INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIOPLINARIA DE BIOTECNOLOGA INSTITUTO NACIONAL DE NEUROLOGA Y NEUROCIRUGA

ANLISIS IN VIVO DE LOS FRAGMENTOS DE LA SUBUNIDAD NR1 DEL NMDAR GENERADOS POR ECTODOMAIN SHEDDING
Berber Aceves Guadalupe Erndira Ingeniera Biotecnolgica

INTRODUCCIN
Receptores metabotrpicos Acoplados a protena G

Glutamato

NMDA

Receptores ionotrpicos

AMPA

Kainato

RECEPTOR NMDA

ECTODOMAIN SHEDDING

Corte inducido por activacin de PKC

OBJETIVO
Investigar

si el procesamiento proteoltico del NMDAR mediado por metaloproteasas se lleva a cabo in vivo en corteza de cerebro de rata

MK-801

DESARROLLO EXPERIMENTAL
Homogenizado en buffer de lisis

Separacin muestras soluble e insoluble

Recuperacin sobrenadante

Bloqueo Ab primario Ab secundario

RESULTADOS

.ANLISIS DE LA REGIN N TERMINAL DEL RECEPTOR NR1

A kDa ~115 B kDa ~30 C C Soluble MK MK C Insoluble

Soluble
MK MK

Insoluble
MK MK

Se puede observar una banda de 115kDa que es el receptor completo Se genera un fragmento de aproximadamente 30kDa que podra indicar una dependencia del receptor o del MK 801 Presenta un correlato con la abundancia del NR1 completo.

MK

MK

.ANLISIS DE LA REGIN C TERMINAL DEL RECEPTOR NR1

C Soluble Insoluble MK MK

MK

kDa ~115

Soluble
MK MK C

Insoluble
MK MK C

D
C kDa ~29

Se puede observar una banda de 115kDa que es el receptor completo Se genera un fragmento de aproximadamente 29kDa, este fragmento presenta una reduccin en las ratas tratadas con MK. Se muestra como el receptor se ubica preferentemente en la parte no soluble como ha sido demostrado anteriormente (Ilse, Delin Ramirez, Et. Al)

MK

DISCUSIN

CONCLUSIONES
Aunque

estos resultados corroboran in vivo que la actividad del receptor modula su procesamiento, es necesario llevar a cabo mas experimentos para confirmar si el procesamiento que genera estos fragmentos es mediado por metaloproteasas.

REFERENCIAS
1.

2.

Montes de Oca Pavel, Ectodomain Shedding and Regulated Intracellular Proteolysis in the Central Nervous System, Vol 10, 2010, Mxico, Central Nervous System Agents in Medicinal Chemistry, pp 337-359 Redolat Rosa Et al. Efectos de la administracin aguda de MK-801, Antagonista no competitivo de los receptores NMDA, sobre la evitacin activa en ratones, Vol. 10, n1, 1998. Universitat de Valencia, Psicothema, pp. 135-141