UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE QUMICA, INGENIERIA QUMICA E INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE QUIMICA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE QUIMICA ANALITICA

LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL II CROMATOGRAFIA DE GASES Alumno: Fabio Espichn Prof.: Neptal Ale Borja. Horario: viernes, 8-2pm

Ciudad universitaria 2008

FUNDAMENTO DEL METODO DE ANALISIS Cromatografa de gases.En cromatografa de gases (GC), la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de un gas inerte. A diferencia de la mayora de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica, funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases: la cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC). La cromatografa gas-lquido tiene gran aplicacin en todos los campos de la ciencia y su denominacin se abrevia normalmente como cromatografa de gases (GC), a pesar de que este hecho deja a un lado la cromatografa gas-slido como si no se tratase de un verdadero tipo de cromatografa. En la cromatografa gas-slido se produce la retencin de los analitos en una fase estacionaria slida como consecuencia de la adsorcin fsica. La cromatografa gas-slido ha tenido una aplicacin limitada debido a la retencin semipermanente de las molculas activas o polares y a la obtencin de picos de elucin con colas muy significativas. (Como consecuencia del carcter no lineal del proceso de adsorcin), de modo que esta tcnica no ha encontrado una gran aplicacin excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo peso molecular. La cromatografa gas-lquido se basa en la distribucin del analito entre una fase mvil gaseosa y una fase lquida inmovilizada sobre la superficie de un slido inerte. El concepto de cromatografa gas-lquido fue enunciado por primera vez, en 1941, por Martin y Synge, quienes fueron tambin los responsables del desarrollo de la cromatografa de reparto lquido-lquido. Tuvo que pasar, sin embargo, ms de una dcada antes de que la importancia de la cromatografa gas-lquido se demostrara experimentalmente'. Tres aos ms tarde, en 1955, apareci en el mercado el primer aparato comercial para cromatografa gas-lquido. Desde entonces, las aplicaciones de esta tcnica han crecido de una forma espectacular. INSTRUMENTOS PARA LA CROMATOGRAFA GAS-LQUIDO
Actualmente, ms de 30 fabricantes de instrumentos ofrecen unos 130 modelos distintos de equipos para cromatografa de gases, con un coste que vara desde unos 1.500 hasta 40.000 dlares. En las ltimas dos dcadas, los instrumentos de cromatografa de gases que han aparecido en el mercado presentan muchos cambios y mejoras. En los aos setenta, se hicieron habituales los integradores electrnicos y los equipos de procesado de datos basados en un ordenador. Los aos ochenta introdujeron la utilizacin de los ordenadores para el control automtico de la mayora de los parmetros instrumentales, tales como la temperatura de la columna, caudales y la inyeccin de la muestra; el desarrollo de instrumentos de un muy alto rendimiento a un coste moderado; y tal vez lo ms importante, el desarrollo de las columnas abiertas que son capaces de separar una multitud de analitos en un tiempo relativamente corto. Los componentes bsicos de un instrumento para la cromatografa de gases se muestran en la Figura 1. A continuacin se da una descripcin de cada uno de los componentes. Obsrvese que en la figura, el caudal de gas se divide antes de entrar en la columna. Este tipo de disposicin se utiliza cuando el detector empleado mide un cambio en las propiedades de la corriente de gas por la presencia de las molculas de analito. Normalmente no se utilizan divisores de caudal con otros tipos de detectores.

Figura 1. Representacin esquemtica de un cromatgrafo de gases

Gas portador Entre los gases portadores, que deben ser qumicamente inertes, se encuentran el helio, el nitrgeno y el hidrgeno. Como se indicar posteriormente, la eleccin de los gases est con frecuencia determinada por el tipo de detector que se utiliza. Con el suministro del gas se encuentran asociados los reguladores de presin, manmetros y medidores de caudal. Adems, el sistema de gas portador contiene a menudo un tamiz molecular para eliminar el agua u otras impurezas. Los caudales se controlan normalmente mediante un regulador de presin de dos niveles colocado en el cilindro de gas, y algn tipo de regulador de presin o regulador de flujo instalado en el cromatgrafo. El intervalo de presiones de entrada normalmente oscila entre 10 y 50 psi (por encima de la presin del entorno), lo que conduce a caudales de 25 a 150 mL/1min con las columnas rellenas, y de 1 a 25 mL/1min en las columnas abiertas (columnas capilares). Generalmente, se supone que los caudales sern constantes si la presin de entrada se mantiene constante. Los caudales pueden determinarse mediante un rotmetro situado en la cabeza de la columna; este dispositivo, sin embargo, no es tan exacto como un simple medidor de pompas de jabn, que tal como se muestra en la Figura 1, se coloca al final de la columna. Cuando se aprieta una pera de goma que contiene una disolucin acuosa de jabn o detergente, se interpone una pelcula de jabn en el camino del gas, a continuacin se mide el tiempo necesario para que esta pelcula se desplace entre dos divisiones de la bureta, lo que permite calcular el caudal volumtrico. Muchos cromatgrafos de gases modernos que estn comercializados van equipados con medidores electrnicos del caudal, que estn controlados por ordenador para mantener el caudal a nivel deseado. Sistema de inyeccin de muestra

La eficacia de la columna requiere que la muestra sea de un tamao adecuado y que sea introducida como un tapn de vapor; la inyeccin lenta de muestras demasiado grandes provoca un ensanchamiento de las bandas y una pobre resolucin. El mtodo ms comn de inyeccin de muestra implica el uso de una microjeringa para inyectar una muestra lquida o gaseosa a travs de un diafragma o septum de goma de silicona, en una cmara de vaporizacin instantnea situada en la cabeza de la columna (la cmara de muestra normalmente est unos 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil de la muestra) Detectores de ionizacin de llama FID El detector de ionizacin de llama (FID) es el detector ms extensamente utilizado, y por lo general, uno de los ms aplicables en cromatografa de gases. En un quemador tal como el que se muestra en la Figura 2, el efluente de la columna se mezcla con hidrgeno y con aire para luego encenderse elctricamente. La mayora de los compuestos orgnicos, cuando se pirolizan a la temperatura de una llama de hidrgeno/l aire, producen iones y electrones que pueden conducir la electricidad a travs de la llama. Cuando se aplica una diferencia de potencial de unos pocos cientos de voltios entre el extremo del quemador y un electrodo colector situado por encima de la llama, la corriente que resulta ( 10-12 A) se dirige para su medida hacia un amplificador operacional de alta impedancia.

Figura 2. Detector de Ionizacin de llama caracterstico La ionizacin en la llama de los compuestos que contienen carbono no es un proceso bien establecido, aunque se observa que el nmero de iones que se produce es

relativamente proporcional al nmero de tomos de carbono reducidos en la llama. El detector de ionizacin de llama responde al nmero de tomos de carbono que entra en el detector por unidad de tiempo, por ello, es ms un detector sensible a la masa, que un sistema sensible a la concentracin. Grupos funcionales, tales como carbonilo, alcohol, halgeno y amina, originan en la llama pocos iones o prcticamente ninguno. Adems, el detector es insensible a los gases no combustibles como H2O, CO2, SO2 y NOx. Estas propiedades hacen del detector de ionizacin de llama uno de los detectores generales ms utilizado para el anlisis de la mayora de compuestos orgnicos, incluyendo aquellos que estn contaminados con agua y con xidos de nitrgeno y de azufre. La insensibilidad del detector de ionizacin de llama hacia el agua le hace particularmente til para la deteccin de contaminantes en muestras naturales de agua. El detector de ionizacin de llama posee una elevada sensibilidad (~ 10-13 g/s), un gran intervalo de respuesta lineal (~ l0-7), y un bajo ruido. Por lo general, es resistente y fcil de utilizar. Una desventaja del detector de ionizacin de llama es que se trata de un detector destructivo de la muestra. Descripcin de la tcnica empleada. En la prctica se utilizo el Mtodo del patrn interno, este mtodo es til ya que se consigue mayor precisin debido a que se evitan las incertidumbres asociadas a la inyeccin de la muestra. En este procedimiento, se introduce en cada estndar y en la muestra una cantidad exactamente medida del patrn interno, y la relacin de las reas (o alturas) del analito y del patrn interno sirve como parmetro analtico. Para poder aplicar este mtodo satisfactoriamente, es necesario que el pico del patrn interno est bien separado de los picos de los dems componentes de la muestra (Rs > 1,25); por otra parte, el pico del patrn debera aparecer cerca del pico del analito. Con un patrn interno adecuado, se pueden conseguir, normalmente, precisiones relativas mejores que el 1 por 100. Descripcin del instrumento empleado

Perkin Elmer Autosystem XL

Inyector FID Caractersticas del equipo.El perkin elmer autosystem GC incluye: Un auto muestras Un simple inyector Detector dual Una vlvula de gas de muestra.

El auto muestreo tiene 82 posiciones para muestras, 4 posiciones de lavado, 4 posiciones de lavado y una posicin de prioridad. El inyector es un sistema split/split less sep up para columna capilar. Detector dual que incluye un FID y un TCD (HWD). El carrier (gas portador) es gas de N2 u otro gas inerte.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Materiales y reactivos Etanol Absoluto QP. Metiletilcetona QP. Fiolas volumtricas de 10mL Pipetas volumtricas de 1, 2, 4, 5, 6mL.

Procedimiento a) preparacin de patrones.2 + M m L 1 m E K E L t O 4H + M m L 1 m E K E L t O H6 + M m L 1 m E K E L t O H

Patrones:

b) preparacin de muestra.-

7 1

m m L

L M

M E

u K

e 7s t rm a L 1 m L

M M E

u K

e s t r a

0 M1

0 M2

Muestras:

Tabla 1 Valores experimentales para las reas y los tiempos de retencin de los patrones primera corrida Patrn 1 2 3 rea (mV/s) 468640,20 678562,62 1394289,87 Tiempo de retencin (min.) 1.843 1,857 1,854

Tabla 2 Valores experimentales para las reas y los tiempos de retencin de los patrones segunda corrida Patrn 1 2 3 rea (mV/s) 361136,840 1388172,77 2355522,72 Tiempo de retencin (min.) 1,871 1,857 1,888

Tabla 3 Valores experimentales para las reas y los tiempos de retencin del estndar MEK primera corrida Mek 1 2 3 rea (mV/s) 317946,720 234128,020 301360,590 Tiempo de retencin (min.) 2,929 2,951 2,962

Tabla 4 Valores experimentales para las reas y los tiempos de retencin del estndar MEK segunda corrida Mek 1 2 3 rea (mV/s) 258888,33 465367,11 532735,19 Tiempo de retencin (min.) 2,942 2,952 2,969

Tabla 5 reas y tiempos de retencin para las muestras primera corrida Muestras 1 2 MeK 1 2 rea 1330859,81 1139848,97 rea 639780,00 553322,46 tR 1,855 1,861 tR 2,952 2,963

Tabla 6 Valores para el ploteo de la curva de calibracin por el mtodo del estndar interno
AETOH ) PROMEDIO AMEK 1,434455 2,940609 4,524132 2,080184(M1) 2,060008(M2) 2,070096 (promedio) ( W ETOH ) WMEK 1,9624 3,9249 5,8875 ---------------------(

GRAFICOS DE LOS EXPERIMENTOS Grafico 1

Curva de Calibracin- Metodo del Estandar Interno- Equipo Cromatografo de Gases PerKin Elmer Autosystem XL
5

4.5

(Area ETOH/ Area MEK) = 0.7872(W ETOH/ W MEK) - 0.1234 R = 0.9998

2

3.5 Area ETOH/ Area MEK

2.5

1.5

0.5

0 0 1 2 3 4 5 6 7 W ETOH / W MEK

CROMATOGRAMAS DE LOS PATRONES Y MUESTRAS Patrn 1:

Patrn 2:

Patrn 3:

Muestra 1:

Muestra 2:

Ejemplos de Clculo Calculo de las relaciones de reas.1.-Para la solucin patrn N1. 1ra corrida:
( AETOH ) = 1,473958 (Tabla 1 y 3) AMEK

2da corrida:
( AETOH ) = 1,394952 (Tabla 2 y 4) AMEK

Promedio:
( AETOH ) promedio = 1,434455 , valor tabulado en la tabla 6 AMEK

2.-Calculo de la relacin de pesos: La densidad del etanol QP a 97,7% es: = 0,7876 g / mL A 100% ser:

100 % =

(0,7876 g / mL ) 100 = 0,7899 g / mL (ETOH) 99 ,7

Para la solucin patrn 1; 2mL de EtOH: WEtOH = (0,7899g/mL) 2 mL = 1,5798g La densidad del methyl ethyl Ketone es:
= 0,805 g / mL , W1mLMEK = 0,805 g

WEtOH
MEK

=1,9624 (Tabla 6)

3. - clculo del % en volumen de etanol en las muestras: De la ecuacin de la recta (grafico 1):
AEtOH W ) = 0,7872 ( EtOH ) 0,1234 AMEK W MEK

Para la muestra 1 tabla 6:

( AEtOH W ) = 2,080184 ( EtOH ) = 2,799 , AMEK WMEK
WE H t O = , 23 2 5

W EtOH = 2,799 0,805 ;

Para la muestra 2 tabla 6:

( AEtOH W ) = 2,070096 ( EtOH ) = 2,786 AMEK W MEK
WE H t O = , 23 2 4

W EtOH = 2,786 0,805 ;

4.- calculo de volmenes

2,253 g = 2,8527 mL g M1, VEtOH = 0,7899 mL 2,243 g = 2,8396 mL g M2, VEtOH = 0,7899 mL

5.- Calculo del % en Volumen de etanol en las muestras:

2,8527mL 100% = 40,75% 7mL 2,243mL 100% = 40,57% Muestra 2, %V = 7mL

Muestra 1, %V =

Promedio,

%V = ,6 % % 4 0 6 4 1

Discusin de resultados En el grafico 1 se observa una buena correspondencia de los puntos ploteados, es una recta perfecta con un coeficiente de correlacin R2 0,9998, lo que permite que los clculos sean mas precisos. De los cromatogramas obtenidos por GC de las soluciones patrones se observa una correspondencia proporcional sobre la intensidad de la seal con la concentracin. A mayor concentracin ser entonces mayor la intensidad de los picos y por tanto una mayor rea, esto se observa para el etanol. Tambin se observa que la muestra N 1 tiene una mayor intensidad y por tanto esta mas concentrada, pudiendo ser este resultado quizs, un error debido a fallas del operador. Los resultados obtenidos muestran que el % V de etanol calculado mediante el anlisis cromatogrfico es muy prximo al valor teorico de 40% en volumen, con un % de error del 2.5%. Siendo este resultado muy bueno y por tanto el mtodo empleado es aceptable para calcular la concentracin de analitos en muestras desconocidas. Bibliografa http://www.sciex.on.ca/. Douglas A. Skoog, F. James Holler, Timothy A. Nieman- Principios de Anlisis Instrumental. Quinta edicin, editorial Mc Graw Hill, Pg. 759.

Espectrofotometra Visible Determinacin del espectro del colorante del maz morado Tabla 1 Datos experimentales de la espectrofotometra visible del colorante del maz morada en solucin acuosa (nm) 400 410 420 430 440 450 460 470 471 472 473 474 475 480 490 500 510 520 Absorbancia (A) 0,262 0,287 0,301 0,323 0,341 0,352 0,358 0,360 0,359 0,358 0,357 0,356 0,353 0,344 0,326 0,324 0,323 0,321

Curva de Absorcin para el colorante de maz morado medio acuoso utilizando el equipo ESPECTROFOTOMETRO VIS SPECTRONIC 20 GENESYS
0.36
max

= 470nm

0.34

0.32

A
0.30 0.28 0.26 400 420 440 460 480 500 520

Tabla 2 Datos experimentales de la espectrofotometra visible del colorante de maz morado en solucin HCl ( nm) 400 410 420 430 440 450 460 470 475 480 485 490 495 500 505 510 515 520 525 530 540 550 Absorbancia A 0.251 0.27 0.284 0.293 0.311 0.319 0.328 0.351 0.365 0.379 0.4 0.412 0.429 0.445 0.47 0.475 0.491 0.497 0.498 0.486 0.438 0.39

Curva de Absorcin para el colorante de maz morado en HCl, utilizando el equipo ESPECTROFOTOMETRO VIS SPECTRONIC 20 GENESYS max =525nm
0.50

0.45

0.40

A
0.35 0.30 0.25 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560

Discusin de los Resultados Se observa de los grficos adjuntos que en solucin neutra (acuosa) presenta un max = 470 nm, mientras que en solucin cida el max = 525nm. Los resultados nos muestran claramente el desplazamiento de la absorbancia en la que absorbe el colorando, dando un efecto Hipercrmico, tambin se observa un efecto batocrmico (desplazamiento hacia el rojo). Se concluye por tanto que existe una dependencia marcada en la longitud de onda en la que absorbe y en la absorbancia del colorante debido a efectos del pH. A pH cidos se observa un efecto hipercrmico y tambin un efecto batocrmico, por tanto se deduce que a pH bsicos deben ocurrir los efectos contrarios, conocidos como efecto hipsocrmico y efecto hipocrmico.