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C rcei c nd ls co r a i s aatr ai e o mi og ns z r mo d d p rd rs ilgcs e e ua oa bo i a ub n s efn o at o c n r a a d a g s ci s o v taa e t c n e c n l rtmino o v n i a o yd ei n c nd n tine e l ai e ur ts mi e d l c macs eL r a e a o ra d i s d

J si V soMo r i e s a ac c nog

Drcoa Mei e Ma (y rl Mi o ilgc) i tr: rx l sH doa e t l b c boo i r a TtrH mb rS l d (e . ilga n l uo: u et a a D p Boo A i ) v ma

Caracterizacin de los microorganismos de depuradoras biolgicas urbanas de fangos activos con tratamiento convencional y de eliminacin de nutrientes de las comarcas de Lrida

Jessica Vasco1; Meritxell Mas1; Humbert Salvad2


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Hydrolab Microbiologica. c/ Blanco 38. 08028 Barcelona. Telf. 93 411 09 40. c.e: info@hydrolab.es 2 Dep. Biologia Animal, Facultat de Biologia, UB. Avda. Diagonal 645. 08028 Barcelona. c.e.: hsalvado@ub.edu

RESUMEN Conocer las comunidades de los microorganismos presentes en los sistemas de depuracin por fangos activos es importante debido a su utilizacin como bioindicadores del proceso de depuracin, constituyendo una herramienta muy importante para el control y la gestin de estos procesos de depuracin. El principal objetivo de este proyecto es el de caracterizar la microfauna de una serie de estaciones depuradoras de aguas residuales urbanas, as como estudiar las relaciones que se establecen entre las especies o grupos de microorganismos y los parmetros fisicoqumicos y operacionales del proceso de depuracin. En total se analizaron 106 muestras correspondientes a 20 depuradoras urbanas, de las cuales 10 tienen un tratamiento convencional de fangos activos y las otras 10, un tratamiento de eliminacin de nutrientes, ya que abocan las aguas a zonas sensibles a la eutrofizacin. La caracterizacin de las comunidades de microorganismos se realiz a partir de anlisis de bioindicacin, en los cuales se identificaron y se realiz el recuento de los diversos tipos de microorganismos presentes en los fangos activos, adems, se analiz el estado del fango. Por ultimo, tambin se analizaron los microorganismos que suelen producir los principales problemas presentes en las plantas depuradoras, y que suelen provocar que la calidad del efluente disminuya notablemente, llegando incluso a no cumplir con los lmites de la Directiva 91/271/CEE. A partir de los resultados obtenidos con este estudio se han podido determinar algunas diferencias entre las depuradoras con tratamiento convencional y las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes. Se ha comprobado que la mayora de las depuradoras estudiadas cumplan con los valores lmite establecidos por la Directiva europea 91/271. Adems, tambin se han determinado las especies o grupos de microorganismos ms frecuentes y abundantes en estas depuradoras, as como los principales causantes de los problemas que tienen.

NDICE
1. INTRODUCCIN ..................................................................................................7 1.1. DEPURACIN BIOLGICA DE LAS AGUAS RESIDUALES...................7 1.2. SISTEMA DE DEPURACIN MEDIANTE FANGOS ACTIVOS ...............7 1.2.1. Tratamiento de eliminacin de nutrientes...............................................7 1.2.2. Parmetros operacionales y de control ...................................................8 1.2.2.1. Carga orgnica .........................................................................8 1.2.2.2. Concentracin de biomasa .......................................................8 1.2.2.3. Carga msica (F/M) .................................................................9 1.2.2.4. Edad del fango o tiempo medio de retencin celular...............9 1.2.2.5. ndice volumtrico de fangos (IVF).........................................9 1.2.3. Fundamento del proceso .........................................................................9 1.2.4. Formacin del flculos ...........................................................................10 1.3. LOS MICROORGANISMOS DE LOS SISTEMAS BIOLGICAS DE DEPURACIN........................................................................................................13 1.3.1 Bacterias ..................................................................................................13 1.3.2. Protozoos ................................................................................................15 1.3.3. Metazoos.................................................................................................17 1.4. RELACIONES TRFICAS ENTRE LOS MICROORGANISMOS ..............18 1.5. SUCESIN TEMPORAL ................................................................................18 1.6. UTILIZACIN DE LA MICROFAUNA COMO BIOINDICADOR DEL PROCESO.......................................................................................................19 1.7. PROBLEMAS DE SEPARACIN LQUIDO/SLIDO EN EL TRATAMIENTO DE FANGOS ACTIVOS ..........................................................20 1.7.1. Pin-point floc o pin-floc..........................................................................20 1.7.2. Bulking viscoso.......................................................................................21 1.7.3. Ascensin de los fangos..........................................................................22 1.7.4. Bulking filamentoso ................................................................................23 1.7.5. Foaming..................................................................................................24 2. OBJETIVOS ...........................................................................................................25 3. MATERIALES Y MTODOS ..............................................................................26 3.1. DESCRIPCIN DE LAS ESTACIONES DEPURADORAS DE AGUAS RESIDUALES .........................................................................................................26 3.2. RECOGIDA DE LAS MUESTRAS.................................................................27 3.3. OBSERVACIN MICROSCPICA ...............................................................27 3.4. DETERMINACIN DEL ESTADO MORFOLGICO Y ESTRUCTURAL

DEL FANGO...........................................................................................................28 3.4.1 Tamao ....................................................................................................28 3.4.2. Estructura................................................................................................28 3.4.3. Grado de cobertura (concentracin) .......................................................28 3.4.4. Otras observaciones ...............................................................................29 3.5. DETERMINACIN DE LOS PARMETROS BIOLGICOS..........................29 3.5.1. Identificacin de los microorganismos ...................................................29 3.5.1.1. Tcnicas de tincin ..................................................................29 3.5.2. Determinacin de los microorganismos .................................................31 3.5.3. Cuantificacin de los microorganismos..................................................32 3.5.3.1. Protozoos, gimnamebas medianas y grandes y metazoos........32 3.5.3.2. Protozoos flagelados y gimnamebas de tamao pequeo........33 3.5.3.3. Recuento de microorganismos filamentosos ...........................34 3.5.4. Determinacin del ndice de diversidad .................................................34 3.6. ANLISIS ESTADSTICOS ................................................................................35 4. RESULTADOS Y DISCUSIN ............................................................................35 4.1. EL AFLUENTEE ..................................................................................................35 4.1.1. Caracterizacin del afluente ...................................................................36 4.1.2. Relaciones entre los parmetros fsico-qumicos ...................................36 4.1.3. Biodegradabilidad del agua del afluente.................................................37 4.2. EL EFLUENTE .....................................................................................................39 4.2.1. Caracterizacin del efluente ...................................................................39 4.2.2. Relaciones entre los parmetros fsico-qumicos ...................................41 4.2.3. Rendimiento operacional de las depuradoras estudiadas........................42 4.3. CARACTERIZACIN DEL FANGO..................................................................43 4.3.1. Tamao ...................................................................................................43 4.3.2. Estructura................................................................................................45 4.3.3. Grado de cobertura (concentracin) .......................................................46 4.3.4. Otras observaciones ................................................................................47 4.3.4.1. Bacterias dispersas ...................................................................47 4.3.4.2. Bacterias helicoidales...............................................................48 4.3.4.3. Bacterias PAO y GAO .............................................................49 4.3.4.4. Zoogloea ..................................................................................50 4.4. COMUNIDADES DE MICROORGANISMOS FILAMENTOSOS ...................51 4.4.1. Clasificacin de los microorganismos filamentosos...............................51 4.4.2. Porcentajes de aparicin de los filamentos dominantes y secundarios...52 4.4.3. Relaciones entre los microorganismos filamentosos y los parmetros fsico-qumicos...............................................................................53 4.4.4. Microorganismos filamentosos ms relevantes ......................................56 4.4.4.1. Microthrix parvicella ...............................................................56 4.4.4.2. Actinomicetos nocardioformes ................................................57 4.4.4.3. Tipo 021N ................................................................................58 5

4.4.4.4. Tipo 1851 .................................................................................59 4.5. COMUNIDADES DE PROTOZOOS FLAGELADOS .......................................60 4.5.1. Clasificacin de los protozoos flagelados...............................................60 4.5.2. Relaciones entre los protozoos flagelados y los parmetros fisico-qumicos ..........................................................................................................................62 4.5.3. Protozoos flagelados ms relevantes ......................................................62 4.5.3.1. Coanoflagelados.......................................................................62 4.6. COMUNIDADES DE PROTOZOOS AMEBOIDEOS .......................................63 4.6.1. Clasificacin de los protozoos ameboideos............................................63 4.6.2. Relaciones entre los protozoos ameboideos y los parmetros fsico-qumicos .................................................................................................64 4.6.3. Protozoos ameboideos ms relevantes....................................................65 4.6.3.1. Euglypha sp..............................................................................66 4.6.3.2. Tecamebas grandes ..................................................................66 4.7. COMUNIDADES DE PROTOZOOS CILIADOS ...............................................67 4.7.1. Clasificacin de los protozoos ciliados...................................................67 4.7.2. Grupos ecolgicos de los ciliados...........................................................68 4.7.3. Relaciones entre los protozoos ciliados y los parmetros fisico-qumicos ..........................................................................................................................69 4.7.4. Especies de protozoos ciliados ms relevantes.......................................71 4.7.4.1. Opercularia articulata .............................................................71 4.7.4.2. Vorticella aquadulcis-complex ................................................72 4.7.4.3. Vorticella convallaria-complex ...............................................73 4.7.5. Diversidad especfica de los protozoos ciliados .....................................73 4.8. COMUNIDADES DE METAZOOS ....................................................................74 4.8.1. Clasificacin de los metazoos................................................................. 4.8.2. Relaciones entre los metazoos y los parmetros operacionales del proceso .......................................................................................................................... 75 4.8.3. Metazoos ms relevantes ........................................................................76 4.8.3.1. Rotferos...................................................................................76 4.9. PROBLEMAS DE FUNCIONAMIENTO............................................................77 4.9.1. Bulking filamentoso ................................................................................77 4.9.2. Foaming..................................................................................................79 5. CONCLUSIONES ..................................................................................................81 6. BIBLIOGRAFA ....................................................................................................84

1. INTRODUCCIN
1.1. DEPURACIN BIOLGICA DE LAS AGUAS RESIDUALES La depuracin biolgica de las aguas residuales consiste en la coagulacin y eliminacin de los slidos coloidales no sedimentables y la estabilizacin de la materia orgnica presente en el agua mediante la accin de los microorganismos (Metcalf y Eddy, 1995). As mismo, este conjunto de microorganismos es capaz de eliminar compuestos nitrogenados, fosfatos y otras sustancias txicas. Durante este proceso, transforman los contaminantes presentes en las aguas residuales en nueva biomasa, dixido de carbono y otros productos finales, que dependern de la naturaleza de los contaminantes y de la distribucin de los microorganismos (Irvine et al, 1988). Hay muchos tipos de procesos biolgicos aplicados al tratamiento de les aguas residuales, ya que pueden tratarse de procesos aerbicos, anaerbicos, anxicos, procesos combinados y sistemas de lagunaje. A la vez, estos procesos es poden dividir segn si el tratamiento se lleva a cabo en un sistema de cultivo en suspensin, fijo o si resulta una combinacin de los dos (Metcalf y Eddy, 1995). 1.2. SISTEMA DE DEPURACIN MEDIANTE FANGOS ACTIVO La depuracin mediante fangos activos consta de un sistema biolgico de tratamiento aerobio de cultivo en suspensin. Este proceso es basa en el cultivo suspendido de forma continua, mediante aeracin o agitacin, de una masa de microorganismos encargados de degradar los residuos del agua por va aerbica (Henze et al., 1995). Esta suspensin se denomina licor mezcla. Este sistema de depuracin fue desarrollado por Arden y Lockett (Rius, 2003) al introducir la recirculacin de la suspensin formada por biomasa activa que se haba formado durante el perodo de aeracin del agua residual. 1.2.1. Tratamiento de eliminacin de nutrientes Junto con la eliminacin de la materia orgnica, en las zonas calificadas como sensibles segn la Directiva 91/271/CEE, las depuradoras tienen que eliminar nitrgeno y/o fsforo, para evitar la eutrofizacin del medio receptor.

La eliminacin de nitrgeno se realiza mediante va biolgica a partir de la nitrificacin y la desnitrificacin. Estos procesos se consiguen a partir de modificaciones del tratamiento convencional antes descrito, donde se alternan etapas aerbicas, anxicas y anaerbicas para que la microfauna est sometida a diferentes estados de aireacin. As, en las zonas oxigenadas se pueden producir procesos de nitrificacin (paso del in amonio a nitrito y posteriormente a nitrato), y en las zonas con ausencia de oxigeno se produce la desnitrificacin (reduccin del nitrato a nitrito y de nitrito a nitrgeno molecular), consiguiendo la eliminacin de nitrgeno. El fsforo del agua residual se encuentra principalmente en forma de ortofosfatos, polifosfatos o fsforo orgnico. Este fsforo es puede eliminar del agua residual mediante precipitacin qumica con sales de hierro o mediante eliminacin biolgica. Una parte del fsforo (10 al 30%) es utilizado por los microorganismos para la sntesis celular y el transporte de energa (Metcalf y Eddy, 1995). El resto se puede eliminar mediante bacterias acumuladoras de fsforo, las cuales acumulan fosfatos en forma de polifosfatos como fuente de energa en condiciones aerbicas o anxicas, mientras que en condiciones anaerbicas, liberan una parte de este fosfato al medio. Con este proceso, en el cual la captacin de fsforo es mayor que la liberacin, se consigue eliminar fsforo del agua residual a travs de la purga de fangos (Metcalf y Eddy, 1995). 1.2.2. Parmetros operacionales y de control En un sistema biolgico de fangos activos existen una serie de parmetros fsicoqumicos y operacionales que se deben medir y controlar para mantener un funcionamiento ptimo de la planta. Estos parmetros son (Metcalf y Eddy, 1995): 1.2.2.1. Carga orgnica Es la cantidad diaria de DBO5 o DQO que entra al reactor y se calcula a partir de la concentracin de DBO5 o DQO y del caudal diario, expresndose en Kg O2/da. 1.2.2.2. Concentracin de biomasa La concentracin de biomasa se mide en slidos en suspensin voltiles del licor mezcla, SSVLM, y representa la materia en suspensin de tipo orgnico, expresado en kg/m3 .

1.2.2.3. Carga msica (F/M) Se considera que es la cantidad de materia o carga orgnica que entra al reactor respecto la concentracin de microorganismos presentes en l, y se expresa en unidades de Kg DBO5/Kg SSVLM da.
F/M = Q DBO5 VX

Donde:

Q: caudal del afluente (m3/d) DBO5: DBO5 del afluente (kg/m3) V: volumen del reactor (m3) X: concentracin de slidos en suspensin voltiles en el reactor (kg/m3)

1.2.2.4. Edad del fango o tiempo medio de retencin celular Es la masa de microorganismos presentes en el reactor aerobio dividida por la masa diaria de microorganismos purgados del sistema. El resultado se expresa en das.

x =
Donde:

VX Qw X w + (Qe Qw ) X e

V: volumen del reactor (m3) X: concentracin de slidos en el reactor (kg/m3) Qw: caudal de purga (m3/da) Xw: slidos de la purga (kg/m3) Qe: caudal del efluente (m3/da) Xe: concentracin de slidos en el efluente (kg/m3)

1.2.2.5. ndice volumtrico de fangos (IVF) Es el volumen, expresado en mililitros, que ocupa 1 gramo de slidos en suspensin del licor mezcla despus de 30 minutos de sedimentacin en una probeta de 1000 ml.
IVF = V30 1000 X

Donde:

V30: volumen de un litro de licor mezcla despus de 30 minutos de sedimentacin (ml) X: concentracin de slidos en el reactor (mg/l)

1.2.3. Fundamento del proceso El agua residual, proveniente del tratamiento primario, se introduce en el reactor biolgico o tanque de aireacin, donde se mantiene el cultivo biolgico en contacto con el agua residual. El cultivo biolgico (o licor mezcla) est formado por un gran nmero de microorganismos agrupados en flculos junto con materia orgnica y sustancias

minerales. Estos microorganismos transforman la materia orgnica mediante reacciones de oxidacin biolgica. La poblacin de microorganismos debe mantenerse a una determinada concentracin (SSVLM) para llegar a un equilibrio entre la carga orgnica a eliminar y la cantidad de microorganismos necesarios para que se elimine esta carga. Esta fase del proceso, que sucede en el reactor biolgico, requiere un sistema de aireacin y agitacin que suministre el oxgeno necesario para llevar a cabo la accin depuradora de los microorganismos aerbicos, que permita la homogeneizacin del reactor y por lo tanto, que todo el alimento llegue por igual a todos los microorganismos y que evite la sedimentacin de los flculos y del fango. Una vez la materia orgnica ha sido suficientemente oxidada, cosa que requiere un cierto tiempo de retencin del agua en el reactor (Tiempo de Retencin Hidrulico o TRH), el licor mezcla pasar al denominado decantador secundario o clarificador. Aqu, el agua se deja reposar y, por lo tanto, los fangos floculados tienden a sedimentar, consiguiendo separar el agua clarificada de los fangos. El agua clarificada constituye el efluente que se vierte al cauce, y parte de los fangos floculados son recirculados de nuevo al reactor biolgico para mantener una concentracin suficiente de microorganismos. Los fangos excedentes se extraen del sistema y se dirigen al tratamiento de fangos. 1.2.4. Formacin del flculo Adems de la importancia que tiene la microfauna en los sistemas de depuracin, la calidad del efluente en los sistemas de tratamiento de fangos activos depende de la correcta separacin entre el agua tratada y la biomasa, proceso que tiene lugar, como ya se ha comentado, en los decantadores secundarios. Para que se d esta correcta separacin entre la fase lquida y la fase slida que forma el licor mezcla, hace falta que los microorganismos formen flculos con un elevado grado de compactacin y con una elevada velocidad de decantacin, cosa que comporta una disminucin de la concentracin de slidos en suspensin en el clarificado. Los flculos estn constituidos por dos tipos de componentes: componentes abiticos, como son las partculas de materia orgnica y inorgnica que provienen del agua residual, as como sustancias polimricas extracelulares con un importante papel en la 10

biofloculacin del fango (Martnez, 2005); y componentes biticos, donde se incluyen todos los microorganismos que podemos encontrar y que se describen ms adelante. La base de los flculos est constituida por un gran nmero de bacterias hetertrofas, denominadas formadoras de flculo, entre las que se incluye el gnero Zoogloea (Jenkins et. al., 1993). Estas y muchas otras bacterias quimiohetertrofas convierten el sustrato orgnico en sustancias polimricas extracelulares, denominadas glicoclix (Costerton et. al., 1981). Este glicoclix est compuesto de carbohidratos, sustancias hmicas y protenas, muy importantes para la floculacin (Higgins y Novak, 1997). Como cualquier otro polmero orgnico, incrementa la viscosidad del agua y permite mantener juntas las clulas individuales o adjuntarlas a las superficies slidas, formando flculos ms grandes que sedimentan mejor debido a su aumento de peso. La teora del esqueleto filamentoso (Filamentous backbone theory) en los sistemas de fangos activos (Sezgin et. al., 1978) considera que existen dos tipos de niveles floculares, denominados microestructura y macroestructura: - La microestructura est formada por las bacterias formadoras de flculo mediante la adhesin, agregacin y biofloculacin de estas bacterias. Esta es la base de la formacin de los flculos, puesto que sin este tipo de microorganismos no se podran formar los grandes agregados que conforman los fangos activos. Cuando los flculos slo estn formados por bacterias floculantes (slo presentan microestructura), son generalmente de tamao pequeo y con una morfologa esfrica y compacta. En este caso, la sedimentacin suele ser deficiente, obteniendo un efluente con una elevada turbidez. - La macroestructura est formada por las bacterias filamentosas. Cuando adems de las bacterias formadoras de flculos tambin hay presentes bacterias filamentosas, los flculos presentan la denominada macroestructura, puesto que estos microorganismos filamentosos forman como una red o esqueleto al cual se van adhiriendo las bacterias floculantes. En este caso los flculos son de mayor tamao, con formas ms irregulares y menos compactas (Jenkins et. al., 1993; Wanner, 1994), obteniendo as una buena sedimentacin y por lo tanto, un efluente con baja turbidez. Las bacterias filamentosas pueden ocupar varios espacios dentro del licor mezcla. Dependiendo de su localizacin tendrn un carcter ms o menos problemtico.

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Pueden crecer dentro de los flculos. El resultado es el llamado flculo ideal, en el cual los microorganismos filamentosos y las bacterias formadoras de flculos crecen en un cierto equilibrio. Los microorganismos filamentosos se desarrollan dentro de los flculos en equilibrio con las bacterias floculantes, cosa que confiere al flculo una estructura compacta, con una elevada cohesin, puesto que actan como esqueleto alrededor del cual se van agregando el resto de microorganismos.

Pueden extenderse desde el interior de los flculos o desde la superficie de stos hasta el medio lquido que los rodea. Esto afecta de manera negativa a la morfologa del flculo por la irregularidad de los mrgenes y por su interaccin con otros agregados. Un desarrollo excesivo de los microorganismos filamentosos puede llegar a formar los denominados puentes interfloculares (uniones entre diferentes flculos), dificultando as su sedimentacin y provocando el fenmeno denominado bulking o esponjamiento del fango que se describe en el apartado 1.6.5. de este captulo. Este esponjamiento del fango puede conducir a situaciones donde los fangos del decantador se escapan, comportando un empeoramiento en la calidad del efluente.

Tambin pueden crecer masivamente en el interior de los flculos, disgregando su estructura. En este caso los flculos suelen ser de tamao grande, con mrgenes difciles de distinguir, de formas irregulares y con grandes huecos en el interior, presentando lo que se denomina estructura abierta. Esta estructura tambin puede conducir a episodios de esponjamiento del fango dado que la densidad de los flculos abiertos es ms similar a la del agua y su capacidad de decantacin y compactacin disminuye.

La correcta formacin de los flculos determina la calidad de los fangos activos, puesto que est relacionada con la sedimentabilidad, el esponjamiento y el espesamiento del fango, y con la calidad final del efluente. Una completa observacin del fango, incluyendo el anlisis microscpico para examinar las caractersticas tpicas del flculo cmo pueden ser el tamao, la forma, la estructura, la consistencia, etc., es necesaria para evitar problemas indeseados en la sedimentacin.

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1.3. LOS MICROORGANISMOS DE LOS SISTEMAS BIOLGICOS DE DEPURACIN En estos tipos de sistemas de depuracin se puede encontrar una gran variedad de organismos. Las poblaciones de microorganismos de estos sistemas estn constituidas principalmente por descomponedores (bacterias y ocasionalmente hongos), que utilizan la materia orgnica disuelta del agua, y los consumidores (flagelados, amebas, ciliados y pequeos metazoos) que se alimentan de bacterias dispersas y otros organismos (Madoni, 1994). La relacin entre los diversos componentes biolgicos de estas poblaciones constituye una red trfica compleja que va cambiando con el tiempo y en funcin de las condiciones del sistema. A continuacin se describen los diferentes grupos de organismos que se pueden encontrar en estos sistemas. 1.3.1 Bacterias El componente mayoritario en un sistema de depuracin biolgico son las bacterias (Ros, 2003), las cuales son el grupo ms importante de los microorganismos de los fangos activos debido a que pueden metabolizar una gran cantidad de compuestos orgnicos, y en algunas ocasiones, tambin algunos nutrientes presentes en el agua residual. Las bacterias presentes en los sistemas de depuracin se pueden dividir en tres grandes grupos segn su relacin con los flculos y su morfologa: a) Bacterias dispersas: son aquellas que se encuentran libres por el licor mezcla, sin agregarse formando flculos, pudiendo ser consumidas por los protozoos o escaparse con el efluente. Las bacterias floculantes pasan por una etapa inicial donde su capacidad de flocular es nula o muy limitada y se encuentran dispersas por el licor mezcla. Si la abundancia de bacterias dispersas es muy elevada, la turbidez del efluente incrementa. b) Bacterias floculantes: son capaces de segregar polmeros extracelulares, los cuales tienen una consistencia pegajosa que permite que muchos microorganismos se unan y formen flculos. Los flculos constituyen una formacin estable puesto que decantan y pueden ser recirculados desde el decantador hacia el reactor aerobio, por lo cual no son eliminados con el efluente (Fernndez-Galiano et. al., 1996). c) Bacterias filamentosas: son bacterias que, tras su divisin, las clulas no se separan y quedan asociadas entre s formando filamentos.

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Por otra parte, las bacterias tambin se pueden clasificar segn sus propiedades metablicas y el tipo de sustrato del que son capaces de alimentarse (Wanner, 1994), distinguindose los siguientes grupos: a) Bacterias aerbicas hetertrofas: corresponden a la mayora de las bacterias presentes en los fangos activos. Son bacterias capaces de metabolizar la materia orgnica biodegradable presente en el agua residual. b) Bacterias nitrificantes: son bacterias auttrofas y aerbicas estrictas. Los gneros ms importantes en fangos activos son Nitrosomonas y Nitrobacter, que son responsables, respectivamente, de la oxidacin del amonaco a nitrito y posteriormente a nitrato (Ros, 2003). c) Bacterias desnitrificantes: son bacterias anaerbicas facultativas capaces de utilizar el nitrato como aceptor final de electrones, convirtiendo el nitrato en nitrgeno atmosfrico (Henze et. al., 1995). d) Bacterias fermentativas: estas bacterias pueden realizar reacciones que tienen lugar en ausencia de oxgeno y nitrgeno. Slo son abundantes en fangos activos si se produce un mal funcionamiento del sistema o en la zona anaerobia en sistemas con procesos biolgicos de eliminacin de fsforo. e) Bacterias acumuladoras de polifosfatos (PAO): incluyen todas aquellas bacterias capaces de acumular grandes cantidades de fosfatos en forma de grnulos de polifosfatos. Este fosfato es utilizado por las bacterias como reserva de energa y, en condiciones anaerbias, para asimilar el carbono orgnico y almacenarlo en forma de grnulos de poli-hidroxibutirato (grnulos de PHB) (Beccari y Ramadori, 1994). En este estudio no se han diferenciado de las bacterias acumuladoras de glicgeno (GAO) dado que son morfolgicamente iguales. Por esta razn en este estudio se habla de bacterias PAO/GAO. f) Bacterias sulfato-reductoras: son bacterias anaerobias estrictas que pueden utilizar los sulfatos como aceptor de electrones, reducindolos a sulfuros. g) Bacterias sulfuroxidantes: son capaces de oxidar las formas reducidas de azufre hasta azufre elemental, forma que estas bacterias pueden acumular como reservas intracelulares (grnulos refulgentes, visibles con el microscopio ptico con contraste de fases). Estas reservas pueden ser metabolizadas en condiciones aerobias con carencia de

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sustrato externo. En fangos activos son importantes las bacterias filamentosas Thiothrix y Beggiatoa, entre otros (Wanner, 1994). 1.3.2. Protozoos Los protozoos son organismos unicelulares eucariotas, no tan abundantes como las bacterias, pero con un papel muy importante en la clarificacin del agua residual puesto que se alimentan de las bacterias libres presentes en los sistemas de fangos activos. Adems, segregan enzimas que estimulan la floculacin de las bacterias (Curds, 1963). Dentro de los protozoos que podemos encontrar en los fangos activos diferenciamos tres grandes grupos segn su morfologa y movilidad: flagelados, amebas y ciliados. Flagelados: los protozoos flagelados poseen uno o ms flagelos que utilizan para el desplazamiento y/o la alimentacin. Se distinguen dos grupos, los fitoflagelados y los zooflagelados (Levine et. al., 1980). Entre los primeros se encuentran aquellos gneros que presentan plastos y que normalmente no son abundantes en los sistemas de fangos activos debido a que la turbidez del agua no permite el paso de la luz. Los zooflagelados son hetertrofos y son frecuentes en los fangos activos, su abundancia puede variar de pocos centenares de clulas por mililitro a millones de clulas por mililitro (Salvad et al, 1997). Pueden alimentarse de materia orgnica soluble o de bacterias (Wanner, 1997). Los flagelados, en concreto los de pequeo tamao (< 20 m), aparecen principalmente en las fases de inicio de la colonizacin de los fangos activos o bien asociados a un mal funcionamiento del proceso, como por ejemplo una baja concentracin de oxgeno disuelto o un exceso de carga orgnica (Madoni, 1991). Son ejemplos comunes de flagelados presentes en sistemas de depuracin biolgicos los gneros Bodo, Peranema, Entosiphon, etc. Rizpodos o amebas: este tipo de microorganismos se desplazan mediante la emisin de seudpodos (extensiones del propio cuerpo). Se alimentan de materia orgnica particulada, bacterias y otros protozoos mediante fagocitosis. Se distinguen dos grupos segn la presencia o ausencia de teca: las gimnamebas o amebas desnudas, con el cuerpo sin forma definida, y las tecamebas, que presentan una estructura de proteccin denominada teca que recubre la clula. Al igual que los flagelados, las gimnamebas de pequeo tamao (< 20 m) suelen asociarse a bruscos incrementos en la carga orgnica del afluente, apareciendo sobre todo en las primeras etapas de colonizacin de un fango (Sangesa et al., 2007). Contrariamente, las de tamao grande (> 50 m) suelen

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aparecer en sistemas con cargas msicas inferiores y, en general, con un buen rendimiento del proceso. Las tecamebas suelen estar relacionadas con la presencia de procesos de nitrificacin (Madoni, 1994). Entre las gimnamebas se pueden destacar los gneros Amoeba, Mayorella y Vahlkampfia y como gneros ms comunes de tecamebas se pueden destacar Arcella, Euglypha y Centropyxis (Rius, 2003). Ciliados: se caracterizan por presentar cilios que utilizan por desplazarse y/o alimentarse. Adems, presentan dos tipos de ncleos, uno ms grande (macroncleo), que tiene funcin vegetativa, y uno ms pequeo (microncleo), con funcin reproductora. Los principales caracteres que se utilizan para su clasificacin son la posicin y forma del citostoma y la ciliatura oral, el tipo de ciliacin somtica, la forma y tamao del cuerpo y el nmero, morfologa y posicin de los ncleos y las vacuolas contrctiles. Los protozoos ciliados son el grupo ms estudiado y ms utilizado en el control de los procesos de depuracin del sistema de fangos activos. Esto se debido a las siguientes caractersticas: a) Son organismos muy abundantes en los fangos activos, con concentraciones que oscilan entre los 2.000 y 100.000 individuos por mililitro, y con una gran variedad de especies, habindose descrito un total de 160 especies en depuradoras (Curds, 1975). Adems, su identificacin es mucho ms sencilla y rpida de realizar en comparacin con la de las bacterias y flagelados. b) Su principal funcin es la ingestin de bacterias dispersas, contribuyendo a la clarificacin del efluente debido a una disminucin de la turbidez as como de la DBO5 (Fernndez-Galiano, 1994). Adems, tambin eliminan bacterias patgenas y fecales, observndose que en tanques aerobios con presencia de protozoos se puede llegar a una eliminacin del 95 % de la bacteria Escherichia coli (Curds y Fey, 1969). c) La estructura de las comunidades de protozoos han sido utilizadas como parmetro de control del proceso, sin necesidad de efectuar largos o costosos anlisis. Un fango bien colonizado, estabilizado y con un buen rendimiento de depuracin posee una microfauna bien diversificada. En cambio, un fango colonizado nicamente por una sola especie indica un desequilibrio trfico (Garca, 2003). d) Estimulan el metabolismo bacteriano, ya que al ingerir bacterias se estimula el crecimiento y el metabolismo de otras, lo que comporta un incremento del rendimiento

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del proceso. Adems, presentan la capacidad de inducir la floculacin de las bacterias presentes debido a la secrecin de polisacridos (Curds, 1963). e) Inducen un proceso de seleccin en el crecimiento de las bacterias floculantes y filamentosas, puesto que con la formacin de flculos grandes son ms difciles de ingerir que las bacterias libres, lo que facilita la formacin de la denominada macroestructura (Salvad, 2007). f) Mediante su actividad depredadora sobre el fango y las bacterias libres contribuyen significativamente a que la cantidad de fango producida sea menor (Salvad, 2007). Los protozoos ciliados pueden clasificarse, segn su alimentacin, en especies carnvoras, cuando se alimentan de otros protozoos, o en especies bacterifagas, cuando se alimentan de bacterias. Otra clasificacin a partir de su hbitat o relacin con el flculo los engloba en tres grupos funcionales: nadadores, reptantes y ssiles (Madoni, 1994). Los nadadores corresponden a los ciliados que nadan activamente por el licor mezcla y entre los flculos; los reptantes tambin son formas libres pero se encuentran normalmente en las superficies de los flculos, explotando los recursos alimentarios asociados a ellos, y los ssiles estn unidos a los flculos mediante el propio cuerpo, una cubierta o loriga o un pednculo. El anlisis de la abundancia y frecuencia de estos grupos da una idea de la estructura de la comunidad y puede servir como ndice de estabilidad del sistema. Esto es debido a que, como ya se ha comentado, los flculos formados en el reactor sedimentan en el decantador secundario y son recirculados al reactor, favoreciendo selectivamente a las especies asociadas a los flculos respeto las libres, puesto que estas pueden ser eliminadas con el efluente (Madoni, 1991). Por lo tanto, un sistema funcionalmente estabilizado tendr una abundancia superior de especies reptantes y ssiles frente al resto, debido al hecho de permanecer asociadas a los flculos. 1.3.3. Metazoos Los metazoos son organismos pluricelulares. Suelen ser ms abundantes en sistemas de depuracin mediante pelcula fija que en fangos activos. Se alimentan de bacterias dispersas y floculantes, as como de pequeas partculas orgnicas (Doohan, 1975). En general se considera que su aparicin indica una elevada edad del fango (Madoni, 1988). Los grupos ms comunes en los sistemas de fangos activos son los rotferos y los nematodos, y en menor frecuencia los oligoquetos, los gastrotricos y los tardgrados.

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1.4. RELACIONES TRFICAS ENTRE LOS MICROORGANISMOS En los procesos de depuracin intervienen una gran cantidad de relaciones interespecficas entre los diferentes microorganismos (Figura 1.1.), establecindose entre ellos relaciones de competencia y/o dependencia, de tal forma que tanto la materia orgnica como el flujo de energa se transforman y fluyen por el sistema. El desarrollo de as bacterias hetertrofas, descomponedores de la materia orgnica, est limitado tanto por la cantidad como por la calidad de los nutrientes presentes en el licor mezcla. Los aumentos de la poblacin de protozoos depredadores depende de la cantidad de bacterias de los que se alimentan, mientras que estos son depredados por otros organismos de tamao ms grande (Madoni, 1986).

Figura 1.1. Esquema de las relaciones trficas entre los grupos de microorganismos que forman la comunidad bitica del proceso de fangos activos (Salvad, 2006b).

1.5. SUCCESIN TEMPORAL Las relaciones trficas son dinmicas y cambiantes en el tiempo debido a la depredacin y la competicin que tienen lugar entre los diferentes microorganismos que coexisten en el licor mezcla as como por las caractersticas del agua residual que alimenta al

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sistema, las cuales acaban llevando a una situacin de estabilidad dinmica dentro del reactor aerobio (Madoni, 1994). La modificacin de alguna variable que altere las interrelaciones puede alterar gravemente el correcto funcionamiento del sistema. En las primeras etapas de puesta en marcha de una planta o en edades del fango bajas hay muchos nutrientes disponibles respecto la cantidad de microorganismos presentes, siendo la carga msica muy elevada (superior a 1 Kg DBO5/kg SSVLM). En estos ambientes los primeros microorganismos que aparecen son las bacterias libres, que tienen una tasa de divisin muy elevada. Estas van retirando materia orgnica del sistema permitiendo que otros microorganismos colonicen el medio. A medida que va incrementando la edad del fango, van apareciendo diferentes tipos de protozoos: primero los flagelados de pequeo tamao y pequeos ciliados libre-nadadores, despus otros ciliados nadadores as como reptantes y, posteriormente, ciliados ssiles y metazoos. Las bacterias dispersas van desapareciendo, siendo sustituidas por bacterias floculantes y filamentosas, y los flculos van compactndose y aumentando de tamao. Esta evolucin temporal en la sucesin nos indica una mejora de la calidad del proceso de depuracin y, en consecuencia, del agua de salida de la planta. Si esta sucesin sucediera a la inversa, indicara que las condiciones del sistema estn empeorando y, por lo tanto, la calidad del efluente tambin disminuira. 1.6. UTILITZACIN DE LA MICROFAUNA COMO BIOINDICADOR DEL PROCESO La bioindicacin se puede definir como un mtodo de trabajo en el cual, a travs de la observacin microscpica de un fango activo, podemos saber como est funcionando el proceso y como modificar los parmetros operacionales para obtener un rendimiento ptimo. Los microorganismos que se utilizan en la bioindicacin son, principalmente, los protozoos y los metazoos. La abundancia y diversidad de sus comunidades son fundamentales para evaluar el grado de funcionamiento de los sistemas y la calidad del efluente. Las comunidades, pero, van cambiando a medida que varan las diferentes variables de funcionamiento de los reactores aerobios, por lo tanto, no se pueden hacer generalizaciones. As y todo, existen grupos de microorganismos que toleran rangos muy estrechos de ciertas condiciones ambientales, y su presencia en un sistema indicar condiciones determinadas del medio.

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As, los microorganismos pueden ser indicadores de varios parmetros operacionales del proceso como son: la calidad del efluente, la carga msica, la edad del fango, la concentracin de oxgeno disuelto en el tanque aerobio y la presencia de toxicidad. Si se conocen estas caractersticas de vida se pueden preveer situaciones que a veces no son detectables mediante tcnicas analticas convencionales y esto da capacidad de actuar antes de que aparezcan graves problemas en el proceso. La bioindicacin tiene, adems, la ventaja de ser un mtodo de realizacin rpida. 1.7. PROBLEMAS DE SEPARACIN LQUIDO/SLIDO EN EL

TRATAMIENTO DE FANGOS ACTIVOS En las estaciones depuradoras de tratamiento por fangos activos se desarrollan muchos problemas que pueden afectar gravemente a la calidad del efluente. La mayor y ms comn de las consecuencias es la prdida de slidos con el efluente debido a una separacin insuficiente entre el agua tratada y la biomasa o fango durante la decantacin secundaria. Esta prdida de slidos puede provocar problemas en el sistema receptor del efluente por contaminacin bacteriana as como por contaminacin por materia orgnica con una DBO y DQO muy elevada, produciendo problemas de deficiencia de oxgeno (eutrofizacin del medio receptor). Estos problemas pueden ser originados por varios factores, aunque en este estudio nos centraremos en los problemas de tipo microbiolgico que aparecen en los procesos de depuracin por fangos activos. Entre estos podemos encontrar la formacin del denominado pin-point floc, el bulking viscoso, la ascensin de los fangos en el decantador secundario, el esponjamiento del fango (bulking filamentoso) y la produccin de espumas de origen biolgico (foaming). Tambin se pueden producir ms de uno de estos procesos a la vez. 1.7.1. Pin-point floc o pin-floc El pin-point floc (o flculo en punta de aguja) se puede definir como un problema originado cuando, en la formacin de los flculos, slo hay presentes las bacterias floculantes y no aparecen o en muy poca cantidad los microorganismos filamentosos. Estos flculos slo presentan microestructura y son de pequeo tamao y consistencia dbil (Figura 1.2) y, por lo tanto, son fcilmente desgarrados y rotos por la turbulencia propia del tanque de aireacin. Generalmente los flculos ms grandes y compactos sedimentan ms rpidamente, pero los ms pequeos se quedan en suspensin, hecho 20

que normalmente se traduce en un clarificado turbio durante la separacin lquido/slido en decantacin secundaria.

Jessica Vasco Figura 1.2. Microfotografa en contraste de fases que muestra la apariencia de los flculos en una situacin de pin-point floc. (100x aumentos).

Los factores que pueden interrumpir la formacin de los flculos y producir pin-point

floc son: una edad del fango muy baja o una excesiva edad del fango, turbulencias
excesivas en el reactor aerobio, presencia de txicos o surfactantes y deficiencia de oxgeno (Martnez, 2006). 1.7.2. Bulking viscoso Este problema, tambin conocido como bulking no filamentoso, se produce por una produccin excesiva de polmeros extracelulares, normalmente asociada al crecimiento de las bacterias floculantes como Zoogloea o bacterias PAO/GAO (Figura 1.3). Esta produccin excesiva de exopolmeros puede dar una consistencia gelatinosa al fango activo, provocando una reduccin de la velocidad de sedimentacin y de la compactacin del fango (Jenkins et. al., 1993), as como disminuir su rendimiento de deshidratacin. Frecuentemente tambin se producen espumas producidas por los exopolmers que generan el bulking viscoso. La excesiva presencia de los polmeros extracelulares se puede poner de manifiesto microscpicamente con tinta china (Jenkins et. al., 1993). Se deposita una gota de tinta china junto al cubreobjetos con la muestra y se deja que penetre por el cubreobjetos. Si hay una excesiva cantidad de exopolmeros la tinta no penetrar dentro de los flculos. Los principales factores que producen bulking viscoso son la deficiencia de nutrientes, la deficiencia de oxgeno y cargas msicas elevadas (Richard, 2003). 21

a)

Jessica Vasco

b)

Jessica Vasco

Figura 1.3. Microfotografas en contraste de fases de las bacterias que pueden producir bulking viscoso: a) bacterias PAO/GAO; b) bacteria Zoogloea. (1000x aumentos).

1.7.3. Ascensin de los fangos Este fenmeno se produce por la presencia de procesos de desnitrificacin en el decantador secundario, cosa que indica que primero han tenido lugar procesos de nitrificacin en el reactor aerobio. Durante la desnitrificacin, los nitratos y nitritos se convierten en nitrgeno gas. El nitrgeno gas se adhiere a la superficie de los flculos y estos son arrastrados a la superficie, haciendo que floten por la superficie del decantador secundario, producindose la prdida de slidos con el efluente. No se debe confundir la ascensin del fango con el bulking ni con las espumas; en el caso del bulking, los fangos sedimentan, pero el manto de fango se encuentra ms o menos cerca de la superficie, y en el caso de las espumas, estas suelen aparecer primero en el reactor aerobio y posteriormente pasar al decantador secundario. A la hora de determinar las principales causas de ascensin de fangos hace falta diferenciar entre las EDARs que estn diseadas para nitrificar y desnitrificar (eliminacin de nitrgeno), de las EDARs que no lo estn. En las depuradoras que normalmente eliminan nitrgeno, la subida de fangos est producida por una incompleta desnitrificacin en el tanque anxico debido a un periodo de anxia insuficiente, a carencia de materia orgnica, etc. En cambio, en las depuradoras que no estn diseadas para eliminar nitrgeno, si se producen procesos de nitrificacin pero la desnitrificacin es incompleta en el reactor aerobio, el fango acaba de desnitrificar en el decantador secundario, producindose el problema de la ascensin de fangos a la superficie. Los principales factores que pueden

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provocar la desnitrificacin en los decantadores secundarios son un edad del fango elevada, elevadas temperaturas y la presencia de materia orgnica (Martnez, 2006). 1.7.4. Bulking filamentoso El bulking filamentoso, tambin denominado esponjamiento del fango, es, probablemente, el problema ms frecuente en las EDARs de todo el mundo. Se produce por una proliferacin masiva de microorganismos filamentosos, cosa que dificulta la sedimentacin del fango en el decantador secundario. Los microorganismos filamentosos pueden crecer en el interior de los flculos y producir una estructura flocular difusa o abierta, o bien pueden extenderse desde los mrgenes de los flculos, unindolos entre s, dando lugar a puentes interfloculares (Figura 1.4). Estos dos tipos de crecimiento pueden llegar a generar bulking filamentoso. El tipo de interferencia en la compactacin de los flculos depende del tipo de microorganismo filamentoso. As, microorganismos filamentosos como Microthrix

parvicella, Nostocoida limicola I y II, el Tipo 0092 o el Tipo 0675 producen,


normalmente, estructuras difusas, mientras que Nostocoida limicola III, Sphaerotilus

natans, Thiothrix I y II o el Tipo 021N originan puentes interfloculares (Jenkins et. al.,
2003). Para determinar episodios de esponjamiento del fango generalmente se utiliza como referencia el ndice volumtrico del fango (IVF). As, la probabilidad de producirse problemas por bulking filamentoso es importante cuando el IVF toma valores superiores a los 150-200 ml/g. Microscpicamente, se habla de susceptibilidad de producirse un episodio de bulking filamentoso cuando la concentracin total de microorganismos filamentosos supera los 200 m/ml (Salvad, 1990).

Jessica Vasco

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Figura 1.4. Microfotografias en contraste de fases de los efectos de los microorganismos filamentosos en la morfologia de los flculos: (a) puentes interfloculares (100x); (b) estructura flocular difusa. (400x).

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Las principales causas que provocan bulking filamentoso son aquellas que producen un crecimiento masivo de los microorganismos filamentosos, y en general son: concentraciones bajas de oxgeno disuelto, cargas msicas bajas, septicidad (concentracin de sulfuros), deficiencia de nutrientes, pH bajos y presencia de grasas y/o aceites (Jenkins et. al., 2003). No todos los microorganismos proliferan con las mismas condiciones, por eso es importante una correcta identificacin microscpica de los microorganismos filamentosos. En la tabla 1.1. se muestran las principales posibles causas y los microorganismos filamentosos relacionados con estas causas.

Tabla 1.1. Resumen de las condiciones asociadas con el crecimiento de los microorganismos filamentosos en los sistemas de fangos activos (adaptado a partir de Jenkins et al., 2003).

Causas Concentracin de oxgeno disuelto baja Septicidad Deficiencia de nutrientes Carga msica baja Aceites y/o grasas pH bajo

Microorganismos filamentosos

S. natans, H. hydrossis, Tipo 1701 Thiothrix Y y II, Beggiatoa sp., Tipo 021N y Tipo 0914 Thiothrix Y y II, S. natans, Tipo 021N, Tipo 0041, Tipo 0675, N. limicola III y H. hydrossis M. parvicella, actinomicetos nocardioformes, H. hydrossis, Tipo 021N, Tipo 0041, Tipo 0675, Tipo 0092, Tipo 0581, Tipo 0961, Tipo 0803 y Tipo 1851 Actinomicetos nocardioformes, M. parvicella y Tipo 1863 Hongos

1.7.5. Foaming El foaming o espumas es otro problema relacionado con la abundancia elevada de algunos microorganismos filamentosos especficos que provoca la aparicin de flotantes, tambin denominados natas, en la superficie tanto del reactor aerobio como del decantador secundario. Tambin existen otros tipos de espumas como las originadas por surfactantes biodegradables y no biodegradables, que suelen aparecer en puestas en marcha de procesos (EMASESA, 1997). Los microorganismos filamentosos o grupos de microorganismos filamentosos que pueden provocar espumas son principalmente tres: los actinomicetos nocardioformes y

Microthrix parvicella (los dos ms comunes) y el Tipo 1863 (pocas veces). Adems de
estos tres, hay otros microorganismos filamentosos que tambin se han encontrado en la observacin de espumas, lo que podra indicar que tambin provocan espumas. Estos 24

otros microorganismos son: el Tipo 0041, el Tipo 0675, el Tipo 0092 y Nostocoida

limicola II (Eikelboom, 1991).


La principal caracterstica que provoca la formacin de espumas es la naturaleza hidrofbica de las paredes celulares, que en contacto con las burbujas de aire presentes en el reactor aerobio hacen que los flculos floten (Jenkins et. al., 2003). Adems, estos microorganismos tambin producen materiales extracelulares hidrofbicos (lpidos, lipoprotenas, protenas y carbohidratos con propiedades de biosurfactantes...) que incrementan la capacidad de flotar de las clulas y, en consecuencia, de formar espumas (Wanner, 1994). Las espumas producidas por el Tipo 1863 son de color gris a blanco y generalmente de poca consistencia; en cambio, las espumas producidas por los actinomicetos nocardioformes y por Microthrix parvicella son de color marrn a marrn oscuro y mucho ms persistentes. Se considera que concentraciones de actinomicetos nocardioformes superiores a los 50 m/ml son susceptibles de producir espumas (Salvad, 1990). Las causas que provocan espumas dependen del tipo de microorganismo filamentoso que las est originando. El crecimiento de los actinomicetos nocardioformes est asociado a cargas msicas bajas, edades del fango elevadas, presencia de grasas, aceites y/o hidrocarburos, as como elevadas temperaturas. Las condiciones que favorecen el crecimiento de Microthrix parvicella son cargas msicas bajas, edades del fango elevadas, procesos de nitrificacin y/o desnitrificacin incompletos (presencia de nitratos y/o nitritos), presencia de aceites y/o grasas en el sistema y bajas temperaturas. El Tipo 1863 no es muy comn en los sistemas de fangos activos y suele aparecer en las primeras etapas de estabilizacin de un fango; las posibles condiciones que favorecen su crecimiento son elevadas cargas msicas, concentraciones de oxgeno disuelto bajas (Martnez, 2006) y episodios de cloracin peridicos.

2. OBJECTIVOS
El principal objetivo de este proyecto ha sido el de estudiar el proceso de depuracin de una serie de depuradoras biolgicas de fangos activos, con tratamiento convencional y tratamiento de eliminacin de nutrientes (nitrgeno y fsforo), y caracterizar las comunidad de microorganismos presentes en estos sistemas.

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Ampliar los conocimientos sobre el proceso de depuracin por fangos activos y las comunidades de microorganismos tiene como objetivo mejorar la gestin de los procesos de depuracin para reducir el impacto ambiental provocado por los vertidos de las aguas depuradas al medio receptor. Como objetivos ms concretos nos hemos propuesto: 1.- Analizar el proceso de depuracin de las depuradoras estudiadas a travs de los parmetros fsico-qumicos, tanto del afluente como del efluente, y operacionales del proceso. 2.- Estudiar las diferencias existentes, en cuanto a la eficiencia del tratamiento, entre los sistemas de tratamiento convencionales y lo de eliminacin de nutrientes. 3.- Caracterizar la estructura flocular del fango. 4.- Determinar las comunidades de los microorganismos que se desarrollan en los sistemas de depuracin mediante fangos activos convencionales y con eliminacin de nutrientes. 5.- Estudiar las relaciones que se establecen entre las especies o grupos de microorganismos y los parmetros fsico-qumicos y operacionales del proceso de depuracin. 6.- Analizar los efectos de los microorganismos filamentosos sobre los fangos activos y estudiar los principales problemas de separacin lquido-slido que producen.

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. DESCRIPCIN DE LAS ESTACIONES DEPURADORAS DE AGUAS RESIDUALES Para realizar este estudio se han identificado las poblaciones de microorganismos y las estructuras floculares en dos grupos diferenciados de muestras: 106 muestras correspondientes a 20 EDARs urbanas (EDARU) de la comarca de Lrida, comprendidas en el periodo de 2005 a 2007. De estas 20 depuradoras, la mitad corresponden a depuradoras con tratamiento convencional, representando un total de 55 muestras, y la otra mitad a depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes, constituyendo 51 muestras.

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La periodicidad de muestreo y el nmero de muestras analizadas es diferente para cada EDAR, segn los requerimientos de cada estacin depuradora. Esto provoca que se hayan acumulado muchos datos de algunas depuradoras y pocas de otras. Las muestras han sido analizadas en el laboratorio de la empresa Hydrolab Microbiologica. Los datos fsico-qumicos y operacionales utilizados en este estudio han sido proporcionados por la empresa que se encarga de la gestin de las depuradoras estudiadas. 3.2. RECOGIDA DE LAS MUESTRAS La observacin microscpica se llev a cabo a partir de las muestras de licor mezcla correspondientes al reactor aerobio de las diferentes estaciones depuradoras estudiadas. Las muestras para el anlisis biolgico se recogieron en frascos de plstico de aproximadamente 500 ml. Los recipientes se llenaron con unos 250 ml de fango activo (licor mezcla), dejando una cmara de aire para que el fango no se quedara sin oxgeno. El traslado hasta el laboratorio se realiz en un periodo de como mximo 24 horas tras la recogida de la muestras para evitar su alteracin. 3.3. OBSERVACIN MICROSCPICA La observacin microscpica es uno de los anlisis ms importantes que se deben realizar en una estacin depuradora de fangos activos. Esta observacin permite deducir si el sistema est bien equilibrado o si existe algn tipo de disfuncin (Salvad, 1999). El anlisis microscpico se realiz en el laboratorio de la empresa Hydrolab Microbiologica y consisti bsicamente en la observacin de la estructura y morfologa del fango y en la identificacin y cuantificacin de los diferentes tipos de microorganismos presentes en las muestras (microorganismos filamentosos, protozoos flagelados, protozoos rizpodos, protozoos ciliados y metazoos). Todas las observaciones se realizaron mediante la observacin en vivo con un microscopio triocular NIKON, modelo Eclipse 50i, utilizando tanto la iluminacin de campo claro como el contraste de fases, dotado con los objetivos de 100x, 400x y 1000x. Las microfotografas obtenidas, tanto de las muestras en vivo como de las muestras en tincin, se realizaron a partir de una cmara fotogrfica NIKON Coolpix 4500 incorporada al microscopio.

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3.4. DETERMINACIN DEL ESTADO MORFOLGICO Y ESTRUCTURAL DEL FANGO La evaluacin de las caractersticas morfolgicas y estructurales de los flculos del fango activo (tamao, estructura, cobertura, etc.) proporciona informacin sobre las propiedades de decantacin y compactacin del fango activo durante la fase de clarificacin del licor mezcla. Tambin se determinaron otras observaciones que permiten hacer una valoracin global ms completa del estado del fango. 3.4.1 Tamao El tamao de los flculos se refiere al dimetro mximo de los mismos y se midi con un ocular de microscopio con micrmetro incorporado. Se midieron entre 10 y 20 flculos y se escogi el rango mayoritario o con ms predominio. Segn Jenkins et. al. (1993) y EMASESA (1997) se distinguen entre: Flculos pequeos: flculos menores de 150 m. Flculos medianos: flculos entre 150 y 500 m. Flculos grandes: flculos mayores de 500 m.

3.4.2. Estructura Tambin se observ el grado de compactacin del flculo. Se determin observando tambin entre 10 y 20 flculos (EMASESA, 1997), distinguiendo entre: Flculos compactos: no existen casi huecos en la estructura interna del flculo. Flculos moderadamente abiertos: se observan algunos huecos, no excesivamente grandes, en el interior de los flculos. Flculos abiertos: los flculos tienen muchos huecos en el interior, rompindose la estructura interna. Generalmente esta situacin vendr asociada con una abundancia muy elevada de microorganismos filamentosos (disgregacin). 3.4.3. Grado de cobertura (concentracin) Con el objetivo de 10x se observaron varios campos visuales representativos de la muestra y se calcul el grado de cobertura que representaban los flculos respecto del campo visual:

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Baja: los flculos cubren menos del 10 % de la superficie del campo visual. Mediana: los flculos cubren entre el 10 y el 50 % de la superficie del campo visual. Elevada: los flculos cubren entre el 50 y el 90 % de la superficie del campo visual. Muy elevada: los flculos cubren ms del 90 % de la superficie del campo visual.

3.4.4. Otras observaciones Las observaciones que se realizaron fueron: Abundancia de bacterias dispersas mediante rangos de abundancia de 1 a 3, siendo 1 poco abundantes y 3 muy abundantes. Abundancia de bacterias helicoidales (espiroquetas y espirilos) mediante rangos de abundancia de 0 a 3, siendo 0 ausencia y 3 muy abundantes. Abundancia de ndulos de bacterias GAO/PAO mediante rangos de abundancia de 0 a 2, siendo 0 ausencia y 2 abundantes. Presencia/Ausencia de ndulos de Zoogloea sp, mediante rangos de abundancia de 0 a 1, siendo 0 ausencia y 1 presencia. 3.5. DETERMINACIN DE LOS PARMETROS BIOLGICOS 3.5.1. Identificacin de los microorganismos La identificacin de los diferentes microorganismos presentes en las muestras de licor mezcla se realiz a partir de observaciones en vivo mediante microscopa ptica de campo claro y de contraste de fases, as como mediante tinciones especficas en los casos que eren necesarias. Para la identificacin de los microorganismos muy activos, se extrajo agua de entre el cubreobjetos y el portaobjetos mediante un papel de filtro sin llegar a secar totalmente la muestra o se esper a que se evaporara algo de agua para retardar el movimiento de los microorganismos y conseguir as, una mejor observacin de sus caractersticas taxonmicas. 3.5.1.1. Tcnicas de tincin Se utilizaron diferentes tcnicas de tinciones para la identificacin de los microorganismos presentes en los fangos activos, tanto de los protozoos ciliados como

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de los microorganismos filamentosos (los protocolos de todas las tinciones citadas se encuentran en el anejo). Para facilitar la identificacin de los protozoos ciliados se realiz la coloracin vital con verde de metil actico, que tie el material gentico y permite la observacin de los ncleos con ms claridad. a) Coloraciones vitales Se pueden utilizar diferentes colorantes, entre los cuales se ha utilizado el verde de metil-actico, que permite visualizar los ncleos de un color verde esmeralda. La muestra teida se observa al microscopio con campo claro y a 400x aumentos. En el caso de los microorganismos filamentosos se realizaron las tinciones diferenciales de Gram y Neisser, la tincin de grnulos de PHB, la tincin de vainas y la tincin de grnulos de azufre segn Jenkins et. al. (1993). La observacin de las muestras teidas se realiza a campo claro y a 1000x aumentos. b) Tincin de Gram Se trata de una tcnica de tincin diferencial que permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas, en funcin del grado de permeabilidad de las paredes celulares al disolvente aplicado durante la tincin. Los filamentos Gram positivos se observarn de color azul y los Gram negativos de color rojo-rosa. c) Tincin Neisser Esta tincin pone de manifiesto la presencia de grnulos de reserva de polifosfato en el interior celular, observados con un color azul-lila. Esto es debido a que el azul de metileno es catinico y se une a las zonas aninicas de las cadenas de polmeros de polifosfato. Los filamentos Neisser positivos se observarn de color azul-lila y los Neisser negativos de color marrn o amarillento. Si el tricoma es marrn y presenta grnulos de color lila, el filamento ser Neisser negativo con presencia de grnulos Neisser positivos. d) Tincin de poli--hidroxibutirato (PHB) Esta tincin permite observar los grnulos intracelulares de tipo lipdico como el PHB que algunos organismos pueden presentar bajo ciertas condiciones ambientales como

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por ejemplo en presencia de deficiencia de nutrientes. Los grnulos de PHB se observan de color negro-azul y el citoplasma celular de color rosa claro o sin teir. e) Tincin de vainas Esta tincin pone de manifiesto la presencia de vaina mediante la utilizacin del colorante, que slo penetrar en las clulas que no presenten vaina, puesto que la presencia de sta acta como una barrera frente el colorante, impidiendo la tincin del filamento. Las clulas sin vaina se tien intensamente de color violeta, mientras que las vainas aparecen de color rosa claro. f) Test de azufre Este test pone de manifiesto la posibilidad de generar grnulos de azufre por parte de algunos microorganismos filamentosos. Si el resultado es positivo se observan grnulos de azufre, es decir, grnulos intracelulares muy brillantes que hacen iridiscencias amarillas-rosadas-azulosas. En algunos microorganismos filamentosos, dependiendo de las condiciones ambientales donde se encuentran, los grnulos de azufre pueden ser visualizados directamente in situ, sin necesidad de someterlos al test. 3.5.2. Determinacin de los microorganismos Protozoos y metazoos La determinacin de los protozoos flagelados, gimnamebas y tecamebas se realiz en vivo, y se determinaron segn Patterson y Hedley (1992). La determinacin se estableci a nivel de orden, familia o gnero segn el caso, debido a la dificultad existente para la determinacin a nivel genrico o especfico de algunos taxones. La identificacin de protozoos ciliados se realiz a partir de observaciones en vivo y sobre muestras teidas, utilizando las tcnicas de tincin citadas anteriormente. Para su clasificacin se utilizaron los trabajos de Curds (1969), Frnandez-Galiano et al, (1996) y Foissner et. al. (1996). Estos microorganismos se determinaron a nivel de especie o gnero. La identificacin de rotferos, nematodos, oligoquetos y tardgrados se realiz en vivo, y su determinacin se realiz segn Streble y Krauter (1978). Estos organismos se identificaron nicamente a nivel de filum.

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Microorganismos filamentosos La determinacin de los microorganismos filamentosos se realiz preferentemente a 1000x aumentos mediante observaciones en vivo con microscopa de contraste de fases y con la utilizacin de un objetivo de inmersin. En algunas ocasiones, cuando no se poda identificar el filamento con este estudio, se utilizaron las tinciones mencionadas anteriormente (Gram, Neisser, PHB, tincin de vaina y test de azufre), la observacin de las cuales se realiz mediante microscopa de campo claro a 1000x aumentos. La determinacin se realiz atendiendo a una serie de caractersticas morfolgicas y estructurales segn Jenkins et. al. (1993). Algunos microorganismos filamentosos se encuentran caracterizados a nivel taxonmico, recibiendo su denominacin de gnero y especie, otros slo estn determinados como integrantes de un gnero e incluso la mayora reciben una identificacin alfanumrica atendiendo a caracteres morfolgicos. 3.5.3. Cuantificacin de los microorganismos El recuento de los diferentes tipos de microorganismos se ha realizado mediante la observacin en vivo, con un microscopio NIKON, modelo Eclipse 50i, utilizando la iluminacin de contraste de fases. Para realizar el recuento se agita suavemente la muestra para homogeneizarla totalmente pero sin llegar a afectar a la estructura flocular. Los recuentos se realizan a partir de 1 a 4 submuestras de 25 l dosificadas con una micropipeta. A continuacin se deposita la gota sobre un portaobjetos y se tapa con un cubreobjetos de 20 x 20 mm de superficie. Las abundancias de organismos del licor mezcla se dan en individuos por mililitro (ind/ml), a excepcin de los recuentos de los microorganismos filamentosos, que se dan en metros por mililitro (m/ml). 3.5.3.1. Protozoos, gimnamebas medianas y grandes y metazoos El recuento de metazoos y protozoos mayores de 20 m, donde se incluyen los flagelados grandes, las gimnamebas medianas (entre 20 y 50 m) y grandes (mayores de 50 m) y los ciliados, se realiza a partir de la observacin en vivo a 100x aumentos y en contraste de fases mediante el mtodo de las submuestras (Madoni, 1984). En principio se analizan dos gotas, pero si el nmero total de individuos por gota es inferior a 50 se ampla el nmero de gotas hasta un total de cuatro.

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Se coloca un extremo del cubreobjetos en el campo visual del microscopio (Figura 3.1) y, observando tambin el lquido que puede haber quedado por fuera del cubreobjetos, se va desplazando la muestra, por ejemplo verticalmente, hasta llegar al extremo opuesto. Una vez en este extremo se desplaza la muestra hacia la derecha, hasta que aparece un nuevo campo visual que no se solapa con el anterior, y a continuacin se desplaza de nuevo la muestra en direccin vertical. Se cuentan todos los protozoos flagelados mayores de 20 m y ciliados, gimnamebas medianas y grandes y metazoos que se van encontrando con el rastreo al nivel taxonmico ms especfico posible.
inicio

final
Figura 3.1. Esquema del procedimiento para el recuento al microscopio de la microfauna. Los crculos indican el campo visual del microscopio.

3.5.3.2. Protozoos flagelados y gimnamebas de pequeo tamao El recuento de protozoos flagelados y gimnamebas de pequeo tamao (menores de 20 m) se realiz a 400x aumentos, en contraste de fases y sobre dos rplicas de 25 l, segn el mtodo de Salvad (1990a). Este recuento se realiza contabilizando los protozoos y gimnamebas de pequeo tamao observados en un total de 15 campos visuales distribuidos al azar por todo el cubreobjetos. Se observan dos gotas de muestra como mnimo. A partir de los individuos contabilizados se realiza una estimacin de los individuos por mililitro segn la siguiente ecuacin:

Individuos / ml = Donde:

Ni A r 2 Vm

Ni = nmero de individuos contabilizados dividido por el nmero de campos observados A = rea ocupada por la muestra (dimensiones del cubreobjetos), en m2. Vm = volumen de la muestra en ml

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= 3,1416 R = radio del campo visual 3.5.3.3. Recuento de microorganismos filamentosos Para realizar el recuento de los microorganismos filamentosos se utiliz el mtodo de Salvad (1990b). Esta tcnica se basa en encontrar la relacin existente entre la circunferencia que conforma el ocular del microscopio y el nmero medio de intersecciones que se obtienen al cruzar los microorganismos filamentosos con esta circunferencia. El procedimiento consiste en contabilizar el nmero de intersecciones existentes entre los filamentos y la circunferencia que traza el campo visual. Se realiza a 400x aumentos y en contraste de fases, observando 15 campos visuales distribuidos al azar por todo el cubreobjetos, observando como mnimo dos gotas. Para obtener el resultado en unidades de m/ml es necesario aplicar la ecuacin:

Longitud de filamentos / volumen = Donde:

Ni A H Vm

Ni = nmero de intersecciones / nmero de campos observados A = rea ocupada por la muestra (dimensiones del cubreobjetos), (m2). H = longitud del segmento dibujado por el ocular multiplicado seno medio de @ = (L)x(2/), (m). seno @ = media del seno de 0 a 360 = 0,63662 =2/ @ = ngulo entre L (longitud del segmento dibujado por el ocular) y los filamentos. Vm = volumen de la muestra (ml).
3.5.4. Determinacin del ndice de diversidad

Una vez determinadas las especies y las abundancias relativas de los protozoos ciliados presentes en las muestras se calcul el ndice de diversidad de Shannon-Weaver (Shannon y Weaver, 1949). Este valor indica la relacin entre el nmero de individuos de una especie respecto el nmero total de individuos de la muestra y se expresa en bits por individuo.

H'=
i =1

Ni N log 2 i N N

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Donde:

Ni = nmero de individuos de una especie N = nmero total de individuos

3.6. ANLISIS ESTADSTICOS

A continuacin se describen las tcnicas estadsticas que se utilizaron para realizar el tratamiento de los datos. Para todos los clculos estadsticos se utiliz el programa SPSS 13.0 (Statistical Package for Social Sciences). El test de Kolmogorov-Smirnov se utiliza para comprobar si los datos utilizados siguen una distribucin normal. La hiptesis nula de normalidad se rechaz considerando un nivel de significacin =0,05. En los casos en que los datos no sigan esta distribucin normal, se utiliza el test no paramtrico de Kruskal-Wallis para comparar una variable en dos o ms muestras independientes. En nuestro caso se utiliz para comprobar si existan diferencias significativas en los parmetros fsico-qumicos del efluente y en los microorganismos segn los dos tipos de tratamiento estudiados, convencional y de eliminacin de nutrientes. La hiptesis nula de homogeneidad se ha rechazado cuando el nivel de significacin p<0,05. Por ltimo, se han realizado correlacionas bivariadas, con los datos fsico-qumicos y los microorganismos, mediante el coeficiente de correlacin de Spearman, que se utiliza en aquellos casos en que los datos no sigan una distribucin normal. Estas correlaciones miden como estn relacionadas linealmente dos variables, y los valores que pueden adoptar estos coeficientes estn comprendidos entre +1 y -1.

4. RESULTADOS Y DISCUSSIN
4.1. EL AFLUENTE

Las poblaciones de microorganismos muestran variaciones en funcin de los cambios en los diferentes parmetros fsico-qumicos y operacionales de las EDARs. Por lo tanto, para poder estudiar los efectos sobre la microfauna se ha caracterizado el agua residual de entrada y las relaciones existentes entre los diversos parmetros. Posteriormente, se han estudiado las posibles relaciones entre estos parmetros fsico-qumicos y la microfauna de los fangos activos.

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4.1.1. Caracterizacin del afluente

En primer lugar se han calculado las medianas, desviaciones estndar y los valores mximos y mnimos de los afluentes. No se han diferenciado segn el tipo de tratamiento, convencional o de eliminacin de nutrientes, puesto que prcticamente no haba diferencias entre los parmetros (Tabla 4.1.).
Tabla 4.1. Resultados de los parmetros fsico-qumicos del afluente de las plantas estudiadas, donde X: media, Des. std: desviacin estndar y n: nmero de muestras.

Conductividad (mS/cm) pH SSLM (mg/l) STLM (mg/l) SVLM (mg/l) Aceites y grasas (mg/l) Detergentes (mg/l) DBO5 soluble (mg O2/l) DBO5 (mg O2/l) DQO soluble (mg O2/l) DQO (mg O2/l) Mat. Voltiles (%) MES (mg/l) Cloruros (mg/l) Fsforo total (mg/l) N (NO2-+NO3-) (mg/l) N Kjeldahl (mg/l) N amoniacal (mg/l) N total (mg/l) Sulfatos (mg/l)

X 0,96 7,29 1941,68 2533,05 76,12 14,08 1,31 58,46 192,32 104,83 376,13 93,03 223,15 108,74 7,34 0,13 35,78 21,96 35,26 175,72

Des. std 0,50 0,32 897,16 825,76 7,53 10,78 1,03 51,44 158,49 80,97 396,37 10,71 328,05 76,34 12,23 0,25 31,46 12,02 31,73 158,63

n 86 86 19 19 19 40 21 47 89 47 89 47 89 19 89 86 89 61 86 19

Mximo 3,54 8,05 3952 4212 84,8 46 3,55 263 943 365 3162 99,9 2819 380 104 1,84 264 52,4 264 727

Mnimo 0,2 6,4 756 1184 53,8 5 0,05 14 14,7 15 38 38,3 11 49 1,17 0,005 5,9 5,16 6 71,7

Si se comparan estos valores con la composicin tpica del agua residual urbana expuesta en Metcalf y Eddy (1995), se puede considerar que en general el agua residual de las depuradoras estudiadas presenta una concentracin media para la gran mayora de los valores, aunque en la mayora de parmetros se puede observar una desviacin estndar muy grande, lo cual indica la gran variacin de composicin que presentan las aguas residuales de entrada a las plantas depuradoras estudiadas.
4.1.2. Relaciones entre los parmetros fsico-qumicos

Primero se comprob, mediante el test de Kolmogorov-Smirnov, que los datos de los parmetros fsico-qumicos no seguan una distribucin normal. Se obtuvo que los nicos parmetros que seguan una distribucin normal eran el pH y el amonio. Por lo tanto, como la mayora de parmetros no seguan una distribucin normal, se determinaron las 36

relaciones entre los diferentes parmetros fsico-qumicos del agua de entrada a partir de los coeficientes de correlacin de Spearman. Entre los coeficientes de correlacin obtenidos (Tabla 4.3.) se pueden destacar los coeficientes de correlacin positivos entre la conductividad y la concentracin de varios iones presentes en el agua residual como el amonio, los sulfatos y los cloruros. Como era de esperar, tambin hay una correlacin positiva entre la DQO y la DBO5.
4.1.3. Biodegradabilidad del agua del afluente

Tambin se ha estudiado el cociente DBO5/DQO, que da una idea de la biodegradabilidad del agua de entrada. El valor de este cociente se encuentra, generalmente, dentro del intervalo 0,4-0,8, siendo poco biodegradable si es menor de 0,2 (Metcalf y Eddy, 1995; Salas et. al., 2007). En el caso de las depuradoras estudiadas se puede observar en la tabla 4.2., que en general el afluente presenta un valor para esta relacin que se encuentra dentro del intervalo tpico comentado. Sin embrago, hay 10 muestras que presentan un cociente menor de 0,2, cosa que, como ya se ha comentado tambin, indica que en estos casos el agua de entrada es poco biodegradable.
Tabla 4.2. Valores del cociente DBO5/DQO, n: nmero de muestras.

Media Desviacin estndar n Mximo Mnimo

Cociente DBO5/DQO 0,54320635 0,14273718 89 1,03773585 0,13975155

37

Tabla 4.3. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre los parmetros fsico-qumicos del afluente. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin.
Fsforo total N amoniacal

Detergentes

DQO total

0,550403 0,693551 0,82457 Conductividad 0,000001 0,000001 0,00001 86 58 19 pH

0,56720 0,464928 0,01132 0,000006 19 86

0,34077 0,494797 0,549542 0,79346 0,00132 0,000001 0,000001 0,00001 86 86 86 21 0,6759 0,0007 21 -0,244 0,023 86 -0,755 0,030 8 0,60556 0,02828 13 0,89445 0,00003 13

SSLM

-0,87831 0,00410 8 0,89445 0,872236 0,00003 0,000101 13 13 0,854210 0,820299 0,000001 0,000001 86 61 0,844398 0,702915 0,000001 0,000001 86 61

0,56034 0,04639 13 0,68334 0,01002 13

SVLM

DBO5

0,760710 0,771542 0,902488 0,000001 0,000001 0,000001 89 89 89 0,76700 0,794275 0,000001 0,000001 89 89 -0,544 -0,55315 -0,34673 -0,56740 0,015 0,01402 0,01695 0,00003 19 19 47 47

DQO total

Mat. voltiles

MES

0,781874 0,606181 0,000001 0,000001 86 61 0,855252 0,695433 0,000001 0,000001 86 61 0,637 0,003 19 0,999849 0,852354 0,000001 0,000001 86 61 0,845398 0,000001 58

0,816931 0,000001 89

Fsforo total

Cloruros

N Kjeldahl

N amoniacal

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Nitratos y nitritos

Aceites y grasas

Cloruros

Sulfatos

N total

DBO5

MES

4.2. EL EFLUENTE

Tal y como se ha realizado con el afluente, tambin se ha caracterizado el agua de salida de las depuradoras estudiadas y se han determinado las relaciones existentes entre los diferentes parmetros. Posteriormente, se han estudiado las posibles relaciones entre estos parmetros fsico-qumicos y la microfauna de los fangos activos.
4.2.1. Caracterizacin del efluente

Con los datos de los parmetros fsico-qumicos y operacionales del efluente se han calculado las medias, desviaciones estndar y los valores mximos y mnimos (Tabla 4.4.).
Tabla 4.4. Resultados de los parmetros fsico-qumicos del efluente de las plantas estudiadas, donde X: media, Des. std: desviacin estndar y n: nmero de muestras.

Conductividad (mS/cm) pH DBO5 (mg O2/l) DQO (mg O2/l) MES (mg/l) Fsforo total (mg/l) N (NO2-+NO3-) (mg/l) N Kjeldahl (mg/l) N amoniacal (mg/l) N total (mg/l) % DBO eliminada % DQO eliminada % N eliminado % P eliminado

X 1,05 7,58 11,04 39,78 14,14 2,04 5,34 6,52 5,84 11,52 93,58 85,74 43,99 55,33

Des. std 0,52 0,38 8,99 30,63 20,47 1,35 5,53 7,67 7,30 7,93 6,15 12,64 37,98 28,86

n 47 57 39 89 98 89 99 94 64 99 32 78 50 87

Mximo 3,72 8,25 48,7 219 168 6,07 36,1 36,8 32,7 40,3 99,40 99,68 93,06 98,68

Mnimo 0,21 6,55 5,1 10 1 0,28 0,08 0,3 0,11 1,77 68,78 36,84 -70,70 -57,39

Al igual que con los datos del afluente, tambin se comprob, mediante el test de Kolmogorov-Smirnov, que los datos no seguan una distribucin normal. Los nicos datos del efluente que seguan una distribucin normal eran el pH y el fsforo total. Como la mayora de variables no seguan una distribucin normal se realiz la prueba de Kruskal-Wallis para determinar si los parmetros fsico-qumicos y operacionales estudiados presentaban diferencias significativas segn el tipo de tratamiento de las depuradoras, tratamiento convencional o tratamiento de eliminacin de nutrientes. Los datos que presentaron diferencias significativas segn el tipo de tratamiento de las depuradoras fueron el fsforo total, los nitratos y nitritos, el nitrgeno Kjeldahl y el total, el

39

porcentaje de eliminacin de la DQO y el porcentaje de eliminacin de nitrgeno (Tabla 4.5.).


Tabla 4.5. Resultados del anlisis de Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad.

Fsforo total Nitratos y nitritos N Kjeldahl N total % Eliminacin DQO % Eliminacin N

H 7,05 6,80 5,22 11,81 7,589 7,41

g.l. 1 1 1 1 1 1

p 0,01 0,01 0,02 0,001 0,006 0,01

Como se puede observar en la Tabla 4.6. el rango promedio del porcentaje de eliminacin de nitrgeno, es, como era de esperar, ms elevado en el caso de las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes. Adems, tanto el fsforo, como las diversas formas del nitrgeno, presentan rangos promedios ms elevados en el caso de las depuradoras con tratamiento convencional, puesto que al no estar diseadas para eliminar nutrientes tendrn concentraciones de salida de estos nutrientes ms elevadas que las diseadas para eliminarlos.

Tabla 4.6. Resultados de la prueba de Kruskal Wallis con los rangos promedios para cada variable, donde n: nmero de casos.

Parmetro

Tratamiento Eliminacin de nutrientes Fsforo total Convencional Eliminacin de nutrientes Nitratos y nitritos Convencional Eliminacin de nutrientes N Kjeldahl Convencional Eliminacin de nutrientes N total Convencional Eliminacin de nutrientes % Eliminacin DQO Convencional Eliminacin de nutrientes % Eliminacin N Convencional

N 44 45 50 49 50 49 50 49 43 45 14 36

Rango promedio 37,64 52,18 42,55 57,60 43,47 56,66 40,18 60,02 52,17 37,17 34,5 22

40

4.2.2. Relaciones entre los parmetros fsico-qumicos

Como la mayora de parmetros no seguan una distribucin normal, se determinaron las relaciones entre los diferentes parmetros fsico-qumicos y operacionales del agua del efluente a partir de los coeficientes de correlacin de Spearman.
Tabla 4.7. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre los parmetros fsico-qumicos y operacionales del efluente. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indiquen falta de correlacin. N Kjeldahl N amoniacal Fsforo total

N total

DQO

MES

Conductividad

0,2988 0,0413 47 0,2984 0,0394 48 0,4596 0,000002 99 0,5643 0,000001 99 0,3310 0,0009 98 0,6239 0,000001 89 0,3490 0,0004 99 0,6141 0,000001 99 0,5314 0,000002 70 0,2953 0,0220 60 -0,4377 0,0002 70 0,8840 0,000001 70 0,3694 0,0016 70 0,4399 0,0001 70

0,3185 0,0291 47

0,4765 0,0007 47

0,2952 0,0464 46

pH

DBO5

0,5354 0,000001 99 0,5944 0,000001 99 0,4275 0,000011 98 0,4186 0,000045 89 -0,3613 0,0002 99

0,4053 0,0001 89 0,5013 0,000001 89 0,2873 0,0063 89

0,6854 0,000001 98 0,6932 0,000001 98

0,6762 0,000001 99

DQO MES

Fsforo total

Nitratos y nitritos

N Kjeldahl

N amoniacal

Los coeficientes de correlacin obtenidos se pueden observar en la Tabla 4.7., y destacan los coeficientes positivos existentes entre los diferentes parmetros indicadores de la contaminacin del efluente como la DQO, la DBO5 y la materia en suspensin (MES).

pH

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Tambin se observa un coeficiente de correlacin negativo entre la concentracin de amonio y la concentracin de nitratos y nitritos, es decir, mayores concentraciones de nitratos y nitritos coinciden con menores concentraciones de amonio, cosa que indica presencia de procesos de nitrificacin, y a la inversa, cosa que indica inhibicin de los procesos de nitrificacin.
4.2.3. Rendimiento operacional de las depuradoras estudiadas

Segn la Directiva 91/271/CEE, que regula los vertidos al cauce pblico, hay una serie de parmetros con un lmite mximo de vertido. Estos parmetros corresponden a la DBO5, DQO y Slidos en suspensin totales. En el caso de las depuradoras que abocan las aguas depuradas a una zona sensible propensa a la eutrofizacin tambin hay lmite de vertido para el nitrgeno total y el fsforo total, que ser diferente segn el nmero de habitantes equivalentes. En el caso del parmetro de la DQO, este lmite mximo es de 125 mg O2/l. Como se puede observar en la tabla 4.4., el valor mximo obtenido por este parmetro en las muestras analizadas es de 219 mg O2/l. Solamente en dos casos se ha superado este valor lmite establecido, los cuales podran ser debidos a un escape de slidos debido a la proliferacin de espumas. El valor mximo observado para el parmetro DBO5 es de 48,7 mg O2/l, el cual tambin supera el valor lmite de 25 mg O2/l establecido por la Directiva 91/271/CEE. Tambin se ha superado este valor slo en dos de las muestras analizadas, que, como era de esperar, son las mismas que superaban el valor lmite para la DQO. Respecto a las materias o slidos en suspensin, el valor lmite establecido por esta Directiva corresponde a 35 mg/l. Este valor ha sido superado en cinco de las muestras analizadas, probablemente debido tambin a un escape de slidos producido por una sedimentacin deficiente del fango. Para el caso del nitrgeno y del fsforo slo se han estudiado los datos de las depuradoras diseadas para eliminar estos nutrientes, lo que corresponde a un total de 10 depuradoras y 51 muestras. Se puede observar que todas las depuradoras estudiadas presentan un lmite de vertido de 2 mg/l de fsforo total y 15 mg/l de nitrgeno total, puesto que estn diseadas para una poblacin de 10.000 a 100.000 habitantes equivalentes. Por lo tanto, para el caso del fsforo, hay 10 muestras que no cumplen este valor lmite; y en el caso del nitrgeno, hay 8 muestras que no cumplen el valor lmite de 15 mg/l. Por tanto, se

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concluye que entre las depuradoras estudiadas diseadas para eliminar nutrientes, una parte no cumplen los niveles lmites de vertido establecidos por la normativa, especialmente para el caso del fsforo total.
4.3. CARACTERIZACIN DEL FANGO

A partir de las caractersticas morfolgicas y estructurales de los flculos y otras observaciones generales del fango se puede obtener informacin sobre la calidad del fango activo y complementar la informacin obtenida con la identificacin y el recuento de los microorganismos.
4.3.1. Tamao

El tamao de los flculos puede afectar a la calidad de los fangos activos, puesto que est relacionado, principalmente, con la sedimentabilidad del fango durante la fase de clarificacin del licor mezcla, y por lo tanto, con la calidad final del efluente. Los flculos se pueden clasificar en tres categoras segn su tamao (Jenkins et. al., 1993; EMASESA, 1997). Los flculos pequeos (< 150 m) tienen, en general, una forma redonda y una estructura compacta, y no presentan microorganismos filamentosos o en una abundancia muy baja. Estos flculos pueden producir el fenmeno denominado pin-point floc, con el que se obtiene un bajo IVF y un efluente de elevada turbidez debido a que decantan con dificultad y muchos slidos se quedan en suspensin. Tambin pueden producirse flculos pequeos debido a una elevada concentracin de microorganismos filamentosos que crecen dentro de los flculos, disgregndolos y rompindolos. En nuestro caso casi el 20 % de las muestras han presentado flculos de pequeo tamao de los cuales un 35 % son debidos a pin-point floc y el 65 % restante, a una elevada concentracin de filamentos. De los datos relacionados con el tamao de los flculos solamente se ha podido observar la abundancia de filamentos, la cual es bastante elevada, 273,5 m/ml de media, debido a que, como ya se ha comentado, la mayora de muestras con flculos de tamao pequeo eran debidas a una estructura disgregada y no a pin-point floc. Los flculos de tamao mediano (entre 150 y 500 m) se caracterizan por un crecimiento equilibrado de las bacterias floculantes y de los microorganismos filamentosos. En general se obtiene un IVF inferior a 150 ml/g, y un sobrenadante bien clarificado. Casi la mitad de las muestras han presentado flculos de tamao mediano, pero el valor medio de la

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abundancia total de filamentos es bastante elevado, dando un valor de 252,4 m/ml de media. Los flculos grandes (> 500 m), debidos en general a un crecimiento masivo de microorganismos filamentosos, tienden a tener los mrgenes irregulares, y se obtienen IVF elevados y en general un sobrenadante muy clarificado, pero en algunos casos el manto de fango puede ascender mucho y acabar abocndose con el efluente. De las muestras analizadas, casi un 34 % han presentado flculos de tamao grande y una abundancia mediana de filamentos de 378,6 m/ml.
700 Abundancia de filamentos (m/ml) 600 500 400 300 200 100 0
Tamao pequeo Tamao mediano Tamao grande

Categorias de tamao de los flculos

Figura 4.1. Abundancia media de microorganismos filamentosos en m/ml segn el tamao medio de los flculos.

Para determinar si la abundancia de microorganismos filamentosos presentaba diferencias significativas segn el tamao medio de los flculos se realiz la prueba de KruskalWallis. A partir de los resultados se comprob que nicamente haba diferencias significativas entre el tamao de flculos grande y el resto de tamaos.

Tabla 4.8. Resultados de la prueba de Krukal-Wallis, n=nmero de casos.

Tamao de los flculos Pequeos Abundancia de filamentos Medianos Grandes

Variable

n Rango promedio 20 43,725 50 49,41 36 64,6111111

Por tanto, como solamente existen diferencias significativas entre los flculos de tamao grande y los otros tamaos, se podra decir que el tamao de los flculos no depende

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nicamente de la abundancia de microorganismos filamentosos; hay otras variables y/o parmetros operacionales que influyen en el tamao de los flculos.
4.3.2. Estructura

La estructura de los flculos tambin afecta a la calidad final del efluente. As los flculos de estructura compacta sedimentarn correctamente y en general el fango tiene un IVF medio menor de 150 ml/g, produciendo un efluente bien clarificado con pocos slidos en suspensin (EMASESA, 1997). En este caso un 23,6% de las muestras han presentado una estructura moderadamente abierta y un 26,4 % una estructura compacta. En cambio, los flculos de estructura abierta, generalmente por una abundancia muy elevada de microorganismos filamentosos que crecen en el interior de los flculos, presentarn un IVF elevado puesto que estos flculos no sedimentan bien (EMASESA, 1997). La mitad de las muestras observadas han presentado flculos de estructura abierta. En este estudio no hemos podido comprobar si la estructura de los flculos est relacionada con la sedimentabilidad del fango al no disponer de datos de IVF. Por lo tanto, se ha vuelto a observar la abundancia total de filamentos, que est relacionada, al menos indirectamente, con la sedimentabilidad del fango.
700 600

Abundancia de filamentos (m/ml)

500 400 300 200 100 0

M oderadamente Compacta abierta Categorias de la estructura de los flculos Abierta

Figura 4.2. Abundancia media de microorganismos filamentosos en m/ml segn la estructura media de los flculos.

Con estos datos se determin si la abundancia de microorganismos filamentosos presentaba diferencias significativas segn la estructura media de los flculos a partir de la prueba de Kruskal-Wallis. An habiendo cierta relacin, a partir de los resultados se pudo

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comprobar que la estructura flocular no depende, al menos nicamente, de la abundancia total de microorganismos filamentosos.
Tabla 4.9. Resultados de la prueba de Kruskal Wallis con los rangos promedio para cada variable, donde n: nmero de casos.

Estructura flocular Abierta Abundancia de filamentos Moderada Compacta


Wallis, g.l.=grados de libertad y p=probabilidad.

Variable

n Rango promedio 53 60,21 25 43,74 28 49,5

Tabla 4.10. Resultados de la prueba de Kruskal-Wallis, n=nmero de casos, H=estadstico de Kruskal-

H g.l. p

Abundancia de filamentos 5,523 2 0,0631

4.3.3. Grado de cobertura (concentracin)

El grado de cobertura flocular o concentracin de flculos corresponde al parmetro fsicoqumico de los slidos en suspensin (SSLM). En este caso, una concentracin baja puede indicar una carga msica demasiado baja que no permite que los flculos se desarrollen, o bien puede responder a una purga de fangos excesiva. Por el contrario, una concentracin elevada a muy elevada de flculos puede empeorar las condiciones de sedimentacin del fango, y normalmente acostumbra a ser causa de un caudal de purga insuficiente.
3500 3000 2500 SSLM (mg/l) 2000 1500 1000 500 0 Elevada Muy elevada Baja Moderada Categoras de concentracin flocular

Figura 4.3. Abundancia media de los slidos en suspensin del licor mezcla (mg/l) en las diferentes categoras de concentracin flocular de las muestras.

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En las muestras observadas ha predominado, con un porcentaje de casi el 54%, las muestras con una concentracin elevada de flculos, seguido de un 31% de muestras con una concentracin moderada. Las otras dos categoras de concentracin de flculos, baja y muy elevada, han presentado el mismo porcentaje de muestras, un 7,5 % (figura 4.3). Aunque la disponibilidad de datos de los slidos en suspensin no es muy elevada, se puede observar que hay cierta relacin con el grado de cobertura de flculos de las muestras. Una posible razn de que la mayora de muestras presenten una concentracin elevada puede ser debido a que el tratamiento de los fangos excedentes tiene un coste muy elevado y por eso se tiende a operar con concentraciones elevadas de slidos, cosa que reduce el coste aparente de operacin de la planta.
4.3.4. Otras observaciones

4.3.4.1. Bacterias dispersas Las bacterias dispersas se han considerado de forma conjunta, sin determinar la gran diversidad de taxones que pueden aparecer. Una concentracin elevada de bacterias dispersas puede incrementar la turbidez del efluente debido a que se quedan en suspensin durante la clarificacin del agua. Adems, tambin indica que el sistema sufre una cierta desestabilizacin o que est afectado por algn tipo de perturbacin. En algn caso han sido relacionadas con una concentracin baja de oxgeno disuelto y una presencia muy baja o nula de procesos de nitrificacin (Rius, 2003). En nuestro caso han predominado, con casi un 70 %, las muestras que presentaban una concentracin baja de bacterias dispersas. Casi un 17% de las muestras presentaban una concentracin moderada de bacterias dispersas y el 13% restante de las muestras, una concentracin elevada. No se ha podido observar si hay cierta relacin con el oxgeno disuelto por carencia de datos, pero si que se ha estudiado si la concentracin de bacterias dispersas tiene cierta relacin con la materia en suspensin del efluente. Como se puede observar en la tabla 4.11., no se ha encontrado relacin entre el parmetro de materia en suspensin del efluente y la concentracin de bacterias dispersas como se

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poda esperar en un principio, ya que los resultados estadsticos muestran que la materia en suspensin no es ms elevada cuando mayor es la concentracin de bacterias dispersas. De las muestras con una concentracin moderada de bacterias dispersas se ha observado que el 44,4 % presentaban problemas de bulking filamentoso y/o espumas, posiblemente es por esta razn que estas muestras presentaban una concentracin bastante elevada de materias en suspensin.
Tabla 4.11. Resultados de los parmetros fsico-qumicos del efluente; siendo X=media y Desv. std=desviacin estndar.

MES (mg/l)

Concentracin baja Concentracin moderada Concentracin elevada X Desv. std n X Desv. std n X Desv. std n 10,399,12 68 28,943,02 16 13,438,66 14

4.3.4.2. Bacterias helicoidales Dentro de lo que denominamos bacterias helicoidales se han incluido las espiroquetas y los espirilos. Las espiroquetas son bacterias mviles, doblemente enrolladas en forma de espiral y extremadamente flexibles que se mueven helicoidalmente. Los espirilos son otro tipo de bacteria ms rgida, solamente enrolladas una vez en forma de espiral, y con un movimiento ms rpido (Isac, L., et al, 2005). Estos dos tipos de bacterias helicoidales indican una concentracin de oxgeno baja y presencia de septicidad en algn punto del sistema (Jenkins et. al., 1993). Normalmente, estas bacterias provienen del agua de entrada o del decantador primario, dnde pueden proliferar, entrando posteriormente al reactor aerobio, as como entrar a cabecera a partir de los retornos procedentes de la lnea de fangos. Adems, una presencia elevada o muy elevada puede suponer un incremento de la turbidez del efluente.

Elevada 15% Ausencia 47% Moderada 25% Baja 13%

Baja 6%

Moderada 9%

Ausencia 85%

Figura 4.4. Resultados obtenidos de los rangos de abundancia de las bacterias helicoidales en las muestras analizadas en: a) espiroquetas y b) espirilos.

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La ausencia de estas bacterias en las muestras analizadas predomina, en el caso de las espiroquetas, en el 47% de las muestras, y en el caso de los espirilos en el 85% de las muestras. La presencia de espirilos ha sido bastante ms baja que la de espiroquetas, apareciendo con una abundancia baja en el 5,6% de las muestras, y con una abundancia moderada en el 9,4% de las muestras. Los porcentajes de aparicin de las espiroquetas, en cambio, son: en el 13% de las muestras han aparecido con una abundancia baja, en el 24,5% con una abundancia moderada, y en el 15% restante con una abundancia elevada (figura 4.4). La presencia de bacterias helicoidales en las depuradoras urbanas es debida, en el 98% de los casos, a una entrada elevada de retornos a cabecera procedentes de la lnea de fangos, mientras que un 1,5% de la presencia de estas bacterias se debe a que el sistema presenta una etapa anaerbica para eliminar fsforo, y el 0,5% restante se debe a la entrada de estas bacterias con el afluente debido a una elevada septicidad en los colectores. 4.3.4.3. Bacterias PAO y GAO Dentro de las bacterias denominadas PAO (Organismos Acumuladores de Polifosfatos), se incluyen todas aquellas bacterias capaces de acumular grandes cantidades de fosfatos en forma de grnulos de polifosfatos. En cambio, las bacterias GAO (Organismos Acumuladores de Glicgeno), aunque tienen un metabolismo muy parecido a las PAO, no son capaces de acumular polifosfatos intracelulares y por lo tanto, no pueden eliminar grandes cantidades de fsforo del medio. Entre estos dos tipo de bacterias se produce una competencia por el mismo sustrato en condiciones anaerobias (Borrs, 2007). En este trabajo se han considerado conjuntamente las bacterias PAO y GAO debido a la dificultad de diferenciarlas nicamente con el microscopio ptico. Estos dos tipos de bacterias producen polmeros extracelulares, que en cantidades elevadas pueden producir bulking viscoso. Como ya se ha comentado en el apartado 1.7.3. Bulking viscoso los principales factores que lo producen son la deficiencia de nutrientes, la deficiencia de oxgeno y cargas msicas elevadas (Richard, 2003). El 98% de las muestras analizadas no presentaron estas bacterias, y slo en el 2% de las muestras fueron poco abundantes. Como ya se ha comentado, las bacterias GAO y PAO aparecen generalmente cuando las concentraciones de nutrientes estn descompensadas, y esto generalmente sucede en las

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aguas residuales industriales, que a diferencia de las urbanas, se caracterizan por presentar un ratio bajo de nutrientes respecto la DQO (De Lucas, et al,. 2007). La composicin del agua residual urbana, por el contrario, suele presentar una composicin, resultado de una mezcla de compuestos tanto de origen urbano como industrial y/o productos de la ganadera y de la agricultura, que hace que las concentraciones de nutrientes presenten la proporcin adecuada de 100:5:1 de carbono (como DBO5), nitrgeno (como nitrgeno total Kjeldahl) y fsforo (como fsforo total) respectivamente (Jenkins, 2003), necesaria para mantener un crecimiento equilibrado de las bacterias GAOs y/o PAOs. A partir de la tabla 4.12., se puede observar que esta relacin, para las muestras observadas, ha sido siempre superada tanto por el nitrgeno como por el fsforo.

Tabla 4.12. Valores de la relacin DBO5/N/P de las muestras observadas. Los valores de N y P estn expresados considerando una DBO5 de 100.

DBO5 NTK Fsforo total n 89 86 89 Media 100 21,62 3,71 Desviacin estndar 8,58 1,96 Mximo 59,55 10,8 Mnimo 7,46 1,31

4.3.4.4. Zoogloea Se trata de bacterias en forma de bacilo que aparecen constituyendo masas de bacterias unidas por una matriz gelatinosa formada por un exopolmero. Suelen aparecer como ndulos que sobresalen de los flculos con formas irregulares o presentar extensiones digitiformes o ramificadas (EMASESA, 1997). Un crecimiento masivo de Zoogloea spp. puede ser debido a una elevada carga msica y baja edad del fango, condiciones que se dan normalmente en puestas en marcha, o a una deficiencia de nutrientes (especialmente deficiencia de nitrgeno o fsforo) (Richard, 2003; Martnez 2005). Como el exopolmero retiene mucha agua puede dar lugar a un aumento del IVF y al fenmeno denominado bulking viscoso (Jenkins et. al., 1993). No se ha observado de forma masiva la bacteria Zoogloea spp. en ninguna muestra de las observadas. Esto puede ser debido a que, como ya se ha estudiado en el apartado anterior, 50

las depuradoras estudiadas no han presentado en ningn momento deficiencia de nutrientes, ni de nitrgeno ni de fsforo, adems, tambin hace falta decir que las depuradoras estudiadas no corresponden a puestas en marcha, sino que son sistemas estabilizados, condiciones que no favorecen el crecimiento masivo de estas bacterias.
4.4. COMUNITADES DE MICROORGANISMOS FILAMENTOSOS

Los microorganismos filamentosos (que incluyen tanto bacterias filamentosas como actinomicetos) son fundamentales en el proceso de depuracin de las aguas residuales puesto que son, juntamente con los otros tipo de bacterias que se pueden encontrar en un fango activo, responsables de la mineralizacin de la materia orgnica y de la formacin de los flculos que contribuyen a la clarificacin del efluente (Rius, 2003). A la vez, estos microorganismos sirven de sustrato y alimento para los protozoos y metazoos. Son tambin muy importantes en la conformacin de los flculos dado que sirven de esqueleto dnde adherirse las bacterias floculantes (conforman la denominada macroestructura flocular), incrementando la consistencia de los flculos y permitiendo que incrementen de tamao. Tambin son importantes por los problemas operacionales que pueden originar en los sistemas de depuracin mediante fangos activos cuando proliferan de forma masiva, dando lugar a problemas de separacin lquido-slido como por ejemplo problemas de esponjamiento del fango (bulking filamentoso) y formacin de espumas o natas (tambin denominado foaming) (Eikelboom, 1977; Jenkins et. al., 1993).
4.4.1. Clasificacin de los microorganismos filamentosos

Se han descrito unas 30 morfoespecies diferentes de microorganismos filamentosos, de las cuales 18 son ms frecuentes en fangos activos (Eikelboom, 1977; Jenkins et. al., 1993). En total, durante este estudio, se han determinado 23 morfoespecies diferentes de microorganismos filamentosos atendiendo a los morfotipos descritos por Eikelboom, 1977 y Jenkins et. al., 1993. Primeramente se ha determinado la abundancia media, la desviacin estndar y la frecuencia de aparicin (tabla 4.2.1.) de los diferentes tipos de microorganismos filamentosos encontrados. A partir de los resultados obtenidos se puede observar que el filamento ms frecuente corresponde al grupo de los actinomicetos nocardioformes, el cual ha aparecido casi en el 90 % de las muestras analizadas. El siguiente filamento ms frecuente corresponde al Tipo 1851, que ha aparecido en el 77 % de las muestras, seguido del Tipo 0041, con un porcentaje de aparicin del 71 % y del Tipo 021N, que ha aparecido 51

en el 65 % de las muestras (tabla 4.2.1.). En cuanto a la abundancia, el microorganismo filamentoso ms abundante ha sido Microthrix parvicella, con una abundancia media de 80,5 m/ml. El siguiente ha sido el Tipo 1851, con una abundancia media de 57,5 m/ml, seguido del grupo de los actinomicetos nocardioformes y el Tipo 021N, con unas abundancias medias de 51 y 47 m/ml respectivamente (tabla 4.2.1.).
4.4.2. Porcentajes de aparicin de los filamentos dominantes y secundarios

En base a los resultados obtenidos se han determinado los filamentos dominantes y secundarios de cada muestra y se han calculado los porcentajes respecto el nmero total de microorganismos filamentosos contabilizados (tabla 4.2.1.). En la tabla 4.2.1. podemos observar que en total han aparecido 9 morfotipos diferentes de microorganismos filamentosos dominantes, cosa que representa un 37,5% del total de microorganismos observados. Como morfotipos que predominan hace falta destacar el Tipo 1851, que ha sido el filamento dominante en el 30% de las muestras observadas, seguido del Tipo 021N, siendo dominante en casi el 22% de las muestras. Por ltimo, se podra destacar los porcentajes de dominancia del grupo de los actinomicetos nocardioformes, que ha estado de casi el 19%, y de Microthrix parvicella, del 16%. Por otra parte, la diversidad del filamento secundario es algo ms elevada, puesto que han aparecido 15 morfoespecies diferentes, representando un 65% del total de filamentos observados. Los actinomicetos nocardioformes son el filamento secundario ms frecuente, con un porcentaje del 25%. El segundo filamento que ha aparecido ms veces como filamento secundario ha sido el Tipo 021N, apareciendo en el 14% de las muestras. Los siguientes filamentos ms frecuentes como filamentos secundarios han sido Microthrix parvicella y el Tipo 1851, apareciendo los dos en casi el 10% de las muestras. Como ya se ha comentado anteriormente, las aguas residuales urbanas presentan una composicin rica de compuestos, lo que permite que microorganismos filamentosos como Microthrix parvicella y los actinomicetos nocardioformes, que requieren ambientes bastante estables y, sobre todo, con presencia de grasas y/o aceites, aparezcan con tanta frecuencia y abundancia en las EDARs urbanas (Eikelboom, 2000). Adems, tambin han aparecido con bastante frecuencia y abundancia otros microorganismos filamentosos ms oportunistas y que soportan deficiencias nutricionales como el Tipo 021N, el Tipo 0041 y Haliscomenobacter hydrossis entre otros (Jenkins et. al., 1993, Stover et. al., 1994).

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Tabla 4.13. Abundancias, expresadas en m/ml, y frecuencias de aparicin de los microorganismos filamentosos encontrados en las muestras, y porcentajes de aparicin de los filamentos dominantes y secundarios, donde X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin.

Actinomicetos nocardioformes Beggiatoa Hongos Haliscomenobacter hydrossis Microthrix parvicella Nostocoida limicola II Nostocoida limicola III Sphaerotilus natans Streptococcus Thiothrix Y Thiothrix II Tipo 0041 Tipo 0092 Tipo 021N Tipo 0581 Tipo 0675 Tipo 0803 Tipo 0914 Tipo 0961 Tipo 1701 Tipo 1851 Tipo 1852 Tipo 1863

X 51,46 0,27 0,59 4,84 80,50 1,33 0,33 1,54 0,40 0,11 0,61 9,13 22,15 47,03 1,38 5,55 0,05 0,06 7,21 0,16 57,52 0,20 0,07

Desv. std. 77,39 0,94 2,72 17,22 203,95 6,37 0,98 5,40 3,21 0,63 2,99 19,43 70,36 93,20 8,16 11,26 0,37 0,50 30,27 0,81 93,92 1,27 0,40

% % dominante % secundario 89,62 18,87 25,23 11,32 0 0,90 6,60 0 1,80 48,11 0 2,70 48,11 16,04 9,91 14,15 0 0,90 15,09 0 0 13,21 0 2,70 2,83 0 0,90 3,77 0 0 7,55 0 0,90 71,70 3,77 8,11 25,47 4,72 8,11 65,09 21,70 14,41 2,83 1,89 0 45,28 0 7,21 1,89 0 0 1,89 0 0 20,75 2,83 6,31 5,66 0 0 77,36 30,19 9,91 4,72 0 0 3,77 0 0

4.4.3. Relaciones entre los microorganismos filamentosos y los parmetros fsicoqumicos

Se han determinado las relaciones existentes entre los diversos tipos de microorganismos filamentosos y los parmetros fsico-qumicos y operacionales del proceso, utilizando el coeficiente de correlacin de Spearman. Slo se han considerado los microorganismos filamentosos que han presentado una frecuencia superior al 10% del total, lo cual ha reducido el estudio a 13 tipos de microorganismos filamentosos. Al estudiar las correlaciones entre los microorganismos filamentosos y los parmetros fsico-qumicos y operacionales del proceso destacan los coeficientes positivos obtenidos entre el filamento Beggiatoa y la DBO5 y la DQO del efluente y el coeficiente negativo con el porcentaje de eliminacin de DQO, indicando que este filamento podra estar relacionado con efluentes de calidad deficiente (tabla 4.14).

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Tambin se puede destacar la correlacin positiva entre los microorganismos del grupo de los actinomicetos nocardioformes con los slidos en suspensin del efluente y los porcentajes de eliminacin de DBO5 y de nitrgeno. Hace falta a decir que los actinomicetos nocardioformes producen problemas de espumas que pueden llegar a ser muy graves, generando escapes de slidos con el agua de salida, por esto es coherente que se correlacione positivamente su abundancia con el incremento de slidos en suspensin del agua de salida. Por ltimo, se puede destacar los coeficientes de correlacin negativos entre el microorganismo filamentoso Tipo 0092 y los parmetros indicadores de la calidad del efluente como la DBO5, la DQO, los slidos en suspensin y el nitrgeno total, cosa que indica que este filamento puede estar relacionado cono una buena calidad del efluente.

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Tabla 4.14. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre la abundancia de los microorganismos filamentosos y los parmetros fsico-qumicos del efluente y operacionales del proceso. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin.

Total filamentos

Actinomicetos nocardioformes

N.limicola III

N. limicola II

H. hydrossis

Beggiatoa

S. natans

T021N

T0041

T0092

T0961 -0,214 0,033 99 0,258 0,014 89

DBO5 e

0,217 0,030 99 0,204 0,042 99 0,207 0,040 98 0,201 0,046 98 0,254 0,016 89 -0,303 0,003 89 -0,342 0,0005 99 0,276 0,020 70 0,324 0,006 70 0,319 0,001 99 0,269 0,011 88 -0,249 0,019 88 0,304 0,031 50 -0,387 0,00007 99 0,293 0,005 88 0,244 0,021 88 0,459 0,0007 50 0,256 0,015 88 0,422 0,002 50 -0,495 0,000001 99 -0,347 0,0008 89 -0,202 0,044 99 0,238 0,017 99

-0,250 0,012 99 -0,348 -0,404 0,462 0,0004 0,00003 0,000001 99 99 99 -0,363 0,0002 98

DQO e

-0,226 0,024 99

MES e

0,254 -0,229 0,011 0,023 98 98 0,367 0,0003 89

Fsforo total e

Nitratos y nitritos e

N amoniacal e

N total e

-0,255 0,527 0,010 0,000001 99 99 -0,303 0,003 88

% DBO5 elim.

% DQO elim.

% Elim. N

55

T1851

4.4.4. Microorganismos filamentosos ms relevantes

A continuacin se detallan las condiciones en las que suelen aparecer los microorganismos filamentosos ms abundantes de las muestras analizadas respeto los parmetros fsicoqumicos ms relevantes con los que estn relacionados. 4.4.4.1. Microthrix parvicella Microthrix parvicella produce frecuentemente problemas de bulking en sistemas convencionales de fangos activos. Este microorganismo filamentoso aparece en sistemas con cargas msicas bajas, bajas concentraciones de oxgeno disuelto, afluentes con elevado contenido en grasas y/o aceites (Eikelboom, 2000), especialmente cido oleico (Andreasen te al, 2000) e incluso en bajas temperaturas (Eikelboom, 2000). Su crecimiento puede verse favorecido con la presencia de procesos incompletos de nitrificacin y/o desnitrificacin ya que puede utilizar los nitratos y nitritos como aceptor de electrones (Salvad, 2006), por tanto, las condiciones de las depuradoras con sistema de eliminacin de nutrientes le son muy favorables (Eikelboom, 2000). Tambin se ha descrito que slo puede crecer con pH>7, siendo su desarrollo ptimo a pH 8 (EMASESA, 1997). Aunque no se ha encontrado una correlacin entre Microthrix parvicella y la concentracin de aceites y grasas del afluente, se ha estudiado su frecuencia de aparicin segn diferentes rangos de concentracin de aceites y grasas, puesto que como se ha comentado, suele aparecer en sistemas con afluentes con elevado contenido en grasas y/o aceites.
Tabla 4.15. Frecuencias de aparicin del filamento Microthrix parvicella con diferentes abundancias segn diversos rangos de concentracin de aceites y grasas del afluente.

Microthrix parvicella (m/ml) 600-700 500-600 400-500 300-400 200-300 100-200 0-100
0-10

1 1 4
10-20

1 1 1 1 8
20-30

1 1 1
30-40 40-50

Aceites y grasas (mg/l)

56

Como se puede observar en la tabla 4.15, la frecuencia de aparicin ms elevada de Microthrix parvicella se da con concentraciones bajas de aceites y grasas. En estos casos suele aparecer con abundancias relativamente bajas, aunque tambin aparece con abundancias muy elevadas pero baja frecuencia. Tambin se observa que a concentraciones ms elevadas de aceites y grasas, todo y que no es muy frecuente, puede llegar a aparecer con abundancias de 300 m/ml (a partir de abundancias de 200 m/ml de microorganismos filamentosos se considera que el sistema puede tener problemas de esponjamiento del fango y en algunos casos, con abundancias a partir de 200 m/ml e incluso inferiores, Microthrix parvicella puede producir problemas de espumas). 4.4.4.2. Actinomicetos nocardioformes En este trabajo se han denominado actinomicetos nocardioformes puesto que existen varios gneros de Actinomicetos (Rhodococcus, Mycobacterium...) que se han identificado conjuntamente. Tambin se pueden encontrar denominados como GALO (Gordonia amarae like organisms), NALO (Nocardia amarae like organisms), Gordona sp o Nocardia sp. Estos microorganismos filamentosos proliferan en condiciones de bajas cargas msicas, elevadas edades del fango y elevadas temperaturas. Tambin puede verse favorecido su crecimiento con la presencia de compuestos hidrofbicos como grasas, aceites, hidrocarburos, etc., siempre en condiciones aerbicas estrictas (Jenkins te al 1993). Tal y como se ha realizado con Microthrix parvicella, al no presentar una correlacin significativa con la presencia de aceites y/o grasas, se ha estudiado su frecuencia de aparicin segn diferentes rangos de concentracin de estos compuestos hidrofbicos. En este caso tambin se observa que las mayores frecuencias de aparicin de estos microorganismos filamentosos se dan con concentraciones de aceites y grasas de hasta 20 mg/l (tabla 4.16). En este caso hay que destacar que los actinomicetos nocardioformes son susceptibles de producir espumas generalmente con concentraciones a partir de 50 m/ml (Salvad, 1990), por lo tanto, aunque no es muy elevada, es importante la frecuencia con que aparece este filamento con concentraciones mayores de 50 m/ml a bajas concentraciones de aceites y grasas dado que pueden producir problemas de formacin de flotantes y escapes de slidos.

57

Tabla 4.16. Frecuencias de aparicin del microorganismo filamentoso del grupo de los actinomicetos nocardioformes con diferentes abundancias segn diversos rangos de concentracin de aceites y grasas del afluente.

Actinomicetos nocardioformes (m/ml) 400-500 1 300-400 200-300 100-200 1 50-100 1 0-50 9


10-20 0-10

1 1 3 6 9
20-30

2
30-40 40-50

Aceites y grasas (mg/l) 4.4.4.3. Tipo 021N Este filamento produce frecuentemente problemas de bulking filamentoso, con unos IVF muy elevados (> 500 ml/g). Se considera que su crecimiento se ve favorecido por aguas residuales spticas o que contengan importantes cantidades de sulfuros y/o cidos orgnicos (EMASESA, 1997), por situaciones de deficiencia de nutrientes y/o presencia de sustratos fcilmente biodegradables y bajas cargas msicas (Eikelboom, 2000). Se ha descrito que el filamento Tipo 021N es muy verstil metablicamente, pudiendo utilizar diferentes azcares, aminocidos y cidos orgnicos como fuente de carbono, cosa que le permite proliferar en muchos ambientes diferentes. Adems, como fuente de nitrgeno utiliza aminocidos y no nitratos, cosa que le permite proliferar en sistemas con deficiencia de nitrgeno (Williams y Unz, 1989). Mediante la prueba de Kruskal Wallis se ha determinado que el microorganismo Tipo 021N presenta diferencias significativas en referencia a su aparicin en plantas depuradoras convencionales respecto plantas diseadas para eliminar nutrientes (tabla 4.17). En la tabla 4.18 se puede observar que el rango promedio de este microorganismo filamentoso ha sido ms elevado en las depuradoras con tratamiento de tipo convencional que en las de eliminacin de nutrientes, cosa que coincide con Eikelboom (2000) que describe que el Tipo 021N es ms frecuente en depuradoras urbanas sin eliminacin de nutrientes.

58

Tabla 4.17. Resultados del anlisis de Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad.

H g.l. p Tipo 021N 11,68 1 0,00062


Tabla 4.18. Resultados de la prueba de Kruskal Wallis con los rangos promedios para cada variable, donde n: nmero de casos.

Tipo 021N

Tipo de tratamiento Eliminacin de nutrientes Convencional

N 51 55

Rango promedio 43,12 63,11

Como este filamento est relacionado con la presencia de sustratos fcilmente biodegradables, se ha estudiado su frecuencia de aparicin segn los diversos grados de biodegradabilidad del agua de entrada. As, se obtiene que la mayor frecuencia y abundancia de este filamento se da en aguas biodegradables (DBO5/DQO entre 0,4 y 0,8) y muy biodegradables (DBO5/DQO 0,8) (Metcalf y Eddy, 1995; Salas et. al., 2007).
Tabla 4.19. Frecuencias de aparicin del filamento Tipo 021N con diferentes abundancias segn los rangos del cociente DBO5/DQO, indicador de la biodegradabilidad del agua del afluente.

Tipo 021N (m/ml) 400-500 300-400 200-300 100-200 0-100


0-0,2

2 2 6 30
0,4-0,8 0,8-1

13
0,2-0,4

Cociente DBO5/DQO 4.4.4.4. Tipo 1851 El filamento Tipo 1851 se observa regularmente en depuradoras de baja carga, pero normalmente no domina nunca en sistemas de tratamiento de aguas residuales urbanas (Eikelboom, 2000). Las condicionas que le favorecen son las bajas cargas msicas y compuestos de bajo peso molecular (Eikelboom, 2000), as como elevadas edades del fango (Jenkins et. al 1993).

59

Al no disponer de datos de cargas msicas ni de edades del fango, se ha estudiado la frecuencia de aparicin del filamento Tipo 1851 a partir de rangos de concentracin de DBO5 del afluente. Todo y que no es exactamente lo mismo, normalmente a ms DBO5 de entrada ms elevada es la carga msica, todo y que no siempre, puesto que la carga msica tambin depende de otros factores como el volumen del reactor, la concentracin de slidos y el caudal del afluente. Aun as, se puede observar en la tabla 4.20. que a concentraciones ms bajas de DBO5 de entrada ms abundante y frecuente es el Tipo 1851.
Tabla 4.20. Frecuencias de aparicin del filamento Tipo 1851 con diferentes abundancias segn diversos rangos de DBO5 del afluente.

Tipo 1851 (m/ml) 500-600 400-500 300-400 200-300 100-200 0-100

1 2 2 3 12
0-100

1 1 7 22
100-200 200-300

1 3 8
300-400

3
400-500

1 3
500-1000

DBO5 del afluente (mg O2/l)

4.5. COMUNITADES DE PROTOZOOS FLAGELADOS

Los protozoos flagelados son microorganismos muy comunes en los sistemas de depuracin por fangos activos, especialmente durante las primeras etapas de colonizacin de los fangos activos (Curds, 1975). Tambin contribuyen, como los protozoos ciliados, a la clarificacin del efluente mediante la digestin de bacterias dispersas.
4.5.1. Clasificacin de los protozoos flagelados

Debido a la dificultad que supone clasificar los protozoos flagelados en vivo y sin hacer cultivos especficos, en este trabajo se han clasificado fundamentalmente en base a su tamao: flagelados pequeos (menores de 20 m) y flagelados grandes (mayores de 20 m). Dentro de cada rango de tamao, en los casos que ha sido posible y, debido fundamentalmente a su valor como bioindicadores, algunos grupos de flagelados se han diferenciado del resto y clasificado en base a la clasificacin taxonmica Systema Naturae

60

2000 (Brands, propuesta por la Society of Protozoologist (Lee, J.J., Leedale, G.F. y Bardbury, P, 2000) (ver clasificacin en el anejo). Se ha determinado la abundancia de flagelados de tamao pequeo (inferior a 20 m), expresada en ind/ml, a partir del mtodo descrito por Salvad (1990a), mientras que la cuantificacin de los flagelados de tamao superior a 20 m se ha determinado mediante el mtodo de submuestras (Madoni, 1984), expresando los resultados tambin en ind/ml. Se ha calculado la media y la desviacin estndar de las abundancias, as como la frecuencia de aparicin de los diferentes grupos y/o gneros estudiados (tabla 4.21)
Tabla 4.21. Abundancias, expresadas en ind/ml, y porcentajes de aparicin de los protozoos flagelados encontrados en las muestras, donde X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin. Flagelados < 20 m Flagelados < 20 m (bodnidos) Flagelados < 20 m (coanoflagelados) Flagelados < 20 m (coloniales) Flagelados < 20 m (Bicosoeca sp.) Flagelados < 20 m (Hexamita sp.) Flagelados < 20 m (Trepomonas sp.) Flagelados > 20 m (Entosiphon sp.) Flagelados > 20 m (Peranema sp.) Flagelados > 20 m (Petalomonas sp.) X 120656,01 44167,64 5046,95 2329,36 3948,86 64,71 1488,21 86,79 31,32 10,94 Desv. std 201755,54 100757,65 17609,55 23982,21 37980,77 666,20 13353,37 312,12 86,06 60,86 % 86,79 30,19 17,92 0,94 4,72 0,94 3,77 16,98 27,36 5,66

Entre los flagelados de tamao pequeo destaca la elevada abundancia y frecuencia de los flagelados de tamao pequeo en general, que bsicamente estn formatos por el grupo de los bodnidos. Por lo tanto, si atendemos a grupos ms concretos, los ms abundantes y frecuentes serian el grupo de los bodnidos, seguidos por el grupo de los coanoflagelados. Los flagelados en general de tamao pequeo (< 20 m), entre ellos el gnero Bodo, aparecen principalmente en las fases de inicio de la colonizacin de los fangos activos o bien asociados a un mal funcionamiento del proceso, como por ejemplo una baja concentracin de oxgeno disuelto o un exceso de carga orgnica (Madoni, 1991). Dentro de los flagelados de tamao grande, el ms abundante ha sido el gnero Entosiphon, que generalmente se asocia a elevadas concentraciones de oxgeno disuelto (Rius, 2003); mientras que el ms frecuente corresponde al gnero Peranema, la proliferacin del cual se asocia, en general, a edades del fango elevadas (Salvad, 1994).

61

4.5.2. Relaciones entre los protozoos flagelados y los parmetros fsico-qumicos

Se han determinado las relaciones existentes entre los diversos grupos y/o gneros de flagelados y los parmetros fsico-qumicos del efluente, utilizando los coeficientes de correlacin de Spearman. Slo se ha trabajado con los protozoos flagelados que han presentado una frecuencia superior al 10% del total. De las correlacionas obtenidas se pueden destacar los coeficientes de correlacin positivos entre los flagelados del grupo de los bodnidos y algunos parmetros indicadores de la calidad del efluente, especialmente la DQO y la materia en suspensin, as como el fsforo y el nitrgeno Kjeldahl y total (tabla 4.22.). Estos flagelados han sido asociados a un mal funcionamiento del proceso, como por ejemplo una baja concentracin de oxgeno disuelto o un exceso de carga orgnica (Madoni, 1991), por lo tanto, se podra decir que son indicadores de una calidad del efluente deficiente.
Tabla 4.22. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre le abundancia de los diversos grupos de protozoos flagelados y los parmetros fsico-qumicos del efluente. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin.

Nitratos y nitritos

N Kjeldahl

Fsforo total

Bodnidos Peranema sp.

0,2634 0,2521 0,2649 0,0088 0,0127 0,0126 97 88 98

0,2993 0,3997 0,0028 0,00005 98 98

0,2150 0,0326 99

4.5.3. Protozoos flagelados ms relevantes

En este apartado se ha analizado ms detalladamente el grupo de los coanoflagelados debido a su elevado valor bioindicador. El resto de flagelados, o no han sido muy abundantes, o su papel bioindicador es muy restringido solamente a un nico parmetro, del cual no disponemos de datos para establecer relaciones. 4.5.3.1. Coanoflagelados Generalmente estn asociados a buenas calidades del efluente, y proliferan en sistemas con bajas cargas msicas (Rius, 2003).

N total

DQO

MES

pH

62

Como no se ha obtenido ninguna correlacin entre los coanoflagelados y parmetros que indiquen una buena calidad del efluente, se ha estudiado la frecuencia y abundancia con que aparecen este grupo de flagelados de tamao pequeo segn unos rangos de porcentajes de eliminacin de DBO5. As, se puede observar en la tabla 4.23., que los coanoflagelados slo han aparecido con rendimientos de eliminacin de DBO5 bastante elevados, siempre mayores del 85%. Pero las frecuencias y abundancias ms elevadas se dan con unos porcentajes de eliminacin mayores del 95%, lo que indica, tal y como se ha comentado, que este grupo de flagelados de tamao pequeo aparecen principalmente cuando la calidad del efluente es muy buena.
Tabla 4.23. Frecuencias de aparicin del grupo de los coanoflagelados con diferentes abundancias segn diversos rangos de porcentajes de eliminacin de DBO5.

Coanoflagelados (ind/ml) 40000-100000 30000-40000 20000-30000 10000-20000 0-10000

1 1 1 1 2
85-90 90-95

4 5
95-100

% de eliminacin de DBO5
4.6. COMUNITADES DE PROTOZOOS AMEBOIDEOS

Las amebas, al igual que los protozoos flagelados, son microorganismos muy comunes en los sistemas de depuracin por fangos activos. Tambin contribuyen a la clarificacin del efluente mediante la ingestin de bacterias dispersas, aunque hay amebas, especialmente dentro de las amebas de tamao grande, que pueden ser depredadoras de otros protozoos e incluso de metazoos.
4.6.1. Clasificacin de los protozoos ameboideos

Se han considerado las gimnamebas (o amebas desnudas) y las tecamebas como dos grandes grupos separados dada su diferenciacin morfolgica. Las gimnamebas se han clasificado, a su vez, en tres grupos diferentes atendiendo a su tamao, puesto que es muy difcil diferenciarlas taxonmicamente en vivo y sin realizar cultivos especficos; adems, los taxones de gimnamebas no suelen estar asociados a un valor bioindicador. En cambio, las tecamebas se han clasificado a nivel genrico atendiendo a la morfologa de la teca en 63

base a la clasificacin taxonmica Systema Naturae 2000 (Lee te al, 2000) (ver clasificacin en el anejo). Al igual que en el caso de los protozoos flagelados, se ha cuantificado la abundancia de amebas (tanto de gimnamebas como de tecamebas) de tamao pequeo (inferior a 20 m) utilizando la tcnica descrita por Salvad (1990a), expresando los resultados en ind/ml. La abundancia de gimnamebas medianas (entre 20 y 50 m), gimnamebas grandes (> 50 m) y tecamebas de tamao grande (> 20 m) se ha realizado mediante el mtodo de las submuestras (Madoni, 1984), expresndose los resultados en ind/ml. Se ha calculado la media y desviacin estndar de las abundancias, y la frecuencia de aparicin de los grupos estudiados (tabla 4.24).
Tabla 4.24. Abundancias, expresadas en ind/ml, y porcentajes de aparicin de los protozoos ameboideos encontrados en las muestras, donde X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin.

X Desv. std Gimnamebas < 20 m 51468,45 153399,94 Gimnamebas entre 20 y 50 m 933,21 2031,80 Gimnamebas > 50 m 314,72 638,33 Tecamebas < 20 m (Cryptodifflugia sp.) 1013,71 3443,16 Tecamebas > 20 m (Arcella sp.) 244,53 907,98 Tecamebas > 20 m (Centropyxis sp.) 18,87 159,64 Tecamebas > 20 m (Euglypha sp.) 247,92 427,28 Tecamebas > 20 m (Trinema sp.) 11,32 66,65

% 73,58 79,25 58,49 9,43 33,96 6,60 56,60 6,60

En el caso de las gimnamebas se puede observar que las ms frecuentes han sido las de tamao mediano y pequeo. Las gimnamebas de tamao pequeo suelen asociarse a bruscos incrementos en la carga orgnica del afluente, apareciendo sobre todo en las primeras etapas de colonizacin de un fango (Ferrer et. al., 2007). A medida que se va estabilizando el proceso, las amebas pequeas son sustituidas por gimnamebas de tamao mediano y estas finalmente por amebas de tamao grande, las cuales son indicadoras de ambientes ms estables. En el caso de las tecamebas de tamao grande las ms frecuentes y tambin abundantes han sido Euglypha sp. y Arcella sp.
4.6.2. Relaciones entre los protozoos ameboideos y los parmetros fsico-qumicos

Para estudiar las relaciones entre los diversos grupos y/o gneros de amebas y los parmetros fsico-qumicos del efluente, se han utilizado los coeficientes de correlacin de

64

Spearman. Slo se ha trabajado con los protozoos ameboideos que han presentado una frecuencia superior al 10% del total. En la tabla 4.25., se pueden observar las correlacionas negativas entre el gnero Euglypha y los indicadores de la calidad del efluente DBO5 y DQO, as como con los rendimientos de eliminacin de materia orgnica. Esto indicara que Euglypha sp., estara relacionada con una buena calidad del efluente. Adems, tambin se observa una correlacin negativa con el amonio del efluente, cosa que indica la relacin de esta tecameba con la presencia de procesos de nitrificacin. Si consideramos los tres grupos de gimnamebas estudiados (pequeas, medianas y grandes) vemos que estn relacionados positivamente con la DQO y con el amonio del efluente y, por lo tanto, estn relacionados con una calidad del efluente ms deficiente.
Tabla 4.25. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre la abundancia de los diversos grupos de protozoos ameboideos y los parmetros fsico-qumicos del efluente. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin.

N Kjeldahl

N amoniacal

% DBO eliminada

-0,2608 -0,38192 -0,46934 -0,49836 Euglypha sp. 0,0091 0,0001 0,000003 0,000001 99 99 89 99 0,265762 0,293543 Arcella sp. 0,007844 0,003351 99 98 0,2432 Gimnamebas 0,0153 medianas 99 0,2639 Gimnamebas 0,0083 pequeas 99 0,2045 Gimnamebas 0,0423 grandes 99

-0,3190 -0,45408 0,2388 0,3961 0,0071 0,000002 0,0251 0,0001 88 70 99 88 0,2459 0,0209 88 0,3703 0,0004 88 0,2895 0,0151 70

4.6.3. Protozoos ameboideos ms relevantes

Tal y como se ha realizado con los flagelados, nicamente se ha estudiado con ms detalle las amebas con un papel bioindicador ms relevante. En este caso han sido las tecamebas y en particular el gnero Euglypha. 65

% DQO eliminada

Fsforo total

N total

DBO5

DQO

MES

4.6.3.1. Euglypha Este gnero de tecamebas est asociado a cargas msicas de moderadas a bajas y edades del fango elevadas, indicando tambin presencia de procesos de nitrificacin en el sistema (Canler te al, 1999). En este estudio, este gnero de tecameba ha presentado diferencias significativas entre los sistemas de tratamiento convencionales y los sistemas de eliminacin de nutrientes segn el anlisis de Kruskal-Wallis (tabla 4.26). Ha sido ms abundante en los sistemas de eliminacin de nutrientes (tabla 4.27.), puesto que como ya se ha comentado, est asociada a procesos de nitrificacin.

Tabla 4.26. Resultados del anlisis de Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad. H 9,94 g.l. 1 p 0,0016

Euglypha sp.

Tabla 4.27. Resultados de la prueba de Kruskal Wallis con los rangos promedio para los dos tipos de tratamiento, donde n: nmero de casos. Rango promedio 62,86 44,81

Tratamiento Eliminacin de nutrientes Euglypha sp. Convencional

N 51 55

4.6.3.2. Tecamebas grandes En general, las tecamebas estn asociadas a efluentes con baja DBO5, baja concentracin de amonio, baja carga msica y buena oxigenacin, es decir, a procesos de nitrificacin. A partir de estos supuestos, se ha analizado si se ve alguna relacin entre la frecuencia de aparicin de las tecamebas y la concentracin de amonio del efluente. En la tabla 4.28 se puede observar que la frecuencia de aparicin de tecamebas de tamao grande ms elevada se da cuando las concentraciones de amonio del efluente son ms bajas. Adems, tambin se observa que las abundancias ms elevadas de tecamebas han aparecido con concentraciones de amonio en el efluente menores de 5 mg/l. En cambio, todo y que tambin han aparecido en concentraciones ms elevadas de amonio, se puede ver que lo han hecho con una abundancia baja.

66

Tabla 4.28. Frecuencias de aparicin del total de tecamebas de tamao grande con diferentes abundancias segn diversos rangos de concentracin de nitrgeno amoniacal del efluente.

Tecamebas de tamao gran (ind/ml) 4000-5000 3000-4000 2000-3000 1000-2000 0-1000 1 1 4 29


5-10 0-5

2
10-15

3
15-20 20-25

Amonio del efluente (mg/l)

4.7. COMUNITADES DE PROTOZOOS CILIADOS

Los protozoos ciliados son muy importantes en los sistemas de depuracin por fangos activos puesto que contribuyen a la clarificacin del efluente mediante la depredacin y induciendo la floculacin (Curds et. al., 1968 y Curds, 1992). Adems, ha sido uno de los grupos ms estudiados dentro de este hbitat y ms utilizado como indicadores del funcionamiento del proceso de depuracin.
4.7.1. Clasificacin de los protozoos ciliados

En total se han identificado 58 especies de protozoos ciliados que han sido clasificadas segn la clasificacin taxonmica propuesta por Lynn y Small (2000) (ver clasificacin en el anejo). Se ha calculado la abundancia media, en individuos/ml, y la desviacin estndar, as como la frecuencia de aparicin (tabla 4.29.) de las diferentes especies de protozoos ciliados encontrados. En esta tabla slo se muestran aquellas especies que han tenido una frecuencia de aparicin superior al 10%. La tabla completa con los resultados se encuentra en el anejo. Como se puede observar en la tabla 4.29 las especies ms abundantes han sido Aspidisca cicada y Vorticella aquadulcis, seguidas de Carchesium polypinum, Vorticella convallaria, Acineria uncinata y Trochilia minuta. Si miramos las especies que han aparecido en un mayor nmero de muestras vemos que la mayora coinciden con las ms

67

abundantes, Vorticella aquadulcis, Aspidisca cicada, Acineria uncinata, Vorticella convallaria, Carchesium polypinum y Thigmogaster oppositevacuolatus.
Tabla 4.29. Abundancias, expresadas en ind/ml, y frecuencias de aparicin de las especies de protozoos ciliados que han presentado una frecuencia de aparicin superior al 10% y de los grupos ecolgicos, donde X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin.

Acineria uncinata Acineta tuberosa Aspidisca cicada Aspidisca lynceus Calyptotricha lanuginosa Carchesium polypinum Cinetochilum margaritaceum Coleps hirtus Epistylis coronata Epistylis entzii Epistylis plicatilis Epistylis sp Euplotes affinis Litonotus lamella Litonotus varsaviensis Opercularia articulata Plagiocampa rouxi Pseudochilodonopsis fluviatilis Thigmogaster oppositevacuolatus Thuricola kellicottiana Tokophrya quadripartita Trochilia minuta Uronema nigricans Vorticella aquadulcis Vorticella convallaria Libre depredador Libre bactervoro Reptante depredador Reptante bactervoro Ssil depredador Ssil bactervoro Parsito

X 428,68 24,15 2034,34 293,58 21,13 536,75 44,15 49,81 99,25 295,85 192,74 183,77 170,19 78,87 6,04 304,53 76,60 48,68 256,23 96,60 7,92 379,62 18,49 1065,28 504,57 215,85 75,09 428,68 3416,23 48,68 3362,45 2,64

Desv. std 1024,91 64,83 5155,43 1969,82 97,87 1617,67 627,59 522,41 878,42 3140,92 925,59 1842,42 812,88 612,58 27,50 4872,69 501,64 195,84 1570,93 564,53 30,72 1811,60 252,09 2033,12 1551,13 463,91 292,52 886,40 5346,18 67,16 3729,76 16,81

% 66,04 25,47 71,70 23,58 16,98 41,51 12,26 13,21 15,09 15,09 19,81 13,21 33,02 21,70 10,38 14,15 23,58 27,36 35,85 16,04 12,26 31,13 11,32 74,53 52,83 56,60 27,36 66,04 90,57 51,89 98,11 3,77

4.7.2. Grupos ecolgicos de los ciliados

Para poder evaluar el papel ecolgico de los protozoos ciliados dentro los sistemas de depuracin urbanos e industriales se han agrupado las diferentes especies estudiadas segn

68

sus caractersticas ecolgicas de afinidad al sustrato y segn su estrategia alimentaria a partir de Madoni (1994) y Foissner y Berger (1996). El grupo ms abundante, ha sido el de protozoos ciliados reptantes bactervoros (tabla 4.29). El siguiente grupo ms abundante corresponde a los ssiles bactervoros, cosa que concuerda con Madoni (1994) que explica que estos dos grupos suelen ser co-dominantes en los fangos activos debido a que al tener diferentes tipos de alimentacin (los reptantes se alimentan bsicamente de bacterias floculantes y los ssiles de bacterias libres) no compiten entre ellos. Se puede destacar la baja abundancia y frecuencia de aparicin del grupo de los libres nadadores bactervoros, los cuales suelen proliferar cuando hay elevadas concentraciones de bacterias dispersas (Madoni, 1994), cosa que como ya se ha comentado, indica que el sistema sufre una cierta desestabilizacin o est afectado por algn tipo de perturbacin.
4.7.3. Relaciones entre los protozoos ciliados y los parmetros fsico-qumicos

Con las especies de protozoos ciliados que han presentado una frecuencia superior al 10% y los grupos ecolgicos, se han determinado las relaciones existentes con los parmetros fsico-qumicos y operacionales del proceso, utilizando el coeficiente de correlacin de Spearman. De las correlacionas obtenidas se puede destacar la correlacin positiva entre la especie Opercularia articulata y la eliminacin de nitrgeno, coincidiendo con la asociacin de esta especie con procesos de nitrificacin por algunos autores (Foissner y Berger, 1996). Tambin se han observado correlaciones positivas entre la especie Litonotus varsaviensis y los parmetros indicadores de la calidad del efluente como la DBO5, la DQO y la materia en suspensin, indicando que este especie est asociada a una calidad del efluente deficiente. La especie Cinetochilum margaritaceum ha presentado correlacin positiva con los nitratos y nitritos del efluente as como negativa con la eliminacin de nitrgeno, cosa que podra indicar que esta especie no est relacionada con la presencia de procesos de nitrificacin, en contra de lo expuesto en la bibliografa, ya que esta especie se asocia a procesos de nitrificacin (Isac et. al., 2005).

69

Tabla 4.30. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre las especies y grupos ecolgicos de protozoos ciliados y los parmetros fsico-qumicos del efluente. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin. % DBO5 eliminada 0,242 -0,199 0,234 0,220 0,237 0,305 0,395 0,226 0,216 0,388 0,394 0,211 0,287 0,2301 0,367 0,255 0,256 0,212 0,291 0,266 0,219 -0,258 -0,253 0,209 0,345 0,315 0,411 0,302 0,264 0,278 0,200 0,292 -0,256 -0,266 -0,419 -0,222 0,218 0,242 -0,192 -0,255 0,232 0,286 0,219 -0,271 0,405 0,218

Acineria uncinata Aspidisca cicada Aspidisca lynceus Carchesium polypinum Cinetochilum margaritaceum Coleps hirtus Epistylis Plicatilis Euplotes affinis Litonotus lamella Litonotus varsaviensis Opercularia articulata Pseudochilodonopsis fluviatilis Thigmogaster oppositevacuolatus Uronema nigricans Vorticella aquadulcis Vorticella convallaria Total Diversidad Libre depredadores Libre bactervoros Reptante depredadores Reptante bactervoros Ssil depredadores Ssil bactervoros

0,210

0,287 0,257 0,322

0,283 0,236

0,383 0,210

70

% DQO eliminada

Nitratos y nitritos

Conductividad

DBO5

pH

% Eliminacin N

N amoniacal

Fsforo

N total

DQO

MES

4.7.4. Especies de protozoos ciliados ms relevantes

En este apartado se relacionan las especies de protozoos ciliados con un valor bioindicador ms importante con aquellos parmetros con los que estn asociados segn la bibliografa aunque no se hayan encontrado correlaciones. Por lo tanto, algunas especies como Acineria uncinata y Aspidisca cicada, aunque han sido de las especies ms abundantes y frecuentes, no se comentan debido a que aparecen en amplios rangos de calidades del efluente (Poole, 1984), siendo muy frecuentes en sistemas de depuracin (Curds y Cockburn, 1970), y encontrndose tanto en aguas urbanas como industriales, por lo tanto, no se consideran buenas indicadoras del proceso de depuracin. 4.7.4.1. Opercularia articulata El gnero Opercularia generalmente est asociado a fangos de calidad deficiente, a la presencia de vertidos industriales y a bajas concentraciones de oxgeno disuelto (Isac et. al. 2005., y Sangesa et. al., 2007). Dentro de este gnero algunos autores diferencian la especie Opercularia articulata de otras especies de Opercularia de tamao pequeo, asociadas a estas condiciones, y la asocian a calidades del efluente elevadas, a bajas cargas msicas y a presencia de procesos de nitrificacin (Foissner y Berger, 1996). En nuestro estudio se ha correlacionado positivamente con el rendimiento de eliminacin de nitrgeno. Adems, mediante la prueba de Kruskal Wallis se ha determinado que Opercularia articulata presenta diferencias significativas respecto su aparicin en plantas depuradoras convencionales frente a plantas diseadas para eliminar nutrientes (tabla 4.31). En la tabla 4.32. se puede observar que el rango promedio de esta especie de protozoo ciliado ha sido ms elevado en las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes.
Tabla 4.31. Resultados del anlisis de Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad.

H Opercularia articulata 3,909

g.l. 1

p 0,048

71

Tabla 4.32. Resultados de la prueba de Kruskal Wallis con los rangos promedio para cada variable, donde n: nmero de casos.

Tratamiento n Rango promedio Eliminacin de nutrientes 51 57,21 Opercularia articulata Convencional 55 50,05 4.7.4.2. Vorticella aquadulcis-complejo Es una especie ssil, adherida a los flculos mediante el pednculo contrctil, y se alimenta de bacterias dispersas (Foissner y Berger, 1996). Con respecto a su papel bioindicador, es caracterstica de sistemas que operan con cargas msicas de moderadas a bajas, as como en edades de fango elevadas. Tambin es indicadora de buena calidad del efluente. Aunque no se ha obtenido una correlacin positiva entre esta especie y la eliminacin de DBO5, se ha estudiado su frecuencia de aparicin por rangos a ver si existe alguna relacin con la calidad del efluente. En la tabla 4.33. se puede observar que la frecuencia de aparicin ms elevada de esta especie se da cuando el porcentaje de eliminacin de DBO5 es del 95 al 100%. Adems, tambin se observa que las mayores abundancias tambin aparecen con elevados rendimientos de eliminacin de materia orgnica.
Tabla 4.33. Frecuencias de aparicin de la especie Vorticella aquadulcis a partir de diversas abundancias y diferentes rangos del porcentaje de eliminacin de DBO5.

Vorticella aquadulcis (ind/ml) 10000-11000 9000-10000 8000-9000 7000-8000 6000-7000 5000-6000 4000-5000 3000-4000 2000-3000 1000-2000 0-1000
70-75

1 1 1 1 2 1 2 10 26
95-100

2 1
75-80 80-85

1
85-90

4
90-95

5 4

% Eliminacin DBO5

72

4.7.4.3. Vorticella convallaria-complejo Se trata de un protozoo ciliado ssil y su alimentacin es bsicamente bactervora (Curds, 1982). Su presencia est asociada a efluentes de buena calidad (Curds, 1982) y a concentraciones adecuadas de oxgeno disuelto (Madoni y Antonietti 1984). Tal y como se ha realizado con V. aquadulcis, tambin se ha estudiado la frecuencia de aparicin de V. convallaria con diversos rangos de porcentajes de eliminacin de DBO5 para ver si existe alguna relacin con la calidad del efluente. As, se observa en la tabla 4.34, que la mayor frecuencia de aparicin de esta especie se da cuando el porcentaje de eliminacin de DBO5 es elevado, entre el 95 y el 100%. Adems, tambin se puede observar que las mayores abundancias tambin aparecen con elevados rendimientos de eliminacin de materia orgnica.
Tabla 4.34. Frecuencias de aparicin de la especie Vorticella convallaria a partir de diversas abundancias y diferentes rangos del porcentaje de eliminacin de DBO5.

Vorticella convallaria (ind/ml) 8000-9000 7000-8000 6000-7000 5000-6000 4000-5000 3000-4000 2000-3000 1000-2000 0-1000 1
65-70 70-75 75-80 80-85

1 1 2 1 1
85-90

3
90-95

1 8

3 3 22
95-100

% Eliminacin de DBO5
4.7.5. Diversidad especfica de los protozoos ciliados

El ndice de diversidad de Shannon-Weaver se ha utilizado para estudiar las comunidades de protozoos. Se considera que la diversidad es baja en comunidades inestables o bajo condiciones ambientales muy fluctuantes (Margalef, 1977). Tambin cuando domina una especie o grupo, normalmente debido a la existencia de algn factor limitante que impide el desarrollo de otras especies. En cambio, la microfauna de un sistema que funciona correctamente, est muy diversificada (Madoni, 1994).

73

En este estudio han predominado las muestras cono una diversidad de ciliados entre moderada y elevada (tabla 4.35), cosa que indica un funcionamiento bastante bueno del sistema y, por lo tanto, que se encuentra ms estructurado, presentando una mayor capacidad de asumir cambios en las condiciones del sistema.
Tabla 4.35. Diversidades medias, expresadas en bits/ind, y frecuencias de aparicin de los rangos de diversidad de los protozoos ciliados, donde n: nmero de muestras, X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin.

Diversidad Baja (0-1 bits/ind) Moderada (1-2 bits/ind) Elevada (2-3 bits/ind) Muy elevada (>3 bits/ind)

n 8 44 53 1

X 0,72 1,54 2,38 3,17

Desv. std 0,265 0,292 0,276 ---

% 7,547 41,50 50 0,943

La diversidad especfica de ciliados ha presentado correlacionas positivas con el pH y la conductividad (tabla 4.30). Adems, aunque no haya presentado correlacin, se puede deducir una relacin con el rendimiento de eliminacin de DBO5 (tabla 4.36.), porque como se puede observar, los mayores rendimientos de eliminacin de materia orgnica se dan, con mayor frecuencia, cuando la diversidad especfica es entre moderada y elevada.
Tabla 4.36. Frecuencias de aparicin de los diferentes rangos de la diversidad especfica de los ciliados y de los porcentajes de eliminacin de DBO5.

% Eliminacin de DBO5 90-100 80-90 70-80 60-70


0-1

4 2

32 5 1
1-2

39 3 1
2-3 3-4

Diversidad especfica (bits/ind)


4.8. COMUNITADES DE METAZOOS

En los fangos activos se pueden encontrar metazoos, aunque generalmente son ms abundantes en otros sistemas de depuracin mediante cultivo fijo como los filtros percoladores y los biodiscos (Rius, 2003). Los grupos ms comunes que habitan los sistemas de depuracin por fangos activos son los rotferos y los nematodos, aunque tambin se pueden encontrar oligoquetos, gastrotricos y tardgrados (Martnez, 2005).

74

4.8.1. Clasificacin de los metazoos

En este estudio todos los tipos de metazoos encontrados se determinaron a nivel de filum. La clasificacin taxonmica utilizada ha sido la de Brusca y Brusca (1990) (ver clasificacin en el anejo). Como se observa en la tabla 4.37, el grupo de metazoos ms abundante y ms frecuente ha sido el de los rotferos, y el siguiente grupo de metazoos tanto en abundancia como en frecuencia ha sido el de los nematodos, coincidiendo con la bibliografa. Tambin se observaron gastrotricos y tardgrados en las muestras analizadas, pero en una abundancia, y sobre todo frecuencia, bastante baja.
Tabla 4.37. Abundancias, expresadas en ind /ml, y porcentajes de aparicin de los diferentes grupos de metazoos encontrados en las muestras, donde X: media, Desv. std: desviacin estndar y %: frecuencia de aparicin.

Gastrotricos Nematodos Rotferos Tardgrados

X 3,40 14,72 181,70 12,83

Des std 34,97 27,78 319,07 59,08

% 0,94 27,36 66,98 8,49

4.8.2. Relaciones entre los metazoos y los parmetros operacionales del proceso

Se han determinado las relaciones existentes entre los diversos grupos de metazoos y los parmetros fsico-qumicos y operacionales del proceso, utilizando el coeficiente de correlacin de Spearman. En cuanto a los coeficientes encontrados se puede destacar el coeficiente de correlacin positivo entre los rotferos y el rendimiento de eliminacin de DBO5 (tabla 4.38.), cosa que coincide con otros autores, que describen la presencia de rotferos en sistemas altamente estabilizados y con eficiencias de eliminacin de DBO5 superiores al 93-95% (Mc Kinney, 1967; Klimowicz, 1970).

75

Tabla 4.38. Coeficientes de correlacin de Spearman (p<0,05) entre los parmetros fsico-qumicos del afluente y los diversos grupos de metazoos. El primer valor corresponde al coeficiente de correlacin, el segundo a la probabilidad, y el tercero al nmero de casos. En negrita se muestran los coeficientes de correlacin con p<0,01. Las casillas en blanco indican falta de correlacin.

% DBO5 eliminada

Nitratos y nitritos

0,3628 0,2544 -0,244 0,244 0,3607 0,0005 0,0161 0,0235 0,0217 0,0100 89 86 88 50 86 -0,217 Nematodos 0,0443 86

Rotferos

4.8.3. Metazoos ms relevantes

4.8.3.1. Rotferos Los rotferos son organismos muy frecuentes en sistemas de depuracin de aguas residuales, lo que coincide con los resultados obtenidos. Los gneros ms comunes son Lecane, que puede fragmentar los flculos y alimentarse de las bacterias floculantes, y Philodina, que se alimenta filtrando las bacterias dispersas y/o de materia orgnica particulada (Doohan, 1975). El mucus contenido en sus excreciones tambin contribuye a la formacin de flculos (Calaway, 1968). Como los protozoos, son organismos aerobios estrictos, y en general se asocian a edades del fango elevadas. Su presencia generalmente indica fangos establos y cantidades de oxgeno disuelto elevadas (Martnez, 2006). Se ha analizado la frecuencia de aparicin de los rotferos con el rendimiento de eliminacin de DBO5, puesto que, como se ha comentado, en la bibliografa se describe que estn asociados a sistemas altamente estabilizados y con eficiencias de eliminacin de DBO5 elevadas y en este estudio, se confirma la correlacin positiva existente entre estos metazoos y este parmetro.

% Eliminacin N

Conductividad

DQO

76

De los resultados obtenidos, se puede destacar que la gran mayora de los rotferos han aparecido con porcentajes de eliminacin de materia orgnica elevados (del 95 al 100%), aunque la mayor frecuencia haya sido con abundancias bajas (tabla 4.39.). As y todo, las abundancias encontradas ms elevadas han sido tambin con los porcentajes de eliminacin de materia orgnica ms elevados.

Tabla 4.39. Frecuencias de aparicin de los metazoos del grupo de los rotferos con diferentes abundancias segn diversos rangos de eliminacin de DBO5.

Rotferos (ind/ml) 1600-2000 1200-1600 800-1200 400-800 0-400


80-85

2 2 1
85-90 90-95

1 1 7
95-100

1 5 34

% eliminacin DBO5

4.9. PROBLEMAS DE FUNCIONAMENTO 4.9.1. Bulking filamentoso

El porcentaje de muestras que presentaban bulking filamentoso se determin teniendo en cuenta la concentracin total de microorganismos filamentosos, considerando que es susceptible de producirse un episodio de bulking filamentoso cuando esta concentracin supera los 200 m/ml (Salvad, 1990). Hay que comentar que no se han podido comparar con los valores de IVF, el cual a partir de 150-200 ml/g tambin indica probabilidad de producirse bulking filamentoso (Jenkins, 1993) debido a que no se dispona de estos datos. El porcentaje de muestras que eran susceptibles de tener problemas de esponjamiento del fango (con ms de 200 m/ml de microorganismos filamentosos) ha sido del 55 %, cosa que indica que un poco ms de la mitad de las muestras eran susceptibles de tener problemas de separacin lquido-slido debido a bulking filamentoso. Tambin se han determinado los principales microorganismos filamentosos que han producido este bulking en las depuradoras estudiadas (tabla 4.40.). En general se puede

77

observar que los microorganismos filamentosos con mayor porcentaje de generar bulking filamentoso, con casi un 26 %, han sido Microthrix parvicella y el Tipo 1851. Recordemos que el microorganismo filamentoso M. parvicella ha sido el ms abundante en las muestras estudiadas y el Tipo 1851, el segundo ms abundante y frecuente.
Tabla 4.40. Porcentajes de aparicin de los microorganismos que han producido problemas de bulking filamentoso y espumas en les muestras estudiadas.

Microorganismo filamentoso Actinomicetos nocardioformes Microthrix parvicella Tipo 0092 Tipo 021N Tipo 0961 Tipo 1851

Bulking 17,24 25,86 5,17 24,13 1,72 25,86

Espumas 61,82 27,27 10,91 -------

Mediante el anlisis de Kruskal-Wallis se ha determinado si haba diferencias en los parmetros de calidad del efluente (DBO5, DQO y MES) entre las muestras que presentaban problemas de bulking filamentoso a partir de la abundancia total de filamentos y las que no. Como se puede observar a la tabla 4.41, estos parmetros no han presentado diferencias significativas dependiendo de si las muestras presentaban una abundancia de filamentos total superior o inferior a 200 m/ml.
Tabla 4.41. Resultados del anlisis Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad.

DBO5 DQO MES

H 1,636 1 0,2007

g.l. 0,229 1 0,632

p 0,058 1 0,808

Se han analizado las frecuencias de aparicin de la suma total de filamentos por rangos de abundancias y rangos de concentracin de materias en suspensin del efluente (Tabla 4.42.). Como se puede observar, de las muestras que superan los 35 mg/l permitidos por la Directiva 91/271/CEE, slo dos han presentado una concentracin de microorganismos filamentosos superior a 200 m/ml. La gran mayora de muestras, aunque tenan una elevada abundancia de filamentos, cumplan con el valor de la Directiva (tabla 4.42.), cosa que se atribuye a qu las medidas que se toman en los decantadores secundarios para evitar el escape de slidos y los sistemas para eliminar flotantes funcionan incluso cuando la

78

concentracin de filamentos es muy elevada y susceptible de producir problemas graves de separacin slido-lquido y de escapes de slidos con el agua de salida.
Tabla 4.42. Frecuencias segn diversas abundancias del total de microorganismos filamentosos segn diversos rangos de concentracin de materia en suspensin del efluente

Microorganismos filamentosos totales (m/ml) 1400-1600 1200-1400 1000-1200 800-1000 600-800 400-600 200-400 0-200 1 1 1 4 2 11 32 42
35-50 0-35

1 1 1
50-100

2
100-150 150-200

MES (mg/l)
4.9.2. Foaming

Para determinar el porcentaje de muestras que presentaban problemas de foaming, se utiliz la referencia de Salvad (1990b) para el grupo de los actinomicetos nocardioformes, la cual considera que concentraciones de actinomicetos nocardioformes superiores a los 50 m/ml son susceptibles de producir espumas. Tambin se ha considerado, a partir de las observaciones realizadas, al no haber ninguna referencia bibliogrfica, que Microthrix parvicella puede producir espumas a partir de concentraciones de 200 m/ml. Se ha considerado que ninguna muestra ha presentado espumas producidas por el microorganismo filamentoso Tipo 1863, puesto que ninguna muestra ha presentado concentraciones elevadas de este microorganismo. En cambio, para el Tipo 0092, para el que tampoco hay ninguna referencia bibliogrfica de la concentracin a la cual puede producir espumas, se observaron cuatro muestras con una elevada concentracin de este filamento y que adems, presentaban espumas. Se ha considerado que las espumas estaban producidas por el filamento Tipo 0092, puesto que la concentracin de otros microorganismos filamentosos como Microthrix parvicella o el grupo de los actinomicetos nocardioformes era muy baja, y adems, porque al observar las espumas se observ una abundancia elevada de este filamento. Las concentraciones del

79

filamento en estas muestras fue de 143,0 m/ml, 146,2 m/ml, 144,0 m/ml y 460,0 m/ml y 478,0 m/ml; por lo tanto, se podra considerar que el microorganismo filamentoso Tipo 0092 es susceptible de producir espumas cuando se encuentra en concentraciones a partir de aproximadamente 150 m/ml. Casi en la mitad de las muestras, exactamente en un 42 %, los microorganismos filamentosos presentes eran susceptibles de generar espumas en el sistema. De estas muestras, ms de la mitad, casi un 62 %, eran producidas por el grupo de los actinomicetos nocardioformes (tabla 4.40). Este resultado coincide con el encontrado por Jenkins et. al. (1993), dnde este microorganismo filamentoso es el ms observado en sistemas con espumas en los Estados Unidos. Adems, hay siete muestras dnde las espumas eran producidas por este filamento juntamente con Microthrix parvicella, el cual ha presentado abundancias susceptibles de generar espumas en el 27 % de las muestras de sistemas con problemas de flotantes. Como ocurre con el problema del esponjamiento del fango, no se han observado diferencias significativas en los parmetros indicadores de la calidad del efluente entre las muestras que presentaban una abundancia de actinomicetos nocardioformes superior a 50 m/ml y las que presentaban una abundancia inferior a 50 m/ml (tabla 4.43). Esto se atribuye a qu los sistemas estudiados estn preparados para evitar el escape de slidos causados por la formacin de espumas biolgicas (placas deflectoras, sistemas de eliminacin de flotantes, etc.).
Tabla 4.43. Resultados del anlisis Kruskal-Wallis, donde H: estadstico de Kruskal-Wallis, g.l.: grados de libertad y p: probabilidad.

DBO5 DQO MES

H 0,049 1 0,825

g.l. 0,644 1 0,422

p 0,496 1 0,481

80

5. CONCLUSIONES
-

El agua residual de entrada a las depuradoras estudiadas se puede clasificar como un agua residual de carga media segn Metcalf y Eddy (1995). La relacin DBO5/DQO, que indica la biodegradabilidad del agua de entrada, se encuentra, en la mayora de muestras, dentro de los intervalos tpicos de las aguas residuales urbanas.

La relacin DBO5/N/P se encuentra dentro del intervalo tpico de 100:5:1 (Jenkins et. al., 1993) para todas las muestras observadas, por lo tanto, las aguas residuales de las plantas depuradoras estudiadas no sufren de problemas causados por deficiencias de nutrientes.

Los valores de DBO5, DQO y MES del efluente han sido mayoritariamente inferiores a los lmites de vertido establecidos por la Directiva 91/271/CEE. Los parmetros de concentracin de nutrientes (nitrgeno y fsforo) del efluente, la eliminacin de nitrgeno y la eliminacin de DQO presentan diferencias significativas entre las depuradoras con tratamiento convencional y las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes, siendo ms bajos en estas ltimas.

Los valores de nitrgeno y fsforo del efluente para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes han sido, mayoritariamente, inferiores a los lmites de la Directiva 91/271/CEE, aunque se han observado bastantes muestras que no los cumplan.

Casi la mitad de las muestras presentaron flculos de tamao mediano pero con una abundancia de microorganismos filamentosos muy elevada. Adems, se determin que el tamao de los flculos no dependen nicamente de la abundancia de microorganismos filamentosos.

Ms de la mitad de las muestras analizadas han presentado una concentracin de flculos elevada, presentando cierta relacin con los slidos en suspensin del licor mezcla (SSLM).

La gran mayora de muestras han presentado una concentracin baja de bacterias dispersas. La presencia de bacterias helicoidales, especialmente de espiroquetas, ha sido bastante elevada, aunque el porcentaje de muestras con una abundancia elevada ha sido slo del 15 % en el caso de las espiroquetas.

81

No se ha observado ninguna muestra con presencia masiva de la bacteria Zoogloea spp., y slo un 2% de las muestras analizadas han presentado bacterias GAO y/o PAO en una concentracin moderada, lo que seguramente es debido a que, como ya se ha comentado, el agua de entrada de estas depuradoras no ha presentado deficiencia de nutrientes.

El microorganismo filamentoso ms abundante ha sido Microthrix parvicella, mientras que el ms frecuente el del grupo de los actinomicetos nocardioformes. Aunque no se han observado correlaciones entre los microorganismos Microthrix parvicella y el grupo de los actinomicetos nocardioformes con la concentracin de aceites y grasas del afluente, se ha observado que hay cierta relacin principalmente con concentraciones de aceites y grasas de hasta 20 mg/l.

El microorganismos filamentoso Tipo 021N ha sido ms abundante en las depuradoras con tratamiento convencional, coincidiendo con Eikelboom (2000), puesto que se trata de un microorganismos aerbico estricto, y en las depuradoras con eliminacin de nutrientes tienen zonas anaerbicas y zonas anxicas. Tambin se ha observado cierta relacin con la biodegradabilidad del agua de entrada, apareciendo principalmente cuando el agua de entrada es entre biodegradable y muy biodegradable.

Los flagelados de tamao pequeo del grupo de los bodnidos se pueden asociar a un efluente de mala calidad, mientras que el grupo de los coanoflagelados, tal y como indica la bibliografa, a buenas calidades del efluente, observndose en nuestras caso, cierta relacin con la eliminacin de DBO5.

Se ha observado que las tecamebas de tamao grande, y especialmente la tecameba Euglypha sp, aparecen asociadas a la presencia de procesos de nitrificacin, debido a que se correlacionan negativamente con la concentracin de amonio del efluente.

Entre las especies ms frecuentes y abundantes observadas se encuentran Aspidisca cicada y Acineria uncinata, las cuales son muy frecuentes en sistemas de depuracin (Curds y Cockburn, 1970) debido a que aparecen en amplios rangos de calidades del efluente (Poole, 1984), por lo tanto, no se han considerado buenas indicadoras del proceso de depuracin.

Destaca la correlacin positiva obtenida entre la especie Opercularia articulata y el rendimiento de eliminacin de nitrgeno as como la diferencia de abundancias entre los dos tipos de tratamientos analizados, siendo superior en los de eliminacin de nutrientes. Esta asociacin no coincide con el resto de especies correspondientes 82

a este gnero, que se asocian a fangos de calidad deficiente, a la presencia de vertidos industriales y a bajas concentraciones de oxgeno disuelto (Isac et. al. 2005., y Sangesa et. al., 2007).
-

Han predominado las muestras con una diversidad de ciliados entre moderada y elevada. Adems, se ha observado que la mayora de muestras con diversidades entre 1 a 3 corresponden a rendimientos de eliminacin de DBO5 elevados.

El grupo de metazoos ms abundante y frecuente en las muestras observadas ha sido el de los rotferos, seguido por los nematodos. Los rotferos han presentado correlaciones positivas con los rendimientos de eliminacin de DBO5 y de nitrgeno, por lo tanto, se puede decir que estn asociados a sistemas con elevados rendimientos de eliminacin de materia orgnica y con presencia de nitrificacin y, por lo tanto, con una buena calidad del efluente.

Casi la mitad de las muestras han sido susceptibles de tener problemas de bulking filamentoso y/o espumas. Los principales microorganismos filamentosos que han generado problemas de esponjamiento del fango han sido Microthrix parvicella, el Tipo 1851 y el Tipo 021N.

La gran mayora de muestras que eran susceptibles de tener problemas de espumas, eran debidas al grupo de los actinomicetos nocardioformes, puesto que les hace falta una abundancia menor que a otros filamentos por poder producir espumas y han sido el filamento ms frecuente.

A partir de los datos observados, se ha establecido que el Tipo 0092 podra producir espumas a partir de abundancias de 150-200 m/ml. Se ha observado que todava aunque la mitad de las muestras presentaron una abundancia superior a 200 m/ml de filamentos totales, abundancia a partir de la cual se considera susceptible de producirse bulking filamentoso (Salvad, 1990), y una abundancia de actinomicetos nocardioformes superior a 50 m/ml, abundancia susceptible de generar espumas (Salvad, 1990b), la gran mayora cumplan con los valores lmites establecidos por la Directiva 91/271/CEE.

De las tres muestras que no cumplan con los valores establecidos por la Directiva europea, se pudo comprobar, gracias al anlisis de la estructura del fango, que eran debidas a que el fango presentaba problemas de pin-point floc.

83

6. BIBLIOGRAFA
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ANEJO I
Clasificacin de los microorganismos

Dominio Eucariota
Reino Protista (Goldfuss, 1818) R. Owen, 1858 Flagelados pequeos (<20 m) Filum Euglenozoa Cavalier-Smith, 1981 Clase Kinetoplastida (Honigberg, 1963) Margulis, 1974 Orden Kinetoplastea Honigberg, 1963 Suborden Bodonida Hollande, 1952 Familia Bodonidae Btschli, 1887 Filum Neomonada Cavalier-Smith, 1997 Classe Choanoflagellata Kent, 1880 Filum Opalozoa Cavalier-Smith, 1991 Orden Bicosoecales Grass, 1926 Familia Bicosoecaceae Stein, 1878 Bicosoeca Filum Metamonada Cavalier-Smith, 1981 Clase Trepomonadea Cavalier-Smith, 1993 Orden Distomatida Klebs, 1892 Familia Hexamitidae Hexamita Dujardin, 1838 Trepomonas Dujardin, 1841 Flagelados grandes (>20 m) Filum Euglenozoa Cavalier-Smith, 1981 Clase Euglenoidea Btschli, 1884 Orden Peranemida Btschli, 1884 Peranema sp Dujardin, 1841 Entosiphon sp Stein, 1878 Orden Petalomonadida Cavalier-Smith, 1993 Petalomonas Stein, 1859

Gimnamebas Gimnamebas de tamao pequeo (< 20 m) Gimnamebas de tamao mediano (20-50 m) Gimnamebas de tamao grande (>50 m) Tescamebas Filum Cercozoa Cavalier-Smith, 1998 Clase Imbricatea Cavalier-Smith i Chao, 2003 Orden Euglyphida Copeland, 1956 Familia Euglyphidae Wallich, 1864 Euglypha Dujardin, 1841 Familia Trinematidae Hoogenraad & de Groot, 1940 Trinema Dujardin, 1841 Filum Amoebozoa Corlis, 1984 Clase Tubulinea Smirnov et al., 2005 Orden Arcellinida (Kent, 1880) Familia Arcellidae Ehrenberg, 1843 Arcella Ehrenberg, 1832

Familia Centropyxidae Jung, 1942 Centropyxis Stein, 1857 Familia Cryptodifflugiidae Jung, 1942 Cryptodifflugia Penard, 1890

Filum Ciliophora Doflein, 1901. Subfilum Postciliodesmatophora Gerassimova i Seravin, 1976 Clase Heterotrichea Stein, 1859 Orden Heterotrichida Stein, 1859 Familia Stentoridae Carus, 1863 Stentor muelleri Ehrenberg, 1831 Familia Blepharismidae Jankowski en Small y Lynn, 1985 Blepharisma undulans Stein, 1868 Subfilum Intramacronucleata Lynn, 1996 Clase Spirotrichea Btschlii, 1889 Subclase Hypotrichia Stein, 1859 Orden Euplotida Ehrenberg, 1838 Familia Euplotidae Small i Lynn, 1985 Euplotes affinis, Dujardin, 1842 Familia Aspidiscidae Ehrenberg, 1838 Aspidisca cicada (Mller, 1786) Claparde y Lachmann, 1958 Aspidisca lynceus (Mller, 1773) Ehrenberg, 1830 Aspidisca lynceus var. turrita (Ehrenberg, 1831) Claparde i Lachmann, 1958 Subclase Stichotrichia Small i Lynn, 1985 Orden Stichotrichida Faur-Fremiet, 1961 Familia Spirofilidae Von Gelei, 1929 Chaetospira muelleri Lachmann, 1856 Clase Litostomatea Small i Lynn, 1981 Subclase Haptoria Corliss, 1974 Orden Haptorida Corliss, 1974 Familia Spathiidae Kahl in Doflein & Reichenow, 1929 Spathidium sp. Dujardin, 1841 Orden Pleurostomatida Schewiakoff, 1896 Familia Litonotidae Kent, 1882 Litonotus lamella (Ehrenberg) Schewiakoff, 1896 Litonotus varsaviensis (Wrzesniomski, 1866) Acineria uncinata Tucolesco, 1962 Clase Phyllopharyngea Puytorac et al., 1974 Subclase Phyllopharyngia Puytorac et al., 1974 Orden Chlamydodontina Deroux, 1976 Familia Chilodonellidae Deroux, 1970 Chilodonella uncinata (Ehrenberg, 1838) Strand, 1928 Thigmogaster oppositevacuolatus Augustin y Foissner, 1989 Thigmogaster potamophilus Pseudochilodonopsis fluviatilis Foissner, 1988 Pseduchilodonopsis piscatoris (Blochmann, 1895) Foissner, 1979 Trithigmostoma cucullulus (Mller, 1786) Jankoswki, 1967 Trithigmostoma steini (Blochmann, 1895) Foissner, 1987

Orden Disteriida Deroux, 1976 Familia Diisteridae Claparde i Lachmann, 1858 Trochilia minuta (ROUX, 1899) Kahl, 1931 Subclase Suctoria Claparde i Lachmann, 1858 Orden Exogenida Collin, 1912 Familia Podophrydae Haeckel, 1866 Podophrya sp. Ehrenberg, 1838 Familia Metacinetidae Btschli, 1889 Metacineta mystacina (Ehrenberg, 1831) Btschli, 1889 Orden Endogenida Collin, 1912 Familia Acinetidae Stein, 1859 Acineta tuberosa (Pallas, 1766) Ehrenberg, 1833 Familia Tokophrydae Jankowski in Small & Lynn, 1985 Tokophrya infusionum (Stein, 1859), Betschli, 1889 Tokophrya lemnarum (Stein, 1859), Entz, 1903 Tokophrya quadripartita (Claparde y Lachmann, Betschli, 1889 Familia Endosphaeridae Jankowski in Corliss, 1979 Endosphaera sp. Engelmann, 1876 Clase Nassophorea Small i Lynn, 1981 Orden Microthoracida Jankowski, 1967 Familia Microthoracidae Wrzesniowski, 1870 Microthorax pusillus Engelmann, 1861 Microthorax costatus Kahl, 1926 Drepanomonas revoluta Penard, 1922 Trochiliopsis opaca Penard, 1922 Clase Prostomatea Schewiakoff, 1896 Orden Prorodontina Corliss, 1974 Familia Plagiocampidae Kahl, 1926 Plagiocampa rouxi Kahl, 1926 Familia Colepidae Ehrenberg, 1838 Coleps hirtus (Mller, 1786) Nitzsch, 1827 Familia Holophrydae Perty, 1852 Holophrya discolor Ehrenberg, 1833 Orden Prostomatida Schewiakoff, 1896 Familia Metacystidae Kahl, 1926 Metacystis sp. Cohn, 1866 Clase Olygohymenophorea Puytorac et al., 1974 Subclase Peniculia Corliss, 1956 (Faur-Fremiet) Orden Peniculida Faur-Fremiet in Corliss, 1956 Familia Parameciidae Dujardin, 1840 Paramecium putrinum Subclase Scuticociliatia Small, 1967 Orden Philasterida Small, 1967 Familia Cinetochilidae Perty, 1852 Cinetochilum margaritaceum Perty, 1852 Familia Uronometidae Thompson, 1964 Uronema nigricans (Mller, 1786) Florentin, 1901 Orden Pleurostomatida Schewiakoff, 1896 Familia Calyptotrichidae Small i Lynn, 1985

1859)

Calyptotricha lanuginosa Penard, 1922 Familia Cycliidae Ehrenberg, 1838 Cyclidium glaucoma Mller, 1773 Cyclidium heptatrichum Schewiakoff, 1893 Subclase Hymenostomatia Delage i Hrouard, 1896 Orden Hymenostomaida Delage i Hrouard, 1896 Familia Tetrahymenidae Corliss, 1952 Colpidium campylum (=Dexiostoma campylum) (Stokes, 1886) Jankowski, 1967 Tetrahymena pyriformis (Ehrenberg, 1830) Lwoff, 1947 Subclase Peritrichia Steein, 1859 Orden Sessilida Kahl, 1933 Familia Vorticellidae Ehrenberg, 1838 Vorticella aquadulcis-complex Foissner et al., 1992 Vorticella campanula-complex Foissner et al., 1992 Vorticella convallaria-complex Foissner et al., 1992 Vorticella infusionum-complex Foissner et al., 1992 Vorticella microstoma-complex Foissner et al., 1992 Vorticella octava-complex Foissner et al., 1992 Carchesium polypinum Linnaeus, 1758 Familia Operculariidae Faur-Fremiet in Corliss, 1979 Opercularia articulata Ehrenberg, 1838 Opercularia asymetrica Familia Epistylidae Kahl, 1933 Epistylis entzii Stiller, 1935 Epistylis plicatilis Ehrenberg, 1838 Epistylis chrysemidis Bishop i Jahn, 1941 Epistylis coronata Nusch, 1970 Epistylis sp. Ehrenberg, 1830 Familia Vaginicolidae de Fromentel, 1874 Thuricola kellicottiana (Stokes, 1887) Kahl, 1935 Cothurnia annulata Stokes, 1885 Reino Animal Filum Nematoda (Rudolph, 1808) Lankester, 1877 Filum Rotifera Cuvier, 1791 Filum Gastrotricha Metschnikoff, 1864 Filum Tardigrada (Spallanzani, 1777) Ramazzotti, 1962

ANEJO II
Protocolos de las tinciones

Coloraciones vitales

La composicin del colorante verde de metil-actico es la siguiente: 0,5 g de verde de metileno 1 ml de cido actico glacial 100 ml de agua destilada Procedimiento: El procedimiento de esta coloracin consiste en depositar una gota de verde de metilactico al lado del cubreobjetos, que est encima de la muestra, i con un papel de filtro al otro lado del cubreobjetos se hace entrar el lquido entre el cubreobjetos y el portaobjetos. Tambin se puede realizar aadiendo una gota de verde de metil-actico directamente sobre la muestra en el portaobjetos y cubrirla posteriormente con el cubreobjetos. La muestra teida se observa en el microscopio con camp claro y a 400x aumentos. Tincin de Gram (Jenkins et al. 1993)

Reactivos: Solucin I: A: 2 g de cristal violeta + 20 ml de etanol 95% B: 0,8 g de oxalato de amonio + 80 ml de oxalato amnico Las soluciones A y B se tienen que mezclar en el momento de su utilizacin y se han de tirar a las 24 horas de su preparacin. Solucin II: 1 g de iodo 2 g de ioduro potsico 300 ml de agua destilada Solucin III: 10 ml de safranina al 2,5% en etanol 95% 100 ml de agua destilada Procedimiento: Se extienden una o dos gotas de la muestra en un portaobjetos y se dejan secar al aire. Un vez seca la muestra se tie con la solucin I durante un minuto. Se lava con agua destilada y despus se tie con la solucin II durante un minuto. Se lava de nuevo con agua destilada y seguidamente se decolora con etanol 95% gota a gota durante 25 segundos. Seguidamente se lava con agua destilada y se aade la solucin III, dejndola actuar

durante un minuto. Finalmente se lava con agua destilada y se deja secar al aire o suavemente con un papel de filtro. La muestra teida se observa al microscopio con campo claro, aceite de inmersin directamente sobre la muestra teida y a 1000x aumentos. Los filamentos Gram positivos se observaran de color azul y los Gram negativos de color rojo-rosa. Tincin Neisser (Jenkins et al. 1993)

Reactivos: Solucin I: A: 0,1 g de azul de metileno + 5 ml de cido actico glacial + 5 ml de etanol 95% + 100 ml de agua destilada B: 3,3 ml de cristal violeta 10% en etanol 95% + 6,7 ml de etanol 95% + 100 ml de agua destilada Se mezclan dos partes de la solucin A con una parte de la solucin B. Esta solucin tiene que prepararse mensualmente. Solucin II: 33,3 ml de Bismark Brown (1 g de Bismark Brown en 100 ml de agua destilada). 66,7 ml de agua destilada. Procedimiento: Se extienden una o dos gotas de la muestra en un portaobjetos y se dejan secar al aire. Un vez seca la muestra se tie con la solucin I durante 30 segundos. Se lava con agua destilada y despus se tie con la solucin II durante un minuto. Se lava de nuevo con agua destilada y se deja secar al aire o se seca suavemente con un papel de filtro. La muestra teida se observa al microscopio con campo claro, aceite de inmersin directamente sobre la muestra teida y a 1000x aumentos. Los filamentos Neisser positivos se observaran de color azul-lila y los Neisser negativos de color marrn o amarillento. Si el tricoma es marrn y presenta grnulos de color lila, el filamento ser Neisser negativo con presencia de grnulos Neisser positivos. Tincin de poli--hidroxibutirato (PHB) (Jenkins et al. 1993)

Reactivos: Solucin I: 0.33 % (p/v) de Negro de Sudan B (IV) en etanol al 60%. Solucin II:

Safranina al 0,5% en solucin acuosa. Se extienden una o dos gotas de la muestra en un portaobjetos y se dejan secar al aire. Un vez seca la muestra se tie con la solucin I durante 10 minutos, aadiendo ms colorante si este se evapora. Se lava con agua destilada y despus se tie con la solucin II durante unos 15 segundos. Se lava de nuevo con agua destilada y se deja secar al aire o con papel de filtro. La muestra teida se observa al microscopio con campo claro, aceite de inmersin directamente sobre la muestra teida y a 1000x aumentos. Los grnulos de PHB se observan de color negro-azul y el citoplasma celular de color rosa claro o sin teir. Tincin de vainas (Jenkins et al. 1993)

Reactivos: 0,1 g de cristal violeta en 100 ml de agua destilada. Procedimiento: Se mezcla una gota de muestra de fango activo con una gota de la solucin de cristal de violeta en un portaobjetos. A continuacin se coloca un cubreobjetos y se examina al microscopio en campo claro a 1000x aumentos y con aceite de inmersin. Las clulas sin vaina se tien intensamente de color violeta, mientras que las vainas aparecen de color rosa claro. Test de azufre (Jenkins et al. 1993)

Reactivos: 1 g de tiosulfato sdico (Na2S2O3) en 100 ml de agua destilada. Procedimiento: Se deja decantar la muestra de fangos activos y se traspasan 20 ml del sobrenadante a un matraz Erlenmeyer de 100 ml. Se aaden entre 1 o 2 ml de fango activo al matraz. A continuacin se aade 1 ml de la solucin de tiosulfato sdico y se deja agitando durante 12 horas a temperatura ambiente y con homogenizacin constante de la mezcla. Transcurridas las 12 horas se coge una gota de la muestra y se observa al microscopio, bajo un cubreobjetos, en contraste de fases a 1000x aumentos y con aceite de inmersin. Si el resultado es positivo se observan grnulos de azufre, es decir, grnulos intracelulares muy brillantes que hacen iridiscencias amarillentas-rosadas-azulosas.

ANEJO III
Resultados de los anlisis

Tabla con los resultados de las abundancias medias en m/ml (X), desviaciones standards (Desv. std.) i frecuencias de aparicin de los microorganismos filamentosos para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes y convencional, y para el conjunto total de muestras.

Tratamiento de eliminacin de nutrientes X Desv. std % Microorganismos filamentosos Actinomicetos nocardioformes 62,29 82,92 94,12 0,23 0,83 9,80 Beggiatoa Hongos 0,59 2,82 5,88 7,04 24,35 47,06 Haliscomenobacter hydrossis 80,62 163,47 52,94 Microthrix parvicella Nostocoida limicola II 0,94 3,54 13,73 Nostocoida limicola III 0,50 1,22 23,53 1,20 4,11 9,80 Sphaerotilus natans 0,64 4,54 1,96 Streptococcus Thiothrix I 0,21 0,89 5,88 Thiothrix II 0,96 3,80 11,76 Tipo 0041 14,14 26,31 76,47 Tipo 0092 42,28 95,73 45,10 Tipo 021N 41,26 103,19 47,06 Tipo 0581 2,86 11,64 5,88 Tipo 0675 7,37 12,06 50,98 Tipo 0803 0,09 0,53 3,92 Tipo 0914 0,09 0,67 1,96 Tipo 0961 0,4 1,41 9,80 Tipo 1701 0,16 0,75 5,88 Tipo 1851 65,23 99,81 70,59 Tipo 1852 0,09 0,49 3,92 Tipo 1863 0,14 0,57 7,84

Tratamiento convencional X Desv. std % 41,41 71,18 85,45 0,31 1,03 12,73 0,60 2,66 7,27 2,81 4,30 49,09 80,40 236,94 43,64 1,69 8,19 14,55 0,17 0,65 7,27 1,85 6,38 16,36 0,17 0,94 3,64 0,02 0,16 1,82 0,28 1,95 3,64 4,48 6,87 67,27 3,48 20,05 7,27 52,39 83,48 81,82 0 0 0 3,87 10,29 40 0 0 0 0,03 0,24 1,82 13,52 41,17 30,91 0,16 0,87 5,45 50,37 88,42 83,64 0,31 1,70 5,45 0 0 0

X 51,46 0,27 0,59 4,84 80,50 1,33 0,33 1,54 0,40 0,11 0,61 9,13 22,15 47,03 1,38 5,55 0,05 0,06 7,21 0,16 57,52 0,20 0,07

Total Desv. std 77,39 0,94 2,72 17,22 203,95 6,37 0,98 5,40 3,21 0,63 2,99 19,43 70,36 93,20 8,16 11,26 0,37 0,50 30,27 0,81 93,92 1,27 0,40

% 89,62 11,32 6,60 48,11 48,11 14,15 15,09 13,21 2,83 3,77 7,55 71,70 25,47 65,09 2,83 45,28 1,89 1,89 20,75 5,66 77,36 4,72 3,77

Tabla con los resultados de las abundancias medias en ind/ml (X), desviaciones standards (Desv. std.) i frecuencias de aparicin de las especies de protozoos flagelados para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes y convencional, y para el conjunto total de muestras.

Protozoos flagelados Flagelados < 20 m Flagelados < 20 m (bodnidos) Flagelados < 20 m (coanoflagelados) Flagelados < 20 m (coloniales) Flagelados < 20 m (Bicosoeca) Flagelados < 20 m (Hexamita) Flagelados < 20 m (Trepomonas) Flagelados > 20 m (Entosiphon) Flagelados > 20 m (Peranema) Flagelados > 20 m (Petalomonas)

Tratamiento de eliminacin de nutrientes Tratamiento convencional Total X Desv. std % X Desv. std % X Desv. std % 118331,24 161052,99 82,35 122811,71 234782,08 90,91 120656,01 201755,54 86,79 31603,65 76964,82 21,57 56033,63 118479,82 38,18 44167,64 100757,65 30,19 2420,73 9080,74 13,73 7482,18 22672,88 21,82 5046,95 17609,55 17,92 0 0 0 4489,31 33293,61 1,82 2329,36 23982,21 0,94 537,94 2312,96 5,88 7111,71 52714,39 3,64 3948,86 37980,77 4,72 134,49 960,45 1,96 0 0 0 64,71 666,20 0,94 2824,16 19212,86 3,92 249,42 1295,79 3,64 1488,21 13353,37 3,77 103,53 289,46 23,53 71,27 333,66 10,91 86,79 312,12 16,98 39,22 110,70 31,37 24 54,21 23,64 31,32 86,06 27,36 22,75 86,63 11,76 0 0 0 10,94 60,86 5,66

Tabla con los resultados de las abundancias medias en ind/ml (X), desviaciones standards (Desv. std.) i frecuencias de aparicin de las especies de protozoos ameboideos para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes y convencional, y para el conjunto total de muestras.

Tratamiento de eliminacin de nutrientes Tratamiento convencional X Desv. std % X Desv. std % X Protozoos ameboideos Gimnamebas < 20 m 65944,94 205044,37 72,55 38044,80 80283,45 74,55 51468,45 Gimnamebas entre 20 i 50 m 998,43 2447,07 80,39 872,73 1573,13 78,18 933,21 Gimnamebas > 20 m 185,10 487,67 52,94 434,91 735,88 63,64 314,72 Tecamebas < 20 m (Cryptodifflugia) 1434,49 4288,35 11,76 623,53 2387,90 7,27 1013,71 Tecamebas > 20 m (Arcella) 240,00 1032,47 33,33 248,73 784,85 34,55 244,53 Tecamebas > 20 m (Centropyxis) 3,14 13,49 5,88 33,45 221,21 7,27 18,87 Tecamebas > 20 m (Euglypha) 344,31 487,28 70,59 158,55 343,83 43,64 247,92 Tecamebas > 20 m (Trinema) 6,27 28,14 5,88 16 88,64 7,27 11,32

Total Desv. std 153399,94 2031,80 638,33 3443,16 907,98 159,64 427,28 66,65

% 73,58 79,25 58,49 9,43 33,96 6,60 56,60 6,60

Tabla con los resultados de las abundancias medias en ind/ml (X), desviaciones standards (Desv. std.) i frecuencias de aparicin de las especies de protozoos ciliados para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes y convencional, y para el conjunto total de muestras. Tratamiento de eliminacin de nutrientes X Desv. std. % 614,12 1197,78 68,63 23,53 48,12 29,41 1792,94 2939,35 76,47 297,25 1202,48 25,49 80 460,89 5,88 0 0 0 23,53 73,40 15,69 550,12 1224,19 43,14 0 0 0 1,57 11,20 1,96 65,10 341,10 7,84 63,53 172,36 23,53 2,35 12,42 3,92 12,55 55,71 7,84 4,71 33,61 1,96 0,78 5,60 1,96 3,92 22,99 3,92 4,71 23,52 5,88 8,63 61,61 1,96 75,29 213,11 17,65 404,71 1826,15 19,61 82,35 284,69 11,76 21,18 135,14 3,92 151,37 357,62 33,33 3,14 15,68 3,92 76,08 371,05 13,73 2,35 9,51 5,88 Tratamiento convencional X Desv. std. % 256,73 369,80 63,64 24,73 56,83 21,82 2258,18 5658,21 67,27 290,18 966,34 21,82 102,55 755,02 3,64 1,45 10,79 1,82 18,91 47,98 18,18 524,36 1221,77 40 1,45 7,56 3,64 0,73 5,39 1,82 24,73 79,81 16,36 37,09 264,31 3,64 0 0 0 0,73 5,39 1,82 0 0 0 0 0 0 16,73 100,28 3,64 0,73 5,39 1,82 59,82 210,93 9,09 121,45 529,15 12,73 194,91 772,95 10,91 295,09 717,79 27,27 334,55 1089,87 21,82 187,64 642,12 32,73 2,18 9,17 5,45 81,45 263,53 29,09 9,45 25,49 14,55 Total Desv. std. 886,40 52,57 4542,44 1081,12 628,05 7,77 61,28 1217,17 5,47 8,65 243,09 224,16 8,65 39,09 23,31 3,89 73,92 16,81 159,21 407,63 1380,71 561,22 802,70 522,76 12,67 318,26 19,75

Protozoos ciliados Acineria uncinata Acineta tuberosa Aspidisca cicada Aspidisca lynceus Aspidisca lynceus var. turrita Blepharisma undulans Calyptotricha lanuginosa Carchesium polypinum Chaetospira muelleri Chilodonella uncinata Cinetochilum margaritaceum Coleps hirtus Cothurnia annulata Cyclidium glaucoma Cyclidium heptatrichum Dexiostoma campylum Drepanomonas revoluta Endosphaera sp Epistylis chrysemydis Epistylis coronata Epistylis entzii Epistylis plicatilis Epistylis sp Euplotes affinis Holophrya discolor Litonotus lamella Litonotus varsaviensis

X 428,68 24,15 2034,34 293,58 91,70 0,75 21,13 536,75 0,75 1,13 44,15 49,81 1,13 6,42 2,26 0,38 10,57 2,64 35,19 99,25 295,85 192,74 183,77 170,19 2,64 78,87 6,04

% 66,04 25,47 71,70 23,58 4,72 0,94 16,98 41,51 1,89 1,89 12,26 13,21 1,89 4,72 0,94 0,94 3,77 3,77 5,66 15,09 15,09 19,81 13,21 33,02 4,72 21,70 10,38

continuacin Metacineta mystacina Metacystis sp Microthorax costatus Microthorax pusillus Opercularia articulata Opercularia asymetrica Paramecium putrinum Plagiocampa rouxi Podophrya sp Pseudochilodonopsis fluviatilis Pseudochilodonopsis piscatoris Spathidium sp Stentor sp Suctor Thigmogaster oppositevacuolatus Thigmogaster potamophilus Thuricola kellicottiana Tokophrya infusionum Tokophrya lemnarum Tokophrya quadripartita Trithigmostoma cucullulus Trithigmostoma steini Trochilia minuta Trochiliopsis opaca Uronema nigricans Vorticella aquadulcis Vorticella campanula Vorticella convallaria Vorticella infusionum Vorticella microstoma Vorticella octava 0 0,78 0 64,31 121,57 0,78 5,49 58,04 2,35 46,27 3,92 0 1,57 2,35 413,33 30,59 14,90 2,35 3,92 8,63 4,71 10,20 565,49 0 0,78 872,94 0 624,39 0 3,14 8,63 0 5,60 0 365,56 433,03 5,60 39,21 174,41 9,51 147,38 28,01 0 11,20 12,42 1335,20 218,44 55,40 9,51 12,01 25,69 33,61 47,22 1531,72 0 5,60 1181,85 0 1446,10 0 15,68 56,18 0 1,96 0 13,73 21,57 1,96 1,96 27,45 5,88 25,49 1,96 0 1,96 3,92 49,02 1,96 7,84 5,88 9,80 11,76 1,96 5,88 35,29 0 1,96 74,51 0 58,82 0 3,92 3,92 7,27 2,18 2,91 0 474,18 8,73 0 93,82 1,45 50,91 0 3,63 0 0 110,55 2,91 172,36 8,73 4,36 7,27 98,91 33,45 207,27 7,27 34,91 1243,64 1,45 393,45 18,91 0 2,91 25,64 16,18 15,11 0 2650,56 41,95 0 346,94 7,56 110,07 0 19,27 0 0 475,28 21,57 418,74 33,28 18,33 21,90 669,81 171,06 579,10 44,28 132,68 2317,63 10,79 966,61 114,40 0 16,96 9,09 1,82 3,64 0 7,27 5,45 0 20 3,64 29,09 0 3,63 0 0 23,64 1,82 23,64 9,09 7,27 12,73 7,27 12,73 27,27 3,64 20 74,55 1,82 47,27 5,45 0 3,64 3,77 1,51 1,51 30,94 304,53 4,91 2,64 76,60 1,89 48,68 1,89 1,89 0,75 1,13 256,23 16,23 96,60 5,66 4,15 7,92 53,58 22,26 379,62 3,77 18,49 1065,28 0,75 504,57 9,81 1,51 5,66 18,74 12,25 10,94 254,32 1932,28 30,59 27,20 276,97 8,52 128,76 19,43 13,95 7,77 8,65 994,09 152,17 312,87 24,96 15,55 23,69 483,22 127,46 1149,80 31,97 96,75 1860,70 7,77 1220,56 82,59 10,94 40,73 4,72 1,89 1,89 6,60 14,15 3,77 0,94 23,58 4,72 27,36 0,94 1,89 0,94 1,89 35,85 1,89 16,04 7,55 8,49 12,26 4,72 9,43 31,13 1,89 11,32 74,53 0,94 52,83 2,83 1,89 3,77

Tabla con los resultados de las abundancias medias en ind/ml (X), desviaciones standards (Desv. std.) i frecuencias de aparicin de los grupos de metazoos para las depuradoras con tratamiento de eliminacin de nutrientes y convencional, y para el conjunto total de muestras.

Metazoos Gastrotricos Nematodos Rotferos Tardgrados

Tratamiento de eliminacin de nutrientes X Desv. std % 0 0 0 18,04 33,29 29,41 225,49 389,77 68,63 3,92 20,01 3,92

Tratamiento convencional X Desv. std % 6,55 48,54 1,82 11,64 21,32 25,45 141,09 231,95 65,45 21,09 79,20 12,73

X 3,40 14,72 181,70 12,83

Total Desv. std 34,97 27,78 319,07 59,08

% 0,94 27,36 66,98 8,49

ANEJO IV
Fotografas de los microorganismos

Listado de las ilustraciones Fotografa 1. Microorganismo filamentoso correspondiente a Microthrix parvicella, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 2. Microorganismo filamentoso correspondiente al grup de los actinomicetos nocardioformes, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 3. Microorganismo filamentoso correspondiente al Tipo 021N, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 4. Microorganismo filamentoso correspondiente al Tipo 1851, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 5. Flagelado de tamao pequeo del grupo de los Bodnidos, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 6. Flagelado de tamao pequeo del grupo de los coanoflagelados, (contraste de fases, 1000x). Fotografa 7. Tecameba de tamao grande correspondiente al gnero Euglypha, (contraste de fases, 400x). Fotografa 8. Protozoo ciliado correspondiente a la especie Acineria uncinata, (contraste de fases, 400x). Fotografa 9. Protozoo ciliado correspondiente a la especie Aspidisca cicada, (contraste de fases, 400x). Fotografa 10. Protozoo ciliado correspondiente a la especie Vorticella aquadulcis, (contraste de fases, 400x). Fotografa 11. Protozoo ciliado correspondiente a la especie Vorticella convallaria, (contraste de fases, 400x). Fotografa 12. Protozoo ciliado correspondiente a la especie Opercularia articulata, (campo claro, 400x). Fotografa 13. Metazoo del grupo de los rotferos del gnero Lecane, (contraste de fases, 400x).

Fotografa 14. Metazoo del grupo de los rotferos del gnero Philodina, (contraste de fases, 400x).

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