxanos como el dimetil polysiloxano.Con estas fases se separan: Hidrocarburos de
alto punto de ebullición, ácidos grasos, aromáticos polinucleares, alcaloides, esteroides, etc.

b. Ligeramente polares: Cyanopropyl phenyl 6% y dimetilpolisiloxano 94%, 20% de diphenyl y 80% de
dimetilpolisiloxano.

c. Polaridad Media: Éteres, cetonas, aldehidos,esteres de ácidos carboxílicos (ftalato de dinonilo,
sebacato de neopentil glicol). Poliésteres (succinato de dietilenglicol, poliésteres aromáticos), 35% de
diphenyl y 65% de dimetilpolisiloxano, 14% Cyanaopropylphenyl y 86% de dimetilpolisiloxano.

Con estas fases se pueden separar: Carbohidratos, aminoácidos, esteroides, alcoholes, halogenados, etc.

c. Polares: Ácidos, aminas, alcoholes, polietilenglicoles, fractonitrilos. Con estas fases se separan: Ácidos
grasos y en general ácidos, alcoholes, ésteres y productos naturales aromáticos, olefinas y cicloparafinas.

d. Altamente polares: Poliésteres, 90% Biscyanoproppyl-10%cyanopropylphenylpolisiloxano,



2.2.4.4.3. Empaquetamiento de la columna.

a. Se define el material del tubo con el cual se va a construir la columna según sea vidrio o metal.

b. Se define el diámetro y la longitud de la columna.

c. Dependiendo de la muestra, de compuestos a separar se selecciona el soporte y la fase estacionaria.

d. Se define la relación en peso de fase estacionaria con relación al relleno.

57

e. Se toma la cantidad previamente pesada de fase líquida disuelta en un volumen adecuado de solvente y
se añade lentamente a un recipiente plano (cristalizador) en el cual se tiene el soporte sólido previamente
pesado. La cantidad de solvente es la suficiente para mojar sin exceso el soporte sólido. Se deja evaporar
el solvente agitando el cristalizador cuidadosamente (no se debe agitar el soporte para evitar que las
partículas se rompan). Se puede calentar ligeramente la mezcla para acelerar la evaporación.

Luego que el material de relleno esté seco se toma la tubería sin doblar y se tapona sin ajustar uno de sus
extremos con lana de vidrio o un tapón de metal poroso. Se coloca un embudo por el otro extremo y se va
introduciendo lentamente el relleno usando en lo posible un vibrador para asegurar que el relleno sea
uniforme.

Una vez llena la columna se tapona el otro extremo y se dobla o enrolla dándole la forma deseada.

f. Envejecimiento de la columna. Una columna recién preparada se debe envejecer, para lo cual se debe
ir calentando lentamente y con flujo de gas de arrastre estando la columna desconectada del detector hasta
una temperatura 15
o
C por debajo de la temperatura máxima de operación de la misma, se mantiene a esta
temperatura entre 10 y 15 horas y luego de 3 a 5 horas a la máxima temperatura.

Después de este procedimiento la columna puede ser empleada para el análisis. A manera de ejemplo
puede citarse la forma de preparar una columna de Chromosorb W al 10% sabiendo que se necesitan 30
grs. de relleno. Se toman tres gramos de fase líquida, se disuelven en 54 mL de solvente (cloruro de
metileno o cloroformo) y se echan sobre 27 grs. de soporte sólido; se sigue el procedimiento anterior. (Ver
Tabla 2.6.)


























58
Tabla 2.6. Fases líquidas más empleadas.

Tipo Fase líquida Actividad temperatura. Máxima Aplicaciones
Rellena Capilar

Hidrocarburo Esqualeno NP 150 130 C5 - C10 parafinas y cicloparafinas.
Apiezon L NP 75-225 75-200 Uso general para altas temperaturas.


Eteres m-bis (m-fenoxifenoxi) benceno P 180 180 Aromáticos; es muy polar Para metil,
etil benceno.
Polieteres OS-138 polofenileter P 75—225 75-200 Aromáticos, substancias polares poco
volátiles.

Dodectil ftalato SP 150 140 General, muestras ligeramente
polares.
Di-2 etilhexisebacato SP 125 125
bis-2(2-metoxietil) P 65 Hidrocarburos alifáticos C2 C5

Succinato de di-etilen P 135 185 Éteres metílicos de Ácidos
Glicol (DEGS) Grasos.
Ésteres
Poliésteres Succinato butanodiol P 70-200 70-190 ―
(BDS)

Adipato de neopentil P 70-200 70-200 ―
Glicol (NPGA)

Succinato de neopentil-
glicol (NPGS) P 70-200 70-200 ―
Tri-metilopropano P 180 Cresoles, xilenoles.
Tripelargonato (Ester
C9 de Celanese)

Carbowax 400 P 100 75 Metilaminas
Carbowax 600 P 125 100 Substancias polares bajo punto
de ebullición.
Poliglicoles
Carbowax 1540 P 150 140 General. Muestras polares

Carbowax 20M P 200 200 Polares alto punto de
ebullición.

Ucon LB 550 X
Poliglicoles (Polipropilenglicol) P 180 160 General muestras polares
Ucon 50 HB 2000
(Polietilen-polipropilen
glicol) P 180 160 ― ―
Igepal CO-880
(Nonilfenoxi polietile-
noxi-etanol) P 60-200 60-185 ― ―



59
Continuación Tabla 2.6.


Tipo Fase líquida Actividad Temperat. Maxim Aplicaciones
rellena Capilar

Aminas Poliamida versamid P 70 Substancias oxigenadas

Nitrilos B,B –oxidipropionitrilo P 175-280 Substancias polares, Alto Punto de
ebullición.

Metilsilicona DC-200 NP 200 160 General
(viscosidad:100 cts)
Metil silicona DC-200
( ancias ad 12.500 cts) NP 225 175 Análisis de pesticidas
SE-30 NP 50-280 80-200 Esteroides, substancias Punto de ebullición

OV-1 NP 50-280 80-200 ― ― ―

DC –550 (Metil-fenil-
Silicona) SP 200 160 Uso general. Temperatu ras intermedias
, subs ancias polares y ligera mente
polares.

Siliconas OV-17 SP 250 200 Esteroides, substancias de alto punto de
ebullición.
FS-1265(QF-1) P 50-250 50-200 Esteroides, substancias de alto punto
De ebullición
SE-52 SP 250 200 Substancias polares alta temperatura.


XE-60 P 250 200 Substancias polares alta temperatura.

Varios Dimetil sulfolano (DMS) P 50 Hidrocarburos alifáticos C2-C5

Hexametil fosforamida P 25 Gas natural, Hidrocarburos CO2



Acido pícrico + fluoreno P 80-125 Hidrocarburos aromáticos

AgNO3 + dietilen-glicol P 50 Gases livianos del petróleo isómeros olefinicos.

m-bis (m-fenoxilenoxi)
benceno + esqualeno P 150 130 Aromáticos. Separación de metil y etil bencenos








60
Continuación Tabla 2.6

Tipo Fase líquida actividad temperat. Maxim Aplicaciones
rellena Capilar

Mezclas m-bis (m-fenoxilenoxi)
Benceno + apiezon L. P 210 175 Aromáticos. Separación de metil y etil
bencenos

7,8 Benzoquinolina +
Esqualeno P 90 Isómeros del xileno

Bentone 34 + DC 200 + Celita P 200 Separación de metil y etil bencenos.



Chromosorb 101 300 Substancias de bajo peso moléculas muy
Chromosorb 102 250 polares: H2O Alcoholes, aminas, esteres,
cetonas, aldehídos y con limitaciones
gases
limitaciones gases livianos.
Los tiempos de retención de chromosorb
101
Polímeros microporosos Son aproximadamente la ½ del 102. Se
prefiere el 102 para gases livianos.

Columnas recomendadas para varias clases de muestras

Tipo de compuestos Fases estacionarias más comunes



Comparación entre características técnicas de columnas empacadas y columnas capilares

Empacadas WCOT SCOT PLOT




61
Continuación tabla 2.6

Comparación de estructuras, polaridades propiedades y uso de algunas columnas capilares en orden de sus
polaridades.




62
Continuación tabla 2.6





63
Continuación tabla 6.2
Adsorbentes sólidos




2.2.4.4.3 Medida de la eficiencia de la columna

El Plato Teórico: La unidad utilizada para medir la eficiencia de una columna cromatográfica es el PLATO
TEORICO, término que deriva de los procesos de destilación. Cuando se calienta una mezcla de dos
componentes, hierve primero el de menor temperatura de ebullición. Sin embargo, el otro componente,
aunque menos volátil, presenta a esa temperatura una presión de vapor finita y, en consecuencia, parte del
mismo se vaporiza junto al más volátil. En estas condiciones, no se efectúa una separación completa y la
destilación se conoce como destilación de plato sencillo. El producto destilado estará enriquecido en el
componente más volátil.

Si este producto fuera destilado de nuevo, se produciría un enriquecimiento en el componente más volátil y
el proceso total sería equivalente a una destilación con dos platos. Así pues, por destilación sucesivas se
obtiene un producto cada vez más puro. Modificando el diseño del equipo de destilación (por ejemplo,
permitiendo algo de reflujo) se aumenta el número de platos de una destilación sencilla y la separación es
más eficaz.

Una separación cromatográfica es, en muchos aspectos, similar a una destilación y por ello su eficiencia fue
medida por AJP Martín en platos teóricos figura 2.6. En este caso, es posible determinar el número de
platos teóricos inyectando en la columna un compuesto sencillo junto con una pequeña burbuja de aire En
la Figura 2.7. aparece el cromatograma correspondiente. Tiempo de emergencia del aire = T minutos
(desde la inyección hasta el máximo del pico de aire).

64


Figura 2.6 Separación de dos componentes; a) Buena separación. b) Mala separación



Tiempo máximo para la muestra = tr + X minutos (desde la inyección hasta el máximo del pico de la
muestra).

Tiempo para que el pico de la muestra pase el detector = Y minutos.




Figura 2.7 Cromatograma de un compuesto que permite ilustrar los tiempos que requiere la muestra y el aire para dar
sus propios picos, x es el tiempo en minutos.

El número de platos teóricos (N) viene dado por la ecuación:

2
16 |
.
|

\
|
=
Y
X
N o
2
16
|
|
.
|

\
|
=
°
W
t
N
r

g rc r
t t t ÷ =
°


Se supone que el aire no interacciona con el substrato líquido y, por tanto, fluye a través de la columna en
un tiempo mínimo. Este período llamado tiempo muerto (tg o trm), es una medida del tiempo que tardaría
una muestra en fluir, si no interaccionara con el substrato. Así pues, el tiempo X es una medida del tiempo

65
extra que invierte un compuesto de la muestra en la columna, concretamente en la fase estacionaria, Y es
el tiempo que tarda la muestra en pasar el detector, es decir, una medida directa de cuánto se ha extendido
o difundido la muestra en la columna durante su recorrido.

El cálculo de N debe hacerse experimentalmente para cada columna, ya que no es posible llenar dos
columnas con substrato en condiciones exactamente iguales. Así por ejemplo, con una columna de 2
metros de longitud se obtuvieron los siguientes datos:

Tiempo de salida del máximo del pico de aire, 1 minuto; tiempo de salida del máximo del pico de la
muestra, 5 minutos; tiempo de paso del pico muestra por el detector, 1/2 minuto; calcular el número de
platos teóricos y la altura de un plato teórico.

( ) cos 1024 64 16
2
1
4
16
2
1
1 5
16 16
2 2
2
i platosteór
Y
X
N = =
|
|
|
|
.
|

\
|
=
|
|
|
|
.
|

\
|
÷
= |
.
|

\
|
=

En la práctica, es más significativo hablar de la altura de cada plato teórico, H, que viene dada por:


( ) HEPT H =
cos atosteóri Númerodepl
umna taldelacol Longitudto
H = ,en el ejercicio anterior:

co platoteóri mm
i platosteór
m mm mX
H / 95 . 1
cos 1024
/ 1000 2
= =

2.2.4.4.4 Ecuación de Van Deempter

Comparando la altura de los platos teóricos de dos columnas se obtiene una medida directa de sus
eficiencias relativas. Conviene hacer constar que no se tiene en cuenta la longitud de la columna, ya que
es una variable que se elimina al indicar las condiciones de máxima eficiencia en el funcionamiento de una
columna dada.

Entre los factores que afectan al tiempo que tarda un componente en atravesar una columna puede citarse
la relación de tiempos invertidos en la fase móvil y en la fase estacionaria. Esta relación se encuentra, a su
vez, afectada por la afinidad entre componentes y substrato, peso molecular del componente, velocidad de
flujo del gas portador y longitud de columna.

En principio podría suponerse que aumentando suficientemente la longitud de la columna podría separarse
cualquier pareja de componentes, independientemente de su afinidad. Sin embargo, aunque todo aumento
en la longitud de la columna implica un incremento en el número de platos teóricos también se produce una
mayor difusión y solapamiento de los componentes, hasta el punto de que, a veces, no se consigue
aumentar su eficiencia.

66

Entre los factores que influyen en la cantidad de componentes esparcidos durante su flujo a través de la
columna deben citarse la difusión en la fase de gas y en la fase líquida, las corrientes parásitas, la
geometría del relleno y la velocidad de flujo del portador gaseoso. La relación entre estas variables y la
eficiencia de la columna viene dada por la ecuación de Van Deempter, que tiene la forma:

H = A + B/V + CV H = (H.E.P.T)) = Altura equivalente a un plato teórico.

A = Una constante que depende de las corrientes parásitas en el flujo gaseoso, y por tanto, de la
geometría del relleno y las paredes de la columna, así como la turbulencia o laminaridad del flujo.

B = Una constante que depende de la difusión de la muestra en la fase gaseosa y líquida. Esta velocidad
depende de la temperatura y de la rapidez con que las moléculas de muestra difunden en el gas portador o
substrato. Aún cuando la mezcla no fluya, difundirá y se extenderá a lo largo de la columna.

C = Una constante que depende de la transferencia de materia entre las moléculas de la muestra en fase
gaseosa y líquida.

V = Velocidad de flujo del gas portador.

Esta ecuación básica ha sido refinada por numerosos investigadores y es objeto, todavía, de una
investigación considerable.

Las constantes A, B y C son características de cada columna. Por ejemplo la constante A es proporcional
a 2ìdp, donde ì es una constante de geometría y dp el diámetro medio de la partícula. El valor de A
depende de las corrientes parásitas que se forman en el gas que fluye. Si el relleno de la columna fuera
perfecto y el flujo gaseoso suficientemente lento, no se produciría turbulencia y A sería cero; sin embargo,
en la práctica, existen irregularidades en el relleno que provocan la turbulencia. Las pequeñas corrientes
parásitas son responsables del esparcimiento de la muestra a lo largo de la columna y, por tanto, de la
superposición de las dos especies. Es, pues, muy importante un relleno adecuado de la columna, ya que
cuanto peor sea éste más intensa será la turbulencia y peor la separación.

La constante B está relacionada con la difusión física de la muestra en la corriente de gas portador.
Supóngase que se inyecta una muestra en el gas portador y que su desplazamiento inicial en la columna es
de 2.5 mm. Si se supone, además que el gas portador no fluye, la muestra difundirá lentamente en dicho
gas. Después de cinco minutos su desplazamiento en la columna es de 25 mm, después de 10 minutos 45
mm, y así sucesivamente. Es evidente que no se formarán corrientes parásitas y, por tanto, la muestra se
esparcirá lentamente en el gas portador.



67


Figura 2.8 Corrientes parásitas en un gas que fluye.

Como ya se expuso anteriormente, la muestra se esparce, fluya o no el gas portador. Si no fluye, y la
muestra se mantiene en la columna durante cinco minutos, avanzará, como mínimo, 25mm.

La velocidad de difusión es independiente de las corrientes parásitas pero depende de las propiedades
físicas de la muestra. La ley de Graham sobre la velocidad difusión de los gases plantea que "Las
velocidades de difusión de los gases están en relación inversa de las raíces cuadradas de sus densidades
o de sus pesos moleculares"
2
1
2
1
d
d
V
V
= o
M
M
V
V
=
2
1
. Moléculas que difunden rápidamente, tales
como hidrógeno o metano, se extienden rápidamente en la columna y su separación es difícil. Sin
embargo, moléculas de peso molecular elevado que se mueven lentamente en la fase gaseosa difunden,
también, lentamente durante su flujo a través de la columna. Conviene tener en cuenta que al hablar de
difusión se hace referencia a la velocidad de difusión de la muestra a la temperatura de la columna.




Figura 2.9 Difusión de muestra en el gas portador dentro de la columna: (a) En el instante de la inyección; (b)
Después de 5 minutos; (c) Después de 10 minutos.

La velocidad de difusión aumenta rápidamente con temperaturas crecientes y, por ello, las muestras de
peso molecular elevado se analizan en columnas calientes.

En estas condiciones, su velocidad de difusión es comparable a la de muestras de pesos moleculares más
bajos a temperaturas inferiores. De forma similar, con moléculas de muy bajo peso molecular, puede ser
necesario enfriarlas antes de su separación para reducir, de esta forma, su velocidad de difusión.

Consideraciones análogas pueden hacerse respecto a la velocidad de difusión de la muestra en la fase

68
líquida. Si la velocidad de flujo es muy pequeña, la muestra permanece en la columna demasiado tiempo y
la difusión es muy grande. Por otra parte, si la velocidad de flujo es demasiado rápida, aumenta la
turbulencia en la columna.

Las condiciones óptimas deben establecerse experimentalmente utilizando la relación de Van Deempter. El
término C representa la resistencia a las transferencias de las moléculas de la muestra entre la fase
gaseosa y la líquida.

Tal como predice la ecuación de Van Deempter, si cambia la velocidad del gas portador, cambia la altura
del plato teórico. La máxima eficiencia de la columna corresponde al mínimo valor de H. El valor óptimo de
V (Velocidad de flujo del gas portador) para obtener el H mínimo puede determinarse experimentalmente,
inyectando una parte alícuota de muestra en la columna con el gas portador fluyendo a una determinada
velocidad V, y calculando H de las ecuaciones.

Repitiendo la determinación con diferentes velocidades de flujo del gas portador se calcula el valor mínimo
de H.


Figura 2.10 Relación entre la altura de un plato teórico y H, y la velocidad lineal, V, del gas portador.


2.2.4.5. Detectores: Los detectores empleados en cromatografía de gases son, en realidad, transductores
de concentración. La propiedad física que mide es la variación de concentración de las sustancias eluídas
en el seno del gas portador, y la mayoría de ellos ofrecen una señal eléctrica proporcional, fácilmente
medible y registrable en función del tiempo.

2.2.4.5.1 Características generales de un detector. Para que un detector (transductor de concentración)
sea útil en cromatografía de gases, debe obedecer una serie de requisitos impuestos por la propia

69
naturaleza del fenómeno cromatográfico y por las prestaciones, en cierto modo exigibles, a esta técnica
separativa. En primer lugar, el detector debe ser un transductor de concentración en fase vapor y, además
poseer una sensibilidad adecuada junto con un bajo nivel de ruido, buena estabilidad y reproducibilidad, alta
fiabilidad y manejo sencillo, no destructivo y de volumen pequeño.

Por otra parte, el detector debe ser rápido, capaz de revelar casi instantáneamente variaciones de
concentración en el gas portador que emerge de la columna cromatográfica; esta rapidez de respuesta es
inherente a la naturaleza del detector, pero puede disminuir si el volumen interno del mismo es grande. Por
tanto, para conseguir una rápida respuesta y también para evitar pérdida de resolución de las sustancias
separadas en la columna, el volumen interno del detector debe ser lo más pequeño posible.

En orden a obtener información cuantitativa es evidente que la respuesta del detector debe ser lineal y con
un margen de linealidad lo más amplio posible.

En resumen, al comparar la calidad de los detectores en cromatografía de gases, hay que tener en cuenta
estos tres conceptos primordiales: Sensibilidad, linealidad y una rapidez de respuesta adecuada, como
también bajo nivel de ruido.

a. Detectores integrales y diferenciales: La primera clasificación general de los diversos tipos de
detectores puede efectuarse según la modalidad en que ofrecen la señal, y son varios los autores que
aceptan esta primera distinción como fundamental.

Los detectores tipo integral ofrecen una señal, en función del tiempo proporcional a la cantidad total que ha
pasado por el detector; la señal se mantiene en el valor que indica el total de sustancia detectada, incluso
cuando ésta ya ha salido del detector y cuando aparece una segunda sustancia, la señal correspondiente
se adiciona a la anterior. Con este tipo de detectores se obtiene un registro en el cual a cada sustancia le
corresponde un peldaño. Y la altura de cada uno de ellos es proporcional a la cantidad de la sustancia
correspondiente (Figura 2.11a.)

Los detectores diferenciales presentan la información en forma curva, que en realidad es la derivada del
registro integral, pues registra la relación ( A s/ A t), ó bien ( A s/ A v). En efecto: El punto de inflexión, en
el registro integral, corresponderá a un máximo en el diferencial y la línea de registro volverá a cero (o el
valor de señal a cero) entre dos sustancias que estén perfectamente separadas (Figura 2.11b.) En este
caso se obtendrán registros cuya forma refleja la distribución de concentraciones, en el seno del gas
portador, de las sustancias eluídas a la salida de la columna; y así la señal es proporcional a la
concentración de sustancia, la cantidad total de la misma será proporcional al área del pico.

Los detectores diferenciales son los empleados en la mayoría de los casos y los que se aplican a los
aparatos comerciales; por ello se hace referencia siempre a los detectores diferenciales cuando se emplea
el término detector.

b. Detectores universales y específicos. Al estudiar los detectores utilizados en la cromatografía
gaseosa es conveniente hacer esta distinción, de acuerdo con el tipo de sustancias capaces de detectar y
también según la especificidad de su respuesta.


70
Se considera como detectores universales aquellos capaces de detectar cualquier sustancia de un modo
lineal cuya respuesta específica es independiente de la naturaleza de la sustancia a detectar. En realidad,
no existe aún ningún detector rigurosamente universal; pues si bien existen detectores, como el de
conductividad térmica, capaz de dar una señal aceptablemente lineal, la respuesta específica depende de
la naturaleza de cada sustancia en grado más o menos importante según el tipo de detector.



Figura 2.11 Representación de la señal por un registrador cuando la recibe: a) De un detector integral, b) De un
detector diferencial.

c. Detectores destructivos y no destructivos. Entre la gran diversidad de tipos de detectores cabe aún
otra clasificación que agrupa a los detectores desde un punto de vista no exento de interés para el químico;
especialmente cuando debe acudir a técnicas auxiliares de identificación cualitativa. Se denomina
detectores no destructivos aquellos capaces de detectar la sustancia sin modificarla químicamente:
Detectores de conductividad térmica y balanza de gases.

Por el contrario, cuando la sustancia queda alterada, el detector es de tipo destructivo: Detectores de
ionización de llama, por ejemplo.

Es importante tener en cuenta que con el empleo del detector destructivo la muestra detectada ya no puede
pasar posteriormente a un instrumento o técnica de identificación cualitativa. Por ejemplo: Espectroscopía
infrarroja o espectrometría de masas. Esta dificultad puede solventarse mediante un divisor de flujo, que
tome parte de la muestra a detectar inmediatamente antes del detector y la conduzca a la salida.

2.2.4.5.2 Detector de Conductividad Térmica

Este tipo de detectores o catarómetros, en sus dos versiones (hilo caliente o termistores),han sido de
aplicación muy amplia en cromatografía de gases. Son detectores de una gran universalidad, buena
linealidad, sensibilidad aceptable para la mayoría de casos y de manejo relativamente simple.

71

Fundamento Físico. Cuando un gas se mezcla con otra sustancia gaseosa, su conductividad térmica
varía respecto a la que poseería cuando estaba puro. Por otra parte, al variar la temperatura de un
filamento metálico o de un termistor, se cambia el valor de su resistencia.

a. Estos dos hechos físicos son la base del detector de conductividad térmica. Si en el interior de una
célula, cuyas paredes se mantienen a temperatura constante, hay el elemento caliente (filamento o
termistor) calentado eléctricamente y por dicha célula circula a flujo constante un gas puro, la
disipación de calor por parte del elemento caliente es constante

Tabla 2.7. Límite de detección de algunos detectores.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------
Detector Sensibilidad
(Peso mínimo detectable g seg
-1
)
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
Conductividad térmica 10
-5

Sección transversal 10
-6

Ionización de llama 10
-11

Ionización de argón 10
-12

Captura electrónica 10
-14

Ionización llama alcalina 3x10
-15

Fotométrico de llama 2x10
-12
para azufre
1.7x10
-12
para fósforo
---------------------------------------------------------------------------------------------------------

y, en consecuencia, también lo será su temperatura y resistencia; en el momento en que aparezca un vapor
de distinta naturaleza, junto con el gas, en el interior de la célula, la disipación térmica del elemento caliente
será distinta y se modificará la temperatura del mismo y por tanto su resistencia, por haber variado la
conductividad térmica del gas. La variación de esta resistencia puede ofrecernos una señal eléctrica
adecuada y proporcional a la cantidad de muestra (vapor) que ha entrado en la célula junto con el gas que
circulaba por ella.

b. Esquema Básico. Para poder utilizar adecuadamente el principio físico antes descrito, es necesario
aplicarlo en forma diferencial. Para ello se emplean dos elementos sensibles idénticos situados cada uno
de ellos en dos cavidades o células independientes que se encuentran a la misma temperatura en un
mismo bloque metálico mantenido a temperatura constante. Los dos elementos sensibles constituyen dos
ramas de un puente de Wheatstone. Por una de las células circula siempre gas portador puro (célula de
referencia), y por la otra, gas portador y las sustancias (célula de medida).

Inicialmente se ajusta a cero el puente y la señal de desequilibrio, cuando el vapor de sustancia eluída llega
a la célula de medida, es la que se utiliza para su percepción y cuantificación.

El esquema de la figura 2.12 es evidentemente simplificado, aunque obedece, en su parte fundamental, a
los que se utilizan en el diseño de detectores de conductividad térmica en la actualidad.


72


Figura 2.12 Esquema simplificado de un detector de conductividad térmica

2.2.4.5.3 Detector de Ionización de LLama

Una llama de hidrógeno y aire da lugar a una corriente de ionización muy débil, pero capaz de ser puesta
de manifiesto mediante un diseño electrónico adecuado. La llama de hidrógeno aire genera un medio-
ionizante de gran eficacia para las sustancias orgánicas y, por tanto, un sensor que con los complementos
electrónicos adecuados, constituye un transductor de elevada sensibilidad.

a. Fundamento Físico. La corriente de ionización de la llama de hidrógeno aire, en ausencia de cualquier
sustancia, se debe a la presencia de iones H3O
+
acompañado de trazas de iones NO
+
y NH4
+
. Esta
corriente de fondo, se establece al someter la llama a una diferencia de potencial. Al aparecer en la llama
una sustancia extraña se dará una variación en la corriente de fondo debida a la aparición de nuevas
especies iónicas o, incluso, modificación de las que había.

La aparición de una sustancia orgánica en la llama de hidrógeno aire provoca un fuerte aumento de la
corriente de ionización, siempre que el compuesto orgánico contenga unidades C-H en su molécula.

b. Esquema básico: El detector de llama de hidrógeno tiene dos partes fundamentales: El sistema para
producir una llama adecuada y la parte electrónica (electrodos filiformes, fuente de tensión y amplificador de
señal). El conjunto constituye el transductor o detector y la llama es propiamente el sensor.

La Figura 2.13. es un esquema simplificado de un detector de llama hidrógeno. La fuente de tensión
continua debe ser perfectamente estable; en muchos aparatos se emplea incluso una batería. Los voltajes
aplicados a los electrodos oscilan entre 80 y 250 V. La resistencia R tiene como misión el dar lugar a una
caída de voltaje, proporcional a la corriente ionización.

73
Esta resistencia es la resistencia de entrada al amplificador y su magnitud es de 10
12
ohmios, pues las
corrientes de ionización son muy pequeñas, entre 10
-7
a 10
-12
amperios.





Figura 2.13 Esquema simplificado de un detector de ionización de llama.

El amplificador de corriente continua es, en realidad, un electrómetro. Una sustancia orgánica en la llama
produce una corriente de ionización Ii que, a través de los electrodos, llega a la resistencia R, donde da
lugar a una caída de tensión IiR que es amplificada mediante el electrómetro. El voltaje a la salida del
electrómetro es la señal que ofrece este transductor.

El detector de ionización por llama es sensible a la mayoría de los compuestos orgánicos, pero es
insensible al agua, aire y demás gases inorgánicos. Es ideal para análisis en que no se desee registrar el
agua o gases inertes como en el caso de las bebidas alcohólicas.

2.2.4.5.4 Detector de Captura Electrónica

Como su nombre lo indica, los compuestos que entran en el detector capturan electrones, provocando una
disminución de la intensidad de la corriente que circula por él. El efecto es similar al de la absorción de
cuántos de luz por las sustancias coloreadas y sigue una ecuación del tipo de la Ley de Beer. Este sistema
de detección se utiliza cuando se desea conseguir una elevada sensibilidad y selectividad con compuestos
halogenados, de fósforo o nitrogenados.


74


Figura 2.14 Esquema de un detector de captura electrónica.

Como fuentes de electrones o rayos gamma se emplea tritio. El tritio que es un gas, se encuentra
absorbido saturando un hilo de tántalo. Los rayos gamma o electrones son transversales al gas que fluye
de la columna. Muchos compuestos, como parafinas o hidrocarburos sencillos, son prácticamente
transparentes a los electrones, que, sin embargo, son captados por derivados halogenados y por
compuestos de nitrógeno y fósforo. En este caso se producirá un cambio abrupto en electrones que
alcanzan el colector y, por tanto, en la señal del detector.

Hidrógeno y nitrógeno son los gases que presentan un comportamiento más satisfactorio, como portadores,
con este detector. Los gases nobles no son adecuados porque se ionizan; actúan de la misma manera que
un detector de ionización de argón. Cuando se utilice hidrógeno como gas portador hay que tener en
cuenta la posibilidad de que reaccione con los componentes de la muestra. En este caso, los resultados
obtenidos serían erróneos.

2.2.4.5.5 Detector Fotométrico de LLama (DFLL)

a. Descripción: El detector fotométrico de llama ha recibido considerable atención desde su introducción
en 1.966, es el primer detector espectroscópico económico desarrollado para determinar la pareja de azufre
y fósforo contenidos en diferentes compuestos orgánicos, lo cual es la primera razón de su popularidad
como un detector específico que requiere especial consideración y atención para su distinción por el
analista.

La figura 2.15 muestra una representación esquemática de sus partes esenciales. Un quemador de chorro,
un espejo reflexivo, un filtro de paso de banda estrecho (394 nm para azufre, 526 nm para fósforo), y un
fototubo multiplicador.

b. Fundamento físico de operación: Cuando una sustancia contiene fósforo o azufre y es llevada al
quemador en una llama rica en hidrógeno, hay una emisión característica de luz a las longitudes de onda

75
de 526 y 394 nm respectivamente. La luz producida por encima de la llama es aprovechada por la posición
que




Figura 2.15 Esquema de un detector fotométrico de llama FPD

ocupa el detector. La luz procedente de esta área es recolectada por un espejo, luego pasa por el filtro
apropiado y es monitoreada por el fotomultiplicador. Comúnmente se aplica al fototubo una diferencia de
potencial de 750 V de corriente directa. El máximo rendimiento es obtenido llevando la señal hacia un
electrómetro. Se ha utilizado para el análisis de contaminantes del aire y del agua como los pesticidas y los
hidrocarburos.

2.2.4.5.6 Detector NPD

El detector NPD pertenece a la familia de detectores de ionización y dentro de éstos al grupo de los
detectores selectivos. Se trata de un sistema que puede responder selectivamente a los compuestos orgá-
nicos que poseen grupos funcionales que contengan nitrógeno o fósforo.

El principal campo de aplicación de éste detector es el análisis de compuestos con actividad biológica
(pesticidas, fármacos, etc) en matrices complejas donde el uso de un detector selectivo evita el problema
de interferencia de otros compuestos.

Se trata de un detector muy sensible y la obtención de buenos resultados esta muy afectada por la correcta
manipulación del sistema.

Una característica del detector NPD es su compatibilidad con el detector FID, ésta se puede definir en dos
aspectos. Por un lado el módulo amplificador del detector NPD puede actuar también como electrómetro
del detector FID de forma que un equipo configurado con estos dos detectores únicamente necesitará el
módulo amplificador para NPD.

76

Tabla 2.8. Detectores.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Conductividad Térmica
Usos: Universal, particularmente empleado en análisis de gases inorgánicos, agua, hidrocarburos.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Sensibilidad: Moderada, dependiente de la concentración de muestra en el gas de arrastre.

LINEALIDAD: Li nealidad: Buena, pero necesita de factores de corrección para cálculos cuantitativos.

------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
PROBLEMAS: problemas: Puede quemarse por exceso de aire u oxígeno en la muestra, difícil limpiar.


Ionización p Ionización por llama de H2
USOS: Análisis de alta sensibilidad; análisis en que no se desee registrar el agua o gases
inertes. (Bebidas alcohólicas).
------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
SENSIBILIDAD Sensibilidad: Alta, excepto para gases inorgánicos y agua.
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
LINEALIDAD: Linealidad: Buena, los factores de corrección para análisis cuantitativos son casi constantes para
sustancias similares
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

PROBLEMAS: C Problemas: contaminación.

Captura de electrones

USOS: Análisis de pesticidas y productos halogenados.
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
SENSIBILIDAD Sensibilidad: Muy alta para algunos compuestos, en particular los halogenados.
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
LINEALIDAD: Linealidad: Rango de linealidad muy bajo.
------------ -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
PROBLEMAS: Problemas: Contaminación.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


a. Principio de funcionamiento:

Su funcionamiento se fundamenta en la recolección de iones negativos que se producen en el entorno de
una perla alcalina termostatizada a alta temperatura sobre la cual esta incidiendo una corriente de
hidrógeno mezclada con el gas portador eluído de la columna y otra de aire. La corriente iónica de fondo
aumenta bruscamente con la presencia de compuestos nitrogenados o fosforados que favorecen la
formación de estos iones. El mecanismo de formación de estos iones y por lo tanto la selectividad es un
hecho que aún hoy suscita una controversia. Se especula con un mecanismo catalítico por parte de la
superficie de la perla. Esta está formada por sales alcalinas depositadas sobre una matriz de sílice, el
conjunto esta soportado por un hilo de platino que a su vez actúa de elemento controlador de temperatura
de la perla.

77
La colección de los iones formados se produce al igual que en otros detectores iónicos (FID) por la
aplicación de un voltaje sobre la superficie de la perla que desplaza los iones hacia un elemento colector.

La amplificación de la corriente eléctrica detectada por parte de un módulo electrónico nos da la señal
exterior sobre la cual se conectará el sistema de tratamiento de datos.

Las dos variables que inciden fundamentalmente sobre el nivel de respuesta obtenido son el caudal de
hidrógeno aportado y la temperatura de la perla. Ambos se deben conjugar adecuadamente para obtener
una respuesta satisfactoria.

Dado el fenómeno catalítico que ocurre en la superficie de la perla, ésta tiene una actividad que irá
disminuyendo y es un elemento fungible que se debe reemplazar en el momento que no consiga la sensi-
bilidad adecuada.




Figura 2.16 esquema de un detector NPD


2.2.4.5.7 Detector de Espectrometría de Masas

La combinación de la cromatografía de gases acoplada con espectrometría de masas se conoce por las
siglas GC-MS en la actualidad muchas compañías fabrican estos instrumentos con este potente sistema de
detección.

En el CG-EM, los solutos que eluyen de la columna pasan directamente a la cámara de ionización de un
espectrómetro de masas, de forma tal que la mayor parte del gas portador se elimina. En la cámara de
ionización todas las moléculas, (resto del gas portador, disolvente y solutos ) se ionizan y los iones se
separan según su relación masa-carga. Como cada soluto sufre una fragmentación característica a iones
más pequeños, su espectro de masas de intensidad de ión en función de la relación masa-carga
proporciona información cualitativa que puede utilizarse para identificar el soluto.

Como detector de cromatografía de gases, la corriente iónica total de todos los iones que llegan al detector

78
suele usarse para obtener el cromatograma de masas (observar figura 2.17 a). La selectividad se logra
controlando solo determinadas relaciones masa-carga (observar figura 2.17 b), proceso denominado
control selectivo de iones (SIM). Los límites de detección del espectrómetro de masas son excelentes, en
general de 25 fg a 100 pg, con una respuesta lineal que abarca cinco órdenes de magnitud.




Figura 2.17 (a). Cromatograma iónico total de una muestra de 10 compuestos. (b) Registro cromatográfico utilizando un
control selectivo de iones SIM para las relaciones masa carga 93 y 95, que son los iones característicos de los
monoterpenos α pineno (tr=5.087 min), β pineno (tr=5.81 min), alcanfor (tr=8.51 min) y metanol (tr=8.93 min)

Los instrumentos para cromatografía de masas CG-EM se utilizan para identificar miles de componentes
presentes en sistemas naturales y biológicos (observar figura 2.17). Por ejemplo estos procedimientos han
permitido identificar los componentes que causan el olor y sabor en los alimentos, identificar contaminantes
del agua, llevar a cabo diagnósticos médicos basados en los componentes del aliento y estudios sobre
metabolitos de fármacos.


Figura 2.18 Cromatograma característico de la corriente iones total de una mezcla de cinco componentes: 1) N-
nitrosodimetilamina, 2) bis(2-cloroetil)éter, 3) bis(2-cloroisopropil)éter, 4) N-nitrosodi-n-propilamina y 5) bis(2-
cloroetoxi)metano.



79

2.2.4.5.8 Detector Espectrofotométrico Infrarrojo de transformada de Fourier (IR-TF)

En la cromatografía de gases acoplada con espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier,
abreviada como (CG-IR-FT), el eluyente de columna pasa a través de una celda óptica fabricada con tubo
pirex de 10 a 40 cm y con un diámetro interno de 1 a 3 mm. La superficie interior de la celda está revestida
por una capa reflectante de oro. Las múltiples reflexiones de la radiación a medida que se transmite a
través de la celda aumentan la longitud del paso de luz ( b ) a través de la muestra por lo cual se produce
un aumento en la absorbancia según la ley de Beer expresada como bC A c = haciéndose más fácil la
detección para la obtención del espectro IR.

2.2.4.5.9 Otros Detectores: Con frecuencia, la cromatografía de gases se combina con otras técnicas
selectivas como la espectroscopía y la electroquímica para generar poderosas herramientas con las que se
pueden separar e identificar compuestos en muestras complejas mediante el acoplamiento del
cromatografo de gases con espectroscopía magnética nuclear y métodos electroanalíticos.

2.2.5 Cromatografía de Gases versus Cromatografía de Alta Resolución (HPLC).

En un principio HPLC Significaba "High pressure liquid cromatography ", pero hoy se entiende más bien
como "High performance liquid cromatography", cromatografía líquida de alta resolución denominada
también con la sigla CLAR.

Debido a su rápido desarrollo en los últimos años, la HPLC presenta hoy un procedimiento eficaz del
análisis moderno. La calidad de los materiales de relleno de columnas y de columnas preparadas, así como
las condiciones instrumentales posibilitan las siguientes cualidades: Selectividad óptima, tiempos de
análisis cortos, gran sensibilidad de detección.

La diferencia básica entre la HPLC y la CG. Esta en cuanto a su utilidad y fenómeno físico de separación:

a. La cromatografía de gases está limitada a muestras volátiles, mientras que la HPLC es aplicable a
sustancias de peso molecular medio o grande, sin la condición de ser volátiles, y a todas aquellas
sustancias susceptibles de alterarse lumínica o térmicamente.

b. Solo el 15 o 20% de los compuestos orgánicos conocidos, pueden separarse por cromatografía de gases
sin previa modificación química. En contraste, la cromatografía líquida requiere que la muestra sea soluble
en la fase móvil, y por esto hace posible el análisis de compuestos de alto peso molecular, orgánicos e
inorgánicos, iónicos o covalentes.

c. En general por HPLC se pueden resolver problemas de separación de compuestos que normalmente no
se separan por cromatografía de gases debido a :

- En cromatografía líquida hay una interacción selectiva de la muestra con dos fases, móvil y estacionaria.
En cromatografía de gas la fase móvil es un gas inerte.

- En cromatografía líquida hay una mayor variedad de fases estacionarias y muchas fases móviles.

80

- Las bajas temperaturas favorecen la separación debido a que las interacciones moleculares son más
efectivas. En HPLC normalmente se trabaja a temperatura ambiente.

- En cromatografía líquida cuando en el proceso de separación se usa un solo solvente se denomina
isocrática, cuando se utiliza una mezcla de solventes y se varia su composición porcentual se denomina por
gradiente.

- Cuando en cromatografía gas líquido en el proceso se utiliza una temperatura constante se denomina
isotérmica y cuando se programan los rangos de temperatura es una cromatografía con programación
lineal de temperatura o rampas.

En cromatografía HPLC cuando la fase estacionaria es no polar y la móvil polar se denomina cromatografía
en fase normal; pero cuando la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar se denomina
cromatografía en fase inversa como los pesticidas y los hidrocarburos.

En cuanto a la instrumentación el esquema de un cromatógrafo líquido, (observar figura 2.19) es similar al
de un cromatógrafo de gases, con la diferencia de sustituir el cilindro de gas a presión, por una bomba
impulsora de líquido. El inyector en gases es una cámara de vaporización y en líquidos es un simple
introductor de muestras.



Figura 2.19 equipo para cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC)

En común tienen, columna permanente y reutilizable de alta eficiencia, sistema de termostatización de la
columna, aunque con finalidad distinta; circulación continua de la fase móvil, detección continua, alta
sensibilidad, visualización gráfica de resultados en forma de cromatograma. Posibilidades de integración
etc.

El cromatógrafo Líquido tiene como componente básicos una bomba o sistema de bombas para impulsar el
solvente o eluente; un sistema de inyección para la aplicación de muestras; la columna para realizar la
separación; y un detector que indica la secuencia como eluyen los componentes.

Adicionalmente los aparatos cuentan con otros accesorios que simplifican el proceso y aumentan la

81
eficiencia del mismo. Entre los accesorios se cuentan los colectores de fracciones, sistemas para progra-
mación de gradientes, hornos de termostatización, registrador gráfico, integrador, muestreador automático,
computador etc.

La bomba se considera después de la columna el componente más importante en HPLC. Conociendo las
ventajas y desventajas del tipo de bomba, se cuenta con una gran ayuda para realizar la cromatografía.

Básicamente se tienen dos tipos de bombas, la de presión constante y la de flujo constante.

La principal ventaja de la primera es su sencillez y libertad en las pulsaciones lo cual produce una línea
base muy uniforme; sin embargo las alteraciones del flujo por cambios de viscosidad causan problemas en
el análisis.

Las bombas de flujo constante, facilitan la reproducibilidad de los volúmenes de retención del análisis,
prescindiendo de cambios en la viscosidad y de posibles obstrucciones en la columna.

Los detectores más utilizados son fundamentalmente dos, que son, los ultravioleta (ya sea de longitud de
onda fija o variable) y los de índice de refracción. Existen otros tales como los de fluorescencia,
electroquímicos, de absorción térmica, de ionización de llama etc.

La HPLC, como técnica analítica de extraordinario desarrollo, se debe en parte a los diversos campos de
aplicación en ambiental, polímeros, farmacia, química, bioquímica, etc. Y para alcanzar ese lugar que
ocupa hoy, la columna, elemento central del sistema, ha sido la parte de mayor investigación y desarrollo.

Los programas de productos para el relleno de columnas HPLC, se orientan en los criterios de calidad
necesarios para separaciones óptimas y abarca por lo tanto una gama de productos muy diversos y que se
complementan entre sí:

-Materiales de relleno de forma irregular, totalmente porosos-Licsob.

-Materiales de relleno de forma esférica, totalmente porosos-Lichrospher.

-Materiales de relleno de forma esférica, superficialmente porosos-perisorb.

Estos materiales de relleno de columnas están disponibles como silicagel sin modificar y modificados
químicamente con grupos orgánicos diferentes y por tanto con comportamiento de selectividad. Se cuenta
también con rellenos a base de óxido de aluminio, especialmente adecuado para separaciones que
requieren un absorbente básico.

El analista que ha de trabajar con HPLC, podrá obtener los mejores resultados conociendo los diferentes
materiales y relacionando la estructura química de la partícula, la molécula y el solvente, por una parte, con
el diámetro, porosidad y superficie específica por la otra.

Los disolventes para HPLC exigen ciertos criterios de calidad entre los cuales se deben considerar los
siguientes:

82

Alto grado de pureza, componentes que influyen en la polaridad del disolvente tales como contenido de
agua, de ácido libre y de posibles estabilizadores.

La pureza óptica es de gran importancia cuando se utiliza detector ultravioleta, igualmente el índice de
refracción cuando en la detección se hace uso de este parámetro.
Interesa también la viscosidad que tiene relación con la velocidad de elución y presión previa en la
columna.






































83



UNIDAD 3

3. ANALISIS CROMATOGRAFICO
8


OBJETIVO GENERAL

Presentar al estudiante las consideraciones generales, parámetros de control y relaciones que se deben
tener en cuenta en la separación Y realización de un análisis tanto cualitativo como cuantitativo por
cromatografía Gas-líquido.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Terminada la unidad el estudiante será capaz de:

1. Seleccionar la columna, el soporte, Fase líquida, gas portador, detector, temperaturas del detector,
bloque de inyección, la columna, velocidad de flujo del gas portador, amplificación y cantidad de muestra a
inyectar en un análisis por cromatografía Gas-líquido.

2. Interpretar la información reportada por el cromatograma obtenido.

3. Analizar cualitativamente una mezcla, identificando cada uno de sus componentes; hacer uso adecuado
del índice de Kovats y sus relaciones con otros parámetros físicos.

4. Aplicar las diferentes técnicas para cuantificación de los componentes de una mezcla.

5. Reconocer las aplicaciones y limitaciones de la cromatografía Gas-líquido.














8 Materiales recopilados y organizados por el profesor Federmán Castro Eusse para la asignatura análisis instrumental II de los programas en Química
Industrial y Tecnología Química de la UTP.

84

3.1 Muestra

La diversidad de muestras que llegan al laboratorio con fines analíticos es muy variada y las
determinaciones requeridas pueden ser muy diferentes de una a otra; por tanto el Químico Analista debe
tener los criterios suficientes que le permitan definir si la cromatografía le es útil en el análisis a realizar y
que tipo de cromatografía es la más adecuada. Con la cromatografía de gas – liquido se analizan mezclas
de sustancias que se puedan volatilizar entre la temperatura ambiente y los 400°C. En un análisis por
cromatografía de gas - líquido se debe seguir la siguiente secuencia:

3.1.1. Indagar Sobre la Muestra. Toda información que se pueda obtener sobre la muestra será de gran
utilidad; se debe conocer su procedencia lo cual da una idea general sobre los posibles compuestos que la
constituyen, para definir si la muestra requiere tratamiento previo para su conservación o análisis.

3.1.2. Tratamiento de la Muestra. Una gran cantidad de muestras no pueden inyectarse al cromatógrafo
tal como se presentan, éstas deben recibir un tratamiento preliminar que puede consistir en una separación,
desecado, pirólisis, esterificación, acilación o un silanizado, extracción en fase sólida, uso del espacio de
cabeza.

3.1.3. Selección de Condiciones para el Análisis. Los posibles compuestos constituyentes de la
muestra, permiten suponer: grupos funcionales presentes, polaridad, pesos moleculares, puntos de
ebullición, presión de vapor; que son propiedades necesarias para definir: tipo de columna, soporte, fase
líquida estacionaria, temperatura del inyector, temperatura de la columna, gas portador, velocidad del gas,
detector, amplificación y cantidad de muestra para realizar la primera inyección.

3.1.4. Condiciones Instrumentales. Calibración y operación del equipo de acuerdo con las instrucciones
y normas de seguridad recomendadas por el fabricante según la marca y modelo del cromatógrafo
disponible.

3.1.5. Inyección de la Muestra.

Ver instrucción 2.2.4.1 Página 43

3.1.6. Interpretación del Cromatograma Obtenido. El cromatograma es una representación gráfica de
los picos de elución de una mezcla de diferentes compuestos, en un plano de coordenadas en cuyo eje de
ordenadas se encuentra la señal del detector, y en el eje de abscisas el tiempo o el volumen de retención.

La forma ideal del pico es una campana de Gauss cuya área bajo la curva o la altura h del compuesto es
proporcional a la cantidad o concentración permitiendo su cuantificación. El tiempo o volumen de retención
gastado para salir el pico, medido en el eje de abscisas, es un parámetro útil para su cualificación.

El cromatograma depende de variables tales como: velocidad de la carta, si se usa un registrador,
amplificación, poder de resolución de la columna, cantidad de muestra inyectada, temperatura, presión,
velocidad flujo, etc.


85
El cromatograma nos presenta la información sobre el comportamiento termodinámica de los compuestos
dentro de la columna y de su análisis e interpretación depende la información para realizar un buen análisis
cualitativo y cuantitativo.

No siempre sucede que el resultado de una primera inyección sea un cromatograma perfecto, por lo cual es
necesario interpretarlo, variar condiciones para optimizarlo y hacerlo útil para los fines analíticos. Con tal
propósito se deben considerar los siguientes factores que afectan los picos:

1. Presión del gas de arrastre

En una columna cromatográfica para gas las partículas de empaquetamiento ofrecen una resistencia al flujo
del gas de arrastre debido a la viscosidad finita del gas por lo cual hay un gradiente de presión a lo largo de
la longitud de la columna. Este gradiente no tendrá efecto sobre el volumen de retención pero si sobre el
tiempo de retención debido al hecho de que el gas es compresible por tanto la rata volumétrica de flujo es
más grande a la salida que a la entrada. Así el gradiente de velocidad es inevitable cuando hay un
gradiente de presión en la columna.

¿Cuál de los siguientes factores no ayuda a minimizar el gradiente de velocidad?

a. Un empaquetamiento fino
b. Una columna más larga
c. Una rata de flujo lenta del gas de arrastre

El gradiente de velocidad puede minimizarse usando un empaquetamiento más suave, una baja velocidad
de flujo y columnas cortas, por lo tanto una columna más larga no sería útil para este propósito.
(Respuesta b).

Se ha demostrado que una relación de presión muy grande entre la entrada y salida de la columna (Pi/Po)
tiene un efecto adverso en el trabajo de la columna y lo más deseable para el diseño de las columnas es
que la relación de presiones se aproxime a la unidad.

Esta es la razón por la cual las columnas trabajan mejor con presiones en exceso de atmósferas que bajo
vacío. (Nota: es conveniente anotar que la cromatografía a alta presión resulta ser más eficiente y dar
mejores resultados por este motivo).

2. Temperatura

Un cambio en la temperatura afecta: a) El coeficiente de partición, b) La rata de flujo volumétrico para una
relación dada de Pi/Po.

Como resultado de estos factores, se puede demostrar que los tiempos de retención relativos son más
grandes a bajas temperaturas que a altas temperaturas y así la reducción en la temperatura aumenta la
eficiencia de la columna. Por otro lado el uso de las bajas temperaturas resulta en un tiempo de análisis
mayor y fácilmente se sobrecarga la columna, siendo necesario inyectar cantidades pequeñas de muestra.


86
La escogencia de la temperatura de operación adecuada, entonces, depende de un balance de estos
factores para obtener los resultados deseados.
En un análisis cromatográfico de una mezcla de m-xileno (p.Eb 139°C) y p-xileno (p.Eb 138°C) llevado a
cabo usando una fase estacionaria semipolar: Di-nonil-ftalato a 120°C. No se obtuvo separación alguna.
¿Cuál de los siguientes factores se debe adoptar para efectuar la separación?

a. Aumentar la temperatura de la columna alrededor de 140°C
b. Disminuir la temperatura de la columna a 100°C
c. Cambiar la fase estacionaria.

Un cambio en la temperatura afecta:

a. El coeficiente de partición.
b. La rata de flujo del gas (velocidad) en la columna para una determinada relación (Pi/Po).

Se debe recordar que la eficiencia de la columna como regla es: Conforme la temperatura aumenta, la
eficiencia de la columna disminuye. Hay necesidad en este caso de aumentar la eficiencia de la columna.

Por lo tanto, hay que disminuir la temperatura. Los tiempos de retención relativos son más grandes a más
bajas temperaturas y la eficiencia de la columna aumenta. Puesto que en este caso se pueden ignorar los
efectos de polaridad, bajando la temperatura a 100°C se efectúa la separación. (Respuesta b).

Habrá otras fases estacionarias selectivas que podrán ser mejores para separar el m-xilano y el p-xilano (ej.
cresilfosfato). Sin embargo una vez que la fase estacionaria ha sido escogida, la fase se deberá cambiar
solamente si después de hacer los ensayos a bajas temperaturas no ha habido separación.


---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
No. FACTOR TIEMPO DE RETENCION
Corto Largo
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1. Rata volumétrica de flujo de gas de arrastre (velocidad) Alta Baja

2. Concentración de la fase estacionaria sobre el material soporte Baja Alta

3. Solubilidad del componente en la fase estacionaria Baja Alta

4. Volatilidad Alta Baja

5. Temperatura de la columna Alta Baja

6. Longitud de la columna Corta Larga
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

La Tabla No. 3.1 resume los principales factores que afectan el tiempo de retención para el análisis de un
Cromatograma.


87
Estos factores se deben considerar cuidadosamente.

Usualmente alguna información acerca de la muestra es suministrada antes del análisis y a partir de esto se
pueden escoger las condiciones instrumentales. Después de observar el cromatograma de la primera
inyección puede ser necesario alterar algunos o todo el conjunto de condiciones varias veces, hasta
obtener un resultado satisfactorio.

Cuando en un cromatograma, no se señala el punto de inyección éste se puede identificar observando que
los picos normalmente salen de izquierda a derecha y el primer pico es el de punta más aguda, el cual está
cerca del punto de inyección.

He aquí un cromatograma (observar Figura 3.1) obtenido de una primera inyección, y la temperatura de la
columna ha sido considerablemente más alta que la temperatura ambiente. Los picos están sin resolver y
aparecen en un tiempo muy corto después de la inyección.


Figura 3.1 Cromatograma con baja resolución


¿Cuál de los siguientes factores se debe cambiar en primer lugar para mejorar considerablemente la
resolución de los picos en el cromatograma?

a. Reducir la presión del gas de arrastre
b. Reducir la temperatura de la columna
c. Cambiar la fase estacionaria
d. Incrementar la longitud de la columna.

Se podría pensar en aumentar la longitud de la columna, lo cual mejoraría la resolución. El tiempo del
análisis se alargaría, pero lo importante es que el tiempo de análisis sería muy corto de todas maneras.

Pero en C.L.G. El diseño se ha hecho para aumentar la precisión de los resultados, rápidamente. Hay que
pensar en los inconvenientes de hacer la columna más larga, la fijación en el horno, etc.


88
Hay muchas más formas convenientes de producir una considerable mejoría en la resolución. El cambio de
fase estacionaria puede mejorar la resolución teniendo en cuenta la afinidad y polaridad antes de hacer la
columna. Una equivocación en la escogencia de la fase estacionaria se traduce en un fracaso para separar
los componentes de interés. El cambiar la fase estacionaria implica un trabajo mayor que el cambio de la
columna con todos sus inconvenientes. Además puesto que el cromatograma muestra que los picos son
distintos visiblemente, indica que la fase estacionaria lo está separando.

Una reducción en la presión del gas de arrastre puede mejorar ligeramente la resolución, si es que la
presión está por encima de su valor original óptimo. Lo mejor es cambiar la temperatura de la columna
(respuesta b) puesto que esta reducción de la temperatura de la columna (horno) hará que:

a. Cambie el coeficiente de partición.

b. Baje la rata volumétrica de flujo (velocidad) en la columna para una relación dada de Pi/Po.

Ahora tenemos otro caso, y es un cromatograma que se ha obtenido de una inyección y se ilustra en la
Figura 3.2.




Figura 3.2 Cromatograma con pobre resolución

La resolución es pobre y los picos están muy confusos aunque el tiempo de análisis y los tiempos de
retención son razonables. Una causa de una resolución muy pobre es la falta de selectividad en el proceso
cromatográfico.

Para mejorar la resolución en este caso, para incrementar la separación de los picos, qué seria lo
aconsejable?

a. Reducir la presión del gas de arrastre.
b. Reducir la temperatura de la columna.
c. Usar una columna con una fase estacionaria diferente.

El tiempo de análisis fue razonable, pero la resolución pobre, reduciendo la presión del gas de arrastre, no
ayudará a mejorar la resolución en este caso. Es la selectividad en el proceso cromatográfico lo que falla.

89

Una reducción en la temperatura de la columna simplemente aumentaría el tiempo del análisis y se ha
dicho que es razonable. Como es la selectividad la que falla, y no el tiempo de análisis, el error está en la
fase estacionaria. Se debe tener en cuenta la afinidad química y los efectos de polaridad en la escogencia
de la columna (respuesta c).

Consideremos el cromatograma presentado en la Figura 3.3.

La resolución todavía no es suficiente para dar completamente una separación de los dos picos mayores,
un mejoramiento en la eficiencia de la columna ayudará a este efecto. Esto se puede lograr bajando la
temperatura del horno y encontrando una nueva rata de flujo de gas por ensayo y error (haciendo ensayos
de exceso y defecto en la presión del gas). Una columna más larga mejoraría las cosas aún más.

Desafortunadamente estos pasos prolongan el tiempo de análisis que de por sí ya es largo.


Figura 3.3 Cromatograma con resolución insuficiente

Para el caso en descripción, puesto que conocemos el área de cada pico que representa la cantidad de
cada componente particular en la mezcla, cuál sería una alternativa para mejorar la resolución?

a. Usar menos muestra en la inyección
b. Usar más muestra en la inyección
c. Usar una columna conteniendo menor fase estacionaria.

Se ha dicho que la resolución no es buena y hay que mejorarla. Como el área del pico es proporcional a la
cantidad del componente, se puede pensar en la cantidad inyectada, pero antes consideremos el caso de la
fase estacionaria.

Si se utiliza menos fase estacionaria el efecto sería igual que inyectar más muestra en la columna o reducir
la longitud de la misma.

Se puede demostrar que previendo que la columna no esté sobrecargada, el tamaño de la muestra es
proporcional a la raíz cuadrada de la longitud de la columna.

90

Para una resolución determinada. Si se inyecta el doble de cantidad de muestra, proporcionalmente se
requiere una mayor longitud de la columna.
Por lo tanto, una reducción en la cantidad inyectada reducirá el área de los picos y la resolución se
mejorará (Respuesta a).

Algunas veces los picos en el primer cromatograma aparecen en forma asimétrica como en la Figura 3.4. y
también la asimetría puede ser tal que la parte posterior del pico es más inclinada que la parte anterior.



Figura 3.4 Cromatograma con picos asimétricos

Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de
asimetría pueden ser:

1. Una columna sobre cargada, la cual se puede corregir inyectando menos muestra.
2. Por descomposición térmica de la muestra en la columna.

Cómo podría rectificarse la descomposición térmica de la muestra?

a. Bajando la temperatura del horno.
b. Aumentando la rata volumétrica (velocidad de flujo) del gas de arrastre.
c. Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria.

Si se piensa que una disminución en la cantidad de fase estacionaria rectificaría la descomposición térmica
de la muestra, ello ayudará por supuesto para dar como resultado tiempos de elución más cortos, para que
los componentes reduzcan su contacto entre la muestra y la columna caliente. Desafortunadamente la
descomposición térmica de la muestra podría ocurrir en corto tiempo.

Pensando aumentar la rata volumétrica del gas de arrastre (velocidad del gas), ayudará a rectificar la
asimetría y esta acción resultará en tiempos de elución más cortos para los componentes. Esto significa
que los componentes estarán en contacto con la columna caliente durante un tiempo menor, pero la
descomposición térmica podría presentarse aún.

91

Al bajar la temperatura del horno, esto rectificará la asimetría del pico causado por descomposición térmica
de la muestra, (Respuesta a). Un incremento en la rata volumétrica del flujo del gas de arrastre (velocidad)
y una reducción en la cantidad de fase estacionaria alrededor de 3% en peso ayudarán juntos a disminuir
los tiempos de elución. (Nota: También la temperatura del bloque de inyección deberá reducirse).

La asimetría de los picos no deberá confundirse con la cola de los picos como en la Figura 3.5



Figura 3.5 Cromatograma con colas de elución

Esto puede interferir con el análisis, y puede con frecuencia ser eliminado por uso de un eliminador de
cola, y/o usarse una columna conteniendo más material inerte de soporte.

La causa de la cola puede ser:

a. Temperatura muy alta
b. Uso de fase estacionaria incorrecta (equivocada)
c. Inyección de mucha muestra.

Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de
asimetría pueden ser:

d. Una columna sobrecargada, lo cual se puede corregir inyectando menos muestra.

e. Por descomposición térmica de la muestra en la columna.

La descomposición térmica de la muestra se puede rectificar:

- Bajando la temperatura de la columna?
- Aumentando la rata volumétrica (velocidad) del gas de arrastre?
- Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria?

92
- Ninguna de las anteriores?
Si se piensa en la inyección de mucha muestra, se puede pensar en su efecto sobre la forma de los picos, y
sobre si la resolución es adecuada en este cromatograma. Si se piensa en que la cola es causada por
temperatura muy alta, en realidad bajando la temperatura de la columna se logra eliminar la cola.

Las colas pueden resultar de una muy baja temperatura causando indebida condensación de la muestra.

Si la temperatura fuera alta lo suficiente para causar la descomposición de la muestra, entonces la
asimetría de los picos podría producirse en el cromatograma. No se debe confundir las colas con la
asimetría.

El uso de una fase estacionaria equivocada es una de las causas de que se presenten las colas
(Respuesta b).

Columnas fuertemente polares pueden ser su causa, o esto podría causarse por una muestra fuertemente
polar, produciéndose "auto asociación" por puentes de Hidrógeno.

Veamos ahora el siguiente cromatograma, Figura 3.6

Los picos están bien separados, el tiempo de retención de cada pico resulta ser más grande que lo
necesario, para dar la adecuada resolución.



Figura 3.6 Cromatograma con óptima resolución

Si podemos acortar estos tiempos de retención, el cromatograma será ideal para todos los propósitos.

Aunque el uso de una columna más corta tiene sus ventajas, el cambio de una columna consume tiempo.

Cual será la forma más rápida de acortar los tiempos de retención para reducir el tiempo del análisis.

a. Aumentar la temperatura de la columna y la rata de volumétrica de flujo de gas de arrastre (velocidad).
b. Aumentar la temperatura de la columna solamente.
c. Aumentar la rata volumétrica de flujo de gas de arrastre solamente.

93

Respuesta b.
3.1.7. Optimización del cromatograma mediante variación de las condiciones iniciales, si el
cromatograma obtenido no es bueno para fines analíticos.

3.1.8. Anotar o grabar en la memoria del computador las condiciones instrumentales con las cuales se
obtuvieron resultados satisfactorios, para reproducirlas cuando se requieran.

3.1.9. Análisis Cualitativo. Realizados los anteriores pasos, el análisis cualitativo puede hacerse
mediante la aplicación de diferentes técnicas:

3.1.9.1. Si el detector no destruye la muestra, se pueden recolectar los compuestos y tomar espectros de
masas (E.M.) o infrarrojo (E.IR.); también se pueden acoplar estos equipos al cromatógrafo y hacer los
análisis directamente.

3.1.9.2. Si no se dispone de los equipos de E.M. o IR. Identificar el compuesto o compuestos de interés en
la muestra con base en los tiempos de retención de la siguiente forma: Inyectar el compuesto puro que sea
de interés en la muestra, en igualdad de condiciones en la cual se tomo el cromatograma, si su tiempo de
retención coincide con el del compuesto en la muestra, según ± A tr podemos concluir que se encuentra
presente.

Para confirmar su presencia podemos agregar a la muestra problema una cantidad X del compuesto e
inyectar igual cantidad de muestra en igualdad de condiciones al cromatograma anterior. Se confirma su
presencia si da un pico más grande en igual tiempo de retención.

Si esto no sucede debe salir un pico más o algún otro pico aumentado si el compuesto adicionado se
encuentra en la mezcla.

Para tener mayor confiabilidad en el análisis, se deben variar las condiciones para hacer que el tiempo de
retención cambie para los compuestos y repetir de nuevo la inyección o inyecciones de los compuestos
presumiblemente presentes y que son de interés, si los tiempos de retención coinciden se asegura su
presencia.

3.1.9.3. Adicionando un estándar para hacer el análisis según los tiempos de retención relativos.

El estándar debe reunir los siguientes requisitos:

a. Ser miscible con la mezcla que se va a analizar.

b. No debe reaccionar con ninguno de los componentes de la mezcla.

c. Debe dar solamente un pico y éste no debe solapar o cubrir parcialmente ninguno de los picos de los
componentes de la muestra.

d. Su tiempo de retención debe estar próximo al compuesto de la muestra que es de interés.

94


trb - tra trc - tra
trbtrs = ---------------- trctrs = -------------
trs - tra trs - tra


trbtrs = Tiempo de retención del compuesto trctrs = Tiempo de retención del compuesto
b con relación al estándar c con relación al estándar

tra = Tiempo de retención del aire

Inyectada la muestra con el estándar, se calcula el tiempo de retención relativos para el compuesto de
interés, luego en igualdad de condiciones se inyecta con el estándar el compuesto que se supone es de
interés, calculando nuevamente el tiempo de retención relativo y comparando el tiempo de retención
relativo con el de la muestra, si corresponde se confirma la presencia del compuesto.

La relación de los tiempos de retención, permite minimizar errores cometidos al hacer la inyección y
colocar en funcionamiento el registrador o puesta en marcha del programa. Acción que debe ser si-
multánea.

3.1.9.4. Para analizar series homólogas de Hidrocarburos, se pueden construir gráficas del logaritmo del
tiempo de retención contra número de carbonos o contra puntos de ebullición. También representa gran
utilidad el uso del índice de Kovats.

3.1.9.5. Índice de kovats. Para proporcionar un medio fácil de identificar un compuesto desconocido,
Kovats propuso un sistema de índices basado en los n-alcanos como sustancias de referencia, puesto que
estos compuestos son químicamente inertes, solubles en las fases estacionarias comunes y son no
polares.

El índice de Kovats, se calcula de la siguiente ecuación:



(
¸
(

¸

+
|
|
.
|

\
|
÷ +
÷
= z
LogRz n LogRz
LogRz LogRx
n I 100

Donde:

Rx es el tiempo de retención de la sustancia
desconocida X

Rz es el tiempo de retención del alcano normal
que tiene z átomos de Carbono


95
Rz+n es el tiempo de retención de un alcano
normal teniendo Z+n átomos de Carbón

n es la diferencia de átomos de Carbono
existente entre los alcanos normales
(z+n)-z = n

Ejemplo: Una sustancia X se supone que tiene 7 carbonos. Se mezcla con hexano (C6H14) y con octano
(C8H18) y se obtuvo el cromatograma de la Figura 3.7.

R6 = 210 segundos
R8 = 795 segundos
Rx = 470 segundos
n = 8-6 = 2
Z = 6


Figura 3.7 Cromatograma ilustrativo del Índice de Kovats



Entonces:


(
¸
(

¸

+ |
.
|

\
|
÷
÷
= 6
3222 , 2 9004 , 2
3222 , 2 6721 , 2
2 100 I =
(
¸
(

¸

+ |
.
|

\
|
6
5782 . 0
3500 . 0
2 100 = ) 6 21 . 1 ( 100 + =721

721 = I



96
Ejemplo: En un experimento similar al descrito, pentano (C5H12) y hexano (C6H14) fueron usados como
estándares. Los tiempos de retención fueron Rx=90 segundos C6=210 segundos; C5=79 segundos. ¿Cuál
es el valor calculado para el índice de retención?

Respuesta: Según la ecuación de Kovats:


513 5
8976 , 1 3222 , 2
8976 , 1 9542 , 1
1 100 =
(
¸
(

¸

+ |
.
|

\
|
÷
÷
= I

Para mantener el índice I como un número entero, el índice se define como:
I = 100 n

Lo cual significa que para el metano I=100, etano I=200, etc. En el caso del ejemplo significa que para esa
fase estacionaria el compuesto desconocido es elucidado entre pentano y hexano. Si la fase estacionaria
cambia el número del índice también cambia (existe un método para calcular I usando un monograma).

Ahora se puede ver que el número de Kovats nos puede ayudar cuando se escoge un estándar
internacional IUPAC.

Conforme la fase estacionaria sea la misma, y la mezcla sea inyectada al mismo tiempo, entonces a partir
del número de índice se puede ver en qué orden son elucidados los componentes, aquellos con el menor
número de carbones son elucidados primero y los de mayor número de último.

3.1.10. Análisis Cuantitativo.

La cromatografía de gas líquido es una técnica que para el análisis cuantitativo presenta las siguiente
ventajas: Se requiere cantidades de muestra muy pequeñas por el orden L µ
7
10
÷
, es de aclarar que
L l
6
10 1
÷
= µ , presenta limites de detección muy bajos, con algunos detectores por el orden de g
14
10
÷
,
los limites de cuantificación y el rango de linealidad de las gráficas de calibración son sumamente
confiables y los reproducibles de los datos si se conservan las condiciones del análisis.

La cantidad o concentración de los compuestos se puede calcular mediante diferentes técnicas:

3.1.10.1. Relacionando las áreas de los picos: para medir las áreas se pueden emplear varios métodos:

a. Triangulación

Se construye el triángulo correspondiente a cada pico trazando tangentes a los puntos de inflexión del pico
y tomando la base como la intersección de esas tangentes con la línea base del cromatograma (observar
la figura 3.8). La altura es medida desde la base al punto en el que se cruzan las tangentes. Se calcula la
superficie de cada pico con la fórmula:
b.h

97
A = ------- y se relaciona para obtener el % aproximado, de cada compuesto en la muestra con una
2 exactitud del 97%.


a. Triangulación


b. Altura por ancho de base a media altura


c. Planimetría


98
Figura 3.8 Métodos para medir las áreas de cada pico.

bx . hx by . hy bz . hz
Ax = ----------, Ay = -----------, Az = ----------
2 2 2


Ax + Ay + Az + ....... An = At = 100%

Ax Ay
% x = ------- x 100, % y = -------- x 100
At At
At = área total = E áreas.

La exactitud aplicando este método depende de la claridad de resolución del pico, de la precisión del
trazado de las tangentes.

b. Tomando el área como la altura x ancho de base a media altura (Figura 3.8 b) esta área así obtenida no
es igual al área del triángulo pero si aproximado. Se puede aplicar este método para relacionar todos los
picos del cromatograma, cuando se presentan colas y bases poco netas en los mismos y así evitar errores.

El error es mayor para picos muy angostos. La exactitud será razonable para picos netos y bien simétricos.

Las relaciones matemáticas para determinar los porcentajes de cada componente se hacen de igual
manera que en a.

c. Planimetría (Figura 3.8 c). Consiste en medir el área de cada uno de los picos del cromatograma
siguiendo los perímetros de los picos mediante un planímetro provisto de un dispositivo mecánico.

Es necesario repetir varias veces el trazado y sacar promedio de las áreas. Las relaciones matemáticas
para determinar la composición porcentual de la mezcla se hace de igual manera que en a.

d. Integradores

Existen integradores de diversos sistemas (electrónicos, a bolillo y disco, a voltaje) agregados al registrador
del cromatógrafo, de manera que simultáneamente con el registro se obtiene la integración de cada pico
(Figura 3.9a). Uno de los sistemas usados es el de bolillo y disco. El integrador digital electrónico
representa uno de los mayores avances tecnológicos incorporados al cromatógrafo para realizar la
cuantificación de los compuestos.

Con este dispositivo electrónico el método consiste en transformar la señal interna del detector en un voltaje
que genera unas pulsaciones proporcionales al área de cada pico que es registrado.

La exactitud depende de la sensibilidad del integrador y de la capacidad de registro y conteo. El software
del computador reporta automáticamente mediante previa programación, el nombre de los compuestos, el

99
tiempo de retención y el porcentaje de cada uno de ellos en la muestra si así se desea.

3. 1.10.2 Relacionando alturas (Figura 3.9 b.)

Se utiliza este método cuando los picos son angostos, simétricos, bien definidos y poseen ancho de base
muy iguales.

Se mide la altura de cada pico desde la base hasta la cúspide. La sumatoria de las alturas se hace igual al
100% de la mezcla y luego se hacen las relaciones matemáticas para determinar el % de cada compuesto,
de tal forma que para una mezcla de 3 compuestos a, b y c cuyas alturas son: para a=90mm, b=110mm,
c=50mm la sumatoria de las alturas será igual a 250mm y el porcentaje de un compuesto como a está dado
por:

ha ha
% a = ----------------- X 100 = ------- X 100
ha + hb + hc Eh


90
% a = -------- X 100 = 36
250

Igual relación se aplica para los demás compuestos teniendo en cuenta sus alturas.


3.1.10.3 Relacionando pesos (Figura 3.9 c.)

Consiste en recortar y pesar cada pico en la balanza analítica. La sumatoria de los pesos se hace igual al
100% de la mezcla. Para determinar el porcentaje de cada compuesto se hacen relaciones matemáticas
similares a las anteriores pero en lugar de alturas se consideran los pesos.

La exactitud del método depende de la homogeneidad del papel de registro y del seguimiento del trazo para
obtener un recorte preciso de cada pico. Tiene la desventaja que se destruye el cromatograma. Esto
puede evitarse tomando previamente una fotocopia.












100





a. Integradores



b. Alturas



c. Corte del pico

Figura 3.9 a. Integradores, b. Alturas, C. Pesos

101


3.1.10.4. Factor de Respuesta

Es un método que permite cuantificar rápidamente un compuesto de interés en una mezcla, evitando que
sea necesario medir áreas, alturas o pesos para todos los compuestos.

El factor de respuesta se determina inyectando en el cromatógrafo una cantidad conocida del compuesto
de interés, en igualdad de condiciones en las cuales se inyectó la mezcla. Se analiza la forma del pico
tanto en la inyección sola del compuesto como en la mezcla y se define si se calcula con factor de
respuesta considerando la altura, el área o el peso.

El factor de respuesta vendrá dado por la relación más conveniente entre uno de estos parámetros y el
volumen o peso del compuesto inyectado y será igual a la altura o área o peso del pico del compuesto
sobre el peso o volumen de la cantidad de compuesto inyectado. Las unidades del factor de respuesta
serán entonces: altura en milímetros o centímetros por unidad del compuesto en peso o volumen (g, mg, o
mL, L µ ). Área en mm
2
o cm
2
por unidad del compuesto en peso o volumen. Peso en g o mg por unidad
del compuesto en peso o volumen.

El siguiente ejemplo ilustra cómo en la práctica se opera con este método.

Se inyectó al cromatógrafo 5 X 10
-3
miligramos de una mezcla de acetona, metiletilcetona e isobutilcetona,
el pico de la acetona dió un área de 5 cm². En igualdad de condiciones se inyectó 1 X 10
-3
miligramos de
acetona y el pico dio un área de 2 cm². Cuál; es el % de acetona en la mezcla. Desarrollo:

1. Se calcula el Factor de respuesta (Fr)


1 mg
Fr = 2 cm² X ------------------ = 2000 cm²/mg
1x10-
3
mg



5 cm² 5 cm²
2. mg de acetona =-------------- = ------------------- = 2.5 X 10
-3
mg
Fr 2000cm
2
/mg


2.5 X 10
-3
mg
3. % de acetona = ------------------------- --------X 100 = 50%
5 X 10
-3
mg de muestra


3.1.10.5. Curva de Calibración.


102
Para obtener la mayor precisión en la determinación de un compuesto de interés en una mezcla, una curva
de calibración de alturas, áreas o pesos de los patrones con relación a un estándar, contra algún parámetro
de concentración (mg/l, % en volumen, % en peso, fracción molar, etc) representa el mejor método.

Procedimiento:

1. Se prepara una serie de patrones (mínimo 4) de diferente concentración y a cada uno se le adiciona una
cantidad igual del estándar. El estándar interno debe cumplir los mismos requisitos que un estándar
utilizado para análisis cualitativo (Ver Página 88, numeral 3.1.9.3)

2. Se toma un alícuota de la muestra, se le adiciona igual cantidad de estándar que a los patrones y se
afora al mismo volumen de estos.

3. En idénticas condiciones instrumentales se inyecta al cromatógrafo una cantidad igual de cada patrón y
de la muestra.

4. Se mide la altura, el área o se determina el peso del pico de cada patrón y del estándar y se calculan las
alturas, áreas o pesos relativos, igual procedimiento se hace con el pico del compuesto de interés en la
muestra y el estándar.

5. Se construye una tabla de datos la cual nos da una idea aproximada del rango de concentración en el
cual se encuentra el compuesto en la muestra.

6. Si se requiere mayor precisión se construye una curva de calibración en cuyo eje de abscisas (eje x) se
coloca la concentración relativa y en el eje de ordenadas (eje y) las alturas, áreas o pesos relativos. Se
ubica cada punto, se traza la gráfica y se extrapola a cero. Si quedan puntos por fuera de la línea, se
puede realizar un ajuste por mínimos cuadrados. Se interpola el valor relativo obtenido para el
compuesto en la muestra problema y se determina su concentración. La concentración real del compuesto
en la muestra será igual a la concentración leída en la gráfica multiplicada por el Factor de dilución (Fd).

La escogencia de la altura, área o peso como parámetro relativo depende de la forma del pico y su
tratamiento debe ser igual para todos los patrones y la muestra.

El rango de concentración para preparar los patrones depende la linealidad de respuesta que presente el
detector para el compuesto de interés, sea el caso de la acetona, utilizando como estándar metiletilcetona y
que se describe en la Tabla 3.2.

La columna 3 (volumen de A en mL) representa el volumen que es necesario tomar de un patrón de 100
mg/l de acetona para preparar 100 mL de cada patrón.

La columna 4 (volumen de B en mL) representa el volumen que es necesario adicionar a cada patrón de
un estándar de 500 mg/l de metil etil cetona, para que la concentración del estándar en cada patrón sea
de 50 mg/l.

La columna 5 (aforo final) presenta el volumen final al cual se afora cada patrón y el alícuota tomado de la

103
muestra problema.
La columna 6 indica que se inyecta 1 microlitros de cada uno de los patrones y muestra problema al
cromatógrafo.

Observando la tabla de datos podemos concluir que la concentración de la acetona en la muestra problema
se encuentra en un rango entre 40 y 80 mg/l que resulta de multiplicar el rango entre 20 y 40 mg/l que
nos da las áreas relativas del pico de la acetona y el estándar en la muestra multiplicadas por 2 que es el
factor de dilución de la muestra.

Si requiere mayor precisión se construye la curva de calibración así: (observar figura 3.10)

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
No. Concent. Vol.de Vol.de Aforo Cantidad Área de patrón Área Estándar Áreas Concent.
Patrón mg/l A en ml B en ml Final inyectada en cm
2
en cm
2
Relativas Relativas
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 20 20 10 100mL 1 μL 10 25 10/25 =0.4 20/50=0.4
2 40 40 10 100mL 1 μL 20 25 20/25 =0.8 40/50=0.8
3 60 60 10 100mL 1 μL 30 25 30/25 = 1.2 60/50=1.2
4 80 80 10 100mL 1 μL 40 25 40/25 = 1.6 80/50=1.6
mp 50 ml muestra 10 100mL 1 μL 15 25 15/25 = 0.6 x/50=?
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tabla 3.2. Datos para construir una curva de calibración para determinar la acetona contenida en una solución
utilizando como estándar metil etil cetona

Según la curva de calibración la concentración de acetona en la solución es de 30 mg/L la cual se debe
multiplicar por un factor de dilución de 2 para obtener la concentración real:

30 mg/l X 2 = 60 mg/L concentración real ya que se tomaron 50 mL de la solución muestra, se le adi-
cionaron 10 mL del estándar y se aforó a 100. Luego:

Vf 100
Ci = Cf------ = 30 mg X ------ = 60 mg/ L
Vi 50

En análisis de rutina cuando se obtienen gráficas lineales y el valor de concentración de la muestra
problema cae en el rango de patrones, no es necesario construir curva de calibración, ya que se puede
aplicar directamente la siguiente relación:


s
m
s
m
s
p
s
p
C
C
A
A
C
C
A
A
=

donde
p
A representa el área del pico del patrón,
s
A el área del pico del estándar,
p
C concentración del
patrón,
s
C concentración del estándar,
m
A área del pico en la muestra,
s
A área del pico del estándar en

104
la muestra y Cm concentración de la muestra la cual podemos despejar al conocer los demás datos.



Figura 3.10 Curva de calibración para la determinación de acetona por cromatografía de gases.


También se puede hacer uso de la siguiente relación:
s
s
s
s
m
m
p
P
C
A
C
A
=

Siendo
s
p
A = al área de patrón con relación al estándar,
s
p
C = concentración del patrón con relación al
estándar,
s
m
A = área de la muestra con relación al estándar,
s
m
C = concentración del patrón con relación al
estándar.

Para la estandarización de un análisis, se deben aplicar Diferentes métodos, hacer un tratamiento
estadístico de los datos y determinar cual es el método cuantitativo por cromatografía más rápido, exacto y
preciso.








105


Unidad 4


4. Instrumentación para cromatografía gas líquido.

Objetivo General: Presentar al estudiante la información sobre las características técnicas y aspectos
comerciales de los equipos, accesorios y mantenimiento relacionados con la cromatografía gas líquido y
por medio de una demostración en los equipos existentes en el laboratorio observe su funcionamiento y la
realización de un análisis completo mediante el uso de la técnica.

Objetivos Específicos: Terminada la unidad el estudiante será capaz de:

1. Reconocer las diferentes casas productoras, marcas, características técnicas de cromatógrafos gas
líquido.

2. Reconocer la configuración de los cromatógrafos de gases tanto en la parte neumática como en
inyectores, columnas y detectores para diferentes fines analíticos.

3. Reconocer el software para el manejo y presentación de la información analítica en cromatografía gas
líquida.

4. Reconocer las características técnicas y las fuentes de información sobre columnas para cromatografía
gas líquido.

5. Reconocer mediante una demostración en el cromatógrafo de gases como se llevan a la práctica
las instrucciones, normas de seguridad y precauciones en el manejo del equipo en la realización de un
análisis.

6. Aplicar y proyectar los conocimientos adquiridos sobre cromatografía de gases en la realización de
un taller teórico, una consulta bibliográfica y un trabajo práctico mediante la ejecución de una
determinación analítica orientada por un monitor.













106


4. Generalidades

La instrumentación para cromatografía gas líquido es ofrecida a nivel mundial por más de 25 casas
fabricantes con unos 125 modelos de equipos diseñados para tal fin.

Los modelos más recientes presentan configuraciones muy versátiles para la incorporación de inyectores,
detectores, columnas, automuestradores y sistemas de micro controladores para el manejo automático de
las diferentes variables que intervienen en el análisis y autodiagnóstico del funcionamiento del equipo.

También es importante destacar la incorporación del PC con el software desarrollado para el manejo y
presentación de la información analítica.

Los costos de incorporación de estas nuevas tecnologías en la instrumentación para cromatografía de
gases dependen de la configuración del equipo y pueden oscilar entre 2.000 45.000 dollares.

Entre los fabricantes más acreditados en nuestro medio se encuentran: Hewlett Packard, Perkin Elmer,
Phillips, Varian techtron, Chimadzu, Konik Instrument.

La configuración de un cromatógrafo gas líquido esta constituida por zonas y módulos fácilmente
intercambiables:

1. Zona neumática de inyectores
2. Modulo de inyectores
3. Zona de horno para columnas
4. Modulo de detectores
5. Zona neumática de detectores
6. Modulo de amplificadores
7. Modulo del microprocesador
8. Canales
9. PC con el software y hardware necesario

4.1. Características técnicas del cromatógrafo de gases

HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT

Casa fabricante: Konik Instrument S.A
Nacionalidad: Española
Configuración por bloques:
_ Zona neumática de inyectores
_ Modulo de inyectores
_ Zona de Horno para columnas
_ Modulo de detectores
_ Zona neumática de detectores

107
_ modulo de amplificadores
_ Modulo de microprocesador
- Canales
-Computador

4.2 Características Generales:

- Conexión a la red :
220 V con fusible de protección de 10 A
110 V con fusible de protección de 20 A
Indispensable la conexión a tierra
Estabilizador de voltaje de núcleo saturado

- Manómetros y válvulas para controlar las presiones de los diferentes gases
- Medidor de flujo de burbuja
- Inyección manual o automática
Se puede configurar con los siguientes inyectores:
Inyector convencional para columnas empaquetadas de 1/8" y semicapilares.
Inyector " on column" para columnas de 1/4".
Inyector multimodo "split/splitless".
Válvulas de inyección.
Inyector "on column" para columnas capilares.
Cámara de desorbción.

- Se puede configurar con 4 detectores:

4.2.1 Detector de Ionización de llama

Especificaciones:
Sensibilidad............0.018 Coulombs/gramo para hidrocarburos
Rango dinámico lineal.......................10
7

Temperatura de funcionamiento máxima..... 400
o
C
Voltaje de polarización ................± 200V DC
Voltaje de ignitor......................1.5V Ac o Dc y 4A
Calefactor..............................125W 220V

4.2..2 Detector de Conductividad Térmica

Especificaciones:
Tipo.......hilo caliente con 4 filamentos de

Renio/tungsteno en puente de Weahtstone y flujo continuo.
Tiempo de respuesta ................0.5 seg.
Ruido máximo ......................... 10 μV.
Deriva máxima......................... 40 μV/hora

108
Corriente máxima...................... 360 mA
Tensión máxima ....................... 45 V
Sensibilidad ......................... mejor que 5 ppm.
Electrómetro.......................... Fuente de corriente constante con amplificador.
Posibilidad de conmutar la polaridad automáticamente.

4.2.3 Detector Captura electrónica

Especificaciones:
Detector: Fuente de
63
Ni milicuries
Temperatura máxima: 400
o
C
Gas portador argon con 5% de metano.
Nitrógeno puro (alternativo)

Linearizador: Anchura de pulso: 0.75 μseg. para Ar/CH4
4.0 μseg para N2 como gas portador.
.
Salida: Integrador: 1 voltio f.s. sin atenuador
Registrador: 1 mv fondo de escala y atenuador de 11 posiciones.

Otras características:

Selector de anchura de pulso en función del gas portador (N2 o Ar/CH4)
Selector de modo de operación.
Autocero con ajuste manual. Que actúa únicamente en el modo linearizado.


4.2.4 Detector NPD
Especificaciones:
Límite detección 0.2-0.4 pg/de N/seg
0.2-0.4 pg/de P/seg

Selectividad P:Hidroc; 2-20 x 10
5

N:Hidroc; 5-40 x 10
4


Linealidad 10
4
a 10
5
para N y P

Voltaje de vaporización Hight:-150V
Low:- 20V


- Columnas: se pueden acoplar capilares, semicapilares, o analíticas rellenas.
- Amplificación: modulo compatible para varios detectores
- Microprocesador con las siguientes características:


109
Control y regulación de temperatura de 6 zonas del equipo:

Inyección, detección (control individual para los dos detectores), horno de columnas, y dos controles
auxiliares para elementos auxiliares, (válvulas, autoinyectores, interfases, etc). Cinco Rampas: Para la
programación de temperaturas del horno a velocidades desde 0.5 hasta 40
o
C/min.

Cronómetro para control de tiempos de análisis, tiempos de retención, inicio y final de ciclos y cálculo de
flujo.

Reloj calendario con batería de níquel - cadmio Seis funciones de tiempos para actuaciones automáticas,
tres fijas para "splitless", válvula inyectora y ciclo automático. Tres para aplicaciones generales con seis
modos operativos de cada una, automatizan operación con inyector automático, espacio de cabeza,
cámara de absorción, sistema de conmutación de columnas, retrocesión de flujo, conmutación de señales,
conexión automática con otros equipos y sistemas auxiliares. Sistema de enfriamiento en el horno de
columnas rápido, (automático de 250
o
C a 50
o
C en menos de 6 minutos) o manual programable por el
usuario.

Funciones de tiempo: cubren el rango de 0 a 99,9 min. programables en décimas y entre 100 y 999
programables de minuto en minuto.

Visualización en pantalla de parámetros, de estados y de evolución del programa.
Sistema de protección de temperatura límite del horno (columnas) programable y con desconexión
automática.

Selección hasta de 8 idiomas para programación y dialogo.

Sistema de auto diagnóstico y aviso de avería: con parada automática del equipo.

Almacenamiento de 5 métodos para programas de aplicaciones generales y específicos en memoria
soportada por batería (expandible opcionalmente).

Interfase bidereccional RS-232 para comunicación con integradores, compatibles PC-KONIK y otros
ordenadores compatibles (opcional).

Flexibilidad en la programación que incluye la posibilidad de cambiar cualquier parámetro de un programa
durante la ejecución del mismo, lo cual supone una total interacción del usuario con el cromatógrafo durante
el curso del análisis.

Interrupción del programa a voluntad.


4.3 Instrucciones resumidas para la operación del cromatografo de gases
HRGC-3000 C de Konik Instrument

1. de acuerdo con el tipo de detector que va utilizar seleccione los gases respectivos tanto portador como

110
para el detector.

2. Cerciórese que el manómetro que marca la presión interna del cilindro le marque una presión mínima de
120 P.S.I que le permita sostener la presión de trabajo durante un tiempo razonable.

3. Para el suministro de los gases ubique la presión de los manómetros de salida de los cilindros según la
siguiente tabla:


Tabla 4.1 Presión recomendable en los manómetros de salida de los cilindros.

Presión
Gas Kg/cm
2
P.S.I.
N2 4 60
He 4 60
Ar+CH4 4 60
Ar+aire 4 60
H2 2 30
Aire 5 70

4. Mediante la válvula VM identificada como carrier ajuste la presión del gas de arrastre en el respectivo
manómetro.

La válvula VM posee un dial que registra numéricamente la apertura, en posición cerrada registrar 999 y
abre a medida que la numeración disminuye.

Espere unos 2 minutos para garantizar que el gas ha recorrido la columna.

5. Conecte el estabilizador a la red 110V, conecte el cable de conexión del cromatógrafo en el estabilizador,
ubique el interruptor del estabilizador en ON, el piloto indicador debe lucir rojo.

6. Para puesta en marcha del equipo presione durante unos segundos el botón start (arranque), que se
encuentra en la parte trasera baja lado derecho. Se debe escuchar el arranque de los ventiladores y
visualizarse encendida la pantalla del microprocesador. Para la parada del equipo presione el botón stop.

7. Seleccione y encienda el detector que requiere de acuerdo con la instrucción siguiente:

7.1 Para el detector de ionización de llama (FID) siga los siguientes pasos:

7.1.1 Oprima la tecla DET TEMP, en la pantalla observará la pregunta: Qué detector? oprima la tecla
on/yes 1, en la pantalla observará la pregunta: temperatura deseada? introduzca mediante el teclado la
temperatura deseada ( máximo 400
o
C ) oprima la tecla enter. En la pantalla al lado derecho observará la
temperatura actual y al lado izquierdo la programada.

7.1.2 Hale el manorreductor del aire. Gírelo hacia la derecha hasta que la aguja del manómetro coincida

111
con la marca (raya negra). Aproximadamente 32 P.S.I.

De igual forma ajuste la presión del hidrógeno.
Precaución: Abra primero el aire y luego el hidrógeno. para apagar el detector haga lo contrario cierre
primero el hidrógeno y luego el aire.

Nota: Si va hacer uso de columnas capilares debe ajustar la presión del make-up A de igual manera que lo
hizo con el aire y el hidrógeno.

7.1.3 Ubique el interruptor del amplificador del detector de ionización de llama en la posición ON, el
amplificador se encuentra ubicado en la parte frontal lado derecho y corresponde al segundo de arriba
hacia abajo.

7.1.4 Oprima el botón del ignitor (se encuentra ubicado al lado derecho del manorreductor del aire), se debe
producir una suave explosión. Si no fuera así se puede aumentar ligeramente la presión del hidrógeno, y se
presiona nuevamente el ignitor.

Una vez encendido el detector se debe bajar la presión hasta la marca.

Precaución: Confirme que el detector quede encendido observando que el vapor de agua que sale por la
chimenea se condensa sobre una superficie reflexiva para tal efecto puede ser útil un vidrio de reloj, un
espejo o una superficie metálica brillante. Sí esto no sucede el detector se encuentra apagado.

Durante la sesión de trabajo monitoree de igual manera que el detector permanezca encendido.

7.1.5 Identifique y use los controles del amplificador de acuerdo con la siguiente información:

Nombre Función

Rango Permite seleccionar la ganancia del amplificador. Hay 4 posiciones
de menos sensible (10
-9
) a más sensible (10
-12
). Cada paso supone
multiplicar por 10
.

Supresor Permite ajustar el offset del amplificador. Línea base en la pantalla.


Cero y atenuación solo se utilizan cuando hay incorporado un registrador.

On-Off Permite prender y apagar el amplificador.


A-B, A+B, -A+B Permite seleccionar la polaridad positiva o negativa de los detectores.



112
7.2 Para el detector de conductividad térmica proceda así:

7.2.1 Siga la instrucción 7.1 identificando el detector de conductividad térmica como 2..

7.2.2 Asegúrese de que por las chimeneas del detector este saliendo gas de arrastre y compruebe que los
flujos son los deseados e iguales en ambos canales.

Precaución: Si no hay flujo de gas de arrastre a través de las chimeneas, no debe encender el detector
porque se queman los filamentos.

7.2.3 Sitúe el mando de corriente del filamento en la posición 1 (intensidad mínima), ubique el interruptor del
amplificador en la posición ON.

7.2.4 Establezca la intensidad de corriente de los filamentos en forma adecuada en función de la
sensibilidad que desee teniendo en cuenta la tabla 4.2.


Tabla 4.2 Posición del control y corriente para T.C.D

Posición: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Corriente en mA: 0 35 65 100 135 165 200 235 265 300 335 365

8. Prenda el computador primero el monitor, luego el pc por último la impresora.

Una vez este en c:\> escriba cd windows déle enter ó win enter, debe aparecer el administrador de
programas. Haga doble clic en el icono de chromatography, aparece la ventana chromatography y el icono
konikrom, haga doble clic en el icono Konikrom, debe aparecer en la pantalla el sistema de datos de la
versión 6.5 de konikrom chromatography, haga clic en OK para abrir la ventana.

Haga clic en el icono identificado como 1 CHRGC 3000 C, en user name escriba demo y dele enter.
Si trabaja bajo windous 95 simplemente haga doble clic en el icono Konikrom para entrar al programa.














113

Figura 4.1

114


Figura 4.

115
4.4 Formato guía para el seguimiento de las demostraciones sobre la Técnica Analítica
Cromatografía de gases.

Objetivos:

Que el estudiante reconozca las partes que conforman un cromatógrafo gas líquido y la función de
cada una.

Observe como se llevan a la práctica las instrucciones, normas de seguridad y precauciones en el
manejo del equipo.

Confirme la influencia en el tiempo de retención de los compuestos de la mezcla y la resolución de los
picos en el cromatograma con los cambios en las variables: Temperatura, velocidad de flujo, presión,
cantidad de muestra inyectada, tipo de columna.

Conozca como se establecen las condiciones óptimas de funcionamiento del equipo en la
estandarización de un buen cromatograma para un análisis específico.

Analice como se interpreta la información que reporta un cromatograma y observe como
se cualifica y se cuantifica mediante dicho registro.

Observe una aplicación de la cromatografía gas líquido en el control de la composición y calidad de una
mezcla de solventes industriales para uso como disolvente. Y el control del contenido de metanol en un
licor.

Desarrollo: Llene los espacios del formato de acuerdo con sus observaciones e instrucciones dadas
por el monitor o el profesor.


Equipo: ____________________________

Marca: ____________________________

Modelo: ____________________________



4.4.1 Configuración del equipo

Zona neumática: Cilindros para gases H2 _____, N2_____, He _____, Ar ______. Ar + CH4 _________

Manómetros ________, reguladores de presión _______,

válvulas _______, medidores de Flujo: Fluximetro de burbujas ______, Rotámetro _____.

116


Zona de inyectores: loop _____, Microjeringa ______, Inyección automática _____.

Rango de temperatura de los inyectores de: ______ Hasta _______°C

Zona de columnas: Horno (recinto termostatado) _______

Rango de temperatura del horno de _____ Hasta _____ °C

Programación de temperatura: Número de rampas _________

Temperatura máxima de operación ________°C

Protección térmica para columnas programable _______

Velocidad de enfriamiento ____________ °C/minuto

Zona de detectores:

Número de detectores ______

Tipo de detectores que se encuentran en el equipo:

Detector de conductividad térmica ______

Detector de ionización de llama ______

Detector de captura electrónica ______

Detector para nitrógeno y fósforo ______

Zona de amplificadores:

Amplificador para DCT ______

Amplificador para DILL ______

Microcontrolador ______

Computador ______

Muestreador automático ______


117
4.4.2 Selección de condiciones iniciales para el análisis

Temperatura del bloque de inyección ________ °C

Detector ______________________

Temperatura del detector _______ °C

Gas portador __________

Presión del gas portador _________ psi

Velocidad de flujo del gas portador en la columna ________ mL / minuto

Velocidad lineal del gas portador _______ cm / minuto

Posición de la válvula de control _______

Presión del make up _____ psi

Velocidad de flujo del gas portador en el detector (make up) ______ mL / minuto

Características de la columna:

Tipo de columna ___________ longitud _____ m, diámetro ______ mm, espesor de la película de la
fase estacionaria ________μm

Referencia ________ Fase líquida estacionaria _______________________________
________________________________

Máxima temperatura de operación ________ °C

Mezcla a inyectar: _____________________________________

Número de compuestos de la mezcla a inyectar _____________

Lista de los compuestos:
1_______________, 2_______________, 3_______________, 4________________.
5_______________, 6_______________, 7_______________, 8 _______________
9 _______________, 10______________,11______________, 12________________
13_______________, 14______________,15_____________ , 16________________


Cantidad de muestra a inyectar ______________μL

118


Programación de la temperatura de la columna





Tiempo de programación total _______ minutos

Máximo valor de mV _______

Características del cromatograma:

Resolución: Óptima ________, Buena ________, Regular ________, Mala ________.

Información sobre el comportamiento termodinámico de los compuestos en el interior de la
columna.

Se observa:

Contaminación en la columna? ________

Difusión de los compuestos? ________

Colas en los picos? ________, Condensación de los compuestos? ________

Descomposición térmica de los compuestos? ________

Número de picos? ________, Linealidad de la línea base? ________

119
Simetría en los picos? ________, Asimetría? ________

Tiempos de retención razonables? ________

Es óptimo el cromatograma para cuantificar y cualificar? ________

Requiere optimización? ________

Para su optimización cambiaria en primer lugar:

La programación de la temperatura de la columna? ________

La velocidad de flujo del gas portador? ________

La presión del gas portador? ________

La columna? ________

El detector? ________




120

Cromatograma patrón hidrocarburos alifáticos C5 a C10

Figura 4.3

121






Cromatógrafos de gases ubicados en la sala de cromatografía en el laboratorios Q127

Figura 4.5


122
4.5 Taller y consulta sobre cromtogrfia de gases


1. Consultar el tratamiento de derivatización que requieren los siguientes compuestos para su estudio
cromatográfico: Aminoácidos, carbohidratos, esteroides, vitaminas, ácidos biliares, ácidos grasos.

2. Consultar cuál es el tipo de columna requerida para realizar la separación de los siguientes
compuestos :Fenoles, gases (H2, O2, N2, CH4), pesticidas clorados, pesticidas fosforados, drogas
(anfetaminas, alcaloides, barbitúricos), triglicéridos, hidrocarburos alifáticos, hidrocarburos
aromáticos, aromas, sabores en que condiciones se deben operar y para cada grupo de
compuestos cuál es el detector adecuado.

3. Para la identificación de virus y bacterias Se ha empleado la cromatografía de gases. Cómo
considera Usted que ha sido posible utilizar esta técnica?

4. Al examinar cromatograficamente dos muestras estándar y una muestra desconocida, se obtuvieron
los siguientes cromatogramas:




Velocidad de la carta 2.5 mm / minuto


a. Calcular el número de platos teóricos con respecto al componente C, calcular
tiempo de retención para cada componente del estándar, calcular la resolución de los picos C y D en
la muestra, calcular la altura equivalente de un plato teórico si la longitud de la columna es de 7.5 m.

123
b. Estimar la composición cualitativa de la muestra desconocida.

c. Consultar qué es el índice de Kovats y que utilidad analítica tiene.

5. Para evaluar la eficiencia en el proceso de la obtención de un ester se trabajo con los siguientes
datos:

H
+

Reacción implicada: CH3COOH + C2H5OH ◄ =====► CH3COOC2H5 + H2O


Se hicieron reaccionar 75 mL de ácido acético puro con 80 mL de etanol puro para producir acetato
de etilo, a los 45 minutos de iniciada la Reacción se tomó una muestra de 2.5 mL se le adicionó 0.5
mL de metanol como estándar y 7.0 mL de agua. En las condiciones de operación NN. Se inyectó
al cromatógrafo 1 microlitro obteniéndose el siguiente cromatógrama con un detector de
iotización de llama:



Para valorar los datos reportados por el cromatógrama se prepararon los siguientes patrones
usando como estándar interno metanol y solvente agua.


Patrón Metanol Etanol Ácido acético Etilo acetato Solvente Cantidad Inyectada
No. mL mL mL mL mL μL
1 0.5 0.25 0.25 0.25 8.75 1.00
2 0.5 0.50 0.50 0.50 8.0 1.00
3 0.5 0.75 0.75 0.75 7.25 1.00
4 0.5 1.00 1.00 1.00 6.50 1.00
5 0.5 1.25 1.25 1.25 5.75 1.00


En igualdad de condiciones en las cuales se inyectó la muestra y con el mismo detector, Se inyecta
al cromatógrafo un microlitro de cada patrón, el cálculo de las áreas correspondientes a los picos

124
de los compuestos de cada patrón se consignaron en la siguiente tabla:

Patrón Metanol Etanol Ácido acético Etilo acetato
No. Área en cm
2
Área en cm
2
Área en cm
2
Área en cm
2

1 0.95 0.4 0.51 0.36
2 0.98 0.74 1.08 0.69
3 1.00 1.25 1.47 1.12
4 1.02 1.61 2.10 1.39
5 0.96 2.08 2.48 1.78

Construya las siguientes curvas de calibración relativas:


Área etanol Vs %V/V etanol
Área metanol %V/V metanol


Área ácido acético Vs % V/V ácido acético
Área metanol %V/V metanol


Área etilo acetato Vs %V/V etilo acetato
Área metanol %V/V metanol

5.1 Evaluación previa del proceso:

a. si la Reacción se diera con el 100% de eficiencia cuántas mL acetato de etilo se obtendrían?

b. Cuántos mL de etanol reaccionarían?

c. Cuántos mL ácido acético reaccionarían?

d. Cuál es el reactivo limitante de la reacción?


5.2 Con la evaluación de los resultados obtenidos para la muestra en el Cromatograma y con las
gráficas construidas resuelva los siguientes interrogantes tomando como base los 2.5 mL de
muestra teniendo en cuenta la dilución:

125
a. Cuáles son los porcentajes de: Etilo acetato, etanol, ácido acético.

b. Con los datos anteriores haga una evaluación de la eficiencia del proceso hasta el momento de
toma de la muestra.

c. Por qué el área del estándar varía en cada patrón?

d. Qué ventajas presenta en el análisis el uso del estándar interno y la construcción de curvas de
calibración con base en parámetros relativos?

e. Qué ventaja presenta para el análisis la utilización de un detector de ionización de llama?

6. Analogías

6.1 Consulte: qué es y qué propiedades presentan los fluidos supercríticos y sus aplicaciones en la
en la técnica cromatográfica.

6.2 Haga una comparación entre las técnicas cromatográficas gas liquido, liquida de alta eficiencia
y fluidos supercríticos. Considere: fundamentos, instrumentación, aplicaciones y limitaciones.

6.3 En que consiste la extracción en fase sólida y que ventajas presenta en el pretratamiento de las
muestras para su separación cromatográfica.

7. Relación entre tr', Vr', Rf' y Kg

Con base en las ecuaciones desarrolladas en las páginas 35, 36, 37 y 38 resuelva el ejercicio de la
página 38.

8. Desarrollar el trabajo particularmente asignado, preferiblemente si las condiciones lo permiten hacerlo
práctico.

Posibles determinaciones a realizar: Alcoholes en licores, aromas en perfumes, sabores en alimentos,
colesterol en orina, alcohol en sangre. Análisis de analgésicos y antipiréticos, vitaminas, antibióticos,
anfetaminas, triglicéridos, proteínas, carbohidratos.












126

Bibliografía

Catálogos de los diferentes cromatógrafos de gases
David Harvey, Química Analítica Moderna (1ª.Ed). España. ED Mcgraw-Hill 2002.

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1968.

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Corp. 1970.

Journal of Chromatography

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Monografías: 10, 16, 23 sobre cromatografías: Liquida de alta presión, en papel y en capa delgada, de
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Pearson Education; 2001.

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Mcgraw-Hill 1.999.

SKOOG, Douglas A. ,LEARY, James J. Análisis Instrumental (4a. ed ) España: ED, McGraw-Hill 1.994.

SKOOG, Douglas A; Holler F James; Nieman Timothy A. Principios de Análisis Instrumental (5ª. Ed).
Madrid: ED Mcgraw-Hill 2000.

SKOOG, Douglas A. WEST Donald M. HOLLER F. James. Crouch Stanley R. Química Analítica (8a.
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SKOOG, Douglas A; Holler F James; Crouch, Stanley R. Principios de Análisis Instrumental (6ª. Ed).
México: ED Cengage Learning 2008.

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WILLARD, Hobart H., Merritt, Lynnel., y Dean John A. Métodos Instrumentales de Análisis (7a. ed
).México: ED, Grupo Editorial Iberoamérica, 1.99 1.





128
Tabla de contenido
No. Pg
Introducción 1
Primera unidad 2

1. generalidades de la cromatografía 2
1.1 Reseña Histórica 3
1.2 Fundamentos de las técnicas de separación por cromatografía 7
1.3 Principios de la cromatografía 7
1.4 Cromatografía sólido líquido 8
1.4.1 Cromatografía en papel 9
1.4.2 Cromatografía en capa fina 11
1.4.3 Cromatografía en columna 12
1.4.4 Cromatografía de intercambio iónico 15
1.5 Cromatografía Líquido Líquido 20
1.6 Técnicas especiales 20
1.6.1 Cromatografía Flash 21
1.6.2 Cromatografía de capa delgada en fase inversa 21
1.6.3 Cromatografía líquida al vacío 22
1.6.4 Electro-cromatografía 23
1.6.4.1 Electroforesis capilar (Resumen) 24
1.6.4.2Cromatografía de fluidos supercríticos (resumen) 25

Segunda unidad 27

2. Cromatografía de Gases 28
2.1 Cromatografía gas sólido 28
2.2 Cromatografía gas liquido 28
2.2.1 Descripción del proceso de separación 28
2.2.2 Ilustración del análisis por cromatografía gas líquido 28

129
2.2.3 Glosario de términos y fórmulas 30
2.2.4 Partes básicas de un cromatógrafo gas líquido 41
2.2.4.1 Muestra (Técnica de la inyección) 41
2.2.4.2 Inyector 42
2.2.4.3 Gas portador 43
2.2.4.4 Columna 45
2.2.4.4.1 Soporte sólido 45
2.2.4.4.2 Fase líquida estacionaria 50
2.2.4.4.3 Medida de la eficiencia de la columna 59
2.2.4.4.4 Ecuación de Van Deempter 61
2.2.4.5 Detectores 64
2.2.4-5.1 Características generales de un detector 64
2.2.4.5.2 Detector de conductividad térmica 66
2.2.4.5.3 Detector de ionización de llama 68
2.2.4.5.4 Detector de captura electrónica 69
2.2.4.5.5 Detector fotométrico de llama 70
2.2.4.5.6 Detector NPD 71
2.2.4.5.7 Detector de espectrometría de masas 73
2.2.4.5.8 Detector espectrofotométrico infrarrojo de transformada de fourier (FTIR) 75
2.2.5 Cromatografía de gases versus cromatografía de alta resolución (HPLC) 75

Tercera Unidad 79
3.1 Muestra 80
3.1.1 Indagar sobre la muestra 80
3.1.2 Tratamiento de la muestra 80
3.1.3 Selección de condiciones para el análisis 80
3.1.4 Condiciones instrumentales 80
3.1.5 Inyección de la muestra (ver instrucciones 2.2.2.1 Pg 40) 80
3.1.6 Interpretación del cromatograma obtenido 80
3.1.7 Optimización del cromatograma 89

130
3.1.8 Anotar o grabar condiciones 89
3.1.9 Análisis cualitativo 89
3.1.10 Análisis Cuantitativo 90
3.1.10.1 Relacionando áreas 92
3.1.10.2 Relacionando Alturas 94
3.1.10.3 Relacionando Pesos 95
3.1.10.4 Factor de respuesta 97
3.1.10.5 Curvas de calibración 97

Cuarta unidad 101
4. Generalidades 102
Instrumentación para cromatografía gas líquido 102
4.1. Características técnicas del cromatógrafo de gases
HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT
4.2 Características Generales: 103
4.2.1 Detector de Ionización de llama 103
4.2.2 Detector de Conductividad Térmica 103
4.2.3 Detector Captura electrónica 104
4.2.4 Detector NPD 104
4.3 Instrucciones resumidas para la operación del cromatógrafo de gases
HRGC-3000 C de Konik Instrument 105
4.4 Formato guía para el seguimiento de las demostraciones sobre
la Técnica Analítica Cromatografía de gases. 111
4.5 Taller y consulta sobre cromatografía de gases 118

Bibliografía 122


El presente material docente denominado apuntes de clase sobre algunas técnicas cromatográficas para los estudiantes de la asignatura Análisis Instrumental II de los Programas en Tecnología Química y Química Industrial de la Escuela de Tecnología Química de la Facultad de Tecnología de la Universidad Tecnológica de Pereira; no pretende ser una obra original del profesor con relación a sus contenidos, es sencillamente un resumen y ordenamiento didáctico sobre las técnicas cromatográficas enfatizando en la cromatografía de gases . En los temas tratados se encuentra una adaptación personal para su desarrollo, llevando una secuencia que le permita al estudiante ver objetivamente la relación de los mismos para su estudio y aprendizaje. Algunos son transcripciones mientras que otras son cortas traducciones y adaptaciones de muchos textos, catálogos y artículos, de diferentes autores y casas productoras de equipos cromatográficos. El profesor espera con la preparación de este material facilitar al estudiante y a otras personas que les pueda ser de utilidad, una información y metodología que fundamente los conceptos, principios, leyes, instrumentación y aplicaciones de las técnicas analíticas tratadas. La complejidad de la gran cantidad de información existente sobre los temas tratados en diferentes publicaciones y textos con distintos enfoques, hace que el estudiante no tenga acceso a unos contenidos básicos de las técnicas cromatográficas; se estima que con base en estos fundamentos pueda posteriormente analizar los temas con mayor profundidad en los diferentes documentos de estudio. También pretende el profesor que con el desarrollo de estos contenidos temáticos, el estudiante pueda dedicar mayor tiempo de su atención en la clase a las explicaciones que a la toma de apuntes y a la elaboración de esquemas y gráficas. Los Temas tratados están ordenados en Unidades siguiendo la misma secuencia del programa y la extensión y profundidad de los contenidos de la cromatografía gas líquido adaptados a los objetivos, metodología, intensidad horaria de la asignatura y a la valoración académica en horas crédito. Además, si se presentaran imprevistos en el desarrollo normal del curso por situaciones de anormalidad académica durante el semestre, no pudiéndose cumplir con el programa en el cien por ciento, el estudiante tiene disponibilidad de los materiales que le permiten apropiarse de estos conocimientos. Los diagramas de los cromatógrafos y sus instrucciones de manejo corresponden a algunos de los equipos existentes en los laboratorios de la escuela de tecnología química de la UTP. Al final se informa la bibliografía consultada. Dado que todos los temas son tratados en la mayoría de los libros de Química Analítica, análisis Instrumental, y específicos de cromatografía, no se hace uso de bibliografía indexada. El profesor agradece a sus compañeros profesores y alumnos sus comentarios y aportes para el mejoramiento del material. Cordialmente Federmán Castro E Profesor

Febrero 2011

2

PRIMERA UNIDAD

1. GENERALIDADES DE LA CROMATOGRAFIA OBJETIVO GENERAL Presentar al estudiante una visión general sobre los orígenes, desarrollo, fundamentos, procesos, clasificación, semejanzas, aplicaciones y limitaciones de las diferentes técnicas de separación cromatográficas sólido líquido, líquido líquido, intercambio iónico y electrocromatografía; para que haga uso adecuado de ellas en el trabajo de laboratorio. Objetivos específicos 1. Terminada la unidad, el estudiante será capaz de: 1. Determinar los principios físicos que gobiernan los procesos de separación por cromatografía sólido líquido, líquido líquido, cromatografía de intercambio iónico y electrocromatografía. 2. Reconocer las técnicas cromatográficas sólido líquido: en papel, capa fina y columna. 3. Reconocer los términos utilizados en cromatografía sólido líquido, líquido líquido, líquido al vacío, intercambio iónico y electrocromatografía. 4. Describir las aplicaciones en la separación por medio de las técnicas de cromatografía en papel, capa fina y columna, como también en las técnicas cromatográficas: líquido líquido, líquido al vacío, cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía. 5. Conocer las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de las técnicas cromatográficas sólido líquido, liquido líquido, líquido al vacío, cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía. 6. Conocer las limitaciones de las técnicas cromatográficas sólido líquido, líquido líquido, líquido al vacío, cromatografía Flash, intercambio iónico y electrocromatografía.

3

Y en la separación de mezclas líquidas se han usado comúnmente las técnicas de extracción. minerales y pigmentos de plantas y animales a través de análisis capilar utilizando tiras de papel. realizó separación de: tinturas. la adsorción y la absorción. aguas.1 RESEÑA HISTORICA1 La química analítica desde sus inicios. o tienen puntos de ebullición muy cercanos. surgieron los procedimientos en múltiples etapas y con ellas la cromatografía. para la situación anterior. centrifugación. en 1897 analizó muestras de petróleo crudo en columnas empacadas finamente con tierra de fulleres (silicatos de aluminio y magnesio). los siguientes avances de interés en el desarrollo de la cromatografía: GOPPELSROEDER. Las técnicas tradicionales de separación para los diferentes constituyentes de una muestra varían dependiendo del estado en que se encuentra.T. Pues bien. En el desarrollo de nuevas técnicas. cristalización. DAY. para cuya separación la destilación es inadecuada. ha requerido de técnicas de separación para aislar los compuestos de interés objeto de estudio en una muestra. realizó su experimento 1 Información recopilada y organizada por el profesor Federmán Castro E para la asignatura Análisis Instrumental II. F. 4 . D. por lo cual. como es el caso de algunos líquidos que forman azeotropos. usando tiras de papel. destilación. hidrocarburos. alcoholes.1. Así como. en la separación de mezclas de tinturas y extractos de plantas. muchos componentes de diferentes mezclas. tanto para su cualificación como para su cuantificación. haciendo uso de las técnicas anteriores. En 1901 Tswett describió la absorción de pigmentos de plantas sobre proteínas y en 1906. dando sus principios y procedió a nombrar este proceso. con los trabajos realizados por RUNGE. suceden cronológicamente. nombre con el que se designan a varias técnicas de separación. haciendo pasar la muestra completamente mediante un flujo ascendente. Tswett. Así. decantación. En 1878 SCHONBEIN. Una correcta interpretación de los trabajos realizados hasta el momento fue dada por el botánico ruso MIKAHIL. se hizo necesario encontrar otras técnicas de separación más apropiadas. era difícil separarlos. él explicó con todo detalle este método. cerveza. tanto de sólidos como de líquidos se cuenta con la sublimación. Estas técnicas cromatográficas se consideran como iniciadas en el año de 1834. o se descomponen por el calor. evaporación. TSWETT. Mientras que en la separación de gases. F. las otras técnicas también presentaron sus limitaciones en la separación de compuestos. coloides.F. usó tiras de papel para el análisis de soluciones. en 1868. Para la separación de sólidos de líquidos se utilizan técnicas como: La filtración. leche. A partir de este año. este investigador ruso se conoce como Padre de la Cromatografía.

de uno en uno..M. por lo cual etimológicamente significa escritura en color. J. Luego introdujo más éter de petróleo el cual.J. En 1940 el científico sueco TISELIUS aplicó la cromatografía en el análisis de proteínas y propiedades electroquímicas de las enzimas haciendo uso de la electrólisis. En 1948 recibió el premio NOBEL de química por los trabajos realizados. A. GORDON.como sigue: Utilizó una columna empacada con carbonato de calcio.L. por el extremo inferior de la columna. SYNGE.. En 1949 MARTIN contribuye con la relación de transporte entre la retención y la constante de equilibrio termodinámica. De modo que se podían recoger aisladamente en diferentes recipientes.J. Si se continuaba agregando más disolvente. Los colorantes fueron absorbidos por el carbonato de calcio y quedaron formando una banda de color oscuro en la parte superior de la columna. 5 . cuando fue utilizada por KUHN y LEDERER. los colorantes salían más separados. A. encontró que el desplazamiento de las zonas era más rápido si se mezclaba algo de etanol con éter de petróleo. presentaron el primer modelo que puede describir la eficiencia de una columna y sentaron las bases de la cromatografía de gases. MARTIN y su colaborador R. CONSDEN. R. presenta en 1940 la primera teoría sobre cromatografía de papel.H. Para su experimento. desarrollaron la cromatografía de partición líquido. sometió las hojas desecadas a extracción con éter de petróleo y produjo un extracto de color intenso que puso en la parte superior de un tubo de vidrio colocado en posición vertical y el cual estaba relleno con carbonato de calcio en polvo. emergiendo en primer lugar el caroteno rojo anaranjado. al descender por el tubo fue lavando gradualmente y arrastrando a los colorantes. en análisis orgánico y bioquímico para la separación de la xantofila de la yema de huevo utilizando silicagel y alúmina como materiales absorbentes.N. En 1952 les fue otorgado el premio NOBEL de química. WILSON. asumiendo un equilibrio completo y una isoterma de absorción lineal. produciendo al avanzar por delante de las otras sustancias una banda de color característico.P. desarrollaron en 1944 la técnica cromatográfica en papel. El conjunto de las zonas o bandas coloreadas se denominó "CROMATOGRAFIA". para separar las sustancias colorantes de las hojas verdes de las plantas. TSWEET. y más atrás dos bandas verdes de clorofila. apareció una banda amarilla de xantofila.. En 1941 el científico inglés A. MARTIN. Por encima de esta sustancia desplazándose más lentamente. pero cada uno a una velocidad diferente. De allí deriva el nombre de cromatografía que viene del griego KROMATOS (color) y GRAPHOS (escritura). seguidamente la xantofila de color amarillo y posteriormente la clorofila de color verde. La técnica cromatográfica toma verdadero interés en 1931.

en 1951 desarrolló la cromatografía gas sólido por elución. la cual ha realizado periódicamente hasta el presente 11 congresos en diversos países: El I en 1.988 en Buenos aires Argentina y el XI en junio de 2006 en Yucatán México.CREMER.T. introducen la cromatografía gas líquido. que reúne los más prestigiosos profesionales de la cromatografía y ciencias afines de Latinoamérica y el mundo. Se han escrito gran cantidad de artículos en las revistas y publicaciones científicas sobre la aplicación de la cromatografía en el análisis de la más diversa variedad de muestras. y MARTIN. en 1956 plantea las teorías sobre la eficiencia de las columnas cromatográficas a través de una ecuación y la distribución gaussiana. El XII. no sólo con fines analíticos. En 1952 JAMES. Brasil del 28 al 30 de octubre del 2008 cumpliéndose así 20 años de sus celebraciones. integrado por profesionales de la química.J. revisa y extiende las teorías cromatográficas. A nivel latinoamericano. último congreso celebrado se realizó en Florianópolis (SC). VAN DEEMPTER. así como sus diferentes aplicaciones. Las técnicas cromatográficas en sus diferentes formas.P. ha ofrecido ciertas ventajas sobre la cromatografía de gases para determinados análisis. El desarrollo la cromatografía líquida de alta eficiencia. Teniendo estos encuentros como objetivo principal proporcionar actualización y mostrar el estado de las distintas técnicas cromatográficas. mediante los avances de la electrónica y los microcontroladores para automatizarlos y manejar los datos. sino también en la separación y purificación de solventes orgánicos a nivel industrial. En Colombia. A. J. biomédicas y de alimentos dando origen a la cromatografía de fluidos supercríticos y la extracción con fluidos supercríticos. existe el Comité Colombiano de Cromatografía. También se ha venido desarrollando la cromatografía de intercambio iónico obteniéndose una gran sensibilidad y rapidez en la separación selectiva y simultánea de aniones y cationes en el rango de microgramos por litro. han sido aplicadas para la separación de un gran número de compuestos. aplicando en ellos las formas más funcionales y simplificadas. En 1965 GIDDINGS.C. La técnica ha tenido un desarrollo vertiginoso y se han diseñado gran cantidad de equipos. 6 .. Durante las dos últimas décadas el trabajo sobre nuevas y prometedoras técnicas de separación cromatográfica ha tomado como base el empleo de fluidos supercríticos para el análisis de muestras ambientales. se ha organizado la Federación de Usuarios de la cromatografía (COLACRO). A.

perfumes.quienes coordinan y organizan encuentros técnicos y cursos a fin de consolidar el intercambio y actualización de conocimientos tanto de sus miembros como de todo el personal que hace uso de esta valiosa técnica. en el control de calidad de medicamentos y diagnósticos en medicina forense. control de calidad de aceites esenciales. y espectrómetros de masas. Permitiendo que las técnicas cromatográficas puedan ser usadas en conjunto con otras técnicas analíticas. UV. como las fotométricas. productos agroquímicos... el petróleo y sus derivados. cursos teórico prácticos a diferentes niveles. alimentos. IR. dándole especial importancia en el análisis químico tanto a nivel investigativo como del control de calidad. etc. La Universidad Industrial de Santander (UIS). estudio de aromas tales como los del café detectados por esta técnica alrededor de 350. solventes industriales. conductímetros. asesorías. mediante el acople con equipos de RMN. 7 .en su Escuela de Química ha creado la Escuela Nacional de Cromatografía para ofrecer un soporte científico y práctico a los usuarios de cromatografía en Colombia a través de la realización de pasantías para entrenamiento personalizado. etc. refractómetros. Son múltiples sus aplicaciones en el análisis de los contaminantes del medio ambiente. montaje de métodos y servicios de análisis. y poder detectar e identificar sustancias presentes en diferentes tipos de muestras hasta el nivel de pico y nano gramos.

Una separación cromatográfica puede verse como una sucesión de extracciones. que determina su estructura isómera o su quiralidad y en función de su polaridad. sus masas moleculares. se pueden separar moléculas en función de sus cargas moleculares. La complejidad del procedimiento depende entonces. En el agua hay un soluto disuelto: en este caso se trata de ioduro. según la ley los semejantes disuelven a los semejantes. por lo cual resultan una gran variedad de técnicas para efectuar la separación de una sustancia.líquido es una técnica que tiene como base la utilización de dos líquidos que no son solubles entre sí. compone la capa más baja.1 Una extracción líquido .1. siendo posible potencialmente una separación. Como el CCl4 es más denso. son inmiscibles. Diagrama 1. una tras de otra.1 son agua (H2O) y tetracloruro de carbono (CCl4). La mezcla se 8 . suponiendo que los dos líquidos utilizados en la ilustración del diagrama 1. sus tamaños moleculares. sus potenciales redox. sus constantes de ionización. disposición de sus enlaces.2 FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS DE SEPARACION POR CROMATROGRAFIA La separación se consigue a través de una gran variedad de técnicas cuyas bases moleculares tienen diferencias muy diversas. de la diferencia de las razones de distribución de los componentes. Se considerarán las separaciones que tienen lugar en función de la polaridad en la cual se fundamenta la solubilidad. Es de importancia recordar y comprender el proceso de extracción para entender desde este punto de vista la base química de la cromatografía así como el origen de la terminología cromatográfica. Los procedimientos de separación en múltiples etapas tienen en común la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases que posteriormente pueden separarse mecánicamente cuando la razón de la cantidad de un compuesto dado presente en cada fase difiere considerablemente de la otra.

En las separaciones cromatográficas un. se utiliza el mismo análisis para la distribución de solutos en interfases entre cualquier combinación de gases. las soluciones en las dos fases se pueden saturar o sobre saturar quedando algún residuo sólido. se observa que los resultados vienen descritos por la siguiente expresión: KD  I 2 CCl I 2 H O 4 2  7  10 2 . Por ejemplo. El producto matemático entre las concentración de la superficie y el volumen de la superficie. La masa total de muestra sometida a una separación cromatográfica debe ser limitada para que las 9 . Si repetimos este experimento varias veces utilizando diferentes concentraciones iniciales de ioduro. En las ecuaciones anteriores se considera que los volúmenes de las dos fases son suficientemente grandes para ser capaces de disolver todo el ioduro que se les añade. por lo cual en cualquier sistema cromatográfico la carga correcta de la muestra es muy importante para obtener una buena separación cromatográfica. esto es. generalizando el reparto de un soluto entre dos fases tenemos: número de moles totales = C1V1  C2V2 . En otros términos. También se puede escribir como K D  C I 2 . incluso cuando el volumen es extremadamente pequeño. se supone definido incluso si el volumen y la concentración por separado no se pueden determinar. Suponiendo que el volumen de la fase i es Vi para el caso de ioduro que se reparte entre el H2O y el CCl4. coeficiente de distribución es útil incluso si una de las fases es un sólido con el analito absorbido en su superficie. C sVs . K D es la constante de equilibrio denominada coeficiente de partición o coeficiente de distribución y algunas veces factor de reparto. el número total de moles de ioduro ya no estaría definido por la expresión C1V1  C2V2 . Por convenio la fase orgánica es la 1. el número de moles totales es =moles en el H2O + moles en el CCl4 = I 2 H O VH O  I 2 CCl VCC 2 2 4 4 . H 2O  C1 C2 Donde C es la concertación expresada en mol / unidad de volumen en las respectivas fases. Cuando en cromatografía ocurre una situación similar. En esta situación. Si se añadiere demasiado ioduro. se puede determinar las concentraciones de ioduro en la fase acuosa y orgánica. el ioduro de cada fase se puede determinar mediante una valoración redox). Para determinar la cantidad de materia contenida en cada fase es necesario conocer el volumen de cada fase.agita vigorosamente y luego reposa mientras los dos líquidos forman las dos capas separadas como se observa en el diagrama 1.CCl4 C I 2 . el cual es constante a unas determinadas condiciones de temperatura y presión.1. Si la concentración de ioduro es suficientemente alta. líquidos y sólidos. pero a una misma temperatura. se dice que el sistema esta sobrecargado (columna sobre cargada). Después de la extracción. se puede ver su color morado en la fase orgánica. Así el coeficiente de distribución es una relación de concentraciones.

radica en la distribución de los solutos (componentes de las mezclas). versus la concentración del soluto en la fase móvil. (Cs  Cm). una representación gráfica (isoterma) de la concentración del soluto en la fase estacionaria. nos daría una línea recta C. en la Figura 1. mayor o menor que la unidad (K =1. 10 . en un sentido amplio designa procesos basados en diferencias de velocidades con las cuales los componentes individuales de una mezcla migran por un medio estacionario bajo la influencia de una fase móvil. puede ser un sólido o un líquido dispuesto en forma de una película sobre un soporte sólido. se designan procedimientos y/o técnicas de separación que se fundamentan en los mismos principios pero difieren en la forma como la fase estacionaria se encuentre dispuesta y el estado físico tanto de la fase fija como de la fase móvil. La fase fija denominada también fase estacionaria.1. esto es. K aparece como constante de proporcionalidad Cs = KCm y despejando obtenemos K = Cs/Cm. El aspecto fundamental considerado en el proceso de separación seguido por estas técnicas. Por lo tanto K puede ser igual. un gas o un fluido supercrítico. K>1. En el caso ideal. Todas las técnicas cromatográficas se fundamentan en principios físicos. presentan como característica una interacción entre los compuestos a separar con una fase fija y una fase móvil. K<1). tendríamos el comportamiento ideal. 1. exceptuando la cromatografía de intercambio iónico que se encuentra gobernada más por un principio químico que físico.fases no se saturen y se sobre carguen. Definir entonces. cromatografía es difícil por la cantidad de procedimientos y/o técnicas que existen. en las diferentes fases. podemos decir que si C S es directamente proporcional a Cm. PRINCIPIOS DE LA CROMATOGRAFIA Bajo el término cromatografía. Sin embargo.3. La fase móvil puede ser un líquido. Todas las técnicas de separación consideradas en la clasificación del cuadro 1. Esta razón conocida como coeficiente de distribución o factor de partición (K) viene expresado matemáticamente por la ecuación: K Cs Cm Donde C s es la concentración del soluto en la fase estacionaria y C m la concentración del mismo soluto en la fase móvil.1. su capacidad no se exceda.

1 Cromatografía en papel. como en los casos de aplicar una diferencia de potencial en la electrocromatografía o medir una conductividad en la cromatografía de intercambio iónico.N. bien sea en papel. Como en casos 11 . deriva de la facilidad con la cual se pueden separar compuestos de peso molecular o puntos de ebullición bastante elevados los cuales es difícil transformarlos en vapores bien sea porque son inestables.4.M. En la Figura 1. CROMATOGRAFIA SÓLIDO-LIQUIDO La cromatografía sólido-líquido comprende un conjunto de técnicas de separación en las cuales la fase estacionaria es un sólido y la fase móvil un líquido. y la espectrometría de masas. Estas disposiciones permiten trabajar con mayor o menor cantidad de muestra. Lo que hace diferentes estas técnicas. es la forma en que la fase estacionaria se encuentra dispuesta. la fase móvil. es una técnica analítica de separación y con la cual. El papel es la fase estacionaria y el disolvente que fluye sobre él. La R.4. en general. además se puede. Curvas típicas de distribución La cromatografía.Figura 1. La cualificación se puede realizar mediante el uso de la misma técnica o utilizando otras como las técnicas espectroscópicas.1. 1. superficie plana o columna. se muestra una ordenación típica para una cromatografía de papel. 1. El uso frecuente de estas técnicas en el laboratorio.2. se isomerizan o se descomponen por efectos de la temperatura para ser separados por otras técnicas. utilizar otras propiedades físicas para acelerar el proceso o detectar los compuestos. como también. usar los recolectores apropiados según el caso. cualificar y cuantificar los componentes de una mezcla.

Gas Liquido-gas Líquido-fluido supercrítico Fase fija Absorbente sólido Polvo fino sostenido Sobre placa de vidrio o metal Resina de intercambio iónico Líquido absorbido en un sólido poroso Disolvente inmiscible sobre matriz de papel Liquido sostenido en los intersticios de un polímero Sólido Adsorbente sólido Disolvente sobre matriz sólida liquido Solvente Fase móvil Solvente o mezcla de solventes Solvente o mezcla de solventes Solución Solventes inmiscibles Gas inerte Gas inerte Fluido supercrítico Cuadro 1. Separación por cromatografía de papel. a velocidad constante. En la práctica. se suspende por un extremo una tira de papel de espesor uniforme y el otro extremo se introduce en el disolvente. Figura 1. En estas condiciones el disolvente fluye hacia arriba.1 Clasificación de las técnicas cromatográficas. cuyos componentes se disolverán y se desplazarán a lo largo del papel con una velocidad proporcional a la velocidad de flujo del disolvente y al tiempo que cada componente gasta en la fase estacionaria.Nombre del proceso Cromatografía de absorción Cromatografía en capa delgada Cromatografía de intercambio de iones Cromatografía de partición Cromatografía en papel Cromatografía de gel Cromatografía gas sólido Cromatografía gas Liquido Cromatografía de fluidos supercríticos Tipo de fases Sólido –líquido Sólido –líquido Sólido –líquido líquido -líquido líquido -líquido líquido -líquido Sólido. Llámese a esta cromatografía. (Se conoce esta cromatografía como descendente). el disolvente entra en contacto con la muestra. 12 . los distintos componentes fluyen a diferentes velocidades y se separan. También es posible disponer el sistema de tal forma que el disolvente fluya hacia abajo. En este movimiento. el flujo es más rápido. Esta ordenación no siempre es aconsejable ya que. cromatografía ascendente. por acción de la gravedad. En definitiva. por la acción capilar de las fibras de papel. anteriores el fundamento de la separación es el distinto tiempo que cada compuesto gasta entre la fase móvil y en la fase estacionaria.2.

RMN y/o EM). para identificarlos se añaden al papel muestras separadas de A. revele su posición. El revelado de moléculas o iones en cromatografía de papel o de capa fina puede ser un problema. si se sabe que una muestra contiene tres componentes. UV.2. se extiende uniformemente sobre una superficie plana (generalmente vidrio o aluminio) y se seca. de esta forma. A. Cromatografía en Capa Fina. que destruirían el papel. deben ser identificados después de su separación por técnicas espectroscópicas (IR. tratándola con un reactivo que la coloree y. El mismo razonamiento sirve para la identificación de los otros componentes. B y C.5 mm de espesor) de un material inerte. 13 . 1. Figura 1. Por ejemplo. se forma una pasta con el óxido y un disolvente adecuado. Para algunos compuestos. Estas capas se preparan manualmente. esto es.4. Si las moléculas son coloreadas la detección se hace por su observación directa. MgO o SiO2. B y C. es el caso menos frecuente. El componente A de la muestra será aquel que haya recorrido la misma distancia que la muestra conocida. tal como Al2O3. La operación de extender la pasta sobre el vidrio o aluminio puede hacerse manual o mecánicamente. como muestra la Figura 1. existen reactivos específicos que reaccionan para dar un compuesto coloreado de observación directa. Es similar a la cromatografía de papel excepto que en lugar de papel utiliza como substrato una fina capa (2.En ambos la posición de cada componente se pone de manifiesto por teñido de la muestra. Si no se conoce la identidad de los compuestos de la muestra. Sin embargo. Para ello.3. o por medio de reacciones químicas. tales como ácidos fuertes. Esquema de la situación de los componentes (a) antes de la separación (b) después de la separación cromatográfica La identidad de cada componente se obtiene comparando la velocidad de flujo con la de muestras conocidas. y se procede al revelado una vez conseguida la separación.3. La ventaja de operar con un substrato inerte es que pueden utilizarse para el revelado sustancias químicamente más reactivas. A.

2. La posición de las manchas indica la situación de los distintos compuestos. pues. que se descompondría. donde el substrato es inerte frente al ácido sulfúrico.. conocido comercialmente bajo el nombre de Ninhydrin. DCompuesto Vcompuesto Dis tan ciarecorridaporelcom puesto t Rf    DSolvente VSolvente Dis tan ciarecorridaporelsolvente t Determinado. Se utiliza en cromatografía de capa fina. se retira cuidadosamente de la placa la zona del compuesto (con substrato). IR y/o cualquier otro método analítico. Un método consiste en utilizar el valor R f (factor de retardo) de la muestra. Algunos compuestos de peso molecular elevado no fluorescen ni pueden ser detectados con reactivos específicos. se emplea un soporte modificado.4.3. la fluorescencia del material base es absorbida o bloqueada físicamente en aquellas zonas donde no existen compuestos fluorescentes. En definitiva. En cromatografía de capa fina. Cromatografía en Columna. el análisis cuantitativo se lleva a cabo midiendo el área de la zona ocupada por cada componente separado. Un material adecuado para este fin es la 1. que contiene un material fluorescente de forma que toda la placa produzca fluorescencia al irradiarla con luz UV. Si sobre la placa así preparada se coloca la muestra y se provoca la separación. Existen compuestos orgánicos cuyas moléculas fluorescen bajo la luz UV.En la mayoría de los casos. para un disolvente y substrato determinados. 1. Si se pretenden resultados más seguros. el cual carboniza el compuesto dejando una mancha marrón. El fundamento de la investigación cualitativa es la velocidad a la que el compuesto fluye a lo largo de la placa. pero no en la de papel. éste se separa del substrato por disolución en un volumen conocido de un solvente adecuado y posteriormente se hace la determinación cuantitativa por absorción al UV. es constante (a temperatura constante) y se define como la relación de la velocidad del compuesto a la del disolvente. El R f de un compuesto. el valor R f de un compuesto desconocido se reduce considerablemente el número de compuestos que pueden presentarlo y. En este caso. se obtiene la cantidad de compuesto en la zona. con este dato y un calibrado previo. en consecuencia. La separación de muestras grandes exige la utilización de una 14 .3. En esta circunstancia se utiliza un reactivo común que es el ácido sulfúrico. su identificación es mucho más fácil.). Si no se conocen los componentes de la muestra su identificación se consigue como se indicó anteriormente (Observar Figura 1. los distintos componentes de la muestra ocuparán las zonas no fluorescentes. La desventaja del método es que se destruye el compuesto. El mayor interés de la cromatografía de capa fina reside en la determinación cualitativa de compuestos de peso molecular elevado. el compuesto muestra es transparente y no puede localizarse visualmente. 3 indantina monohidrato. especialmente en los campos de la investigación médica y biológica.

) Para recoger el disolvente y la muestra disuelta que salen de la columna puede utilizarse un colector de fracciones.5 cms de diámetro. La solubilidad de los componentes de la muestra debe ser distinta. con objeto de obtener una buena separación. La gran cantidad de disolvente utilizado puede evaporarse de cada una de las fracciones y obtenerse así los componentes en estado puro de la muestra (Observar Figura 1. a través de la fase estacionaria. agua. aunque pueden variar considerablemente según las necesidades. sin disolver. examinada de la forma más adecuada. a distintas velocidades. Cada una de las fracciones separadas puede estudiarse por una nueva cromatografía. que separa las parafinas de la muestra. Cada solvente provoca la elución de un grupo distinto de compuestos orgánicos. un determinado solvente actúa solamente sobre un grupo de compuestos tales como hidrocarburos. Cada fracción será posteriormente. Acetato de Etilo. Consta de un gran número (hasta 100) de pequeños tubos situados en la periferia de un disco circular. como el éter dietílico. se examinan por separado cada una de estas fracciones para identificar los distintos componentes de la muestra. Una vez separadas las parafinas se puede proceder a eluir los compuestos aromáticos. Entre los materiales que se han utilizado como fase estacionaria pueden citarse: Al2O3. en la superficie de la columna.columna de substrato. mezclas de solventes. Esta operación se repite hasta que todo el eluyente se ha recogido en numerosas fracciones pequeñas. lo que hace posible la separación de la muestra en compuestos con grupos funcionales comunes. Cloroformo. a la salida. que dependen del tiempo gastado en la fase móvil y en la estacionaria. por 1. Posteriormente. El primer solvente a utilizar debe ser el hexano. puede añadirse un nuevo solvente para separar un segundo grupo de compuestos. También puede utilizarse. Cuando los compuestos solubles han eluído de la columna. A continuación. Después puede tratarse con otro disolvente de características distintas. Éter o mezcla de solventes. que puede separarse en distintas fracciones conteniendo cada una de ellas un componente de la muestra. las distintas fracciones. es conveniente mezclar todas las fracciones que contienen el mismo componente para recuperarlo en estado puro. se gira el disco y recogen otros 5 ml. Otra posibilidad es hacer pasar el eluyente de la columna a través de un aparato IR. Benceno. SiO2. silicagel y resinas. Se coloca uno de los tubos debajo de la columna y se recogen unos 5 ml.4. De esta forma se ejerce un control continuo sobre el eluyente. con benceno como disolvente. MgO. Con mezclas complejas puede ser necesario utilizar varias mezclas de solventes. o UV. 1 gramo) se disuelve en el disolvente adecuado y se vierte sobre el substrato (generalmente 30g) por la parte superior de la columna. de eluyente (este volumen puede ser distinto). Solventes típicos son. Así por ejemplo. Hexano. De esta forma se separan y se recogen. espectroscopía de 15 . Las dimensiones de una columna normal son del orden de 90 cms de largo. A veces. dejando el resto de compuestos. estas parafinas se separan mediante una segunda columna cromatográfica por cromatografía gaseosa o por alguna otra técnica adecuada. en el tubo siguiente. con incremento de la polaridad de éstos. La muestra (aproximadamente. se añade disolvente y los componentes descienden. A su vez.

Es frecuente operar en conjunción con alguna otra técnica que permita la identificación de los compuestos eluídos. Aunque la separación de componentes no es completa. (espectrometría de masas).1. Partes de una cromatografía de columna (forma abierta) En general. o UV. como los que ilustra la Tabla 1.4. Figura 1. creciente. De esta forma se llevan a cabo los análisis cualitativo y cuantitativo de los componentes de la muestra. el resto del solvente es recogido por el extremo inferior de la columna.M. Este método es muy utilizado en la identificación de mezclas complejas de compuestos orgánico de elevado peso molecular. A continuación.. los solventes se añaden en orden creciente de polaridad o constante dieléctrica para disolver los compuestos en orden de polaridad también. se elige un solvente que disuelva fácilmente a la muestra y la disolución formada se añade por la parte superior de la columna. permite un rápido análisis semicuantitativo. los de más afinidad y. evita la necesidad de grandes cantidades de solventes y asegura la separación en un corto período de tiempo. La muestra en conjunto no es separada pero sí ordenada en el sentido de que los componentes emergen en orden inverso a su afinidad por la fase. de movimiento más lento constituirán la última fracción. es suficiente realizar un análisis frontal. Este método hace posible la manipulación de muestras de gran tamaño. No siempre es conveniente o necesario llevar a cabo una cromatografía en los términos descritos. 16 . Los componentes de la muestra serán retenidos. junto con algo de solvente en las zonas superiores de la fase estacionaria. Los compuestos que muestren menos afinidad por la fase estacionaria descenderán más rápidamente por la columna y formarán el frente de la muestra. o bien por RMN (resonancia magnética nuclear) o E.absorción IR. por tanto. Para ello. se añade un segundo solvente que posea una elevada afinidad hacia la fase estacionaria para que desplace todos los componentes de la muestra de la superficie de la fase estacionaria. A veces.

En la HPLC el solvente pasa por presión a través de una bomba.C). En general.C. En HPLC la columna se puede utilizar muchas veces. presentando los resultados en un registrador. para evaluar el contenido de cada componente en las fracciones recolectadas. Es la detección y cuantificación de los compuestos que eluyen de la columna.La diferencia fundamental entre la cromatografía líquida clásica de columna abierta (C. En cromatografía C. el material de relleno. como espectrofotometría. el sistema de aplicación de las muestras y el sistema de recolección de fracciones entre otras. simplemente. manteniendo un flujo constante. Esto representa una gran perdida de material y tiempo. C. y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). 17 . El problema principal de la cromatografía de la C. es únicamente de tecnología. El solvente fluye por gravedad. lograndose la separación en pocos minutos. un registro gravimétrico. b. por lo tanto para separar una mezcla de compuestos se pueden gastar varias horas. conocimiento y aplicación de los parámetros que gobiernan la separación: a. En la cromatografía clásica. c. se usa alguna técnica auxiliar. La HPLC realiza los dos procesos automáticamente. tales como la dimensión de la columna.C.el relleno de la columna se utiliza una vez por análisis. Existen además otras diferencias. análisis químico o.C.

9 21.2 9. se utiliza una resina como soporte inerte insoluble.97 0. Pueden ser catiónicos o aniónicos.0 80.864 0.61 0.1 Estructura de la resina.5 36.0 68.8 8.791 1.804 0. las zeolitas naturales y artificiales han sido muy utilizadas en el ablandamiento de aguas por intercambio de Ca2+ y Mg2+ del agua con Na+ de la zeolita.783 1.9 9.6 61.4.724 0. Solventes para cromatografía.4 8.0 7.57 0.20 1.32 0.6 100.32 0.7 76.2 9.900 0.45 0.4 9. Con este fundamento.6 80.692 0.779 1.37 0.2 10. con una estructura de polímero y un grupo funcional. Desde hace muchos años se sabe que las arcillas (Al2O3SiO2xH2O) contienen iones metálicos capaces de intercambiarse con otros iones situados en sus proximidades.2 68.26 0.789 0.594 0.928 0.2 11.44 2.2 57.60 1.6 118.52 0.791 1. Solvente Isooctano Eter Isopropílico n-Pentano n-Hexano Eter etílico Cicloexano Tetracloruro de carbono Acetato de etilo m-Xileno Tolueno Cloroformo Acetato de metileno Benceno Acetona Cloruro de Metileno Alcohol n-propílico Piridina Etanol ahihidro Acetonitrilo Acido acético glacial Metanol Agua Polaridad 7.32 1.23 0. en ambos casos.3 7.050 0.6 10.37 0.4 12.626 0.0 7.5 64.94 1. Esta observación ha sido de gran importancia para el conocimiento de la Química del Suelo. Cromatografía de Intercambio Iónico.4.659 0. Las zeolitas (silicatos de aluminio y sodio) tienen propiedades similares a las arcillas.4 11.7 34.879 0.1 115.0 Pebc 99.5 7.1 9.54 3.1 139.00 1.000 Viscosidad 0. 1.Tabla 1.713 0.481 0.1 39.0 D20 0.4. aunque distinto grupo funcional.5 81.982 0.867 1. Como ejemplo de resina puede citarse la que se obtiene en la 18 .6 8.325 0.8 12.7 76.30 0.1 56.2 78.1.2 8.8 97.6 8.37 0.0 110.65 0.4. Recientemente se han desarrollado cambiadores iónicos de propiedades parecidas a las zeolitas.00 0.

el catión intercambiable es el hidrógeno ácido (H+). Eligiendo una resina en forma correcta pueden llevarse a cabo intercambios selectivos.4. en forma sódica. En estas resinas el grupo funcional suele ser un ácido. la reacción de intercambio sería: RES-SO3H + Na+ ----> RES-SO3 Na + H+ En las mismas condiciones. En los dos casos. generalmente: SO3H en todos los anillos bencénicos de la resina. Si el ión intercambiable es el hidrógeno. En este sentido. El efecto neto sería: RES-COOH + Na+ -----> RES-COONa + H+ Si el grupo ácido fuera el sulfónico.4. El proceso de intercambio de iones entre la resina y la solución es general cualquiera que sea la forma de la resina. se puede introducir un grupo ácido. donde RES representa la matriz y (SO3H) el grupo ácido introducido. posteriormente. la disolución se va haciendo más ácida. Es evidente que. débilmente unido al grupo funcional que. se dice que la resina está en forma ácida. está químicamente unido a la resina. si es el sodio. una resina en la forma sódica podría utilizarse para extraer iones metálicos del agua del mar sin que interfirieran los iones sodio que se intercambian por estar contenidos en el agua original. Resina de intercambio catiónico. También con ácidos carboxílicos. pueden obtenerse resinas similares de fórmula RES-COOH.2. Se obtiene así un cambiador catiónico de fórmula RES-SO3H. los grupos funcionales tal como se indica a continuación: 1. Por sulfonación. una resina en la forma sódica puede utilizarse para intercambiar otros metales pero no iones sodio.polimerización del estireno con divinilbenceno: El polímero contiene cientos de átomos de carbono que forman una rígida matriz molecular tridimensional sobre la que se añaden. Así por ejemplo. la casi totalidad de iones metálicos experimentarían las mismas reacciones. El intercambio de ión cobre se produce según la reacción: Res(SO3Na)2 + Cu2+ ----> Res(SO3)2 Cu + 2Na+ 19 . al producirse el intercambio. a su vez. Si una disolución que contiene iones sodio se hace pasar a través de una resina ácida se produce el desplazamiento de los H+ de la resina por Na+.

los grupos funcionales son aminas o sales de amonio cuaternario. es decir. RES NH3OH + Cl. Todos los iones presentes en la columna compiten por los grupos funcionales. A-(estacionaria) + B-(móvil) ------> A-(móvil)+B-(estacionaria) <-----[A-móvil] x [B-estacionaria] K = -------------------------------------------------[A-estacionaria] x [B-móvil] K: Constante de equilibrio 20 . 1. a igualdad de concentración.5. La diferencia fundamental entre los dos procesos es que así como en cromatografía existe un equilibrio en la distribución de la muestra entre la fase estacionaria y la fase móvil: que es controlado por las propiedades físicas de los componentes. con frecuencia. en una columna de intercambio iónico.4. En general.4. Resinas de intercambio iónico como método de separación cromatográfica.4. la distribución entre las dos fases depende de propiedades químicas. La fórmula de una resina aniónica puede ser RES-NH3OH y la reacción de intercambio.donde el cobre que se fija en la resina es sustituido por iones sodio en la disolución. La velocidad del intercambio de un ión está controlada por la ley de la acción de masas. El ión de mayor tamaño tiene la afinidad más elevada.4. Li+ < Na+ < K+ < Cs+ < Be2+ <Mg2+ < Sn2+. la elevada concentración de H+ provoca la eliminación de Na+ que son sustituidos por H+. Resinas aniónicas. 1. La separación de iones en una columna de resina de intercambio iónico sigue reglas similares a las que se aplican a la cromatografía en general (cromatografía de columna). Si el ión fuera demasiado grande podría distorsionar la estructura y la regla deja de cumplirse. Así por ejemplo. más pura que la destilada. Se rige por el mismo mecanismo que las de intercambio catiónico. si a través de una resina en forma sódica (total o parcialmente) se hace pasar un ácido muy fuerte. que son sustituidas por OH.3. Este proceso se ajusta al concepto de la ley de acción de masas. Na+ < Ca2+ < La3+. 1. esto es. los grupos funcionales son saturados por aquellos iones que poseen más afinidad por el grupo.4.4 Principios que gobiernan el intercambio.respectivamente. La afinidad de los distintos iones puede obtenerse de las reglas siguientes: El ión de carga más elevada posee la mayor afinidad.Utilizando una resina que sea una mezcla de resinas catiónica y aniónica es posible intercambiar los cationes y aniones del agua por H+ y OH. RES-NH3Cl + OHde esta forma se eliminan aniones de soluciones acuosas. De esta forma se obtiene agua.4.

la afinidad de los aminoácidos hacia la resina. la resina se regenera y los iones metálicos pasan a la solución ácida de acuerdo con la ecuación: 21 . el oro que inicialmente se encontraba disuelto en varios galones de agua. Si las disponibilidades de esta agua son grandes. Igualmente puede conocerse el contenido aniónico total con un cambiador que libere OH. por tanto. presenta el inconveniente de que no elimina las impurezas orgánicas (no iónicas). El contenido total catiónico de la muestra puede conocerse con un cambiador en forma ácida valorando los H+ que intercambian con los iones metálicos presentes.4. Añadiendo ácido o base se ajusta el pH de la disolución de cada grupo. es la regeneración de la resina. que es bastante barato. rápido y que requiere poca atención. las resinas se regeneran rápida y fácilmente. una resina catiónica (ácida) puede llegar a saturarse con otros iones metálicos según la reacción: RES-SO3H + M+ ----> RES-SO3 M+ + H+ Si una vez agotada la resina (RES-SO3M) se hace pasar un ácido fuerte. los iones oro son retenidos.A: Ión en fase móvil-muestra B: Ión Inicialmente en fase estacionaria La separación de dos componentes iónicos en una columna de resina se ajusta a la ecuación de Van Deempter. se encuentra ahora concentrado en 100 ml. se trata la columna con una pequeña cantidad de ácido fuerte como el HCl. Este método. Así por ejemplo.6 Aplicaciones analíticas de la cromatografía de intercambio iónico. En estas condiciones. Así pues. pueden separarse los grupos y obtener los aminoácidos individuales. si un agua que contiene 10 partes por millón de iones oro se hace pasar a través de una columna adecuada. Si desea un agua de elevada pureza deben eliminarse por otro método. Para recuperar el oro. 1. Las bandas anchas son debidas a efectos (tales como difusión y corrientes turbulentas) similares a los encontrados en cromatografía gaseosa. De esta forma se cambia la carga de las moléculas y. pueden tratarse varios galones con la misma columna. Las columnas de intercambio iónico pueden utilizarse para concentrar los componentes iónicos que interesan de una muestra.y posterior valoración de los mismos. se puede regenerar empleando ácido o base según el tipo de resina usada (catiónica o aniónica). el oro concentrado puede determinarse por algún método adecuado. suministra un agua muy pura y es ampliamente utilizado en Química Analítica. de ácido. Tratando de nuevo cada una de las disoluciones con resina. Así por ejemplo. En el área de la Química Orgánica. De las principales ventajas de esta cromatografía. En la práctica. Anteriormente se citó como ejemplo de aplicación la eliminación en el agua de cationes y aniones utilizando una mezcla de resinas de intercambio catiónica y aniónica.4. es de destacar la posibilidad de separar aminoácidos utilizando una resina apropiada.

que permanece saturada.5. Por ejemplo.RES-SO3M + H+  RES-SO3H + M+ De forma similar. un automuestrador. nitritos. se pierde la mitad de la resina. para nuevo uso. Si ésto no es posible. una válvula para la inyección.5. contaminantes ambientales. si previamente se ha separado por flotación o por algun otro método.I. las resinas aniónicas se regeneran añadiendo NaOH para provocar la reacción: RES NH3X + OH. Equipo para cromatografía de intercambio iónico. Instrumentación: Un equipo para análisis mediante cromatografía de intercambio iónico (C. laboratorios clínicos. por flotación) antes de proceder a la regeneración. fluoruros. productos farmacéuticos.) está constituido básicamente por los componentes siguientes: Un inyector. mezcladas. Figura 1. El diseño de un equipo con estas características. productos agrícolas.I. una bomba un sistema de detección conductimétrico. Sin embargo. Las determinaciones de aniones y cationes más frecuentes son: Cloruros. posteriormente. un compartimiento para la columna.------> RES NH3OH + XLos aniones X. las resinas pueden tratarse individualmente y.). se regenera la resina catiónica pero no la aniónica. Si se trata de una mezcla de resinas catiónicas y aniónica. 22 .se encuentran en la solución que emerge de la columna. un microprocesador para automatizar operaciones y un computador para manejar y almacenar información (observar Figura 1. una o varias columnas. un sistema de registro o de integración. laboratorios de control de calidad y análisis en general. permite aplicaciones analíticas cualitativas y cuantitativas rápidas. si la mezcla se trata con un ácido fuerte. bromuros. selectivas y simultáneas principalmente de especies iónicas inorgánicas en el rango de microgramos por litro en muestras de aguas. la última debe separarse (por ejemplo. bebidas. industria de alimentos. recubrimientos.

sulfocianuro. Reproducibilidad de las cromatografías. más utilidad. distribuyéndose así. la cromatografía líquido. boratos. Y la segunda se conoce como de fase ligada o enlazada (CFL y/o CFE). que comúnmente es el octadecilsileno -ODS-.Si ---. le permitió a la CLL. Aún así. como las siguientes: Mayor estabilidad entre la fase estacionaria y el soporte. zinc. bario. estroncio. La primera se desarrolla en forma análoga a la de cromatografía de gases-líquido. sodio.Si -C18H37  R Enlace silileter -ODS- De acuerdo a lo anterior. Utilizar solventes polares. ya que tiene varias ventajas sobre la normal. ya que los componentes de la muestra se separan por desintegración entre las fases móviles y estacionarias (la cual está ligada a un soporte por adsorción) y difiere poco de la tradicional cromatografía líquida (CL). litio. 23 - . silicatos. Todavía no se ha eliminado: La saturación de la fase móvil por la fase estacionaria. manganeso. El uso de la fase ligada. dimetil amina. con respecto a otras técnicas cromatrográficas siguen siendo grandes. magnesio. amonio. lactato. potasio. donde la fase estacionaria ha sido ligada a una matriz. se clasifica en normal y en fase inversa. como fase estacionaria. como se muestra seguidamente: R  ---. La separación de la muestra se efectúa según como la fase estacionaria sea presentada. las limitaciones de utilizar la CLL. acetato) y aminas (metil amina. cobalto. ácidos carboxílicos (tartratos. en la próxima unidad.nitratos . y hay dos formas generalmente.5.o ---.1. que será ampliamente presentado en este tratado. calcio. 1. fosfatos. trimetil amina). la cual es su propósito central: Adicionando una solución de la fase estacionaria a un soporte y luego evaporando el solvente.líquido. la fase estacionaria sobre el soporte. El no poder efectuar gradiantes de elución. como se explicó anteriormente para el caso de las cromatografías líquidas y se ilustró en el Cuadro 1. Cromatografía Líquido-líquido La cromatografía líquido-líquido (CLL) pertenece al grupo de las cromatografías de partición. sulfatos.

buscando alternativas y/o variantes de las técnicas normales cromatográficas. El desarrollo de las técnicas especiales ha surgido por la necesidad en tener una mayor rapidez de separación. La Figura 1. p. 1. 281 24 . técnicas como la cromatografía flash. Técnicas Especiales. delgada en fase inversa.6. usando silica gel 40 de diámetro y eluyendo con solventes no polares (0. Un equipo semejante hoy se consigue comercialmente* y con el objeto de que este procedimiento.1.6. ilustra el equipo diseñado por Still y colaboradores para hacer la separación. de dos alcaloides 2 epinúricos: ----------- Figura 1. flujo contracorriente (Droplet countercurrent chromatography)* y cromatografía líquida al vacío. Usando este procedimiento. 1970. utilizar solventes polares y separar cantidades grandes de muestras.1. consumiendo poco 2 Scince.6.35). para separar rápida y eficientemente compuestos orgánicos no volátiles. En este procedimiento.6. Es una alternativa. Es así. de la cromatografía normal de columna. THOMPSON Y HANSON (1984) y JACOBSON (1988) han presentado modificaciones que lo facilitan. se emplean en diversas actividades industriales e investigativas.1  Rf  0. se pueden separar muestras con peso entre 0. como hoy. Cromatografía FLASH. la utilización de aire o un gas inerte a presión. Este método de cromatografía fue descrito por Still y colaboradores en 1978.1 a 10 gr. se necesita básicamente. con el objeto de aumentar el flujo y dar rápidas separaciones. pueda hacerse a bajo costo y utilizar en los cursos de química orgánica general. Equipo paralizar cromatografía FLASH.167.

2 Cromatografía de capa delgada en fase inversa. La ventaja que se obtiene con la CCD-FI. En la aplicación más generalizada de esta cromatografía. 58.7. Usando como adsorbente silica gel 60H o a. Vaciode ensayo F. por lo cual la separación ocurre por partición líquido-líquido (CLL). ya que la fase ligada se puede obtener fácilmente. fué la técnica cromatográfica más difundida. En esta técnica también los compuestos podemos decir que se separan por partición. (CCD-FI ). Tubo de caucho e.Vidrio sinterizado a. Erlenmeyer de filtración e. Procedimiento descrito por COLL y BOWDEN3. Tubo g. Con la introducción de las fases ligadas (se origina la técnica cromatográfica en fase inversa). Tapónde ensayo perforado d. 1981 p. muestra adsorbente.j. Equipo para la cromatografía líquida al vacío.Adsorbente b. del adsorbente) y eluyendo 3 Chem. Alúmina 60H (en relación 1/50. Cromatografía líquida al vacío (CLV).solvente y silica en un tiempo de 10-30 minutos 1.3. 1. denominándose cromotagrafía de capa delgada en fase inversa. es más una técnica cromatográfica preparativa.6. Vidrio sinterizado d. se hace empleando el equipo que se muestra en la Figura 1. Adsorbente c. es su facilidad de operación. esta técnica amplió su radio de acción. ED. tratando la silica gel con aceite de parafina al 10% en éter. La cromatografía de capa delgada o de papel. ya que la silica gel utilizada contiene agua. Tapón de caucho perforado b. se obtiene una buena fase estacionaria ligada.997-1003 25 . Vacío Figura 1. Algodón g. Y si junto con la fase estacionaria (fase ligada) usamos solventes polares se logra que los compuestos polares migren más rápidamente que los no polares de una muestra: Principio semejante al de la cromatografía HPLC. Algodón F. dada su versatilidad e información sobre los compuestos de una mezcla.Erlenmeyer de filtración c.6.7. en los primeros años de estudios de la ciencia química y afines. hasta una altura de 5 cms. donde la elución es ayudada por vacío.

8. que se han considerado anteriormente (1) la solubilidad de cada componente en el 26 . En un análisis electrocromatográfico. hacia abajo. acetato de etilo.en orden creciente de polaridad con los solventes más comunes para los trabajos en cromatografía de capa delgada: Hexano.5 cm. Esquema del equipo utilizado para electrocromatografría. hacia abajo. hacia el ánodo y 40 cm.6. El efecto neto resultante es que los componentes describen trayectorias como las que se muestran en el esquema de la Figura 1. Simultáneamente. Análisis electrocromatográfico continúo. 10 cm. en sentido descendente. Estas trayectorias dependen de las velocidades de desplazamiento lateral y hacia abajo. 7.8. se aplica un campo eléctrico perpendicular a la dirección de desplazamiento. Procedimiento que ha dado resultados satisfactorios para fragmentación de extractos brutos en trabajos fitoquímicos recientes de extracción de metabolitos secundarios en pasto Braquiaria decumbus y altamisa (Partheniun hysterophorus). supongamos que en el equipo de la Figura 1. diclorometano. la velocidad de flujo descendente de cada componente depende de los mismos factores que controlan la separación en una cromatografía sólido-líquido. Electrocromatografía: Es una combinación de la cromatografía sólido-líquido y del efecto de un campo eléctrico sobre una partícula cargada. hacia el cátodo durante un recorrido de 10 cm. hacia el ánodo mientras recorre 40 cm. como en una cromatografía normal. En definitiva.8. C no se desplaza lateralmente y el D. Figura 1. Estos factores. éter de petróleo. los componentes han de recorrer una distancia de 40 cm. el resultado neto es una separación clara de los componentes cuando alcanzan la base del papel. Así por ejemplo. Como soporte para la muestra y el disolvente se emplea una lámina de papel y una fase estacionaria.4. en sentido descendente: El tiempo que tardará cada uno de ellos en alcanzar el colector dependerá de su velocidad en este sentido. Así el componente A recorre 10 cm. Los componentes de la muestra se separan por desplazamiento hacia abajo. 1. el B. acetona y metanol.

es superior a cualquiera otro. la separación de dos metales que en condiciones normales. el proceso de separación no es destructivo y los componentes se recogen inalterados. la velocidad de flujo descendente por el papel será pequeña. Con esta técnica pueden detectarse cambios en la composición del suero humano (que se altera en una persona enferma). al igual que todas las formas de cromatografía. ya que las moléculas grandes gastan más tiempo en la superficie de la fase estacionaria. Por otra parte.4. los componentes pueden ser identificados y determinados por algún método adecuado (tal como espectroscopía de absorción IR. Aplicaciones analíticas. Una vez separados. por lo cual se puede hacer uso de detectores cuantitativos como los utilizados en cromatografía líquida de 27 . La electrocromatografía permite la separación de mezclas de iones metálicos así como de aniones. dio origen a varios instrumentos comerciales para producir separaciones a altas velocidades y gran resolución con volúmenes de muestras extremadamente pequeñas por el orden de 0. El mismo efecto se observa si se aumenta el área superficial de la fase estacionaria. Así mismo. También puede utilizarse para separar colorantes o purificarlos.6.disolvente que se desplaza y (2) la tendencia de éstos a ser retenidos en la superficie del substrato. Aunque el método no está muy divulgado. Las especies separadas son eluidas desde uno de los extremos del capilar.1 a 10 nanolitros (nL). una vez en marcha el equipo. o atómica).1. los agentes acomplejantes modifican las características de flujo de los componentes. el desplazamiento lateral será hacia el cátodo o hacia el ánodo. En general. respectivamente. si no posee carga eléctrica no experimentará desviación alguna. 1. El método es continuo. en contraste con la electroforesis ordinaria que emplea volúmenes por el orden de microlitros (μL). ya que los cambios de pH afectan sensiblemente la carga sobre los iones metálicos. para algunas aplicaciones especiales. El efecto neto de este factor es variable. Cuanto mayores son la carga y el campo aplicado. la carga del componente controla el desplazamiento horizontal. Según que el componente esté cargado positiva o negativamente. es la separación de los componentes de una muestra. La aplicación más importante de la electrocromatografía. la velocidad del movimiento lateral depende del campo aplicado y de la carga eléctrica. Por otra parte. Es necesario un cuidadoso control de pH. La muestra puede ser añadida de forma continua a la superficie del papel y recogida en la base. mayor es la fuerza atractiva y más rápido el movimiento. sean difíciles de separar puede lograrse acomplejando uno de ellos y dejando el otro en su estado normal. cuanto mayor es el tamaño de la molécula más lento es el movimiento. la electrocromatografía es más utilizada con muestras acuosas aunque también ha encontrado aplicaciones con disolventes orgánicos. Si las fuerzas atractivas entre el componente y la fase estacionaria son importantes (fuerza de absorción). La distancia lateral recorrida por cada componente depende del tiempo que tarde en alcanzar la base del papel. Así pues. Así por ejemplo. El movimiento lateral de los componentes depende del campo aplicado. Electroforesis capilar: La investigación y aplicación de la electroforesis en tubos capilares al final de la década de los años ochenta del siglo pasado.

Puede ser fisicoquímica como. Una de sus mayores aplicaciones ha sido en la investigación del genoma humano en la secuencialización del ADN. A diferencia de la mayoría de las otras técnicas cromatográficas la fase móvil no interactúa con las moléculas de los compuestos a separar su única función es transportar los compuestos a través de la columna. por el orden de décimas de microlitros y menores. 2. La elución se lleva a cabo mediante el flujo de una fase móvil de gas inerte. Cromatografía de Gases: En la cromatografía de gases los componentes de una muestra vaporizada se separan como consecuencia del reparto entre una fase gaseosa y una fase estacionaria Contenida en una columna. es una Técnica de alta sensibilidad. Los materiales finamente divididos (carbón activado. La cromatografía de gases en sus modalidades gas sólido. en fuerzas a los enlaces químicos corrientes y mucho más fuertes que los enlaces de Vander Waals que caracterizan la adsorción física. es de las más utilizadas en la química analítica por ser una técnica donde se trabaja con cantidades de muestra muy pequeñas. como proteínas. La quimioadsorción es la formación de enlaces entre las moléculas superficiales de una sustancia con gran energía superficial y otra sustancia gaseosa o líquida que entra en contacto con ella. bajos 28 . en el caso de un líquido que toma moléculas de un gas o vapor y es muy importante en el proceso de separación por cromatografía gas líquido. También son usadas como soportes de de la fase líquida estacionaria en la cromatografía gas líquido. Al efectuar una separación cromatográfica de gases. gas liquido es aplicada en la separación y análisis químico de compuestos volátiles. la muestra se vaporiza y se inyecta en la cabeza de la columna.alta resolución en lugar de las técnicas de coloración de la electroforesis común. La absorción es la penetración de una sustancia en la estructura interna de otra. silicagel) o microporosos con una gran área de superficie activa son fuertes adsorbentes por lo cual son utilizados como fases estacionarias en la cromatografía gas sólido ya que cuando están presentes las moléculas de dos o más sustancias. La adsorción es la adherencia de los átomos iones o moléculas de un gas o líquido a la superficie de otra sustancia denominada adsorbente. las de una sustancia pueden ser adsorbidas más fácilmente que las de las otras. Los enlaces así formados son comparables. los sistemas más comunes son gas sólido y líquido sólido. fenómeno conocido como adsorción preferente. La quimiadsorción es aprovechada en la cromatografía gas líquido en el desarrollo de fases líquidas estacionarias enlazadas o ligadas al soporte sólido. La cromatografía Gas líquido tiene gran aplicación en todos los campos de la ciencia. La cromatografía gas sólido se basa en una fase estacionaria sólida en la cual la retención de los analitos ocurre por que hay adsorción y su aplicación es limitada a la separación de ciertos compuestos gaseosos de bajo peso molecular. fragmentos de ADN y ologonucleótidos que tienen en esencia la misma carga pero distinto tamaño. alúmina activa. La electroforesis capilar ha permitido solucionar una gran cantidad de problemas analíticos mediante su aplicación en varias modalidades como la electroforesis capilar en gel utilizada en las separaciones de macromoléculas.

límites de detección y cuantificación ( por el orden de 10-14g), gran exactitud y precisión, es muy selectiva con pocas interferencias permitiendo la separación de mezclas muy complejas, se obtienen datos analíticos reproducibles de alta confiabilidad, por lo cual es objeto de estudio en la segunda unidad de estos apuntes. 3. Cromatografía de fluidos supercríticos: Es un hibrido de la unión de la cromatografía de gases y cromatografía de líquidos, en la cual se tienen en cuenta algunas de las mejores características de cada una. En ciertas aplicaciones es superior a la cromatografía de gases y a la cromatografía líquido líquido de alta eficiencia o HPLC. La cromatografía de fluidos supercríticos es importante por que permite la separación y determinación de un grupo de compuestos que no son manejados convenientemente ni por la cromatografía de gases ni por la de líquidos. Estos compuestos son 1) no volátiles o térmicamente inestable por lo cual la cromatografía de gases es inaplicable 2) no contienen grupos funcionales que permitan la detección mediante técnicas espectroscópicas o electroquímicas que se utilizan en cromatografía de líquidos de alta resolución. En la cromatografía de fluidos supercríticos la fase estacionaria es líquida y la fase móvil es un fluido supercrítico. Un fluido supercrítico se forma siempre que una sustancia se calienta por encima de su temperatura crítica. La temperatura crítica de una sustancia es aquella por encima de la cual no puede existir en fase líquida independientemente de la presión. La presión de vapor de una sustancia a su temperatura crítica es una presión crítica. Una sustancia a temperaturas y presiones por encima de su temperatura y presión críticas (punto crítico) se denomina fluido supercrítico. La densidad, viscosidad y otras propiedades de los fluidos supercríticos son intermedias entre las propiedades de esa sustancia en estado gaseoso y en estado líquido. Una propiedad de los fluidos supercríticos que está relacionada con sus densidades elevadas (0.2 a 0.5 g/cm3, es su capacidad para disolver moléculas grandes no volátiles. El dióxido de carbono (Co2) supercrítico por su capacidad de disolver fácilmente hidrocarburos alifáticos con un gran número de átomos de carbono es una de las fases móviles más utilizada en esta técnica cromatográfica y procesos industriales de extracción.

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UNIDAD 2 2. CROMATOGRAFIA DE GASES4 Objetivo General Presentar al estudiante los principios generales de la cromatografía gas líquido, para su aplicación en el análisis cualitativo y cuantitativo de mezclas de líquidos orgánicos. Objetivos Específicos Terminada la unidad, el estudiante será capaz de: 1. Determinar los principios físicos que gobiernan los procesos de separación por cromatografía gas líquido. 2. Definir los términos utilizados en cromatografía gas líquido. 3. Reconocer, clasificar y describir la función de cada uno de los componentes de una columna cromatográfica y medir su eficiencia. 4. Reconocer y describir la función de cada una de las partes que integran un cromatógrafo de gases. 5. Diferenciar la cromatografía gas-líquido de la cromatografía líquida de alta eficiencia.

4 Materiales didácticos recopilados y organizados por el profesor Federmán Castro Eusse para la asignatura análisis Instrumental II.

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2. Cromatografía de gases 2.1. Cromatografía Gas-sólido En cromatografía Gas-Sólido la fase estacionaria es un sólido y la fase móvil un gas, el proceso de partición se opera en equilibrios de adsorción gaseosa. La cromatografía Gas Sólido ha sido de limitada aplicación debido a las dificultades que presenta para reproducir las áreas superficiales, por dejar colas en los picos de elución y por la retención semipermanente de gases activos sobre la superficie sólida. En la cromatografía Gas Líquido la fase fija está constituida por un líquido, sostenido sobre una matriz sólida inerte y el proceso de separación se da mediante equilibrios líquido-vapor. Es el proceso de separación por fraccionamiento más importante y de mayor uso por los químicos. 2.2. Cromatografía Gas-líquido. La cromatografía Gas-Líquido puede definirse como una técnica analítica útil en la separación, identificación y cuantificación de los compuestos de una mezcla. Se fundamenta en la diferencia de velocidades de migración de sus compuestos individuales al ser arrastrados por un gas inerte a través de un tubo relleno de un material adecuado que soporta un medio líquido fijo o estacionario. 2.2.1 Descripción del proceso de separación por cromatografía gas líquido. 1) se inicia con la introducción de la muestra en fase gaseosa por la parte superior de la columna, cuando la muestra es líquida se debe pasar a la fase de vapor. 2) Los componentes que tienen buena solubilidad en la fase estacionaria se distribuyen entre ésta y la fase móvil gaseosa según la ley del equilibrio (liquido- vapor). 3) La elución se hace por medio de un gas inerte que se hace pasar a través de la columna denominado gas de arrastre o portador. 4) La velocidad de movimiento de los distintos compuestos de la mezcla a lo largo de la columna depende de su tendencia a disolverse en la fase líquida estacionaria, la diferencia en la energía libre de Gibbs
0G para la evaporación de los diferentes compuestos de la fase estacionaria, da como RT resultado tiempos de retención diferentes para cada compuesto. ln K g 

5). Si el coeficiente de partición favorece la fase líquida estacionaria la cual es el disolvente, se obtendrá 31

si su velocidad fuera de 20 cm/minuto. Dependiendo de la forma de los picos (simetría) también se puede cuantificar mediante una relación directa de la altura del pico con la cantidad o la concentración. usado para el análisis cualitativo y cuantitativo. en la cual la arena será la fase estacionaria y el gas que fluye la fase móvil. EM.La identificación también puede hacerse acoplando el cromatógrafo con otras técnicas analíticas como la E. se introduce en el recipiente el gas Z que hemos considerado anteriormente y que es soluble en el líquido no 32 . tardaría 6 minutos para atravesar el tubo. Etc. 7) El compuesto que tiene menor afinidad por la fase estacionaria llegará más rápidamente al final de la columna de tal manera que es detectado por un instrumento que convierte la presencia del compuesto en una señal eléctrica proporcional a la cantidad o concentración del mismo. RMN.una baja velocidad. (Si en una columna se colocan dos tipos de moléculas diferentes como un hidrocarburo alifático y un compuesto aromático. recibe el nombre de cromatograma.IR. tardaría 4 minutos en pasar. tomando como base que el área es directamente proporcional a la cantidad o a la concentración del compuesto.2. Complementemos esta analogía considerando algunas propiedades de los gases y vapores solubles: Coloquemos en un recipiente un líquido no volátil A.UV. 6) Cada componente de la muestra gasta una parte de su tiempo en la fase estacionaria ( debido a las fuerzas de retención) y otra en la fase móvil ( debido a las fuerzas de elución). 9) El registro gráfico de la elución de cada compuesto viene dado por curvas en forma de campana de Gauss o picos. 2. 8) La señal análoga dada por el detector es amplificada y convertida en una señal digital la cual es procesada para dar un registro gráfico. es muy probable que el tiempo que permanezcan en la fase móvil sea distinto). ¿Si el tubo lo llenamos de arena y hacemos pasar nuevamente el gas Z que sucederá? Por supuesto que fluiría más lentamente. 10) La identidad de los compuestos se hace con base en el tiempo que cada compuesto es retenido por la fase estacionaria de la columna y en términos cromatográficos se denomina tiempo de retención simbolizado como tr . Tomemos un gas Z y supongamos que fluye con una velocidad constante de 30 cm/minuto a determinadas condiciones de temperatura y presión a través de un tubo vacío de 120 cm de largo y 1 cm de diámetro.2 Mediante algunos datos supuestos se tratará de ilustrar el análisis cromatográfico. E. 11) La cuantificación se hace midiendo el área bajo la curva o pico correspondiente a cada compuesto y relacionándola con la cantidad o la concentración. a condiciones constantes de temperatura y presión.que es cuando se desplaza hacia la parte final de la columna. En estas condiciones el tubo con arena es similar a una columna de cromatografía gaseosa. pero para aquellos compuestos cuya solubilidad es baja en la fase líquida la velocidad de desplazamiento a lo largo de la columna será más rápida.

volátil A. Cerremos herméticamente el recipiente. ¿Qué sucederá después de transcurrido algún tiempo? Lógicamente que el gas sobre el líquido se encuentra en equilibrio con el gas disuelto, es decir, se ha establecido un equilibrio, lo que indica que la distribución de moléculas gaseosas en el líquido y en el gas permanece constante. No obstante, se presenta un equilibrio dinámico dándose un intercambio entre las moléculas gaseosas en los dos estados, así pues, las moléculas gaseosas se disuelven a la misma velocidad con la cual las moléculas de gas disuelto abandonan el líquido. Cada molécula del gas Z gasta una parte constante de su tiempo en el líquido A y el resto en la fase gaseosa. Saquemos la arena del tubo, empapémosla con el solvente A en una forma homogénea y volvamos a ubicarla en el tubo. Aquí ya existe una mayor analogía con una columna para cromatografía Gas Líquido. La arena será el soporte de la fase estacionaria, el líquido no volátil A será la fase líquida y el gas Z será la fase móvil. Supongamos que el Gas Z pasa un 40% de su tiempo en el líquido A y un 60% en estado gaseoso. Hagamos pasar nuevamente el gas Z a través del tubo, ¿Qué sucederá con el tiempo que gasta para atravesarlo? ¿Aumentará? ¿Disminuirá? Evidentemente aumenta, pues el gas será retenido por la fase estacionaria y sólo se moverá cuando se encuentre en estado gaseoso. El tiempo que demora el gas en atravesar la columna se denomina en términos cromatográficos tiempo de retención y se simboliza por t r . Anteriormente hicimos el supuesto de que el gas Z cuando el tubo se encontraba lleno de arena lo atravesaba con una velocidad de 20 cm/min demorándose 6 minutos, ahora el gas en presencia del líquido no podrá hacerlo con el 100% de su velocidad sino que lo hará con una velocidad media de: 60/100 x 20 cm/min = 12 cm/min, denominada velocidad lineal Demorándose para atravesar el tubo 10 minutos. Si sustituyéramos el gas Z por un segundo gas Y observamos que en igualdad de condiciones el gas Y gasta sólo un 20% de su tiempo en el líquido, y un 80% de su tiempo en estado gaseoso si lo hacemos fluir a través del tubo con arena humedecida con el líquido A, su velocidad media sería: 80/100 x 20 cm/min = 16 cm/min y tardaría para atravesar el tubo 7.5 minutos. Si hiciera pasar a través del tubo lleno de arena embebida en el líquido A una mezcla del gas Z y Y, en igualdad de condiciones a los casos anteriores, ¿Qué sucederá? Que el gas Y saldría a los 7.5 y el Z a los 12 minutos obteniéndose su separación. Usando un gas inerte como fase móvil para arrastrar el gas Z y el gas Y se logra más rápida y mejor la separación. Qué fracción de tiempo pasa un compuesto en la fase móvil?. Cuando se encuentran en la fase móvil, las moléculas de soluto se transportan a la velocidad de la fase móvil. Cuando una molécula se asocia a la fase estacionaria, no se mueve. Por tanto se puede enunciar una ley como base de todas las separaciones cromatográficas: La velocidad media de una sola molécula depende del tiempo medio que permanece asociada a la fase estacionaria comparado con el tiempo en que se mueve con la fase móvil Esta ley puede expresarse por medio de una ecuación. La ecuación contiene la velocidad lineal la cual 33

representa la velocidad media a la que fluye la fase móvil a lo largo de la columna. Por lo tanto: Velocidad media de desplazamiento = velocidad de la fase móvil X fracción de tiempo de la molécula
en la fase móvil + velocidad lineal de la fase estacionaria X fracción de tiempo de la molécula en la fase estacionaria.

Debido a que la velocidad lineal de la fase estacionaria es cero, el segundo término no contribuye a la medida. Si se llama V a la media de la velocidad lineal de la fase móvil, entonces: velocidad media de desplazamiento = V X fracción de tiempo de la molécula en la fase móvil. Podemos relacionar el coeficiente de partición K g con el tiempo de retención t r considerando la fracción de tiempo que la molécula está en la fase móvil es igual a la fracción de especies que se encuentran en la fase móvil. Escrito en forma de ecuación para un compuesto la idea se puede expresar así:
Número de moles del compuesto en la fase móvil Fracción de tiempo de un compuesto en la fase móvil = __________________________________________________________________ Número total de moles del compuesto en la fase móvil y en la fase estacionaria

El número de moles del compuesto es igual al producto algebraico de la concentración molar y el volumen por lo tanto los subíndices m y s, se refieren a la fase móvil y estacionaria respectivamente:
C mVm La ecuación anterior se puede expresar en C mVm  C sVs C términos de coeficiente de distribución, K g  s , haciendo las respectivas sustituciones. Cm En la gráfica de la figura 2.1 , la extracción sucede a medida que la fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria, la idea de que la separación es equivalente a una extracción de un único equilibrio, ocurre a través de una longitud específica entre dos fronteras conceptuales, está incluida en este modelo. La longitud (o altura) entre estas fronteras conceptuales es un plato teórico.

Fracción de tiempo en la fase móvil=

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Figura 2.1 Grafica que muestra la idea de la cromatografía como una extracción.

2.2.3. Glosario de términos y fórmulas5. Cromatograma: Representación gráfica de los picos de elución de una mezcla en un plano de coordenadas, en cuya abscisa se encuentra el tiempo o el volumen de retención y en ordenadas la señal del detector en mv. Es el registro obtenido al representar gráficamente la salida de los distintos componentes de la mezcla. Línea Base: Línea dibujada por el registrador o monitor de un Cromatógrafo en ausencia de muestra. Punto de Inyección: Momento en que se introduce la muestra al sistema cromatográfico.

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Stanbuk,Jorge Walter,J.Q. Jackson, Jr.M.T. And MaynardJ.B. Ed Chromatographic troubleshooting. 2a. Edition, Academic press. New York.

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and

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La base del triángulo obtenido al trazar tangentes a los puntos de máximo pendiente. Representación gráfica de un pico cromatográfico y un cromatograma de tres compuestos.Figura 2. Volumen muerto Vg: Volumen de retención para un componente que no interactúa con la fase líquida. y su velocidad se aproxima a la velocidad del gas portador. Campana de Gauss: Curva normal. Ancho de la base W: La distancia entre las intersecciones de las tangentes a los puntos de inflexión con la línea base.2. Tiempo muerto tg: Tiempo de retención de un gas o de un componente cuya solubilidad en la fase líquida es muy baja. 36 . la distancia perpendicular desde la línea base y la máxima deflexión del pico. (ejemplo: oxígeno. forma ideal de un pico cromatográfico de elución. Tiempo de retención tr: Tiempo requerido para que el máximo de un pico de soluto llegue al detector en una columna cromatográfica. tiene una longitud de cuatro veces la desviación típica estándar. Volumen de retención corregido a la presión media de la columna vr : Corresponde a Vr . La cual tomada como longitud o como tiempo es la base para los cálculos cuantitativos y relacionados con la eficiencia de la columna y tiempo de retención. Volumen de retención Vr: Volumen de gas requerido para llevar un máximo de componente a través de la columna.Vg . aire). Tiempo de retención corregido t r : Equivale al tiempo de retención menos el tiempo muerto (tiempo de retención del aire). Wh: Ancho a la mitad de altura. Altura h: Altura del pico.

W1 : Ancho de base del pico 1 W2 : Ancho de la base del pico 2 Cuando R = 1. Es función del ancho y la distancia entre los picos. Coeficiente de partición Kg: La relación de concentración de soluto en la fase estacionaria con relación a la concentración de soluto en la fase móvil (Gas de arrastre o gas portador). R 2d W1  W2 d : Distancia entre dos picos adyacentes. Columna rellena empacada o analítica: Tubo de vidrio o metal que contiene en su interior tanto el soporte sólido como la fase líquida o estacionaria. vidrio teflón o sílice) que contiene la fase estacionaria.25 mm de diámetro). de longitud relativamente 37 .5 a 0. Esta es la relación de los tiempos de retención corregidos (relativos) entre los componentes.Resolución R: Es el grado de separación entre dos picos. Es la relación entre tiempo de retención corregido de un compuesto y el tiempo muerto. o la relación entre los coeficientes de partición. la separación es completa. Factor de retención : Medida de la capacidad de una fase estacionaria de separar dos compuestos. a través de la columna. Columna capilar: Columna de diámetro pequeño (0.  Kx Ky ó  t rx t ry Factor de capacidad k': Es un término que depende de las propiedades de la columna y del soluto. K'  tr  t g tg Factor de retardo Rf: Razón entre las velocidades de movimiento de un compuesto y el gas portador.5. Concentración de soluto en la fase líquida (peso/ml) Kg = ---------------------------------------------------------------Concentración de soluto en la fase gaseosa (peso/ml) Columna: Tubo de (metal.

Argón y Argón/Metano. Tiempo que gasta el compuesto en atravesar el detector. El flujo se determina midiendo el tiempo que gasta una burbuja en desplazarse un rango seleccionado de la graduación.wall bond open tubular). X N  16  Y  2  t o N  16 r W      2 t r = Tiempo de retención corregido W = Anchura del pico en la base.apreciable (45 a 90 metros). el cual se encuentra distribuido uniformemente sobre el soporte sólido. una pera de caucho y una solución de jabón. Eficiencia N: La capacidad de una columna para mantener la forma aguda de los picos. Se denomina también columna de Golay. es un líquido poco volátil a la temperatura de operación de la columna. consistente en una esfera pequeña contenida en un tubo de vidrio. 38 . puede contener únicamente la fase estacionaria depositada sólo en las paredes internas. Rotámetro: Medidor del flujo de gas. Medidor de flujo de burbuja: Es un medidor de flujo de gas conformado por un tubo de vidrio graduado. Flujo Fc: Es el flujo volumétrico del gas de arrastre medido a la temperatura de la columna y a la presión de salida. Determinado en volumen por unidad de tiempo (mL/s) Velocidad lineal de flujo: relación entre la longitud de la columna y el tiempo que demora un compuesto para recorrerla. Sustrato: Superficie recubierta por la fase líquida. La velocidad de flujo es función del peso de la esfera en el tubo. Los más comunes son: Helio. Fase ligada: Fase estacionaria unida químicamente al soporte Gas de arrastre: Gas inerte que lleva a través de la columna los componentes de la muestra.wall coat open tubuler) y la fase estacionaria químicamente ligada a la pared (WBOT . Nitrógeno. Elución: Es la salida al final de la columna de un componente de la muestra. Splitter: Divisor fijo o variable del volumen de muestra inyectada. N = Número de platos Soporte sólido: Sólido poroso e inerte que va dentro de la columna y en el cual se empapa o se liga químicamente la fase líquida o estacionaria. Este es el primer criterio para evaluar la calidad de una columna. Fase líquida: Llamada también fase estacionaria. (WCOT .

Teoría de platos1: De acuerdo con la definición de coeficiente de partición una sustancia que entra en una columna junto con el gas de arrastre se disolverá en la fase líquida hasta que se establezca un equilibrio de acuerdo con los valores de la concentración en la fase estacionaria y en la fase móvil. T: Temperatura de la columna en grados Kelvin. 39 . Donde: KD: Constante de distribución. Monitor: Parte del hardware del computador donde se presenta el cromatograma y demás información. R: Constante de los gases ideales. en cada una de estas secciones el equilibrio vapor líquido debe restablecerse. este equilibrio se rompe por efectos del transporte y debe restablecerse consecutivamente. factor de reparto o coeficiente de distribución. es como si se dividiera la columna en un número de secciones iguales entre sí. Durante el paso de la sustancia a lo largo de la columna. en forma similar al término empleado en la destilación (Equilibrio líquido-Vapor en las columnas de destilación). Los detectores monitorean por medio del cambio en alguna de las propiedades físicas de los gases. G: Cambio en la energía libre de Gibbs para la evaporación del compuesto en la fase estacionaria. Se ha denominado a cada una de estas secciones plato teórico. Sensibilidad: cambios en la señal producidos por cambios en la concentración. Detector: Dispositivo que convierte la presencia de un componente de la muestra en una señal eléctrica al final de la columna. Ln Kg = -G/RT: Expresión general matemática que describe que la retención es función de la temperatura columna y la volatilidad del soluto mientras esta disuelto en la fase estacionaria. resulta en tiempos de retención diferentes para los distintos solutos. Selectividad: Es la tendencia de un detector o columna a responder o separar más a cierta clase de compuestos que a otros. Registrador: Instrumento que grafica los picos de los componentes eluídos de una muestra conformando el cromatograma. Amplificador: Parte del sistema electrónico que amplifica la señal producida en el detector cuando un componente de la muestra es eluído. Atenuación: Parte del sistema electrónico que atenúa o reduce la señal ha ser llevada al registrador o monitor. las diferencias en la energía libre de Gibbs para la evaporación de los solutos de la fase estacionaria. Desde el punto de vista teórico es conveniente considerar este proceso en varios pasos continuos de equilibrio.

= -----L/tg tr Velocidad del componente = L/tr Velocidad del gas portador = L/tg 40 . Se puede hacer en forma mecánica o electrónica. reporte de datos y resultados en los análisis cromatográficos. Pico fantasma: Picos inesperados en el cromatograma.1] P1 = Presión de entrada del gas a la columna P0 = Presión del gas a la salida de la columna (7) L/tr tG Rf = -------. Software para cromatografía: Conjunto de programas que facilitan la programación de parámetros. cuantificación.Integrador: Instrumento usado para determinar el área bajo la curva de cada pico cromatográfico. la cualificación. Pico principal: Pico caracterizado por una gradual elevación y por un rápido regreso a la línea base. Relación entre TR'. Pico: Representación gráfica de la elución de un compuesto de la muestra. RF' Y KG (1) (2) (3) Vr= trFC VG = tg FC FC = F'C Tc --Ta F'C = Velocidad de flujo del gas medido a la temperatura de la columna y a la presión de salida FC = Velocidad observada Tc = Temperatura de la columna Ta = Temperatura ambiente (4) (5) (6) Vor = J tr FC Vog = J tG FC 3 [(P1/P0)2 . generalmente causados por la contaminación en el sistema y/o la muestra. VR'.1] J = ------------------2 [(P1/P0)3 .

Vog (8) Rf = -------Vor Para un sistema líquido. Para la cromatografía gas líquido es conveniente expresar Rf en volúmenes de fase gaseosa y fase líquida.= -----------------tr Vor/J FC J FC (Vor) Vog = -------Vor Luego. de donde en la ecuación (9): Am = Área transversal de la fase gaseosa As = Área transversal de la fase líquida Kg = Coeficiente de partición Siendo: Vl = Volumen total de líquido contenido en la columna Vog = Volumen corregido de la fase gaseosa L = Longitud de la columna Luego: Vog = AmL Vog entonces. Am = ----41 . puede aplicarse la ecuación (9): Para relacionar Vog y Vor con el coeficiente de partición (Kg) (9) Am Rf = --------------Am + Kg As Con las bajas concentraciones utilizadas en la cromatografía gas líquido Kg es a menudo independiente de la concentración.= ---------------.Despejando la ecuación (4) y (5) Vor tr = -----J FC y Vog tg = ------J FC Reemplazando estos valores en la ecuación (7) tg Vog/J FC J FC (Vog) Rf = ----.

Como puede verse tr se hace menor al aumentar el flujo FC del gas eluyente. (10) Vog Rf = ---------------Vog + Kg Vl Observando la ecuación (8) Vog Rf = -----Vor y comparándola con (10).= ---------------Vor Vog + Kg Vl Se puede decir que: Vor Vog (Vog + Kg Vl) = ----------------------Vog simplificando Vog. contenidas en la columna rellena. y del coeficiente de partición. Para los tiempos de retención relativos de una mezcla de dos componentes b.L Vl = AsL Vl As = ----L Sustituyendo estos valores en la ecuación (9). tenemos: Vog Vog ---. c se tiene: Vog + Kgb Vl trb = --------------JFC trc = Vog + Kgc Vl ------------------JFC 42 . tenemos: (11) Vor = Vog + Kg Vl Vor en la ecuación (4) es igual a Jtr FC Reemplazando este valor en la ecuación (11) JtrFC = Vog + Kg Vl Vog + Kg Vl tr = ---------------JFC Luego: (12) El tiempo de retención depende del volumen de la fase líquida y gaseosa (Vl y Vog).

Volumen de retención corregido del N-Hexano 3.= --------------trc Vog + Kgc Vl Que es el tiempo de retención relativo denominado también factor de separación o selectividad: trb  = ----trc Ejercicio: En un análisis cromatográfico. 43 . Volumen de retención corregido del N-Heptano 4.2 CC/min 6. Coeficiente de partición a 40oC para el n-Hexano y para el n-Heptano 6.C. Tiempo de retención del aire 0. 5.9 minutos Calcular: 1.120 mm Hg 3. Tiempo de retención para el N-Hexano 2. Tiempo de retención para el N-Heptano 3. Presión del gas a la salida de la columna 620 mm Hg 4. Factor de capacidad K 7. Presión del gas a la entrada de la columna 1.5 C. Temperatura de la columna 40oC 2. Volumen de fase líquida estacionaria a 40oC 3. Velocidad de flujo del gas a 22oC 14. Factor de separación  Nota: Considerar la temperatura absoluta. Volumen de retención del aire 2.25 minutos 7.Dividiendo miembro a miembro obtenemos: trb Vog + Kgb Vl ---.75 minutos 8. Rf para n-Hexano Rf para n-Heptano 5. se obtuvieron los siguientes datos para una columna (gas-líquido): 1.

4 Partes básicas de un cromatógrafo gas líquido. llevando la muestra a la columna (4) que puede ser rellena o capilar. la capilar solo contiene el líquido como revestimiento en las paredes. la rellena está empacada con un material de revestimiento polvoroso que soporta un líquido. ubicada en un recinto termostato u horno (5). Argón) (3) fluye a través del inyector. 44 .3.2. La cromatografía de gas permite una rápida separación de mezclas complejas en compuestos individuales y permite una identificación y determinación cuantitativa de cada compuesto como se indica en la Figura 2. se inyecta una muestra (1) a una cámara de inyección calorífica (2) y a través de una corriente constante de un gas inerte (Nitrógeno.2. Helio.

Se limpia la aguja y se introduce en la cámara. La introducción de la muestra se hace mediante una Microjeringa graduada en microlitros (1 micro-litro= 10-6 litros) provista de una aguja hipodérmica con la cual se atraviesa un tapón de caucho (septum). la muestra se puede introducir mediante válvulas.4. Muestra: Técnica de la jeringa e inyección.3 Diagrama de un cromatógrafo de gases La muestra se separa en la columna. perforando el septum. b. Para hacer una buena inyección deben seguirse los siguientes pasos: a. Al presionar el émbolo la muestra es depositada en la cámara de inyección. circuitos cerrados y en forma automatizada para minimizar errores en la cantidad inyectada. Se toma en la jeringa un poco de la muestra a analizar y se eliminan las burbujas de aire. 2. Se mide la cantidad de muestra a inyectar c. y el gas portador y componentes separados emergen de la columna y entran al detector (6) Señales emitidas por el detector y amplificadas (7) activan al registrador (8) el que deja un registro permanente de la separación al trazar una serie de picos. Si la señal es digitalizada por el convertidor análogo digital (10). 45 . se lleva a un procesador (11) para ser exhibida en un monitor o una pantalla de cristal liquido.Figura 2.1. cromatograma (9) con el tiempo de retención tr se identifica el compuesto y con el área bajo el pico se determina la cantidad o concentración.2.

la mugre y la grasa de los dedos contaminan la aguja y crean dificultad para la introducción del émbolo en el cuerpo de la jeringa. de tal manera que el vaciado sea rápido. Diferentes modelos de microjeringas.Figura 2. Para uso posterior de la Microjeringa. ésta se lava con éter preferiblemente. c. Esto hace que la inyección no sea precisa y se dificulte o se haga imposible la inyección. Precauciones en el uso de las Microjeringas: a. o con otro solvente volátil. Se marca el punto de inyección en la carta o se oprime el botón start al mismo tiempo que se retira la aguja de la cámara. d. Se presiona el émbolo.4. Evitar que la aguja o el émbolo de la microjeringa se doble. b. e. Ni la aguja ni el émbolo se deben tocar con las manos. La jeringa se debe guardar siempre en su estuche para evitar que se contamine con el polvo y los 46 .

Disponen de manómetros y reductores para bajar la presión. j obra citada 47 . Gas Portador: Es necesario disponer de una fuente de gas portador. Sistema de muestreo. Generalmente uno de dichos manómetros marca la presión interna del cilindro y en el otro se selecciona la presión de salida. conectado en serie con el circuito del gas portador que se encuentra separado del exterior por un tapón de un material perforable (caucho) denominado septum el cual recupera su impermeabilidad inicial después de la perforación ocasionada por la aguja de la Microjeringa.10 ul (liq) 1 .3. Además se puede ubicar en su interior un tubo capilar de vidrio.reactivos químicos. Las escalas graduadas de estos medidores usualmente vienen en P.1 . para la retención de los sólidos que pueda poseer la muestra y así proteger la columna de posibles contaminantes. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tamaño de muestra Detector de conductividad: 1 .10 ml (gas) --------------------------------------------------Ionización: 0.2. (liq) ------------------------------------------------------------Temperatura Ligeramente superior a la temperatura de ebullición del compuesto menos volátil de la muestra. Inyector: El inyector es un pequeño recinto Calentado eléctricamente y forrado en material refractario que lo mantiene a una temperatura elevada. Para columnas capilares usar inyector con sistema divisor de flujo y flujo turbulento. una vez ésta ha sido retirada. Generalmente los gases que cumplen este fin son suministrados comercialmente en cilindros a alta presión (de 1500 a 1800 PSI. encuentra el gas portador y junto con él entra en la columna.4. Para medir la velocidad de flujo del gas de arrastre. por lo cual la muestra se vaporiza inmediatamente. que puede ser un cilindro. la muestra en fase de vapor. se dispone en algunos equipos de un fluxímetro que 6 Stambuck. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------2.4. libras por pulgada cuadrada).I (libras por pulgada cuadrada).2.1. La cámara de inyección está constituida por un bloque metálico. 2..1 . Tabla 2.S. A la salida del sistema de inyección.1 ul.2.6 ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tipo Para columnas rellenas usar un sistema de muestreo con volumen pequeño y flujo laminar.1 ul (liq) -------------------------------------------------Captura de electrones: 0. un depósito o un gasómetro.

3. La sílica elimina la humedad del gas y el tamiz los contaminantes orgánicos para el caso del Nitrógeno. cm/sg con ------------------------------------------------------------Columna rellena 1/4" ó 1/8" 3-4 6-7 Columna Gollay 0. El gas portador para cumplir su función debe reunir los siguientes requisitos: a. Ar más metano. la cual la eleva a lo largo del tubo tanto más cuanto más rápida es dicha corriente. Velocidad: La velocidad del análisis depende de la velocidad de difusión de los componentes de la mezcla en el gas portador. H2.2. CO2.suele ser del tipo "Rotámetro". ya que existe el peligro de que éste al estar en contacto con la muestra durante un tiempo y a una temperatura alta. He. -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tipo de columna Gas de arrastre ------------------------------------------------------------Argón Helio Nitrógeno Hidrógeno cm/sg. distinta a la deseada y viene a producir una señal más en el detector. de sección en forma de V. Tabla 2. Sensibilidad: Dado que el gas de arrastre fluye constantemente por el sistema. Los gases de mayor uso como portadores son: N2.010 Columna Scot 5-7 18-20 -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------b. Tabla 2. c. constituido por un tubo de vidrio dispuesto verticalmente.3. Para mejorar la pureza del gas portador se recomienda un filtro en la tubería. el cual. 7 Stambuck. producirá una señal de fondo la cual influirá sobre la sensibilidad de acuerdo con el detector empleado. que es el más utilizado por su fácil adquisición y bajo costo. Un instrumento sencillo para medir el flujo es el medidor de pompas jabón observar figura 2.. el contenido de oxígeno no debe superar las 20 p.p.. El nivel al que flota la esfera indica la velocidad del gas. Ar. j obra citada 48 . Selección del gas de arrastre. más amplia hacia la parte superior que hacia la parte inferior.m. Pureza: Cualquier impureza presente en el gas de arrastre equivale a la presencia de una muestra adicional. está compuesto por silicagel y un tamiz molecular. 7Velocidades lineales promedios aconsejables. dentro del cual hay una esfera o una pequeña pieza metálica en forma cónica que es arrastrada por la corriente gaseosa. se pueda producir descomposición o combinación de la muestra.

4. El helio permite análisis más rápidos. Debe ser térmicamente estable. La escogencia del gas de arrastre dependerá de: a.W.4. Dentro de ella se 49 .D. b.D.I. Disponibilidad del gas b. Con nitrógeno o argón a igual eficiencia que con helio la velocidad del análisis será menor. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Detectores: Conductividad térmica (H. Trabajando en modal de corriente pulsante usar con 5% de metano. nitrógeno o argón. c. ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Captura de electrones (E. 2.------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Pureza Usar siempre gas de arrastre de 99% pureza y se aconseja el empleo de un filtro antes de la entrada del gas al instrumento. Con nitrógeno o argón la eficiencia disminuye más rápidamente que con helio. Consideraciones respecto al tiempo del análisis y al detector empleado. Se debe tener en cuenta que al no trabajar a la velocidad óptima se aumenta la velocidad pero se disminuye la eficiencia.2. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Control En trabajos isotérmicos o con columnas capilares usar simplemente regulación isobárica Trabajando con temperatura programada usar control de flujo.D. Para determinar hidrógeno use helio con hidrógeno (8 a 10% de . Pureza del gas c. hidrógeno) ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Ionización por llama (F.) Al trabajar en corriente continua use N2. Propiedades del gas: a. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Velocidad del gas Seleccione la velocidad lineal del gas (o el flujo) según el gas. Columna. Debe ser inerte respecto a la fase estacionaria y los componentes de la muestra. columna y problema.) Use helio.) Use helio o hidrógeno con excepción de los análisis en los cuales debe determinarse hidrógeno o helio.C. Es el corazón del cromatógrafo y en la cual se realiza la separación.

encuentra la fase estacionaria líquida. El tubo de la columna puede ser vidrio o metal que sea inatacable por los componentes de la mezcla. y por tanto en la separación de los mismos. Debe tener resistencia mecánica y no romperse fácilmente. d. Estructura porosa con diámetro uniforme igual o inferior a 10 um por poro. presentan la ventaja que se pueden plegar o enrollar una vez rellena con el soporte y la fase estacionaria. haciendo circular aire caliente por medio de un ventilador. Igualmente existen equipos a los cuales se puede acoplar un programador lineal de temperatura. En la mayoría de los equipos la temperatura se puede regular de un modo continuo a cualquier valor deseado. hasta diferentes clases de sustancias silicadas entre las que tienen mayor importancia son las tierras diatomáceas. Un soporte sólido debe tener las siguientes características: a. el cual permite calentar la columna con una o varias ratas o rampas de calentamiento predeterminada. dispuesta bien sea sobre un relleno sólido denominado soporte o sobre el lado interior de la pared del propio tubo. La columna se encuentra ubicada dentro de un horno o recinto termostatado. acero y silicio en columnas capilares. pero en algunos equipos de precio más reducido sólo existen algunas pocas posiciones de ajuste a ciertos valores prefijados de temperatura. entre las cuales se pueden citar desde pequeñas esferas de vidrio. El soporte sólido ideal que cumpla todos estos requisitos no se ha encontrado. El soporte sólido tiene como finalidad la de aumentar la superficie efectiva de contacto entre el vapor de la muestra y la fase estacionaria a la cual sirve de apoyo. Las columnas son a menudo de diferentes longitudes (de 2 a 6 m) y (diámetros variados de 3 a 6 mm). Las partículas deben ser de tamaño y forma uniforme e.1. por ello. Las sustancias empleadas como soporte sólido en cromatografía son de tres tipos: Tierra de diatomáceas. no tener interacción química absorción por la muestra. Debe ser inerte.4. interesa que la temperatura sea constante a lo largo de toda la columna. Las columnas de vidrio se pueden disponer en varios tramos conectados convenientemente para reducir el espacio de la cámara donde se alojan. c. Soporte Sólido: Las sustancias usadas como soportes sólidos inertes son muy diversas. el metal de mayor uso para la construcción de columnas cromatográficas es el acero inoxidable pero también es utilizado el Cobre y el Aluminio. 50 .4.2. 2. Superficie específica grande (de 1 a 20 m2/g) b. Se consigue que la temperatura sea uniforme en el interior de la cámara donde se encuentra la columna. ya que la temperatura influye de modo importante en la retención de los componentes por la columna. generalmente habrá una de las características que determine finalmente el tipo de soporte a emplear. por lo cual la temperatura debe ser fácilmente controlable. con lo cual pueden ser colocadas en un espacio de pequeñas dimensiones. resinas plásticas. las columnas metálicas. grafito o metal.

o ambos. Anakrom. recibe varios nombres según el fabricante así: Chromosorb. Figura 2. La tierra de diatomáceas es el soporte más empleado. En general: METAL ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Diámetro 3 mm Para aplicaciones generales 51 . etc. Gas-Chrom.4. Celite. Los tratamientos químicos pueden ser: Lavado con ácido (AW).esferas de vidrio y teflón. silanizado (HMDS) o (DMCS). llevando además un sufijo que indica el tipo de tratamiento que ha recibido con objeto de mejorar alguna de las características antes mencionadas. Tabla 2. Selección de columnas. -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Material Para muestras biológicas y pesticidas: VI DRIO.5 Diferentes modelos de columnas rellena y capilares.

6 Similar en características a la muestra. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Soporte sólido Análisis generales Chromosorb W.H en compuestos inactivos Si . Muestras polares: Tratamiento de lavado con ácido y silanizado.o . este efecto es indeseable porque retarda el paso de soluto de la película líquida al gas portador. Muestras no polares sin tratamiento --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tamaño de las Partículas del soporte Columnas de 3 mm: 80-100 mesh. Sin embargo se reduce al usar una fase líquida polar que sea fuertemente absorbida en la superficie del sólido. pero es más efectivo el tratamiento del sólido con un agente silanizante como el HMDS (Hexametil disilizano)[(CH3)3Si]2 NH que convierte a los grupos Si .poca caída de presión. De acuerdo con la Tabla 2.o . (mallas) Columnas de 6mm: 60-80 mesh (mallas) ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Porcentaje de fase estacionaria Columnas de 3 mm: Hasta 10% Columnas de 6mm: Hasta 20% Muestras poco volátiles: Hasta 3% Muestras muy volátiles: Hasta 30% Soportes tratados: Hasta 3% -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Columnas capilares Alta resolución .Si (CH3)3 mediante la siguiente reacción: 52 . Fase estacionaria Silanizado: La tierra de diatomáceas es una forma de sílice hidratada que contiene muchos grupos Hidroxilos libres en su superficie. Estos pueden servir de sitios donde las moléculas de soluto se absorben.6 mm Análisis de trazas -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Longitud Hasta 6 m para columnas rellenas y dependiente de la resolución deseada. rápidas . Usar columnas SCOT para muestras con tiempos de retención cortos o para análisis muy rápidos. Hidrocarburos: Chromosorb P. Muestras semipolares lavado con ácidos. observable en la asimetría de los picos presentados en el cromatograma.análisis de muestras reducidas. Pesticidas y esteroides Chromosorb G.

no es frágil ni absorbente.Tiene mayor absorción que los demás. Así mismo si el % de fase estacionaria es inferior al 5% se recomienda silanizar la columna. Si se va a recubrir el soporte con fase estacionaria semipolar se recomienda el tratamiento con ácido y si el porcentaje de recubrimiento es inferior al 5% se recomienda además el silanizado. Cuando el recubrimiento es con fase estacionaria polar se recomienda el empleo de soporte lavado con ácido y silanizado. Chromosorb P: .Se usa en cromatografía preparativa. área específica grande. se emplea con un porcentaje muy bajo de fase líquida.[(CH3)3 Si]2 NH ─ Si ─ O ─ Si + --------------------->   HMDS OH OH Grupo activo de silice hidratado Si ─ │ │ O │ Si O ─ │ │ O │ Si Si + NH3 CH3 compuesto inactivo Con la cual se reemplaza el H del OH por: CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 Si CH3 CH3 CH3 Las recomendaciones en cuanto a la selección del soporte son las siguientes: Si se emplea el soporte para recubrirlo con una fase estacionaria no polar (muestras no polares). Características de algunos soportes sólidos: Chromosorb G: . tiene más resistencia mecánica que el Chromosorb W. se emplea sobre todo para hidrocarburos. Chromosorb A: . 53 . puede emplearse hasta con 25% de fase estacionaria. el soporte no precisa tratamiento pero sí la silanización.Para compuestos polares. El área específica no es muy grande.

Muy inerte.2% Para columnas preparadas con Chromosorb G se deben reducir los valores dados anteriormente a la mitad. Es muy difícil de recubrir y el porcentaje de fase estacionaria no debe ser mayor al 10%. Algunas reglas son las siguientes: Columnas de 1/8" con soporte 80-100 mesh (excepto en los casos indicados posteriormente) usar 8-10% de fase líquida. Columnas de 1/4" con soporte 60-80 mesh usar 15-20%. amoníaco. Uso general. Es poco eficiente y sólo se debe usar cuando se requiere un soporte inerte.0. puede emplearse hasta con 25% de fase 54 . Para columnas de 1/8" se recomienda 80-100 mesh. Al seleccionar el tamaño de las partículas del soporte se debe llegar a un compromiso entre eficiencia (tamaño pequeño de partículas) y baja caída de presión (tamaño grande de partículas). se ha empleado para compuestos muy polares. Está siendo reemplazada por polímeros porosos. es frágil pero de muy alta eficiencia.Chromosorb T: . Columnas con esferas de vidrio. hidrazína. Análisis de esteroides (exceptuando como soporte el Chromosorb G usar 3-4%) Columnas con Teflón: Usar menos del 10%. La cantidad de recubrimiento en la columna influirá sobre la eficiencia de la columna y capacidad de muestra. Así. Al no disponerse de soporte con estas características de tamaño de partícula se puede aplicar la regla de Purnell: El diámetro interno de la columna debe ser por lo menos 8 veces mayor que el diámetro de las partículas del soporte sólido.Similar al Celite 545. Aumentando la proporción de fase líquida se aumenta la capacidad de muestra y por tanto se baja la concentración mínima detectable. pero al mismo tiempo el espesor del recubrimiento para un soporte sólido dado aumentará la transferencia entre vapor de muestra y fase líquida disminuyendo eficiencia. Teflón: . También al seleccionar el porcentaje adecuado se debe llegar a un compromiso entre estas dos variables. etc. Esfera de vidrio . menos del 3%. Chromosorb A: . de fase estacionaria y 85 gramos de soporte sólido. El porcentaje de fase estacionaria con que se va a recubrir el soporte indica la relación en peso de fase estacionaria con relación al relleno.05 . halógenos. se recomienda para compuestos muy polares o reactivos como agua.Se usa en cromatografía preparativa. en tanto que para columnas de 1/4" se recomienda 60-80 mesh. El diámetro promedio de las partículas se da en unidades de malla (mesh) correspondiendo números mayores a diámetros menores. Chromosorb W: . los valores típicos con este soporte son de 0.Se emplea sobre todo con detectores de conductividad térmica para separaciones de H2O.Debido a que el vidrio es prácticamente inerte. SO2. para 15% de fase estacionaria se necesitará 15g. El recubrimiento es muy bajo (máximo 3%).

4.2 Fase líquida La regla de oro en cuanto a la selección adecuada del material es: "La fase líquida debe tener características fisicoquímicas semejantes a la muestra a analizar". no es frágil ni absorbente. Así para analizar hidrocarburos saturados escogeremos un hidrocarburo saturado como fase líquida. Tabla 2. Es conveniente relacionar esta semejanza con base a polaridades. no debe descomponerse térmicamente ni evaporarse.0 Fluoropack 0. puede emplearse hasta con 25% de fase estacionaria.2.8 Chromosorb A: . una muestra semipolar en una fase semipolar. Entre las más importantes de estas cualidades están: a. b.Se usa en cromatografía preparativa. con el fin de que una evaporación de la fase estacionaria líquida no provoque el paso de la misma a la fase móvil. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Soporte ml.5 Chromosorb t 1.5 Chromosorb w 2. ni con el gas de arrastre. Relación de solventes/soporte sólido. 2. analizando una muestra polar en una fase líquida polar. Se han empleado un sin número de sustancias como fase estacionaria y la literatura al respecto es una de las más abundantes dentro del tema de cromatografía de gases. un ester orgánico se podrá analizar en un poliéster. Selectividad respecto a los componentes de la fase móvil: Esta condición es la que define en sí a la 55 . no deben reaccionar químicamente con: el soporte. sea relleno o sea pared interior de tubo. provocando una mala distribución de la misma en la columna. c. con los componentes a separar.0 Chromosorb g 0. no es frágil ni absorbente. de solventes/gramo de soporte --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Chromosorb p 1. lo cual presentaría perturbaciones en la separación y en el análisis posterior. d.estacionaria. Viscosidad: No deberá ser muy alta a la temperatura de operación.5. para facilitar la velocidad de establecimiento de los equilibrios de reparto entre las fases. deben formar una película que se adhiera uniformemente y deben garantizar una selectividad suficientemente alta y por tanto propiedades separadoras altas. asegurándose en lo posible que la adherencia soporte-liquido sea suficiente para evitar que la fase móvil arrastre a la fase estacionaria.4. La fase líquida además de ser semejante a la muestra debe tener una composición química definida deben ser líquidas y lo menos viscosa posible. Tensión Superficial: La fase estacionaria líquida deberá mojar bien el soporte. Tensión de Vapor: Deberá ser mínima..

que se realizan a lo largo de la columna. aminas. Esta condición excluye implícitamente cualquier reacción química entre los componentes a separar y la fase estacionaria. de compuestos a separar se selecciona el soporte y la fase estacionaria. etc.cromatografía de gases. Se define el material del tubo con el cual se va a construir la columna según sea vidrio o metal. División de las fases estacionarias líquidas según su polaridad: a. Esta condición limita algunas veces la aplicación de un líquido dado como fase estacionaria. Poliésteres (succinato de dietilenglicol.4. 35% de diphenyl y 65% de dimetilpolisiloxano. e. 90% Biscyanoproppyl-10%cyanopropylphenylpolisiloxano.4. ácidos grasos. etc. d. Empaquetamiento de la columna. No polares: Parafinas (escualeno. Con estas fases se pueden separar: Carbohidratos. Con estas fases se separan: Ácidos grasos y en general ácidos. f. alcoholes. c. sebacato de neopentil glicol). 56 . c. poliésteres aromáticos). Se define la relación en peso de fase estacionaria con relación al relleno. etc. Reversibilidad del reparto: El reparto de cada componente entre las fases deberá ser reversible. Polaridad Media: Éteres. alcaloides. fractonitrilos. hidrocarburos de alto peso molecular.esteres de ácidos carboxílicos (ftalato de dinonilo. aminoácidos.). halogenados. en sí misma y respecto de los componentes de la mezcla a resolver.3. grasa Apiezon L y M. esteroides. Las constantes de reparto de los componentes a separar entre la fase móvil y la estacionaria deberán ser suficientemente diferentes para que la fase estacionaria oponga resistencias distintas al paso de cada componente a través de la columna. d. a la temperatura de trabajo. olefinas y cicloparafinas. metil siliconas. esteroides. proporcionando así una buena separación de los componentes a la salida de la misma. 20% de diphenyl y 80% de dimetilpolisiloxano. Polares: Ácidos. b. b. dialquilsiloxanos como el dimetil polysiloxano. Se define el diámetro y la longitud de la columna. aromáticos polinucleares. sean rápidos y completos en alcanzar el equilibrio. Altamente polares: Poliésteres. 14% Cyanaopropylphenyl y 86% de dimetilpolisiloxano.2. Ligeramente polares: Cyanopropyl phenyl 6% y dimetilpolisiloxano 94%.Con estas fases se separan: Hidrocarburos de alto punto de ebullición. ésteres y productos naturales aromáticos. para favorecer que los procesos consecutivos de absorción y desabsorción. c. Dependiendo de la muestra. a. alcoholes. cetonas. alcoholes. 2. polietilenglicoles. aldehidos. Estabilidad Térmica: Es de gran importancia que la fase estacionaria sea estable.

Una vez llena la columna se tapona el otro extremo y se dobla o enrolla dándole la forma deseada. Se puede calentar ligeramente la mezcla para acelerar la evaporación. Envejecimiento de la columna.) 57 . (Ver Tabla 2. se mantiene a esta temperatura entre 10 y 15 horas y luego de 3 a 5 horas a la máxima temperatura.e. de relleno. Se toma la cantidad previamente pesada de fase líquida disuelta en un volumen adecuado de solvente y se añade lentamente a un recipiente plano (cristalizador) en el cual se tiene el soporte sólido previamente pesado. de soporte sólido. A manera de ejemplo puede citarse la forma de preparar una columna de Chromosorb W al 10% sabiendo que se necesitan 30 grs. se disuelven en 54 mL de solvente (cloruro de metileno o cloroformo) y se echan sobre 27 grs. Se deja evaporar el solvente agitando el cristalizador cuidadosamente (no se debe agitar el soporte para evitar que las partículas se rompan). La cantidad de solvente es la suficiente para mojar sin exceso el soporte sólido. Se coloca un embudo por el otro extremo y se va introduciendo lentamente el relleno usando en lo posible un vibrador para asegurar que el relleno sea uniforme. Una columna recién preparada se debe envejecer. Después de este procedimiento la columna puede ser empleada para el análisis. Se toman tres gramos de fase líquida. para lo cual se debe ir calentando lentamente y con flujo de gas de arrastre estando la columna desconectada del detector hasta una temperatura 15oC por debajo de la temperatura máxima de operación de la misma. f.6. Luego que el material de relleno esté seco se toma la tubería sin doblar y se tapona sin ajustar uno de sus extremos con lana de vidrio o un tapón de metal poroso. se sigue el procedimiento anterior.

― ― Eteres m-bis (m-fenoxifenoxi) benceno Polieteres OS-138 polofenileter Dodectil ftalato Di-2 etilhexisebacato bis-2(2-metoxietil) Succinato de di-etilen Glicol (DEGS) Ésteres Poliésteres Succinato butanodiol (BDS) Adipato de neopentil Glicol (NPGA) Succinato de neopentilglicol (NPGS) Tri-metilopropano Tripelargonato (Ester C9 de Celanese) Carbowax 400 Carbowax 600 Poliglicoles Carbowax 1540 Carbowax 20M Ucon LB 550 X (Polipropilenglicol) Ucon 50 HB 2000 (Polietilen-polipropilen glicol) Igepal CO-880 (Nonilfenoxi polietilenoxi-etanol) P P 70-200 180 70-200 ― Cresoles. General. General.6. xilenoles. Uso general para altas temperaturas.C10 parafinas y cicloparafinas. muestras ligeramente polares. Tipo Hidrocarburo Fase líquida Esqualeno Apiezon L Actividad NP NP P P SP SP P P P P temperatura. Fases líquidas más empleadas. General muestras polares ― ― ― ― Poliglicoles P P P 180 180 60-200 160 160 60-185 58 . P P P P 100 125 150 200 75 100 140 200 Metilaminas Substancias polares bajo punto de ebullición. Aromáticos.Tabla 2. Hidrocarburos alifáticos C2 C5 Éteres metílicos de Ácidos Grasos. substancias polares poco volátiles. Aromáticos. Máxima Rellena Capilar 150 75-225 180 75—225 150 125 65 135 70-200 70-200 130 75-200 180 75-200 140 125 185 70-190 70-200 Aplicaciones C5 . Muestras polares Polares alto punto de ebullición. es muy polar Para metil. etil benceno.

Continuación Tabla 2.6. Hidrocarburos CO2 Siliconas OV-17 FS-1265(QF-1) SE-52 XE-60 SP P SP P P P 250 50-250 250 250 50 25 Varios Dimetil sulfolano (DMS) Hexametil fosforamida Acido pícrico + fluoreno AgNO3 + dietilen-glicol m-bis (m-fenoxilenoxi) benceno + esqualeno P P P 150 80-125 50 130 Hidrocarburos aromáticos Gases livianos del petróleo isómeros olefinicos. General Análisis de pesticidas Esteroides. Esteroides. Aromáticos. Esteroides. Tipo Aminas Nitrilos Fase líquida Poliamida versamid B. Substancias polares alta temperatura. 200 50-200 200 200 Aplicaciones Substancias oxigenadas Substancias polares. Maxim rellena Capilar 70 175-280 200 225 50-280 50-280 200 160 175 80-200 80-200 160 . Temperatu ras intermedias subs ancias polares y ligera mente polares.B –oxidipropionitrilo Actividad P P Temperat.500 cts) NP SE-30 NP OV-1 DC –550 (Metil-fenilSilicona) NP SP Uso general. substancias de alto punto de ebullición. Alto Punto de ebullición. substancias Punto de ebullición ― ― ― Metilsilicona DC-200 NP (viscosidad:100 cts) Metil silicona DC-200 ( ancias ad 12. Separación de metil y etil bencenos 59 . substancias de alto punto De ebullición Substancias polares alta temperatura. Hidrocarburos alifáticos C2-C5 Gas natural.

esteres. Maxim rellena Capilar 210 175 Aplicaciones P Aromáticos. Los tiempos de retención de chromosorb Polímeros microporosos Son aproximadamente la ½ del 102. Se prefiere el 102 para gases livianos. Separación de metil y etil bencenos Isómeros del xileno Separación de metil y etil bencenos. aldehídos y con limitaciones limitaciones gases livianos. Columnas recomendadas para varias clases de muestras Tipo de compuestos Fases estacionarias más comunes Comparación entre características técnicas de columnas empacadas y columnas capilares Empacadas WCOT SCOT PLOT 60 . cetonas.Continuación Tabla 2. aminas.8 Benzoquinolina + Esqualeno actividad temperat. P 200 90 Bentone 34 + DC 200 + Celita P Chromosorb 101 Chromosorb 102 gases 101 300 250 Substancias de bajo peso moléculas muy polares: H2O Alcoholes. 7.6 Tipo Mezclas Fase líquida m-bis (m-fenoxilenoxi) Benceno + apiezon L.

Continuación tabla 2. 61 .6 Comparación de estructuras. polaridades propiedades y uso de algunas columnas capilares en orden de sus polaridades.

Continuación tabla 2.6 62 .

Así pues.3 Medida de la eficiencia de la columna El Plato Teórico: La unidad utilizada para medir la eficiencia de una columna cromatográfica es el PLATO TEORICO. es posible determinar el número de platos teóricos inyectando en la columna un compuesto sencillo junto con una pequeña burbuja de aire En la Figura 2.Continuación tabla 6. similar a una destilación y por ello su eficiencia fue medida por AJP Martín en platos teóricos figura 2. el otro componente. Sin embargo. Una separación cromatográfica es. Tiempo de emergencia del aire = T minutos (desde la inyección hasta el máximo del pico de aire). permitiendo algo de reflujo) se aumenta el número de platos de una destilación sencilla y la separación es más eficaz. Modificando el diseño del equipo de destilación (por ejemplo. Cuando se calienta una mezcla de dos componentes.7. por destilación sucesivas se obtiene un producto cada vez más puro.6. se produciría un enriquecimiento en el componente más volátil y el proceso total sería equivalente a una destilación con dos platos. En este caso. aparece el cromatograma correspondiente. hierve primero el de menor temperatura de ebullición. en consecuencia. parte del mismo se vaporiza junto al más volátil. no se efectúa una separación completa y la destilación se conoce como destilación de plato sencillo. El producto destilado estará enriquecido en el componente más volátil. En estas condiciones.2 Adsorbentes sólidos 2.2. en muchos aspectos. presenta a esa temperatura una presión de vapor finita y.4.4. 63 . aunque menos volátil. Si este producto fuera destilado de nuevo. término que deriva de los procesos de destilación.

el tiempo X es una medida del tiempo 64 . a) Buena separación. por tanto.6 Separación de dos componentes. si no interaccionara con el substrato. Figura 2. Así pues.Figura 2. x es el tiempo en minutos. es una medida del tiempo que tardaría una muestra en fluir. Este período llamado tiempo muerto (tg o trm). Tiempo para que el pico de la muestra pase el detector = Y minutos. fluye a través de la columna en un tiempo mínimo. El número de platos teóricos (N) viene dado por la ecuación: X N  16  Y  2  tr o N  16 W      2 t r  t rc  t g Se supone que el aire no interacciona con el substrato líquido y. b) Mala separación Tiempo máximo para la muestra = tr + X minutos (desde la inyección hasta el máximo del pico de la muestra).7 Cromatograma de un compuesto que permite ilustrar los tiempos que requiere la muestra y el aire para dar sus propios picos.

Conviene hacer constar que no se tiene en cuenta la longitud de la columna. ya que es una variable que se elimina al indicar las condiciones de máxima eficiencia en el funcionamiento de una columna dada. 5 minutos. El cálculo de N debe hacerse experimentalmente para cada columna.95mm / platoteóri co 1024 platosteór i cos 2. que viene dada por: 2 2 H  HEPT  H Longitudto taldelacol umna .4. a su vez. H. es más significativo hablar de la altura de cada plato teórico. calcular el número de platos teóricos y la altura de un plato teórico. En principio podría suponerse que aumentando suficientemente la longitud de la columna podría separarse cualquier pareja de componentes. peso molecular del componente. velocidad de flujo del gas portador y longitud de columna. 1/2 minuto. a veces. Y es el tiempo que tarda la muestra en pasar el detector. aunque todo aumento en la longitud de la columna implica un incremento en el número de platos teóricos también se produce una mayor difusión y solapamiento de los componentes. tiempo de salida del máximo del pico de la muestra. Así por ejemplo.en el ejercicio anterior: Númerodepl atosteóri cos H 2mX1000mm / m  1. no se consigue aumentar su eficiencia. con una columna de 2 metros de longitud se obtuvieron los siguientes datos: Tiempo de salida del máximo del pico de aire.4 Ecuación de Van Deempter Comparando la altura de los platos teóricos de dos columnas se obtiene una medida directa de sus eficiencias relativas. hasta el punto de que. 65 . concretamente en la fase estacionaria. Esta relación se encuentra.2. Sin embargo. una medida directa de cuánto se ha extendido o difundido la muestra en la columna durante su recorrido. es decir.     2  5 1 4 X   16   1664  1024 platosteór i cos N  16   16  1  1 Y       2  2 En la práctica. ya que no es posible llenar dos columnas con substrato en condiciones exactamente iguales. afectada por la afinidad entre componentes y substrato. 1 minuto.extra que invierte un compuesto de la muestra en la columna. independientemente de su afinidad.4. Entre los factores que afectan al tiempo que tarda un componente en atravesar una columna puede citarse la relación de tiempos invertidos en la fase móvil y en la fase estacionaria. tiempo de paso del pico muestra por el detector.

Aún cuando la mezcla no fluya.T)) = Altura equivalente a un plato teórico. V = Velocidad de flujo del gas portador. Si el relleno de la columna fuera perfecto y el flujo gaseoso suficientemente lento. 66 . sin embargo.Entre los factores que influyen en la cantidad de componentes esparcidos durante su flujo a través de la columna deben citarse la difusión en la fase de gas y en la fase líquida. además que el gas portador no fluye. por tanto. no se produciría turbulencia y A sería cero. que tiene la forma: H = A + B/V + CV H = (H. B = Una constante que depende de la difusión de la muestra en la fase gaseosa y líquida. así como la turbulencia o laminaridad del flujo. A = Una constante que depende de las corrientes parásitas en el flujo gaseoso. B y C son características de cada columna. la muestra se esparcirá lentamente en el gas portador. Por ejemplo la constante A es proporcional a 2dp. donde  es una constante de geometría y dp el diámetro medio de la partícula. Es evidente que no se formarán corrientes parásitas y. difundirá y se extenderá a lo largo de la columna. pues. Esta ecuación básica ha sido refinada por numerosos investigadores y es objeto. Si se supone.5 mm.E. de la geometría del relleno y las paredes de la columna. la muestra difundirá lentamente en dicho gas. muy importante un relleno adecuado de la columna. La relación entre estas variables y la eficiencia de la columna viene dada por la ecuación de Van Deempter. de una investigación considerable. las corrientes parásitas. Las pequeñas corrientes parásitas son responsables del esparcimiento de la muestra a lo largo de la columna y. Después de cinco minutos su desplazamiento en la columna es de 25 mm. todavía. ya que cuanto peor sea éste más intensa será la turbulencia y peor la separación. y por tanto. El valor de A depende de las corrientes parásitas que se forman en el gas que fluye. Supóngase que se inyecta una muestra en el gas portador y que su desplazamiento inicial en la columna es de 2. la geometría del relleno y la velocidad de flujo del portador gaseoso. de la superposición de las dos especies. Las constantes A. después de 10 minutos 45 mm. Esta velocidad depende de la temperatura y de la rapidez con que las moléculas de muestra difunden en el gas portador o substrato. existen irregularidades en el relleno que provocan la turbulencia. C = Una constante que depende de la transferencia de materia entre las moléculas de la muestra en fase gaseosa y líquida. La constante B está relacionada con la difusión física de la muestra en la corriente de gas portador. por tanto. en la práctica. y así sucesivamente. Es.P.

la muestra se esparce.Figura 2. por ello. Consideraciones análogas pueden hacerse respecto a la velocidad de difusión de la muestra en la fase 67 . (c) Después de 10 minutos. como mínimo.8 Corrientes parásitas en un gas que fluye. Figura 2. En estas condiciones. fluya o no el gas portador. tales V2 M V2 d2 como hidrógeno o metano. las muestras de peso molecular elevado se analizan en columnas calientes. La velocidad de difusión es independiente de las corrientes parásitas pero depende de las propiedades físicas de la muestra. su velocidad de difusión es comparable a la de muestras de pesos moleculares más bajos a temperaturas inferiores. se extienden rápidamente en la columna y su separación es difícil. La velocidad de difusión aumenta rápidamente con temperaturas crecientes y. su velocidad de difusión. moléculas de peso molecular elevado que se mueven lentamente en la fase gaseosa difunden. La ley de Graham sobre la velocidad difusión de los gases plantea que "Las velocidades de difusión de los gases están en relación inversa de las raíces cuadradas de sus densidades M V d1 V o de sus pesos moleculares" 1  o 1  . Como ya se expuso anteriormente. Si no fluye. también. (b) Después de 5 minutos. De forma similar. avanzará. con moléculas de muy bajo peso molecular.9 Difusión de muestra en el gas portador dentro de la columna: (a) En el instante de la inyección. Conviene tener en cuenta que al hablar de difusión se hace referencia a la velocidad de difusión de la muestra a la temperatura de la columna. de esta forma. puede ser necesario enfriarlas antes de su separación para reducir. Moléculas que difunden rápidamente. Sin embargo. lentamente durante su flujo a través de la columna. y la muestra se mantiene en la columna durante cinco minutos. 25mm.

El término C representa la resistencia a las transferencias de las moléculas de la muestra entre la fase gaseosa y la líquida.2. El valor óptimo de V (Velocidad de flujo del gas portador) para obtener el H mínimo puede determinarse experimentalmente. y la velocidad lineal.5.4. La máxima eficiencia de la columna corresponde al mínimo valor de H.4.10 Relación entre la altura de un plato teórico y H. Repitiendo la determinación con diferentes velocidades de flujo del gas portador se calcula el valor mínimo de H. La propiedad física que mide es la variación de concentración de las sustancias eluídas en el seno del gas portador. y la mayoría de ellos ofrecen una señal eléctrica proporcional. 2. del gas portador. Las condiciones óptimas deben establecerse experimentalmente utilizando la relación de Van Deempter. Detectores: Los detectores empleados en cromatografía de gases son. inyectando una parte alícuota de muestra en la columna con el gas portador fluyendo a una determinada velocidad V. y calculando H de las ecuaciones. fácilmente medible y registrable en función del tiempo. debe obedecer una serie de requisitos impuestos por la propia 68 . 2. si la velocidad de flujo es demasiado rápida.2. Figura 2. cambia la altura del plato teórico.5. en realidad. Tal como predice la ecuación de Van Deempter. aumenta la turbulencia en la columna. si cambia la velocidad del gas portador. Por otra parte. transductores de concentración. Para que un detector (transductor de concentración) sea útil en cromatografía de gases. Si la velocidad de flujo es muy pequeña. V. la muestra permanece en la columna demasiado tiempo y la difusión es muy grande.líquida.1 Características generales de un detector.

11b. ó bien (  s/  v). Los detectores diferenciales son los empleados en la mayoría de los casos y los que se aplican a los aparatos comerciales. Con este tipo de detectores se obtiene un registro en el cual a cada sustancia le corresponde un peldaño.11a. b. a esta técnica separativa. 69 . incluso cuando ésta ya ha salido del detector y cuando aparece una segunda sustancia. la señal correspondiente se adiciona a la anterior. de acuerdo con el tipo de sustancias capaces de detectar y también según la especificidad de su respuesta. en cierto modo exigibles. Por otra parte. Al estudiar los detectores utilizados en la cromatografía gaseosa es conveniente hacer esta distinción. En primer lugar. pues registra la relación (  s/  t). esta rapidez de respuesta es inherente a la naturaleza del detector. la señal se mantiene en el valor que indica el total de sustancia detectada. en el seno del gas portador. al comparar la calidad de los detectores en cromatografía de gases. la cantidad total de la misma será proporcional al área del pico. como también bajo nivel de ruido. Detectores universales y específicos. alta fiabilidad y manejo sencillo. el volumen interno del detector debe ser lo más pequeño posible. además poseer una sensibilidad adecuada junto con un bajo nivel de ruido. hay que tener en cuenta estos tres conceptos primordiales: Sensibilidad. el detector debe ser rápido. pero puede disminuir si el volumen interno del mismo es grande. Detectores integrales y diferenciales: La primera clasificación general de los diversos tipos de detectores puede efectuarse según la modalidad en que ofrecen la señal.) Los detectores diferenciales presentan la información en forma curva. En resumen. Por tanto. en el registro integral.naturaleza del fenómeno cromatográfico y por las prestaciones. en función del tiempo proporcional a la cantidad total que ha pasado por el detector. buena estabilidad y reproducibilidad. En orden a obtener información cuantitativa es evidente que la respuesta del detector debe ser lineal y con un margen de linealidad lo más amplio posible. y son varios los autores que aceptan esta primera distinción como fundamental. En efecto: El punto de inflexión. a. Los detectores tipo integral ofrecen una señal. no destructivo y de volumen pequeño.) En este caso se obtendrán registros cuya forma refleja la distribución de concentraciones. corresponderá a un máximo en el diferencial y la línea de registro volverá a cero (o el valor de señal a cero) entre dos sustancias que estén perfectamente separadas (Figura 2. linealidad y una rapidez de respuesta adecuada. Y la altura de cada uno de ellos es proporcional a la cantidad de la sustancia correspondiente (Figura 2. capaz de revelar casi instantáneamente variaciones de concentración en el gas portador que emerge de la columna cromatográfica. para conseguir una rápida respuesta y también para evitar pérdida de resolución de las sustancias separadas en la columna. por ello se hace referencia siempre a los detectores diferenciales cuando se emplea el término detector. que en realidad es la derivada del registro integral. de las sustancias eluídas a la salida de la columna. el detector debe ser un transductor de concentración en fase vapor y. y así la señal es proporcional a la concentración de sustancia.

c. Esta dificultad puede solventarse mediante un divisor de flujo. cuando la sustancia queda alterada. Son detectores de una gran universalidad. como el de conductividad térmica. 2. 70 .5. capaz de dar una señal aceptablemente lineal. no existe aún ningún detector rigurosamente universal. Entre la gran diversidad de tipos de detectores cabe aún otra clasificación que agrupa a los detectores desde un punto de vista no exento de interés para el químico. sensibilidad aceptable para la mayoría de casos y de manejo relativamente simple.11 Representación de la señal por un registrador cuando la recibe: a) De un detector integral. por ejemplo.Se considera como detectores universales aquellos capaces de detectar cualquier sustancia de un modo lineal cuya respuesta específica es independiente de la naturaleza de la sustancia a detectar. especialmente cuando debe acudir a técnicas auxiliares de identificación cualitativa. pues si bien existen detectores. el detector es de tipo destructivo: Detectores de ionización de llama.2. Se denomina detectores no destructivos aquellos capaces de detectar la sustancia sin modificarla químicamente: Detectores de conductividad térmica y balanza de gases. En realidad. la respuesta específica depende de la naturaleza de cada sustancia en grado más o menos importante según el tipo de detector. b) De un detector diferencial. Figura 2. Es importante tener en cuenta que con el empleo del detector destructivo la muestra detectada ya no puede pasar posteriormente a un instrumento o técnica de identificación cualitativa.han sido de aplicación muy amplia en cromatografía de gases. buena linealidad. Por el contrario. en sus dos versiones (hilo caliente o termistores). Por ejemplo: Espectroscopía infrarroja o espectrometría de masas.4. Detectores destructivos y no destructivos.2 Detector de Conductividad Térmica Este tipo de detectores o catarómetros. que tome parte de la muestra a detectar inmediatamente antes del detector y la conduzca a la salida.

se cambia el valor de su resistencia. cuyas paredes se mantienen a temperatura constante. Estos dos hechos físicos son la base del detector de conductividad térmica. cuando el vapor de sustancia eluída llega a la célula de medida. Esquema Básico. su conductividad térmica varía respecto a la que poseería cuando estaba puro.7.7x10-12 para fósforo --------------------------------------------------------------------------------------------------------y. es la que se utiliza para su percepción y cuantificación. Inicialmente se ajusta a cero el puente y la señal de desequilibrio. la disipación de calor por parte del elemento caliente es constante Tabla 2. es necesario aplicarlo en forma diferencial.12 es evidentemente simplificado. en consecuencia. también lo será su temperatura y resistencia. El esquema de la figura 2. en su parte fundamental. al variar la temperatura de un filamento metálico o de un termistor. Para ello se emplean dos elementos sensibles idénticos situados cada uno de ellos en dos cavidades o células independientes que se encuentran a la misma temperatura en un mismo bloque metálico mantenido a temperatura constante. b. Los dos elementos sensibles constituyen dos ramas de un puente de Wheatstone. 71 (Peso mínimo detectable g seg-1) . Cuando un gas se mezcla con otra sustancia gaseosa. aunque obedece. La variación de esta resistencia puede ofrecernos una señal eléctrica adecuada y proporcional a la cantidad de muestra (vapor) que ha entrado en la célula junto con el gas que circulaba por ella.Fundamento Físico. gas portador y las sustancias (célula de medida). y por la otra. Por una de las células circula siempre gas portador puro (célula de referencia). la disipación térmica del elemento caliente será distinta y se modificará la temperatura del mismo y por tanto su resistencia. Por otra parte. Si en el interior de una célula. en el momento en que aparezca un vapor de distinta naturaleza. a. en el interior de la célula. Límite de detección de algunos detectores. por haber variado la conductividad térmica del gas. Para poder utilizar adecuadamente el principio físico antes descrito. ------------------------------------------------------------------------------------------------------Detector Sensibilidad -------------------------------------------------------------------------------------------------------Conductividad térmica 10-5 Sección transversal 10-6 Ionización de llama 10-11 Ionización de argón 10-12 Captura electrónica 10-14 Ionización llama alcalina 3x10-15 Fotométrico de llama 2x10-12 para azufre 1. a los que se utilizan en el diseño de detectores de conductividad térmica en la actualidad. hay el elemento caliente (filamento o termistor) calentado eléctricamente y por dicha célula circula a flujo constante un gas puro. junto con el gas.

72 . a. El conjunto constituye el transductor o detector y la llama es propiamente el sensor. constituye un transductor de elevada sensibilidad. La llama de hidrógeno aire genera un medioionizante de gran eficacia para las sustancias orgánicas y. se debe a la presencia de iones H3O+ acompañado de trazas de iones NO+ y NH4+. b. fuente de tensión y amplificador de señal).3 Detector de Ionización de LLama Una llama de hidrógeno y aire da lugar a una corriente de ionización muy débil. Los voltajes aplicados a los electrodos oscilan entre 80 y 250 V. pero capaz de ser puesta de manifiesto mediante un diseño electrónico adecuado.12 Esquema simplificado de un detector de conductividad térmica 2. La Figura 2. Al aparecer en la llama una sustancia extraña se dará una variación en la corriente de fondo debida a la aparición de nuevas especies iónicas o. siempre que el compuesto orgánico contenga unidades C-H en su molécula.4.5. La corriente de ionización de la llama de hidrógeno aire. es un esquema simplificado de un detector de llama hidrógeno. La aparición de una sustancia orgánica en la llama de hidrógeno aire provoca un fuerte aumento de la corriente de ionización. Fundamento Físico. Esta corriente de fondo. modificación de las que había. un sensor que con los complementos electrónicos adecuados. por tanto. La resistencia R tiene como misión el dar lugar a una caída de voltaje. en muchos aparatos se emplea incluso una batería. incluso. se establece al someter la llama a una diferencia de potencial. en ausencia de cualquier sustancia.13.2. La fuente de tensión continua debe ser perfectamente estable. Esquema básico: El detector de llama de hidrógeno tiene dos partes fundamentales: El sistema para producir una llama adecuada y la parte electrónica (electrodos filiformes. proporcional a la corriente ionización.Figura 2.

entre 10-7 a 10-12 amperios. un electrómetro. El amplificador de corriente continua es.5. aire y demás gases inorgánicos. a través de los electrodos. provocando una disminución de la intensidad de la corriente que circula por él. 73 .4. pero es insensible al agua. El voltaje a la salida del electrómetro es la señal que ofrece este transductor. Figura 2.2. donde da lugar a una caída de tensión IiR que es amplificada mediante el electrómetro. El detector de ionización por llama es sensible a la mayoría de los compuestos orgánicos. Una sustancia orgánica en la llama produce una corriente de ionización Ii que. llega a la resistencia R.4 Detector de Captura Electrónica Como su nombre lo indica. en realidad. Es ideal para análisis en que no se desee registrar el agua o gases inertes como en el caso de las bebidas alcohólicas. Este sistema de detección se utiliza cuando se desea conseguir una elevada sensibilidad y selectividad con compuestos halogenados. los compuestos que entran en el detector capturan electrones. El efecto es similar al de la absorción de cuántos de luz por las sustancias coloreadas y sigue una ecuación del tipo de la Ley de Beer.Esta resistencia es la resistencia de entrada al amplificador y su magnitud es de 1012 ohmios.13 Esquema simplificado de un detector de ionización de llama. 2. de fósforo o nitrogenados. pues las corrientes de ionización son muy pequeñas.

un filtro de paso de banda estrecho (394 nm para azufre.5. los resultados obtenidos serían erróneos.2. La figura 2. son captados por derivados halogenados y por compuestos de nitrógeno y fósforo. como portadores. que. Muchos compuestos. Como fuentes de electrones o rayos gamma se emplea tritio. es el primer detector espectroscópico económico desarrollado para determinar la pareja de azufre y fósforo contenidos en diferentes compuestos orgánicos.Figura 2. 526 nm para fósforo). en la señal del detector. como parafinas o hidrocarburos sencillos. son prácticamente transparentes a los electrones.966. sin embargo. Hidrógeno y nitrógeno son los gases que presentan un comportamiento más satisfactorio. El tritio que es un gas. En este caso se producirá un cambio abrupto en electrones que alcanzan el colector y. hay una emisión característica de luz a las longitudes de onda 74 . un espejo reflexivo. se encuentra absorbido saturando un hilo de tántalo. por tanto. Un quemador de chorro. y un fototubo multiplicador. Cuando se utilice hidrógeno como gas portador hay que tener en cuenta la posibilidad de que reaccione con los componentes de la muestra.15 muestra una representación esquemática de sus partes esenciales. En este caso. con este detector. actúan de la misma manera que un detector de ionización de argón. Fundamento físico de operación: Cuando una sustancia contiene fósforo o azufre y es llevada al quemador en una llama rica en hidrógeno.14 Esquema de un detector de captura electrónica. 2. lo cual es la primera razón de su popularidad como un detector específico que requiere especial consideración y atención para su distinción por el analista. b. Descripción: El detector fotométrico de llama ha recibido considerable atención desde su introducción en 1.5 Detector Fotométrico de LLama (DFLL) a. Los rayos gamma o electrones son transversales al gas que fluye de la columna. Los gases nobles no son adecuados porque se ionizan.4.

La luz producida por encima de la llama es aprovechada por la posición que Figura 2.15 Esquema de un detector fotométrico de llama FPD ocupa el detector. El máximo rendimiento es obtenido llevando la señal hacia un electrómetro. Se trata de un sistema que puede responder selectivamente a los compuestos orgánicos que poseen grupos funcionales que contengan nitrógeno o fósforo.6 Detector NPD El detector NPD pertenece a la familia de detectores de ionización y dentro de éstos al grupo de los detectores selectivos. ésta se puede definir en dos aspectos. fármacos. La luz procedente de esta área es recolectada por un espejo.5. luego pasa por el filtro apropiado y es monitoreada por el fotomultiplicador. El principal campo de aplicación de éste detector es el análisis de compuestos con actividad biológica (pesticidas. Se ha utilizado para el análisis de contaminantes del aire y del agua como los pesticidas y los hidrocarburos. 2.4. Se trata de un detector muy sensible y la obtención de buenos resultados esta muy afectada por la correcta manipulación del sistema. etc) en matrices complejas donde el uso de un detector selectivo evita el problema de interferencia de otros compuestos. Por un lado el módulo amplificador del detector NPD puede actuar también como electrómetro del detector FID de forma que un equipo configurado con estos dos detectores únicamente necesitará el módulo amplificador para NPD. Una característica del detector NPD es su compatibilidad con el detector FID. 75 .2.de 526 y 394 nm respectivamente. Comúnmente se aplica al fototubo una diferencia de potencial de 750 V de corriente directa.

los factores de corrección para análisis cuantitativos son casi constantes para sustancias similares -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Problemas: contaminación. -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Linealidad: Rango de linealidad muy bajo. El mecanismo de formación de estos iones y por lo tanto la selectividad es un hecho que aún hoy suscita una controversia. Li nealidad: Buena. Ionización por llama de H2 USOS: Análisis de alta sensibilidad. (Bebidas alcohólicas). Esta está formada por sales alcalinas depositadas sobre una matriz de sílice.8. dependiente de la concentración de muestra en el gas de arrastre. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Problemas: Contaminación. -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Sensibilidad: Alta. La corriente iónica de fondo aumenta bruscamente con la presencia de compuestos nitrogenados o fosforados que favorecen la formación de estos iones. particularmente empleado en análisis de gases inorgánicos. excepto para gases inorgánicos y agua. hidrocarburos.Tabla 2. Principio de funcionamiento: Su funcionamiento se fundamenta en la recolección de iones negativos que se producen en el entorno de una perla alcalina termostatizada a alta temperatura sobre la cual esta incidiendo una corriente de hidrógeno mezclada con el gas portador eluído de la columna y otra de aire. Detectores. Captura de electrones USOS: Análisis de pesticidas y productos halogenados. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Conductividad Térmica Usos: Universal. difícil limpiar. 76 . -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Sensibilidad: Muy alta para algunos compuestos. en particular los halogenados. -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Linealidad: Buena. --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Sensibilidad: Moderada. pero necesita de factores de corrección para cálculos cuantitativos. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- a. agua. Se especula con un mecanismo catalítico por parte de la superficie de la perla. el conjunto esta soportado por un hilo de platino que a su vez actúa de elemento controlador de temperatura de la perla. análisis en que no se desee registrar el agua o gases inertes. ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------problemas: Puede quemarse por exceso de aire u oxígeno en la muestra.

16 esquema de un detector NPD 2. La amplificación de la corriente eléctrica detectada por parte de un módulo electrónico nos da la señal exterior sobre la cual se conectará el sistema de tratamiento de datos. ésta tiene una actividad que irá disminuyendo y es un elemento fungible que se debe reemplazar en el momento que no consiga la sensibilidad adecuada.4. Como cada soluto sufre una fragmentación característica a iones más pequeños. Las dos variables que inciden fundamentalmente sobre el nivel de respuesta obtenido son el caudal de hidrógeno aportado y la temperatura de la perla.5. Figura 2. En el CG-EM. En la cámara de ionización todas las moléculas. Dado el fenómeno catalítico que ocurre en la superficie de la perla. Como detector de cromatografía de gases. su espectro de masas de intensidad de ión en función de la relación masa-carga proporciona información cualitativa que puede utilizarse para identificar el soluto. los solutos que eluyen de la columna pasan directamente a la cámara de ionización de un espectrómetro de masas. (resto del gas portador. disolvente y solutos ) se ionizan y los iones se separan según su relación masa-carga.7 Detector de Espectrometría de Masas La combinación de la cromatografía de gases acoplada con espectrometría de masas se conoce por las siglas GC-MS en la actualidad muchas compañías fabrican estos instrumentos con este potente sistema de detección.La colección de los iones formados se produce al igual que en otros detectores iónicos (FID) por la aplicación de un voltaje sobre la superficie de la perla que desplaza los iones hacia un elemento colector. la corriente iónica total de todos los iones que llegan al detector 77 . Ambos se deben conjugar adecuadamente para obtener una respuesta satisfactoria.2. de forma tal que la mayor parte del gas portador se elimina.

alcanfor (tr=8. proceso denominado control selectivo de iones (SIM). 2) bis(2-cloroetil)éter.17 (a).81 min). Figura 2.17 b). (b) Registro cromatográfico utilizando un control selectivo de iones SIM para las relaciones masa carga 93 y 95. con una respuesta lineal que abarca cinco órdenes de magnitud. Los límites de detección del espectrómetro de masas son excelentes.51 min) y metanol (tr=8. en general de 25 fg a 100 pg. que son los iones característicos de los monoterpenos α pineno (tr=5. Por ejemplo estos procedimientos han permitido identificar los componentes que causan el olor y sabor en los alimentos. Cromatograma iónico total de una muestra de 10 compuestos. β pineno (tr=5. 78 .17 a).17). 4) N-nitrosodi-n-propilamina y 5) bis(2cloroetoxi)metano.18 Cromatograma característico de la corriente iones total de una mezcla de cinco componentes: 1) Nnitrosodimetilamina. identificar contaminantes del agua.suele usarse para obtener el cromatograma de masas (observar figura 2. La selectividad se logra controlando solo determinadas relaciones masa-carga (observar figura 2. Figura 2. 3) bis(2-cloroisopropil)éter.087 min). llevar a cabo diagnósticos médicos basados en los componentes del aliento y estudios sobre metabolitos de fármacos.93 min) Los instrumentos para cromatografía de masas CG-EM se utilizan para identificar miles de componentes presentes en sistemas naturales y biológicos (observar figura 2.

b. sin la condición de ser volátiles.En cromatografía líquida hay una interacción selectiva de la muestra con dos fases.4. móvil y estacionaria. Debido a su rápido desarrollo en los últimos años. En contraste. Solo el 15 o 20% de los compuestos orgánicos conocidos. La cromatografía de gases está limitada a muestras volátiles.2. mientras que la HPLC es aplicable a sustancias de peso molecular medio o grande. tiempos de análisis cortos. la cromatografía de gases se combina con otras técnicas selectivas como la espectroscopía y la electroquímica para generar poderosas herramientas con las que se pueden separar e identificar compuestos en muestras complejas mediante el acoplamiento del cromatografo de gases con espectroscopía magnética nuclear y métodos electroanalíticos. . orgánicos e inorgánicos. y por esto hace posible el análisis de compuestos de alto peso molecular. 2. 79 .8 Detector Espectrofotométrico Infrarrojo de transformada de Fourier (IR-TF) En la cromatografía de gases acoplada con espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier. Esta en cuanto a su utilidad y fenómeno físico de separación: a. En general por HPLC se pueden resolver problemas de separación de compuestos que normalmente no se separan por cromatografía de gases debido a : . y a todas aquellas sustancias susceptibles de alterarse lumínica o térmicamente.5. la HPLC presenta hoy un procedimiento eficaz del análisis moderno.En cromatografía líquida hay una mayor variedad de fases estacionarias y muchas fases móviles. En cromatografía de gas la fase móvil es un gas inerte. pueden separarse por cromatografía de gases sin previa modificación química.4. La diferencia básica entre la HPLC y la CG. Las múltiples reflexiones de la radiación a medida que se transmite a través de la celda aumentan la longitud del paso de luz ( b ) a través de la muestra por lo cual se produce un aumento en la absorbancia según la ley de Beer expresada como A  bC haciéndose más fácil la detección para la obtención del espectro IR. 2.5. abreviada como (CG-IR-FT). En un principio HPLC Significaba "High pressure liquid cromatography ". cromatografía líquida de alta resolución denominada también con la sigla CLAR. pero hoy se entiende más bien como "High performance liquid cromatography".2. el eluyente de columna pasa a través de una celda óptica fabricada con tubo pirex de 10 a 40 cm y con un diámetro interno de 1 a 3 mm.5 Cromatografía de Gases versus Cromatografía de Alta Resolución (HPLC). así como las condiciones instrumentales posibilitan las siguientes cualidades: Selectividad óptima. La superficie interior de la celda está revestida por una capa reflectante de oro. la cromatografía líquida requiere que la muestra sea soluble en la fase móvil. iónicos o covalentes.2. La calidad de los materiales de relleno de columnas y de columnas preparadas.2. c.9 Otros Detectores: Con frecuencia. gran sensibilidad de detección.

pero cuando la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar se denomina cromatografía en fase inversa como los pesticidas y los hidrocarburos. cuando se utiliza una mezcla de solventes y se varia su composición porcentual se denomina por gradiente. columna permanente y reutilizable de alta eficiencia. . alta sensibilidad. Adicionalmente los aparatos cuentan con otros accesorios que simplifican el proceso y aumentan la 80 . Figura 2. la columna para realizar la separación. visualización gráfica de resultados en forma de cromatograma. y un detector que indica la secuencia como eluyen los componentes.19 equipo para cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) En común tienen. (observar figura 2.. sistema de termostatización de la columna. aunque con finalidad distinta. detección continua.En cromatografía líquida cuando en el proceso de separación se usa un solo solvente se denomina isocrática. un sistema de inyección para la aplicación de muestras. El inyector en gases es una cámara de vaporización y en líquidos es un simple introductor de muestras.19) es similar al de un cromatógrafo de gases. por una bomba impulsora de líquido. En HPLC normalmente se trabaja a temperatura ambiente.Las bajas temperaturas favorecen la separación debido a que las interacciones moleculares son más efectivas.Cuando en cromatografía gas líquido en el proceso se utiliza una temperatura constante se denomina isotérmica y cuando se programan los rangos de temperatura es una cromatografía con programación lineal de temperatura o rampas. con la diferencia de sustituir el cilindro de gas a presión. En cuanto a la instrumentación el esquema de un cromatógrafo líquido. El cromatógrafo Líquido tiene como componente básicos una bomba o sistema de bombas para impulsar el solvente o eluente. Posibilidades de integración etc. circulación continua de la fase móvil. En cromatografía HPLC cuando la fase estacionaria es no polar y la móvil polar se denomina cromatografía en fase normal. .

totalmente porosos-Licsob. Conociendo las ventajas y desventajas del tipo de bomba. polímeros. porosidad y superficie específica por la otra. sin embargo las alteraciones del flujo por cambios de viscosidad causan problemas en el análisis.eficiencia del mismo. electroquímicos. superficialmente porosos-perisorb. Básicamente se tienen dos tipos de bombas. facilitan la reproducibilidad de los volúmenes de retención del análisis. la columna. se orientan en los criterios de calidad necesarios para separaciones óptimas y abarca por lo tanto una gama de productos muy diversos y que se complementan entre sí: -Materiales de relleno de forma irregular. Y para alcanzar ese lugar que ocupa hoy. etc. por una parte. Se cuenta también con rellenos a base de óxido de aluminio. muestreador automático. podrá obtener los mejores resultados conociendo los diferentes materiales y relacionando la estructura química de la partícula. Los programas de productos para el relleno de columnas HPLC. de ionización de llama etc. La principal ventaja de la primera es su sencillez y libertad en las pulsaciones lo cual produce una línea base muy uniforme. Entre los accesorios se cuentan los colectores de fracciones. la de presión constante y la de flujo constante. El analista que ha de trabajar con HPLC. totalmente porosos-Lichrospher. de absorción térmica. -Materiales de relleno de forma esférica. prescindiendo de cambios en la viscosidad y de posibles obstrucciones en la columna. Los detectores más utilizados son fundamentalmente dos. Las bombas de flujo constante. química. farmacia. integrador. se cuenta con una gran ayuda para realizar la cromatografía. La bomba se considera después de la columna el componente más importante en HPLC. Existen otros tales como los de fluorescencia. sistemas para programación de gradientes. especialmente adecuado para separaciones que requieren un absorbente básico. la molécula y el solvente. como técnica analítica de extraordinario desarrollo. los ultravioleta (ya sea de longitud de onda fija o variable) y los de índice de refracción. elemento central del sistema. La HPLC. -Materiales de relleno de forma esférica. Estos materiales de relleno de columnas están disponibles como silicagel sin modificar y modificados químicamente con grupos orgánicos diferentes y por tanto con comportamiento de selectividad. bioquímica. se debe en parte a los diversos campos de aplicación en ambiental. registrador gráfico. Los disolventes para HPLC exigen ciertos criterios de calidad entre los cuales se deben considerar los siguientes: 81 . ha sido la parte de mayor investigación y desarrollo. con el diámetro. que son. computador etc. hornos de termostatización.

de ácido libre y de posibles estabilizadores.Alto grado de pureza. 82 . La pureza óptica es de gran importancia cuando se utiliza detector ultravioleta. componentes que influyen en la polaridad del disolvente tales como contenido de agua. Interesa también la viscosidad que tiene relación con la velocidad de elución y presión previa en la columna. igualmente el índice de refracción cuando en la detección se hace uso de este parámetro.

identificando cada uno de sus componentes. la columna. ANALISIS CROMATOGRAFICO8 OBJETIVO GENERAL Presentar al estudiante las consideraciones generales. el soporte. 2. hacer uso adecuado del índice de Kovats y sus relaciones con otros parámetros físicos. amplificación y cantidad de muestra a inyectar en un análisis por cromatografía Gas-líquido. Seleccionar la columna. 8 Materiales recopilados y organizados por el profesor Federmán Castro Eusse para la asignatura análisis instrumental II de los programas en Química Industrial y Tecnología Química de la UTP. Reconocer las aplicaciones y limitaciones de la cromatografía Gas-líquido. bloque de inyección. detector. 3. Aplicar las diferentes técnicas para cuantificación de los componentes de una mezcla. temperaturas del detector.UNIDAD 3 3. 5. 4. gas portador. Fase líquida. Analizar cualitativamente una mezcla. velocidad de flujo del gas portador. parámetros de control y relaciones que se deben tener en cuenta en la separación Y realización de un análisis tanto cualitativo como cuantitativo por cromatografía Gas-líquido. 83 . OBJETIVOS ESPECIFICOS Terminada la unidad el estudiante será capaz de: 1. Interpretar la información reportada por el cromatograma obtenido.

amplificación. éstas deben recibir un tratamiento preliminar que puede consistir en una separación. temperatura de la columna.2.líquido se debe seguir la siguiente secuencia: 3. esterificación. Ver instrucción 2. 3. puntos de ebullición.3. si se usa un registrador. uso del espacio de cabeza.1. y en el eje de abscisas el tiempo o el volumen de retención.4.4. 3. soporte. El cromatograma depende de variables tales como: velocidad de la carta. cantidad de muestra inyectada. polaridad.1. Toda información que se pueda obtener sobre la muestra será de gran utilidad. pesos moleculares. La forma ideal del pico es una campana de Gauss cuya área bajo la curva o la altura h del compuesto es proporcional a la cantidad o concentración permitiendo su cuantificación. presión. 84 .1. Calibración y operación del equipo de acuerdo con las instrucciones y normas de seguridad recomendadas por el fabricante según la marca y modelo del cromatógrafo disponible.1 Página 43 3.6. acilación o un silanizado. por tanto el Químico Analista debe tener los criterios suficientes que le permitan definir si la cromatografía le es útil en el análisis a realizar y que tipo de cromatografía es la más adecuada. Inyección de la Muestra. Los posibles compuestos constituyentes de la muestra.5. es un parámetro útil para su cualificación. gas portador. para definir si la muestra requiere tratamiento previo para su conservación o análisis. En un análisis por cromatografía de gas .2. temperatura del inyector. extracción en fase sólida.3. permiten suponer: grupos funcionales presentes.1 Muestra La diversidad de muestras que llegan al laboratorio con fines analíticos es muy variada y las determinaciones requeridas pueden ser muy diferentes de una a otra. Una gran cantidad de muestras no pueden inyectarse al cromatógrafo tal como se presentan. fase líquida estacionaria.1. El cromatograma es una representación gráfica de los picos de elución de una mezcla de diferentes compuestos. velocidad flujo. El tiempo o volumen de retención gastado para salir el pico. se debe conocer su procedencia lo cual da una idea general sobre los posibles compuestos que la constituyen. detector. etc. Selección de Condiciones para el Análisis.1. pirólisis. Interpretación del Cromatograma Obtenido. amplificación y cantidad de muestra para realizar la primera inyección. Condiciones Instrumentales. Tratamiento de la Muestra. desecado. temperatura. medido en el eje de abscisas. que son propiedades necesarias para definir: tipo de columna. en un plano de coordenadas en cuyo eje de ordenadas se encuentra la señal del detector. velocidad del gas. Con la cromatografía de gas – liquido se analizan mezclas de sustancias que se puedan volatilizar entre la temperatura ambiente y los 400°C. presión de vapor. 3.1. poder de resolución de la columna. Indagar Sobre la Muestra. 3.1.

85 . Presión del gas de arrastre En una columna cromatográfica para gas las partículas de empaquetamiento ofrecen una resistencia al flujo del gas de arrastre debido a la viscosidad finita del gas por lo cual hay un gradiente de presión a lo largo de la longitud de la columna. (Nota: es conveniente anotar que la cromatografía a alta presión resulta ser más eficiente y dar mejores resultados por este motivo). Con tal propósito se deben considerar los siguientes factores que afectan los picos: 1. Una columna más larga c. ¿Cuál de los siguientes factores no ayuda a minimizar el gradiente de velocidad? a. una baja velocidad de flujo y columnas cortas. siendo necesario inyectar cantidades pequeñas de muestra. Como resultado de estos factores. Un empaquetamiento fino b. No siempre sucede que el resultado de una primera inyección sea un cromatograma perfecto. Temperatura Un cambio en la temperatura afecta: a) El coeficiente de partición. por lo cual es necesario interpretarlo. Una rata de flujo lenta del gas de arrastre El gradiente de velocidad puede minimizarse usando un empaquetamiento más suave. por lo tanto una columna más larga no sería útil para este propósito. se puede demostrar que los tiempos de retención relativos son más grandes a bajas temperaturas que a altas temperaturas y así la reducción en la temperatura aumenta la eficiencia de la columna.El cromatograma nos presenta la información sobre el comportamiento termodinámica de los compuestos dentro de la columna y de su análisis e interpretación depende la información para realizar un buen análisis cualitativo y cuantitativo. Por otro lado el uso de las bajas temperaturas resulta en un tiempo de análisis mayor y fácilmente se sobrecarga la columna. variar condiciones para optimizarlo y hacerlo útil para los fines analíticos. (Respuesta b). Así el gradiente de velocidad es inevitable cuando hay un gradiente de presión en la columna. b) La rata de flujo volumétrico para una relación dada de Pi/Po. Este gradiente no tendrá efecto sobre el volumen de retención pero si sobre el tiempo de retención debido al hecho de que el gas es compresible por tanto la rata volumétrica de flujo es más grande a la salida que a la entrada. Se ha demostrado que una relación de presión muy grande entre la entrada y salida de la columna (Pi/Po) tiene un efecto adverso en el trabajo de la columna y lo más deseable para el diseño de las columnas es que la relación de presiones se aproxime a la unidad. 2. Esta es la razón por la cual las columnas trabajan mejor con presiones en exceso de atmósferas que bajo vacío.

¿Cuál de los siguientes factores se debe adoptar para efectuar la separación? a. depende de un balance de estos factores para obtener los resultados deseados.La escogencia de la temperatura de operación adecuada.1 resume los principales factores que afectan el tiempo de retención para el análisis de un Cromatograma. Por lo tanto. 86 . Habrá otras fases estacionarias selectivas que podrán ser mejores para separar el m-xilano y el p-xilano (ej. Temperatura de la columna Alta Alta Baja Baja 6. la eficiencia de la columna disminuye. Rata volumétrica de flujo de gas de arrastre (velocidad) Concentración de la fase estacionaria sobre el material soporte Baja Alta Alta 3. Disminuir la temperatura de la columna a 100C c. FACTOR TIEMPO DE RETENCION Corto Largo Alta Baja Baja -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. hay que disminuir la temperatura. Se debe recordar que la eficiencia de la columna como regla es: Conforme la temperatura aumenta. Los tiempos de retención relativos son más grandes a más bajas temperaturas y la eficiencia de la columna aumenta. No se obtuvo separación alguna. Aumentar la temperatura de la columna alrededor de 140C b. La rata de flujo del gas (velocidad) en la columna para una determinada relación (Pi/Po). Solubilidad del componente en la fase estacionaria 4. Puesto que en este caso se pueden ignorar los efectos de polaridad. Longitud de la columna Corta Larga --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------La Tabla No. Volatilidad 5. Un cambio en la temperatura afecta: a. El coeficiente de partición. 3. --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------No. Hay necesidad en este caso de aumentar la eficiencia de la columna. 2. En un análisis cromatográfico de una mezcla de m-xileno (p. Cambiar la fase estacionaria. entonces. Sin embargo una vez que la fase estacionaria ha sido escogida. cresilfosfato).Eb 139C) y p-xileno (p. bajando la temperatura a 100C se efectúa la separación.Eb 138C) llevado a cabo usando una fase estacionaria semipolar: Di-nonil-ftalato a 120C. (Respuesta b). b. la fase se deberá cambiar solamente si después de hacer los ensayos a bajas temperaturas no ha habido separación.

pero lo importante es que el tiempo de análisis sería muy corto de todas maneras.Estos factores se deben considerar cuidadosamente. Se podría pensar en aumentar la longitud de la columna. 87 . Figura 3. rápidamente. c. el cual está cerca del punto de inyección. no se señala el punto de inyección éste se puede identificar observando que los picos normalmente salen de izquierda a derecha y el primer pico es el de punta más aguda. y la temperatura de la columna ha sido considerablemente más alta que la temperatura ambiente. d. El diseño se ha hecho para aumentar la precisión de los resultados.1) obtenido de una primera inyección. Después de observar el cromatograma de la primera inyección puede ser necesario alterar algunos o todo el conjunto de condiciones varias veces. El tiempo del análisis se alargaría. He aquí un cromatograma (observar Figura 3. Los picos están sin resolver y aparecen en un tiempo muy corto después de la inyección. hasta obtener un resultado satisfactorio. Pero en C. Hay que pensar en los inconvenientes de hacer la columna más larga. etc. Usualmente alguna información acerca de la muestra es suministrada antes del análisis y a partir de esto se pueden escoger las condiciones instrumentales.L. b. lo cual mejoraría la resolución. Cuando en un cromatograma.1 Cromatograma con baja resolución ¿Cuál de los siguientes factores se debe cambiar en primer lugar para mejorar considerablemente la resolución de los picos en el cromatograma? a. Reducir la presión del gas de arrastre Reducir la temperatura de la columna Cambiar la fase estacionaria Incrementar la longitud de la columna.G. la fijación en el horno.

si es que la presión está por encima de su valor original óptimo. Usar una columna con una fase estacionaria diferente. El tiempo de análisis fue razonable.2. qué seria lo aconsejable? a.Hay muchas más formas convenientes de producir una considerable mejoría en la resolución. b. para incrementar la separación de los picos. Baje la rata volumétrica de flujo (velocidad) en la columna para una relación dada de Pi/Po. no ayudará a mejorar la resolución en este caso. c. Figura 3. Además puesto que el cromatograma muestra que los picos son distintos visiblemente. reduciendo la presión del gas de arrastre. Una reducción en la presión del gas de arrastre puede mejorar ligeramente la resolución. El cambio de fase estacionaria puede mejorar la resolución teniendo en cuenta la afinidad y polaridad antes de hacer la columna. Una equivocación en la escogencia de la fase estacionaria se traduce en un fracaso para separar los componentes de interés. 88 . Ahora tenemos otro caso. Lo mejor es cambiar la temperatura de la columna (respuesta b) puesto que esta reducción de la temperatura de la columna (horno) hará que: a. b. El cambiar la fase estacionaria implica un trabajo mayor que el cambio de la columna con todos sus inconvenientes. pero la resolución pobre. Reducir la presión del gas de arrastre. y es un cromatograma que se ha obtenido de una inyección y se ilustra en la Figura 3. Es la selectividad en el proceso cromatográfico lo que falla. Para mejorar la resolución en este caso. indica que la fase estacionaria lo está separando. Reducir la temperatura de la columna.2 Cromatograma con pobre resolución La resolución es pobre y los picos están muy confusos aunque el tiempo de análisis y los tiempos de retención son razonables. Cambie el coeficiente de partición. Una causa de una resolución muy pobre es la falta de selectividad en el proceso cromatográfico.

89 . Desafortunadamente estos pasos prolongan el tiempo de análisis que de por sí ya es largo. puesto que conocemos el área de cada pico que representa la cantidad de cada componente particular en la mezcla. un mejoramiento en la eficiencia de la columna ayudará a este efecto. Usar una columna conteniendo menor fase estacionaria.3 Cromatograma con resolución insuficiente Para el caso en descripción. Esto se puede lograr bajando la temperatura del horno y encontrando una nueva rata de flujo de gas por ensayo y error (haciendo ensayos de exceso y defecto en la presión del gas). Usar más muestra en la inyección c. Si se utiliza menos fase estacionaria el efecto sería igual que inyectar más muestra en la columna o reducir la longitud de la misma. Consideremos el cromatograma presentado en la Figura 3. La resolución todavía no es suficiente para dar completamente una separación de los dos picos mayores. Como es la selectividad la que falla.3. Una columna más larga mejoraría las cosas aún más. Se debe tener en cuenta la afinidad química y los efectos de polaridad en la escogencia de la columna (respuesta c). y no el tiempo de análisis.Una reducción en la temperatura de la columna simplemente aumentaría el tiempo del análisis y se ha dicho que es razonable. pero antes consideremos el caso de la fase estacionaria. el tamaño de la muestra es proporcional a la raíz cuadrada de la longitud de la columna. Se puede demostrar que previendo que la columna no esté sobrecargada. cuál sería una alternativa para mejorar la resolución? a. se puede pensar en la cantidad inyectada. Usar menos muestra en la inyección b. Como el área del pico es proporcional a la cantidad del componente. el error está en la fase estacionaria. Figura 3. Se ha dicho que la resolución no es buena y hay que mejorarla.

Cómo podría rectificarse la descomposición térmica de la muestra? a. proporcionalmente se requiere una mayor longitud de la columna. Una columna sobre cargada. Esto significa que los componentes estarán en contacto con la columna caliente durante un tiempo menor. Si se piensa que una disminución en la cantidad de fase estacionaria rectificaría la descomposición térmica de la muestra.4 Cromatograma con picos asimétricos Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Por descomposición térmica de la muestra en la columna. Por lo tanto. Otras causas de asimetría pueden ser: 1. Algunas veces los picos en el primer cromatograma aparecen en forma asimétrica como en la Figura 3. 2. una reducción en la cantidad inyectada reducirá el área de los picos y la resolución se mejorará (Respuesta a). pero la descomposición térmica podría presentarse aún. para que los componentes reduzcan su contacto entre la muestra y la columna caliente.Para una resolución determinada. y también la asimetría puede ser tal que la parte posterior del pico es más inclinada que la parte anterior. Pensando aumentar la rata volumétrica del gas de arrastre (velocidad del gas). Figura 3. Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria. Si se inyecta el doble de cantidad de muestra. ayudará a rectificar la asimetría y esta acción resultará en tiempos de elución más cortos para los componentes. b. c. Bajando la temperatura del horno. ello ayudará por supuesto para dar como resultado tiempos de elución más cortos. Aumentando la rata volumétrica (velocidad de flujo) del gas de arrastre. Desafortunadamente la descomposición térmica de la muestra podría ocurrir en corto tiempo. 90 .4. la cual se puede corregir inyectando menos muestra.

Por descomposición térmica de la muestra en la columna.Aumentando la rata volumétrica (velocidad) del gas de arrastre? . Una columna sobrecargada. e. y/o usarse una columna conteniendo más material inerte de soporte.Al bajar la temperatura del horno. esto rectificará la asimetría del pico causado por descomposición térmica de la muestra. Uso de fase estacionaria incorrecta (equivocada) c. y puede con frecuencia ser eliminado por uso de un eliminador de cola. (Nota: También la temperatura del bloque de inyección deberá reducirse).Bajando la temperatura de la columna? . (Respuesta a). La causa de la cola puede ser: a. La asimetría de los picos no deberá confundirse con la cola de los picos como en la Figura 3.Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria? 91 . Otras causas de asimetría pueden ser: d. Inyección de mucha muestra. Temperatura muy alta b. lo cual se puede corregir inyectando menos muestra. Un incremento en la rata volumétrica del flujo del gas de arrastre (velocidad) y una reducción en la cantidad de fase estacionaria alrededor de 3% en peso ayudarán juntos a disminuir los tiempos de elución.5 Cromatograma con colas de elución Esto puede interferir con el análisis. Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. La descomposición térmica de la muestra se puede rectificar: .5 Figura 3.

el cromatograma será ideal para todos los propósitos.6 Cromatograma con óptima resolución Si podemos acortar estos tiempos de retención. Veamos ahora el siguiente cromatograma. Las colas pueden resultar de una muy baja temperatura causando indebida condensación de la muestra. b. el tiempo de retención de cada pico resulta ser más grande que lo necesario. o esto podría causarse por una muestra fuertemente polar. Aunque el uso de una columna más corta tiene sus ventajas. Si se piensa en que la cola es causada por temperatura muy alta. Si la temperatura fuera alta lo suficiente para causar la descomposición de la muestra. No se debe confundir las colas con la asimetría. 92 . Figura 3. y sobre si la resolución es adecuada en este cromatograma. para dar la adecuada resolución. El uso de una fase estacionaria equivocada es una de las causas de que se presenten las colas (Respuesta b).Ninguna de las anteriores? Si se piensa en la inyección de mucha muestra. Columnas fuertemente polares pueden ser su causa. el cambio de una columna consume tiempo. Cual será la forma más rápida de acortar los tiempos de retención para reducir el tiempo del análisis. a. Aumentar la rata volumétrica de flujo de gas de arrastre solamente. en realidad bajando la temperatura de la columna se logra eliminar la cola.6 Los picos están bien separados. Figura 3. entonces la asimetría de los picos podría producirse en el cromatograma.. produciéndose "auto asociación" por puentes de Hidrógeno. se puede pensar en su efecto sobre la forma de los picos. Aumentar la temperatura de la columna solamente. c. Aumentar la temperatura de la columna y la rata de volumétrica de flujo de gas de arrastre (velocidad).

se pueden recolectar los compuestos y tomar espectros de masas (E. Optimización del cromatograma mediante variación de las condiciones iniciales. 3.1. Se confirma su presencia si da un pico más grande en igual tiempo de retención. Adicionando un estándar para hacer el análisis según los tiempos de retención relativos. 3.1. No debe reaccionar con ninguno de los componentes de la mezcla.1. si los tiempos de retención coinciden se asegura su presencia. para reproducirlas cuando se requieran. 3. Si no se dispone de los equipos de E.9. en igualdad de condiciones en la cual se tomo el cromatograma. 3. Para confirmar su presencia podemos agregar a la muestra problema una cantidad X del compuesto e inyectar igual cantidad de muestra en igualdad de condiciones al cromatograma anterior.7. Si esto no sucede debe salir un pico más o algún otro pico aumentado si el compuesto adicionado se encuentra en la mezcla.M.1. si su tiempo de retención coincide con el del compuesto en la muestra. Debe dar solamente un pico y éste no debe solapar o cubrir parcialmente ninguno de los picos de los componentes de la muestra.M.1.8.9. también se pueden acoplar estos equipos al cromatógrafo y hacer los análisis directamente. Identificar el compuesto o compuestos de interés en la muestra con base en los tiempos de retención de la siguiente forma: Inyectar el compuesto puro que sea de interés en la muestra.1. Si el detector no destruye la muestra. se deben variar las condiciones para hacer que el tiempo de retención cambie para los compuestos y repetir de nuevo la inyección o inyecciones de los compuestos presumiblemente presentes y que son de interés. o IR. 93 . 3.1. b. Ser miscible con la mezcla que se va a analizar. según ±  tr podemos concluir que se encuentra presente.9. si el cromatograma obtenido no es bueno para fines analíticos.) o infrarrojo (E. El estándar debe reunir los siguientes requisitos: a. Su tiempo de retención debe estar próximo al compuesto de la muestra que es de interés.3. Realizados los anteriores pasos. c.). d. el análisis cualitativo puede hacerse mediante la aplicación de diferentes técnicas: 3.IR.2.Respuesta b. Anotar o grabar en la memoria del computador las condiciones instrumentales con las cuales se obtuvieron resultados satisfactorios. Para tener mayor confiabilidad en el análisis.9. Análisis Cualitativo.

permite minimizar errores cometidos al hacer la inyección y colocar en funcionamiento el registrador o puesta en marcha del programa.9. se calcula el tiempo de retención relativos para el compuesto de interés. se pueden construir gráficas del logaritmo del tiempo de retención contra número de carbonos o contra puntos de ebullición. puesto que estos compuestos son químicamente inertes. luego en igualdad de condiciones se inyecta con el estándar el compuesto que se supone es de interés.4.tra trbtrs = ---------------trs . si corresponde se confirma la presencia del compuesto. Índice de kovats.tra trc . Para analizar series homólogas de Hidrocarburos. Kovats propuso un sistema de índices basado en los n-alcanos como sustancias de referencia.tra trctrs = ------------trs . Acción que debe ser simultánea. La relación de los tiempos de retención. se calcula de la siguiente ecuación:   LogRx  LogRz     z I  100n     LogRz  n  LogRz   Donde: Rx es el tiempo de retención de la sustancia desconocida X Rz es el tiempo de retención del alcano normal que tiene z átomos de Carbono 94 . calculando nuevamente el tiempo de retención relativo y comparando el tiempo de retención relativo con el de la muestra. También representa gran utilidad el uso del índice de Kovats. 3.1.5.1. El índice de Kovats.trb . 3.tra trctrs = Tiempo de retención del compuesto c con relación al estándar trbtrs = Tiempo de retención del compuesto b con relación al estándar tra = Tiempo de retención del aire Inyectada la muestra con el estándar.9. Para proporcionar un medio fácil de identificar un compuesto desconocido. solubles en las fases estacionarias comunes y son no polares.

5782   I  721 95 .21  6) =721   0.3222   =   0.3500   1002   6 = 100(1. R6 = 210 segundos R8 = 795 segundos Rx = 470 segundos n = 8-6 = 2 Z =6 Figura 3.7 Cromatograma ilustrativo del Índice de Kovats Entonces:   2. Se mezcla con hexano (C6H14) y con octano (C8H18) y se obtuvo el cromatograma de la Figura 3.Rz+n es el tiempo de retención de un alcano normal teniendo Z+n átomos de Carbón n es la diferencia de átomos de Carbono existente entre los alcanos normales (z+n)-z = n Ejemplo: Una sustancia X se supone que tiene 7 carbonos.9004  2.6721  2.7.3222   I  1002   6   2.

Si la fase estacionaria cambia el número del índice también cambia (existe un método para calcular I usando un monograma). los limites de cuantificación y el rango de linealidad de las gráficas de calibración son sumamente confiables y los reproducibles de los datos si se conservan las condiciones del análisis.h 96 . Conforme la fase estacionaria sea la misma. es de aclarar que 1l  10 6 L . entonces a partir del número de índice se puede ver en qué orden son elucidados los componentes. Relacionando las áreas de los picos: para medir las áreas se pueden emplear varios métodos: a.1.3222  1.10. presenta limites de detección muy bajos.8976   Para mantener el índice I como un número entero. con algunos detectores por el orden de 10 14 g . pentano (C5H12) y hexano (C6H14) fueron usados como estándares. Ahora se puede ver que el número de Kovats nos puede ayudar cuando se escoge un estándar internacional IUPAC. 3. C5=79 segundos. aquellos con el menor número de carbones son elucidados primero y los de mayor número de último. La cromatografía de gas líquido es una técnica que para el análisis cuantitativo presenta las siguiente ventajas: Se requiere cantidades de muestra muy pequeñas por el orden 10 7 L . Análisis Cuantitativo.9542  1. Los tiempos de retención fueron Rx=90 segundos C6=210 segundos.8). ¿Cuál es el valor calculado para el índice de retención? Respuesta: Según la ecuación de Kovats:   1. etc.10. La cantidad o concentración de los compuestos se puede calcular mediante diferentes técnicas: 3.1. Triangulación Se construye el triángulo correspondiente a cada pico trazando tangentes a los puntos de inflexión del pico y tomando la base como la intersección de esas tangentes con la línea base del cromatograma (observar la figura 3. y la mezcla sea inyectada al mismo tiempo. el índice se define como: I = 100 n Lo cual significa que para el metano I=100. La altura es medida desde la base al punto en el que se cruzan las tangentes.1. Se calcula la superficie de cada pico con la fórmula: b.8976   I  1001   5  513   2.Ejemplo: En un experimento similar al descrito. En el caso del ejemplo significa que para esa fase estacionaria el compuesto desconocido es elucidado entre pentano y hexano. etano I=200.

Altura por ancho de base a media altura c. de cada compuesto en la muestra con una exactitud del 97%. a. Triangulación b. Planimetría 97 .A = ------2 y se relaciona para obtener el % aproximado.

Integradores Existen integradores de diversos sistemas (electrónicos. Az = ---------2 2 2 Ax + Ay + Az + . de la precisión del trazado de las tangentes.. hz Ax = ----------. a bolillo y disco. Las relaciones matemáticas para determinar los porcentajes de cada componente se hacen de igual manera que en a. a voltaje) agregados al registrador del cromatógrafo.. cuando se presentan colas y bases poco netas en los mismos y así evitar errores.9a).x 100 At At At = área total =  áreas. Es necesario repetir varias veces el trazado y sacar promedio de las áreas. el nombre de los compuestos.Figura 3. el 98 . Consiste en medir el área de cada uno de los picos del cromatograma siguiendo los perímetros de los picos mediante un planímetro provisto de un dispositivo mecánico. An = At = 100% Ax Ay % x = ------.8 Métodos para medir las áreas de cada pico.x 100.. c.... Planimetría (Figura 3. Se puede aplicar este método para relacionar todos los picos del cromatograma.8 b) esta área así obtenida no es igual al área del triángulo pero si aproximado. La exactitud será razonable para picos netos y bien simétricos. La exactitud aplicando este método depende de la claridad de resolución del pico. bx . de manera que simultáneamente con el registro se obtiene la integración de cada pico (Figura 3. d. Las relaciones matemáticas para determinar la composición porcentual de la mezcla se hace de igual manera que en a. El integrador digital electrónico representa uno de los mayores avances tecnológicos incorporados al cromatógrafo para realizar la cuantificación de los compuestos. hy bz . Uno de los sistemas usados es el de bolillo y disco. El software del computador reporta automáticamente mediante previa programación. Ay = -----------. La exactitud depende de la sensibilidad del integrador y de la capacidad de registro y conteo. b.8 c). Tomando el área como la altura x ancho de base a media altura (Figura 3. El error es mayor para picos muy angostos. hx by . Con este dispositivo electrónico el método consiste en transformar la señal interna del detector en un voltaje que genera unas pulsaciones proporcionales al área de cada pico que es registrado. % y = -------.

de tal forma que para una mezcla de 3 compuestos a.X 100 = ------. La sumatoria de las alturas se hace igual al 100% de la mezcla y luego se hacen las relaciones matemáticas para determinar el % de cada compuesto. 3.3 Relacionando pesos (Figura 3. 1.9 b. 3.X 100 ha + hb + hc h 90 % a = -------.2 Relacionando alturas (Figura 3. b y c cuyas alturas son: para a=90mm.9 c.) Consiste en recortar y pesar cada pico en la balanza analítica. Esto puede evitarse tomando previamente una fotocopia. Para determinar el porcentaje de cada compuesto se hacen relaciones matemáticas similares a las anteriores pero en lugar de alturas se consideran los pesos.1.10. c=50mm la sumatoria de las alturas será igual a 250mm y el porcentaje de un compuesto como a está dado por: ha ha % a = ----------------. La exactitud del método depende de la homogeneidad del papel de registro y del seguimiento del trazo para obtener un recorte preciso de cada pico. simétricos. bien definidos y poseen ancho de base muy iguales. 99 . Se mide la altura de cada pico desde la base hasta la cúspide.X 100 = 36 250 Igual relación se aplica para los demás compuestos teniendo en cuenta sus alturas.tiempo de retención y el porcentaje de cada uno de ellos en la muestra si así se desea. b=110mm. Tiene la desventaja que se destruye el cromatograma. La sumatoria de los pesos se hace igual al 100% de la mezcla.) Se utiliza este método cuando los picos son angostos.10.

Pesos 100 . Corte del pico Figura 3. Integradores b. Alturas. Alturas c. C. Integradores.9 a. b.a.

Factor de Respuesta Es un método que permite cuantificar rápidamente un compuesto de interés en una mezcla.5 X 10-3 mg Fr 2000cm2/mg 2. mg de acetona =-------------.= 2.5. alturas o pesos para todos los compuestos. El factor de respuesta se determina inyectando en el cromatógrafo una cantidad conocida del compuesto de interés. en igualdad de condiciones en las cuales se inyectó la mezcla. Curva de Calibración. El factor de respuesta vendrá dado por la relación más conveniente entre uno de estos parámetros y el volumen o peso del compuesto inyectado y será igual a la altura o área o peso del pico del compuesto sobre el peso o volumen de la cantidad de compuesto inyectado. Se calcula el Factor de respuesta (Fr) 1 mg Fr = 2 cm² X -----------------. 101 . L ). Desarrollo: 1. En igualdad de condiciones se inyectó 1 X 10-3 miligramos de acetona y el pico dio un área de 2 cm². Se analiza la forma del pico tanto en la inyección sola del compuesto como en la mezcla y se define si se calcula con factor de respuesta considerando la altura.4. Área en mm2 o cm2 por unidad del compuesto en peso o volumen. metiletilcetona e isobutilcetona.3. el pico de la acetona dió un área de 5 cm². evitando que sea necesario medir áreas. mg.= ------------------.1.10. Se inyectó al cromatógrafo 5 X 10-3 miligramos de una mezcla de acetona.5 X 10-3 mg 3. Cuál. es el % de acetona en la mezcla.= 2000 cm²/mg 1x10-3mg 5 cm² 5 cm² 2.1. El siguiente ejemplo ilustra cómo en la práctica se opera con este método. Las unidades del factor de respuesta serán entonces: altura en milímetros o centímetros por unidad del compuesto en peso o volumen (g. o mL.--------X 100 = 50% 5 X 10-3 mg de muestra 3.10. % de acetona = ------------------------. el área o el peso. Peso en g o mg por unidad del compuesto en peso o volumen.

9. área o peso como parámetro relativo depende de la forma del pico y su tratamiento debe ser igual para todos los patrones y la muestra. Se mide la altura. etc) representa el mejor método. sea el caso de la acetona. % en peso. Si quedan puntos por fuera de la línea. Procedimiento: 1. Se interpola el valor relativo obtenido para el compuesto en la muestra problema y se determina su concentración. numeral 3. La columna 3 (volumen de A en mL) representa el volumen que es necesario tomar de un patrón de 100 mg/l de acetona para preparar 100 mL de cada patrón. igual procedimiento se hace con el pico del compuesto de interés en la muestra y el estándar. para que la concentración del estándar en cada patrón sea de 50 mg/l. contra algún parámetro de concentración (mg/l. 3. Se construye una tabla de datos la cual nos da una idea aproximada del rango de concentración en el cual se encuentra el compuesto en la muestra. 5.2. se puede realizar un ajuste por mínimos cuadrados.Para obtener la mayor precisión en la determinación de un compuesto de interés en una mezcla. % en volumen. 4. el área o se determina el peso del pico de cada patrón y del estándar y se calculan las alturas. 6. áreas o pesos de los patrones con relación a un estándar. áreas o pesos relativos. Se prepara una serie de patrones (mínimo 4) de diferente concentración y a cada uno se le adiciona una cantidad igual del estándar.1. El estándar interno debe cumplir los mismos requisitos que un estándar utilizado para análisis cualitativo (Ver Página 88. En idénticas condiciones instrumentales se inyecta al cromatógrafo una cantidad igual de cada patrón y de la muestra. fracción molar. La columna 4 (volumen de B en mL) representa el volumen que es necesario adicionar a cada patrón de un estándar de 500 mg/l de metil etil cetona. La columna 5 (aforo final) presenta el volumen final al cual se afora cada patrón y el alícuota tomado de la 102 . una curva de calibración de alturas. se le adiciona igual cantidad de estándar que a los patrones y se afora al mismo volumen de estos. áreas o pesos relativos.3) 2. La concentración real del compuesto en la muestra será igual a la concentración leída en la gráfica multiplicada por el Factor de dilución (Fd). se traza la gráfica y se extrapola a cero. La escogencia de la altura. Se ubica cada punto. Se toma un alícuota de la muestra. El rango de concentración para preparar los patrones depende la linealidad de respuesta que presente el detector para el compuesto de interés. utilizando como estándar metiletilcetona y que se describe en la Tabla 3. Si se requiere mayor precisión se construye una curva de calibración en cuyo eje de abscisas (eje x) se coloca la concentración relativa y en el eje de ordenadas (eje y) las alturas.

8 40/50=0. Luego: Vf 100 Ci = Cf-----.muestra problema. ya que se puede aplicar directamente la siguiente relación: Am As A  s Cp Cm Cs Cs Ap donde A p representa el área del pico del patrón. Patrón mg/l A en ml B en ml Final inyectada en cm2 en cm2 Relativas Relativas -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 20 20 10 100mL 1 μL 10 25 10/25 =0.10) -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------No. C p concentración del patrón. C s concentración del estándar.2 4 80 80 10 100mL 1 μL 40 25 40/25 = 1.de Aforo Cantidad Área de patrón Área Estándar Áreas Concent. no es necesario construir curva de calibración. se le adicionaron 10 mL del estándar y se aforó a 100. Observando la tabla de datos podemos concluir que la concentración de la acetona en la muestra problema se encuentra en un rango entre 40 y 80 mg/l que resulta de multiplicar el rango entre 20 y 40 mg/l que nos da las áreas relativas del pico de la acetona y el estándar en la muestra multiplicadas por 2 que es el factor de dilución de la muestra.6 mp 50 ml muestra 10 100mL 1 μL 15 25 15/25 = 0.= 60 mg/ L Vi 50 En análisis de rutina cuando se obtienen gráficas lineales y el valor de concentración de la muestra problema cae en el rango de patrones. La columna 6 indica que se inyecta 1 microlitros de cada uno de los patrones y muestra problema al cromatógrafo. Vol. Si requiere mayor precisión se construye la curva de calibración así: (observar figura 3.= 30 mg X -----.6 x/50=? -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Tabla 3.8 3 60 60 10 100mL 1 μL 30 25 30/25 = 1.6 80/50=1.de Vol.4 20/50=0.4 2 40 40 10 100mL 1 μL 20 25 20/25 =0. Am área del pico en la muestra. Datos para construir una curva de calibración para determinar la acetona contenida en una solución utilizando como estándar metil etil cetona Según la curva de calibración la concentración de acetona en la solución es de 30 mg/L la cual se debe multiplicar por un factor de dilución de 2 para obtener la concentración real: 30 mg/l X 2 = 60 mg/L concentración real ya que se tomaron 50 mL de la solución muestra.2.2 60/50=1. As el área del pico del estándar. As área del pico del estándar en 103 . Concent.

También se puede hacer uso de la siguiente relación: APs Am  s C p s C ms Siendo A ps = al área de patrón con relación al estándar.10 Curva de calibración para la determinación de acetona por cromatografía de gases. C ps = concentración del patrón con relación al estándar. exacto y preciso. hacer un tratamiento estadístico de los datos y determinar cual es el método cuantitativo por cromatografía más rápido. Ams = área de la muestra con relación al estándar. C ms = concentración del patrón con relación al estándar. 104 . se deben aplicar Diferentes métodos. Figura 3. Para la estandarización de un análisis.la muestra y Cm concentración de la muestra la cual podemos despejar al conocer los demás datos.

Aplicar y proyectar los conocimientos adquiridos sobre cromatografía de gases en la realización de un taller teórico. Reconocer las diferentes casas productoras. accesorios y mantenimiento relacionados con la cromatografía gas líquido y por medio de una demostración en los equipos existentes en el laboratorio observe su funcionamiento y la realización de un análisis completo mediante el uso de la técnica. características técnicas de cromatógrafos gas líquido.Unidad 4 4. 4. normas de seguridad y precauciones en el manejo del equipo en la realización de un análisis. 6. Reconocer la configuración de los cromatógrafos de gases tanto en la parte neumática como en inyectores. 105 . 3. Instrumentación para cromatografía gas líquido. columnas y detectores para diferentes fines analíticos. marcas. Objetivos Específicos: Terminada la unidad el estudiante será capaz de: 1. una consulta bibliográfica y un trabajo práctico mediante la ejecución de una determinación analítica orientada por un monitor. 2. 5. Objetivo General: Presentar al estudiante la información sobre las características técnicas y aspectos comerciales de los equipos. Reconocer el software para el manejo y presentación de la información analítica en cromatografía gas líquida. Reconocer las características técnicas y las fuentes de información sobre columnas para cromatografía gas líquido. Reconocer mediante una demostración en el cromatógrafo de gases como se llevan a la práctica las instrucciones.

Perkin Elmer. Entre los fabricantes más acreditados en nuestro medio se encuentran: Hewlett Packard. detectores. Los costos de incorporación de estas nuevas tecnologías en la instrumentación para cromatografía de gases dependen de la configuración del equipo y pueden oscilar entre 2. Modulo de detectores 5.1.000 45. automuestradores y sistemas de micro controladores para el manejo automático de las diferentes variables que intervienen en el análisis y autodiagnóstico del funcionamiento del equipo. Características técnicas del cromatógrafo de gases HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT Casa fabricante: Konik Instrument S. Los modelos más recientes presentan configuraciones muy versátiles para la incorporación de inyectores.000 dollares. Modulo del microprocesador 8. La configuración de un cromatógrafo gas líquido esta constituida por zonas y módulos fácilmente intercambiables: 1. columnas. Zona neumática de inyectores 2. Modulo de inyectores 3. Zona de horno para columnas 4. Modulo de amplificadores 7. Generalidades La instrumentación para cromatografía gas líquido es ofrecida a nivel mundial por más de 25 casas fabricantes con unos 125 modelos de equipos diseñados para tal fin. También es importante destacar la incorporación del PC con el software desarrollado para el manejo y presentación de la información analítica. Konik Instrument. Canales 9. PC con el software y hardware necesario 4.4. Phillips. Zona neumática de detectores 6. Varian techtron.A Nacionalidad: Española Configuración por bloques: _ Zona neumática de inyectores _ Modulo de inyectores _ Zona de Horno para columnas _ Modulo de detectores _ Zona neumática de detectores 106 . Chimadzu.

...2 Detector de Conductividad Térmica Especificaciones: Tipo...0........... Deriva máxima. Cámara de desorbción. Tiempo de respuesta .......... Ruido máximo ........2 Características Generales: ..... 10 μV.......1...........0.. 40 μV/hora 107 ..........5 seg...........1 Detector de Ionización de llama Especificaciones: Sensibilidad.......Conexión a la red : 220 V con fusible de protección de 10 A 110 V con fusible de protección de 20 A Indispensable la conexión a tierra Estabilizador de voltaje de núcleo saturado ..018 Coulombs/gramo para hidrocarburos Rango dinámico lineal.... Inyector "on column" para columnas capilares. Inyector " on column" para columnas de 1/4".Canales -Computador 4.2.. Inyector multimodo "split/splitless".......107 Temperatura de funcionamiento máxima...Medidor de flujo de burbuja ..hilo caliente con 4 filamentos de Renio/tungsteno en puente de Weahtstone y flujo continuo.Se puede configurar con 4 detectores: 4. Válvulas de inyección........5V Ac o Dc y 4A Calefactor......_ modulo de amplificadores _ Modulo de microprocesador ...2..... 400oC Voltaje de polarización ..............± 200V DC Voltaje de ignitor...........Inyección manual o automática Se puede configurar con los siguientes inyectores: Inyector convencional para columnas empaquetadas de 1/8" y semicapilares..............Manómetros y válvulas para controlar las presiones de los diferentes gases ...... ............125W 220V 4............

...Microprocesador con las siguientes características: 108 ....2.. 2-20 x 105 N:Hidroc... Que actúa únicamente en el modo linearizado... semicapilares.... Fuente de corriente constante con amplificador....... 45 V Sensibilidad .4 pg/de P/seg Selectividad Linealidad P:Hidroc. sin atenuador Registrador: 1 mv fondo de escala y atenuador de 11 posiciones... 4.....75 μseg. Nitrógeno puro (alternativo) Linearizador: Salida: Anchura de pulso: 0...2.2-0...........Corriente máxima..20V Voltaje de vaporización ...... 360 mA Tensión máxima .... Integrador: 1 voltio f.... Electrómetro.......4 pg/de N/seg 0.... Autocero con ajuste manual.Columnas: se pueden acoplar capilares......4 Detector NPD Especificaciones: Límite detección 0... para Ar/CH4 4... . 4. o analíticas rellenas... ... 5-40 x 104 104 a 105 para N y P Hight:-150V Low:.....s.Amplificación: modulo compatible para varios detectores ......2-0.. Posibilidad de conmutar la polaridad automáticamente...... mejor que 5 ppm....0 μseg para N2 como gas portador. Otras características: Selector de anchura de pulso en función del gas portador (N2 o Ar/CH4) Selector de modo de operación...3 Detector Captura electrónica Especificaciones: Detector: Fuente de 63Ni milicuries Temperatura máxima: 400oC Gas portador argon con 5% de metano.

Funciones de tiempo: cubren el rango de 0 a 99.Control y regulación de temperatura de 6 zonas del equipo: Inyección. (automático de 250oC a 50oC en menos de 6 minutos) o manual programable por el usuario. sistema de conmutación de columnas. retrocesión de flujo. espacio de cabeza. programables en décimas y entre 100 y 999 programables de minuto en minuto. inicio y final de ciclos y cálculo de flujo. Reloj calendario con batería de níquel . compatibles PC-KONIK y otros ordenadores compatibles (opcional). Interrupción del programa a voluntad.cadmio Seis funciones de tiempos para actuaciones automáticas. de acuerdo con el tipo de detector que va utilizar seleccione los gases respectivos tanto portador como 109 . cámara de absorción. conmutación de señales. Visualización en pantalla de parámetros. Flexibilidad en la programación que incluye la posibilidad de cambiar cualquier parámetro de un programa durante la ejecución del mismo. y dos controles auxiliares para elementos auxiliares. Interfase bidereccional RS-232 para comunicación con integradores.9 min. 4. de estados y de evolución del programa. detección (control individual para los dos detectores). Selección hasta de 8 idiomas para programación y dialogo. tres fijas para "splitless". etc). lo cual supone una total interacción del usuario con el cromatógrafo durante el curso del análisis. Cinco Rampas: Para la programación de temperaturas del horno a velocidades desde 0. (válvulas. interfases. Sistema de auto diagnóstico y aviso de avería: con parada automática del equipo. automatizan operación con inyector automático. horno de columnas. Tres para aplicaciones generales con seis modos operativos de cada una. Almacenamiento de 5 métodos para programas de aplicaciones generales y específicos en memoria soportada por batería (expandible opcionalmente). Cronómetro para control de tiempos de análisis. válvula inyectora y ciclo automático.3 Instrucciones resumidas para la operación del cromatografo de gases HRGC-3000 C de Konik Instrument 1. conexión automática con otros equipos y sistemas auxiliares. autoinyectores. Sistema de protección de temperatura límite del horno (columnas) programable y con desconexión automática. Sistema de enfriamiento en el horno de columnas rápido.5 hasta 40oC/min. tiempos de retención.

En la pantalla al lado derecho observará la temperatura actual y al lado izquierdo la programada. 3. 2.para el detector. Gírelo hacia la derecha hasta que la aguja del manómetro coincida 110 .1. La válvula VM posee un dial que registra numéricamente la apertura. Conecte el estabilizador a la red 110V. Mediante la válvula VM identificada como carrier ajuste la presión del gas de arrastre en el respectivo manómetro. en posición cerrada registrar 999 y abre a medida que la numeración disminuye. Seleccione y encienda el detector que requiere de acuerdo con la instrucción siguiente: 7. Se debe escuchar el arranque de los ventiladores y visualizarse encendida la pantalla del microprocesador. Para puesta en marcha del equipo presione durante unos segundos el botón start (arranque). Gas N2 He Ar+CH4 Ar+aire H2 Aire Presión Kg/cm2 P.1 Oprima la tecla DET TEMP. 5. en la pantalla observará la pregunta: Qué detector? oprima la tecla on/yes 1.1 Para el detector de ionización de llama (FID) siga los siguientes pasos: 7. Para la parada del equipo presione el botón stop. Para el suministro de los gases ubique la presión de los manómetros de salida de los cilindros según la siguiente tabla: Tabla 4. Espere unos 2 minutos para garantizar que el gas ha recorrido la columna. el piloto indicador debe lucir rojo. 4 60 4 60 4 60 4 60 2 30 5 70 4. 7. 6. conecte el cable de conexión del cromatógrafo en el estabilizador. que se encuentra en la parte trasera baja lado derecho.1.S.I.S. ubique el interruptor del estabilizador en ON. en la pantalla observará la pregunta: temperatura deseada? introduzca mediante el teclado la temperatura deseada ( máximo 400oC ) oprima la tecla enter.1 Presión recomendable en los manómetros de salida de los cilindros. 7. Cerciórese que el manómetro que marca la presión interna del cilindro le marque una presión mínima de 120 P.2 Hale el manorreductor del aire.I que le permita sostener la presión de trabajo durante un tiempo razonable.

111 Supresor Cero y atenuación On-Off A-B.I.5 Identifique y use los controles del amplificador de acuerdo con la siguiente información: Nombre Rango Función Permite seleccionar la ganancia del amplificador. Permite prender y apagar el amplificador. Nota: Si va hacer uso de columnas capilares debe ajustar la presión del make-up A de igual manera que lo hizo con el aire y el hidrógeno.3 Ubique el interruptor del amplificador del detector de ionización de llama en la posición ON. Aproximadamente 32 P. Durante la sesión de trabajo monitoree de igual manera que el detector permanezca encendido. -A+B . Hay 4 posiciones de menos sensible (10-9) a más sensible (10-12). 7. solo se utilizan cuando hay incorporado un registrador.4 Oprima el botón del ignitor (se encuentra ubicado al lado derecho del manorreductor del aire).con la marca (raya negra). De igual forma ajuste la presión del hidrógeno.1. para apagar el detector haga lo contrario cierre primero el hidrógeno y luego el aire. Permite ajustar el offset del amplificador. Línea base en la pantalla. 7.1. Precaución: Confirme que el detector quede encendido observando que el vapor de agua que sale por la chimenea se condensa sobre una superficie reflexiva para tal efecto puede ser útil un vidrio de reloj. Si no fuera así se puede aumentar ligeramente la presión del hidrógeno. y se presiona nuevamente el ignitor. Permite seleccionar la polaridad positiva o negativa de los detectores. Sí esto no sucede el detector se encuentra apagado. A+B. se debe producir una suave explosión. Cada paso supone multiplicar por 10 . 7.S. Una vez encendido el detector se debe bajar la presión hasta la marca. Precaución: Abra primero el aire y luego el hidrógeno. un espejo o una superficie metálica brillante.1. el amplificador se encuentra ubicado en la parte frontal lado derecho y corresponde al segundo de arriba hacia abajo.

debe aparecer en la pantalla el sistema de datos de la versión 6.2.1 identificando el detector de conductividad térmica como 2. 7. Haga doble clic en el icono de chromatography.1 Siga la instrucción 7.2. 112 ..7. aparece la ventana chromatography y el icono konikrom.2. Si trabaja bajo windous 95 simplemente haga doble clic en el icono Konikrom para entrar al programa. Una vez este en c:\> escriba cd windows déle enter ó win enter.2 Para el detector de conductividad térmica proceda así: 7. ubique el interruptor del amplificador en la posición ON. haga clic en OK para abrir la ventana.4 Establezca la intensidad de corriente de los filamentos en forma adecuada en función de la sensibilidad que desee teniendo en cuenta la tabla 4. no debe encender el detector porque se queman los filamentos. Precaución: Si no hay flujo de gas de arrastre a través de las chimeneas.2.3 Sitúe el mando de corriente del filamento en la posición 1 (intensidad mínima).2 Posición del control y corriente para T. luego el pc por último la impresora. Haga clic en el icono identificado como 1 CHRGC 3000 C.C.D Posición: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Corriente en mA: 0 35 65 100 135 165 200 235 265 300 335 365 8. 7.5 de konikrom chromatography. 7. debe aparecer el administrador de programas. en user name escriba demo y dele enter. haga doble clic en el icono Konikrom. Tabla 4.2 Asegúrese de que por las chimeneas del detector este saliendo gas de arrastre y compruebe que los flujos son los deseados e iguales en ambos canales. Prenda el computador primero el monitor.2.

1 113 .Figura 4.

114 .Figura 4.

Confirme la influencia en el tiempo de retención de los compuestos de la mezcla y la resolución de los picos en el cromatograma con los cambios en las variables: Temperatura. N2_____. normas de seguridad y precauciones en el manejo del equipo. reguladores de presión _______.4.1 Configuración del equipo Zona neumática: Cilindros para gases H2 _____. Observe como se llevan a la práctica las instrucciones. válvulas _______. Ar ______. 115 .4 Formato guía para el seguimiento de las demostraciones sobre la Técnica Analítica Cromatografía de gases. Desarrollo: Llene los espacios del formato de acuerdo con sus observaciones e instrucciones dadas por el monitor o el profesor. Observe una aplicación de la cromatografía gas líquido en el control de la composición y calidad de una mezcla de solventes industriales para uso como disolvente. cantidad de muestra inyectada. Rotámetro _____. presión. Analice como se interpreta la información que reporta un cromatograma y observe como se cualifica y se cuantifica mediante dicho registro.4. tipo de columna. Y el control del contenido de metanol en un licor. Ar + CH4 _________ Manómetros ________. Equipo: ____________________________ Marca: ____________________________ Modelo: ____________________________ 4. velocidad de flujo. Objetivos: Que el estudiante reconozca las partes que conforman un cromatógrafo gas líquido y la función de cada una. Conozca como se establecen las condiciones óptimas de funcionamiento del equipo en la estandarización de un buen cromatograma para un análisis específico. medidores de Flujo: Fluximetro de burbujas ______. He _____.

Zona de inyectores: loop _____. Inyección automática _____. Rango de temperatura de los inyectores de: ______ Hasta _______°C Zona de columnas: Horno (recinto termostatado) _______ Rango de temperatura del horno de _____ Hasta _____ °C Programación de temperatura: Número de rampas _________ Temperatura máxima de operación ________°C Protección térmica para columnas programable _______ Velocidad de enfriamiento ____________ °C/minuto Zona de detectores: Número de detectores ______ Tipo de detectores que se encuentran en el equipo: Detector de conductividad térmica Detector de ionización de llama Detector de captura electrónica Detector para nitrógeno y fósforo Zona de amplificadores: Amplificador para DCT Amplificador para DILL Microcontrolador Computador Muestreador automático ______ ______ ______ ______ ______ 116 ______ ______ ______ ______ . Microjeringa ______.

16________________ Cantidad de muestra a inyectar ______________μL 117 ________ C .4.11______________.2 Selección de condiciones iniciales para el análisis Temperatura del bloque de inyección Detector ______________________ Temperatura del detector _______ C Gas portador __________ Presión del gas portador _________ psi Velocidad de flujo del gas portador en la columna ________ mL / minuto Velocidad lineal del gas portador _______ cm / minuto Posición de la válvula de control _______ Presión del make up _____ psi Velocidad de flujo del gas portador en el detector (make up) ______ mL / minuto Características de la columna: Tipo de columna ___________ longitud _____ m. 8 _______________ 9 _______________. 6_______________. 12________________ 13_______________. 14______________. diámetro ______ mm. 3_______________. 2_______________.4. 7_______________. espesor de la película de la fase estacionaria ________μm Referencia ________ Fase líquida estacionaria _______________________________ ________________________________ Máxima temperatura de operación ________ C Mezcla a inyectar: _____________________________________ Número de compuestos de la mezcla a inyectar _____________ Lista de los compuestos: 1_______________. 10______________.15_____________ . 5_______________. 4________________.

Programación de la temperatura de la columna Tiempo de programación total _______ minutos Máximo valor de mV _______ Características del cromatograma: Resolución: Óptima ________. Buena ________. Se observa: Contaminación en la columna? ________ Difusión de los compuestos? ________ Colas en los picos? ________. Información sobre el comportamiento termodinámico de los compuestos en el interior de la columna. Condensación de los compuestos? ________ Descomposición térmica de los compuestos? ________ Número de picos? ________. Regular ________. Mala ________. Linealidad de la línea base? ________ 118 .

Simetría en los picos? ________. Asimetría? ________ Tiempos de retención razonables? ________ Es óptimo el cromatograma para cuantificar y cualificar? ________ Requiere optimización? ________ Para su optimización cambiaria en primer lugar: La programación de la temperatura de la columna? ________ La velocidad de flujo del gas portador? ________ La presión del gas portador? ________ La columna? ________ El detector? ________ 119 .

3 120 .Cromatograma patrón hidrocarburos alifáticos C5 a C10 Figura 4.

Cromatógrafos de gases ubicados en la sala de cromatografía en el laboratorios Q127 Figura 4.5

121

4.5 Taller y consulta sobre cromtogrfia de gases 1. Consultar el tratamiento de derivatización que requieren los siguientes compuestos para su estudio cromatográfico: Aminoácidos, carbohidratos, esteroides, vitaminas, ácidos biliares, ácidos grasos. 2. Consultar cuál es el tipo de columna requerida para realizar la separación de los siguientes compuestos :Fenoles, gases (H2, O2, N2, CH4), pesticidas clorados, pesticidas fosforados, drogas (anfetaminas, alcaloides, barbitúricos), triglicéridos, hidrocarburos alifáticos, hidrocarburos aromáticos, aromas, sabores en que condiciones se deben operar y para cada grupo de compuestos cuál es el detector adecuado.

3. Para la identificación de virus y bacterias Se ha empleado la cromatografía de gases. Cómo considera Usted que ha sido posible utilizar esta técnica? 4. Al examinar cromatograficamente dos muestras estándar y una muestra desconocida, se obtuvieron los siguientes cromatogramas:

Velocidad de la carta 2.5 mm / minuto

a. Calcular el número de platos teóricos con respecto al componente C, calcular tiempo de retención para cada componente del estándar, calcular la resolución de los picos C y D en la muestra, calcular la altura equivalente de un plato teórico si la longitud de la columna es de 7.5 m. 122

b. Estimar la composición cualitativa de la muestra desconocida. c. Consultar qué es el índice de Kovats y que utilidad analítica tiene. 5. Para evaluar la eficiencia en el proceso de la obtención de un ester se trabajo con los siguientes datos: Reacción implicada: H+ CH3COOH + C2H5OH ◄ =====► CH3COOC2H5 + H2O

Se hicieron reaccionar 75 mL de ácido acético puro con 80 mL de etanol puro para producir acetato de etilo, a los 45 minutos de iniciada la Reacción se tomó una muestra de 2.5 mL se le adicionó 0.5 mL de metanol como estándar y 7.0 mL de agua. En las condiciones de operación NN. Se inyectó al cromatógrafo 1 microlitro obteniéndose el siguiente cromatógrama con un detector de iotización de llama:

Para valorar los datos reportados por el cromatógrama se prepararon los siguientes patrones usando como estándar interno metanol y solvente agua.
Patrón No. 1 2 3 4 5 Metanol mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Etanol mL 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 Ácido acético mL 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 Etilo acetato mL 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 Solvente mL 8.75 8.0 7.25 6.50 5.75 Cantidad Inyectada μL 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

En igualdad de condiciones en las cuales se inyectó la muestra y con el mismo detector, Se inyecta al cromatógrafo un microlitro de cada patrón, el cálculo de las áreas correspondientes a los picos 123

48 Etilo acetato Área en cm2 0.39 1.25 1.78 Área en cm2 Área en cm2 Construya las siguientes curvas de calibración relativas: Área etanol Vs %V/V etanol Área metanol %V/V metanol Área ácido acético Área metanol Vs % V/V ácido acético %V/V metanol Área etilo acetato Área metanol 5.02 0.95 0.51 1.98 1.5 mL de muestra teniendo en cuenta la dilución: 124 .10 2. Cuál es el reactivo limitante de la reacción? 5. si la Reacción se diera con el 100% de eficiencia cuántas mL acetato de etilo se obtendrían? b. Cuántos mL de etanol reaccionarían? c.de los compuestos de cada patrón se consignaron en la siguiente tabla: Patrón No.4 0.1 Evaluación previa del proceso: Vs %V/V etilo acetato %V/V metanol a.08 Ácido acético Área en cm2 0.69 1. Cuántos mL ácido acético reaccionarían? d.47 2.12 1.61 2.96 Etanol 0. 1 2 3 4 5 Metanol 0.00 1.2 Con la evaluación de los resultados obtenidos para la muestra en el Cromatograma y con las gráficas construidas resuelva los siguientes interrogantes tomando como base los 2.74 1.36 0.08 1.

36. Posibles determinaciones a realizar: Alcoholes en licores.1 Consulte: qué es y qué propiedades presentan los fluidos supercríticos y sus aplicaciones en la en la técnica cromatográfica. 37 y 38 resuelva el ejercicio de la página 38. ácido acético. 8. Rf' y Kg Con base en las ecuaciones desarrolladas en las páginas 35.a.2 Haga una comparación entre las técnicas cromatográficas gas liquido. Vr'. vitaminas. 7. 6. sabores en alimentos. antibióticos. 125 . instrumentación. carbohidratos.3 En que consiste la extracción en fase sólida y que ventajas presenta en el pretratamiento de las muestras para su separación cromatográfica. anfetaminas. liquida de alta eficiencia y fluidos supercríticos. Analogías 6. Por qué el área del estándar varía en cada patrón? d. Desarrollar el trabajo particularmente asignado. Con los datos anteriores haga una evaluación de la eficiencia del proceso hasta el momento de toma de la muestra. proteínas. etanol. Qué ventaja presenta para el análisis la utilización de un detector de ionización de llama? 6. Considere: fundamentos. Cuáles son los porcentajes de: Etilo acetato. c. Análisis de analgésicos y antipiréticos. preferiblemente si las condiciones lo permiten hacerlo práctico. Relación entre tr'. colesterol en orina. aplicaciones y limitaciones. aromas en perfumes. 6. alcohol en sangre. b. triglicéridos. Qué ventajas presenta en el análisis el uso del estándar interno y la construcción de curvas de calibración con base en parámetros relativos? e.

en papel y en capa delgada. Fundamentos de la cromatografía de gases (1ª.A. Guzmán. 23 sobre cromatografías: Liquida de alta presión. Grob.Bibliografía Catálogos de los diferentes cromatógrafos de gases David Harvey. Publicación Técnica Varian Techtron. Applications. de gases. Dabrio.A.V. Manuel Cortés Ramírez Ramírez. Ed). Monografías: 10. Cromatografía líquida Alta Resolución 1. Química Analítica Moderna (1ª. Madrid: Alambra S. España. Gas Chromatography Detectors. de la secretaría general de la organización de estados americanos OEA.Ed). J. 1968. M. and Troubleshooting.988 Robert L. Traducción del Ingeniero Químico. Héctor. Journal of Chromatography Hartmann Harold C. Madrid: ED. Chromatography Fundamentals. Pattison. Modern Practice of Gas Chromatography 126 . 1971. 1970.M Storch de Gracia y Asensio. Jorge D Stambuk. ED Mcgraw-Hill 2002. Manual Práctico de Cromatografía de Gases. ed). 16. Cromatografía de gases tomos I Y II (1a. John Q.B. Alambra S. Publicación Técnica The Perkin Elmer Corp. Walker. A Programmed Introduction to Gas Liquid Chromatography – Published By Heyden and Son Ltd. J.

Acriba. Holler F James. ed ) España: ED. Química Analítica Contemporánea (edición en español). Instrumentación Química (1a. STROBEL. Análisis Instrumental (edición en español). Holler F James. Haward A. México: ED Cengage Learning 2008. WEST Donald M. Pearson Education. Madrid: ED. Química Analítica (8a. 2001. SKOOG. James W. Douglas A. Rubinson Judith F. Merritt. Hobart H. Colombia: ED 127 .. Principios de Análisis Instrumental (5ª. James J. James.México: ED. Pearson Education. Rubinson. Kenneth A. Ed). Douglas A. James.. México: ED Thomson 2005. Analítica (6a.. 1974. Madrid: ED Mcgraw-Hill 2000. Lynnel. . Ed). México: Limusa. Stanley R. Zaragoza: ED. HOLLER F.999. Rubinson. Química Mcgraw-Hill 1. Nieman Timothy A. Douglas A. SKOOG. Ed). SKOOG. Principios de Análisis Instrumental (6ª.A. 1. Douglas A. SKOOG. y Dean John A. ed).. ed.99 1. Crouch Stanley R. Rubinson Judith F. McGraw-Hill 1. Grupo Editorial Iberoamérica. S. Douglas A. ed ). Madrid: ED. 1988 WILLARD. ed. HOLLER F. Kenneth A. SKOOG. 2001. Análisis Instrumental (4a.). WEST Donald M. Principios de Análisis Instrumental (1a. Métodos Instrumentales de Análisis (7a.LEARY.).Robinson.994. Crouch.

generalidades de la cromatografía 1.6.6.2.1 Cromatografía Flash 1.4.3 Cromatografía en columna 1.2 Cromatografía de capa delgada en fase inversa 1.2 Fundamentos de las técnicas de separación por cromatografía 1. Cromatografía de Gases 2.2 Cromatografía en capa fina 1.6 Técnicas especiales 1.4 Electro-cromatografía 1.4 Cromatografía de intercambio iónico 1.1 Electroforesis capilar (Resumen) 1.2 Cromatografía gas liquido 2.6.6.3 Principios de la cromatografía 1.5 Cromatografía Líquido Líquido 1.6.4.4.1 Cromatografía en papel 1.1 Reseña Histórica 1.3 Cromatografía líquida al vacío 1.4 Cromatografía sólido líquido 1.4. Pg Introducción Primera unidad 1.2.1 Cromatografía gas sólido 2.6.4.2 Ilustración del análisis por cromatografía gas líquido 128 1 2 2 3 7 7 8 9 11 12 15 20 20 21 21 22 23 24 25 27 28 28 28 28 28 .Tabla de contenido No.4.1 Descripción del proceso de separación 2.2Cromatografía de fluidos supercríticos (resumen) Segunda unidad 2.

1.4 Columna 2.5.2.4.2.1 Soporte sólido 2.2.2 Fase líquida estacionaria 2.2.5 Inyección de la muestra (ver instrucciones 2.3 Glosario de términos y fórmulas 2.1 Muestra (Técnica de la inyección) 2.7 Detector de espectrometría de masas 2.4.5.2 Detector de conductividad térmica 2.4.2.2.4.1.4.2.2.5.1.4.2.2.6 Interpretación del cromatograma obtenido 3.2.4.4.8 Detector espectrofotométrico infrarrojo de transformada de fourier (FTIR) 2.1 Indagar sobre la muestra 3.4.2.2.4 Detector de captura electrónica 2.4.4.6 Detector NPD 2.1.5 Detector fotométrico de llama 2.4 Condiciones instrumentales 3.4.1.3 Gas portador 2.5.2.2.5.4 Partes básicas de un cromatógrafo gas líquido 2.1.2.4.4 Ecuación de Van Deempter 2.3 Medida de la eficiencia de la columna 2.2.2.2 Inyector 2.4.4.4.2.5 Detectores 2.4.2.2.1 Pg 40) 3.5 Cromatografía de gases versus cromatografía de alta resolución (HPLC) Tercera Unidad 3.1.4.5.1 Muestra 3.2.1 Características generales de un detector 2.4.4-5.5.7 Optimización del cromatograma 129 30 41 41 42 43 45 45 50 59 61 64 64 66 68 69 70 71 73 75 75 79 80 80 80 80 80 80 80 89 .4.2 Tratamiento de la muestra 3.3 Selección de condiciones para el análisis 3.3 Detector de ionización de llama 2.2.

1.10.1. 4.1.10.1.4 Factor de respuesta 3.1.1.1.5 Curvas de calibración Cuarta unidad 4.10 Análisis Cuantitativo 3.10.1.10.4 Formato guía para el seguimiento de las demostraciones sobre la Técnica Analítica Cromatografía de gases.3 Relacionando Pesos 3.1.8 Anotar o grabar condiciones 3. Generalidades Instrumentación para cromatografía gas líquido 4.2.9 Análisis cualitativo 3.2 Relacionando Alturas 3.2.2 Características Generales: 4.1 Detector de Ionización de llama 4.10. Características técnicas del cromatógrafo de gases HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT 4.2.3 Detector Captura electrónica 4.3 Instrucciones resumidas para la operación del cromatógrafo de gases HRGC-3000 C de Konik Instrument 4.2 Detector de Conductividad Térmica 4.1 Relacionando áreas 3.4 Detector NPD 4.3.5 Taller y consulta sobre cromatografía de gases Bibliografía 89 89 90 92 94 95 97 97 101 102 102 103 103 103 104 104 105 111 118 122 130 .2.

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