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ADSORCIN DE ZEARALENONA UTILIZANDO BACTERIAS LACTICAS LIOFILIZADAS Zearalenona adsorption by lyophilized lactic acid bacteria

Vega, Mara F1.; Damario, Roco(1); Riccio, Beln(2); Dieguez, Susana(2) (4); Tapia, Ofelia(2); Gonzlez, Silvia(3).
(1) DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA Y CALIDAD DE LOS ALIMENTOS. Facultad de Ciencias Veterinarias. UNCPBA. Campus Universitario Tandil Telfono: 02293 439850 INTERNO:263 / mail: mfvega@vet.unicen.edu.ar. (2) LABORATORIO DE TOXICOLOGA (SNITV) - Facultad de Ciencias Veterinarias UNCPBA Campus Universitario Tandil. (3) CATEDRA SALUD PUBLICA. UNT San Miguel de Tucumn. (4) PERSONAL DE APOYO CIC PBA.

INTRODUCCION
La Zearalenona (ZEA) es una micotoxina de actividad estrognica causante de trastornos reproductivos que generan prdidas econmicas en la produccin animal. La utilizacin de adsorbentes de micotoxinas es el mtodo ms comn para prevenir las micotoxicosis. En investigaciones previas se demostr que cepas de Lactobacillus spp. tienen capacidad de adsorber la micotoxina en estudio. Continuando con esta investigacin y como paso previo al desarrollo de un adsorbente que contenga estos microorganismos se plantea el siguiente

METODOLOGIA
Obtencin del adsorbente: Se utilizaron dos cepas de Lactobacillus (L) de uso comercial L. rhamnosus (GG) y L. casei (LC), una cepa aislada de heces porcinas (L4) y un adsorbente de uso comercial (ADS). Los cultivos bacterianos fueron incubados en caldo MRS, centrifugados, lavados y resuspendidos en medio de proteccin formulado a base de leche, lactosa y cido ascrbico, y posteriormente liofilizados. Se liofiliz tambin medio de proteccin sin bacteria para ser utilizado como blanco. A continuacin se determin el nmero de Lactobacillus viables por el mtodo de recuento en placa, utilizando MRS agar como medio de cultivo. Estudio de la capacidad de adsorcin: Una porcin de 0.01g de adsorbente comercial o de liofilizados bacterianos fue incubada a 37C durante una hora en 1,5 ml de una solucin acuosa de metanol al 2,6% (pH=5) conteniendo 9% de NaCl y 12,34 ug/ml de ZEA. Posteriormente se centrifug a 10.000 rpm y 4C durante 10 minutos. La concentracin de ZEA presente en el sobrenadante fue medida mediante mtodo HPLC-UV.
Reactivacin de los cultivos congelados Incubacin en caldo MRS Repiques sucesivos hasta llegar a 200ml de caldo final Centrifugacin Lavado del pellet con solucin fisiolgica

Objetivo:
Evaluar la capacidad adsorbente de liofilizados de bacterias lcticas y comparar este resultado con el de un adsorbente comercial.

Resuspensin en medio de proteccin (leche, lactosa, c. ascrbico y agua) Control de viabilidad Estudio de la capacidad de adsorcin

RESULTADOS PROCESO DE LIOFILIZACION:


Gramos de liofilizado obtenido:(GG) 3,32 gr - (LC) 3,29 gr - (L4) 3,02 gr Recuento de lactobacillus spp: (GG) 2,14 1010 ufc/gr - (LC) 4,20 1009 ufc/gr - (L4) 1,38 1011 ufc/gr

Liofilizacin

Mtodo de recuento en placa MRS agar como medio de cultivo

HPLC-UV

BIBLIOGRAFIA
Aranguren, S. 2008. Aislamiento fngico en trigo y maz: tipificacin y determinacin de la capacidad toxicognica de las especies del gnero Fusarium aisladas. (Tesis de grado Licenciatura en Ciencias Biolgicas-Facultad de Ciencias VeterinariasUNCPBA), [impresa]. Disponible en el LABORATORIO DE TOXICOLOGA (SNITV) - Facultad de Ciencias Veterinarias UNCPBA Tandil. Zrate, G; Nader-Macias, M E. 2006. Viability and biological properties of probiotic vaginal lactobacilli after lyophilization and refrigerated storage into gelatin capsules. Process Biochemistry;41:17791785.

CONCLUSIONES Y DISCUSION
El liofilizado de la cepa (L4) aislada de hisopados rectales de cerdos de la zona, present la mayor capacidad secuestrante (87,8%), respecto al porcentaje obtenido por los otros liofilizados bacterianos la diferencia fue estadsticamente significativa (p<0,05). En cuanto al adsorbente disponible en el mercado la diferencia no fue significativa (p>0,05) presentando un resultado comparable. Investigaciones realizadas por ElNezami (2002) indican que molculas polimricas como los polisacridos y peptidoglicanos de la pared celular bacteriana son los principales responsables de la unin con la toxina estudiada, la presencia de polmeros en el blanco como los polipptidos y polisacridos provenientes de la leche en polvo explicara el porcentaje de adsorcin del mismo (57,21%). Futuras investigaciones se orientarn a optimizar la formacin de complejos ZEA-bacteria, y al estudio de otros factores que puedan modificar el proceso de adsorcin en condiciones in vitro e in vivo.

Bueno, D. 2003. Detoxificacin de micotoxinas presentes en alimentos de aves de corral. (Tesis Doctoral-Universidad de Tucumn), [impresa]. Disponible en biblioteca del CERELA (Centro de Referencia de Lactobacilos) Tucumn. El-Nezami, H; Polychronaki, N; Salminen, S; Mykknen, H. 2002. Binding Rather Than Metabolism May Explain the Interaction of Two Food-Grade Lactobacillus Strains with Zearalenone and Its Derivative -Zearalenol. Applied and environmental microbiology, 68 (7):35453549.

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