P. 1
1-MICROPROPAGACION DE 0RQUIDEAS

1-MICROPROPAGACION DE 0RQUIDEAS

|Views: 119|Likes:
Publicado porMichael Cox

More info:

Published by: Michael Cox on Oct 14, 2011
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

11/08/2012

pdf

text

original

1

Nº5 MICROPROPAGACION DE 0RQUIDEAS.

I.-ANTECEDENTES HISTORICOS. Hardley ( 19829) llegó a la conclusión que las orquídeas obtenian los hidratos de carbono de los hongos. Pero está lejos de la realidad. Sin embargo se ha comprobado que las orquídeas reciben a veces aminoácidos ( glutamina, ácido glutámico, ácido aspártico y ácido nicotínico) provenientes del hongo. (Hyner y Arditti 1973). Knudson ( 1922), demostró que era posible la germinación sobre un medio simple que contuviera minerales y azúcartes, sin la presencia de hongos. La investigación desarrollada por Knudson (1922) supuso una conmoción en el mundo de las orquídeas, al demostrar que las semillas de Cattleya, Epidendrum y otras orquídeas eran capaces de germinar asimbióticamente in vitro. A pesar del descubrimiento de Knudson, se comprobó que no siempre es posible hacer un medio en el que una determinada especie de orquídea pueda germinar y desarrollar..Se han descrito muchos medios nutritivos, para muchos géneros y especies diferentes (Arditti,1967, 1982, Arditti y Ernst, 1982 y Fast, 1980). Razones por las que no puede germinar: 1.-Las semillas de orquídea son muy pequeñas y alimenticia. 2.-La germinación y el subsiguiente desarrollo de la plántula, dependen en la naturaleza de la relación simbiótica con un hongo, sin embargo, en in vitro es posible sustituir la acción del hongo por un medio nutritivo, a esta germinación se denomina asimbiótica. 3.-La siembra in vitro permite germinar embriones inmanduros de orquídea, disminuyendo su ciclo de mejora. 4.-La germinación y el desarrollo es más eficiente en in vitro, ya que se realiza en un ambiente acondicionado, y sin competencia con hongos y bacterias. contienen poco o nada de reserva

1-2mm de largo y 0. Harley (1969) y Pierik ( 1982) se puede describir de la siguiente forma: El embrión absorbe agua a través de la testa. Posteriormente el protocormo y los rizoides pierden su misión nutritiva y desaparecen. de tal forma que cada semilla puede ser considerada como un auténtico globo. Las semillas de orquídeas son muy pequeñas.2 II. aumentando de volumen.. que encierra un embrión de alrededor de 200 células. y sobre aquel se puede distinguir un meristemo del vástago. que es diferente para cada especie. Las semillas constan de una testa gruesa. La germinación de las semillas de orquídeas. . 2. Después se inicia la división celular. no identificable en el estado de semilla. en forma de red. La mayor parte de las semillas de orquídeas están escasamente diferenciadas: No se distinguen cotiledones ni raíces y carecen de endospermo.1.La cubierta tiene un aspecto exterior característico. Luego se diferencia los órganos ( meristemo del vástago en un lado y rizoides en el opuesto). En el extremo distal del embrión existe un punto de crecimiento potencial. comienza un período de crecimiento intenso.5-1mm de ancho. adquiere el color verde y al mismo tiempo se desarrolla hojas. rompiendo el embrión la cubierta seminal.DESCRIPCION DE LAS ORQUIDEAS2.La testa está formada por un tejido muerto. según Arditti (1967).-LA GERMINACION DE LAS SEMILLAS. A continuación se forma una estructura de tipo protocormo. El embrión tiene una forma redondeada o esférica. compuesto hasta en un 96% de aire.. Luego se forman las raíces verdaderas en forma endógena.2. Se producen en cantidades elevadas por cápsula : 1300 -4 000 000. Si el protocormo está expuesto a la luz. a partir del agregado de células.Como resultado de la formación de la clorofila de planta se hace autótrofo.-LAS CARACTERISTICAS ANATOMICAS DE LAS SEMILLAS.

las semillas de orquídea se pueden sembrar cuando la semilla se encuentra en el estadío intermedio entre la fertilización y la maduración de la cápsula.-CAPSULAS CERRADAS. Calanthe Cattleya Coelogyne Dendrobium Epidendrum Miltonia Phalaenopsisi 4 meses 11 meses 13 meses 12 meses 4 meses 9 meses.-En este caso la esterilización es muy simple: . Odontoglossum 7 meses 2. La esterilización se realiza de dos formas: 1.3. puede ser utilizado para determinar la viabilidad de las semillas de orquídeas tropicales epífitas.-METODOS DE LA PRUEBA DE LA VIABILIDAD. antes de que la cápsula haya llegado a los dos tercios de su madurez.3 2.En la tabla que se da a continuación (Lucke 1971) se indican los períodos de tiempo entre la fertilización y la madurez. la prueba clásico del tetrazolio. Se aconseja almacenar las semillas maduras a 5°C ( Fast 1980).-Preparación de la semilla en una solución al 5% de Ca (0Cl)2 más 1% tween 80.-ESTERILIZACION. 6 meses. al final. en principio. 3. Lucke (1971) afirmó que.El mismo recomienda que las semillas no se deben sembrar in vitro.4. 2. mientras que los no viables quedan blancos). cuya viabilidad se determina bajo tres etapas: 1.-Inmersión en agua estéril durante 24 horas.-Aplicación. Van Waes y Debergh (1986) han demostrado que el método Sing no puede ser aplicado a las orquídeas del oeste de Europa. Sing (19819) demostró que el test del tetrazolio ( los embriones viables se tiñen de rojo.

Después de la fertilización el líquido es retirado. ya que las semillas crecen así mejor que cuando están aislados. Smith (1975) afirmó que la cubierta seminal no tiene efecto inhibidor sobre la germinación. mientras los que flotan. Las semillas se siembra sobre el agar.Se colocan las semillas en un pequeño matráz conteniendo lejía al 10% t Tween 20 en una proporción de 2-5 % (v/v).5. bien por vertido.Se utiliza una espátula aguja de siembra para distribuir las semillas de forma uniforme sobre el medio. La densidad a la que se siembran dependen de la proporción de las semillas viables y también de la especie de orquídea de que se trate. no contienen embrión. o con la ayuda de una pipeta. La siembra se realiza generalmente sobre un medio nutritivo sólido con una cierta pendiente. es necesario repicar las plántulas de orquídeas dos a tres veces. la germinación es baja. Las semillas viables se hunden en la lejía. Cuando las orquídeas se trasplantan al suelo. es influida por la concentración de ABA de las semillas: De manera que si la concentración de ABA es alto. Las orquídeas in vitro se refieren en grupos. sino se realiza las plantas llegan a estar demasiado apretados y el crecimiento es lento.. posteriormente se aclaran las semillas con agua esterilizada. El medio en el que se repican es generalmente diferente de la siembra. La cápsula que contiene las semills. . 2. que generalmente está estéril en su interior. El tiempo que las orquídeas permanecen en el tubo es muy variable : entre 6 meses y 2 años. El repicado es necesario.-LA SIEMBRA.La esterilización de las semillas individuales constituye un proceso más delicado y complejo.La esterilización se realiza durante 5-10 minutos. luego se abre con una escapel estéril. Sin embargo. Para ser trasplantado al suelo. también se pueden suspender las semillas en agua estéril y hacer la siembra por medio de una gota (Arditti. Van Der Kinderen (1982) indica que la germinación de algunas orquídeas.1982). 2. generalmente se llevan en macetas madre.-CAPSULAS ABIERTAS.4 Se baña la cápsula en alcohol de 96% y posteriormente se flamea.

.-EL pH debe situarse entre 4. Rao (1977).Se utiliza el homogenizado de plátano. 6. Un pH más bajo de 4 o más alto de 7 resulta muy desfavorable.25°C.-Es necesario añadir las siguientes vitaminas : biotina. 9.0.-AGAR.6 .-La concentración recomendada es de 0. 5. Las Revistas American orchid Society bulletin.-LOS REGULADORES. 1. jugo de tomate y extracto de patata. Las orquídeas generalmente necesitan Fe para germinar y es muy probable que necesite Mn. Por lo general se emplea Sacarosa. especialmente para las semillas que germinan en la oscuridad. peptona. Harley (1969) .-AZUCAR. vitamina C.La duración del día es de 12-16 horas ( tubos fluorescentes) se aconseja una irradiación baja de 2.Los efectos estimuladores de estas mezclas se explica por su contenido en vitaminas y aminoácidos.8 % (Bacto-Agar-Difco). 3.1982).6.. ácido pantoténico. Fast (1980) Hadley (1975. Leche de coco. o vástago Adventicio) . 1982).-VITAMINAS.-La temperatura.-LUZ. Thomale (1957) y Zimmer (1980). Hidrolizado de caseína. Concentraciones bajas de IBA y NAA.8-5. Los factores complejos que influyen la germnación y el crecimiento de orquídeas.Esta información se ha recopilado con la ayuda de los siguientes artículos: Arditti (1967. 8.-FACTORES QUE AFECTAN A LA GERMINACION Y AL CRECIMIENTO. Levadura de fermentación. Arditti y Ernst (1982). de las plántulas de endrobium. además dependen en gran medida de la especie.-Las semillas germinan a 20. Las orquídeas terrestres requieren un medio. jugo de piña. ácido Nicotínico. 4.Generalmente no son necesarios para la germinación de las semillas y su presencia puede producir efectos no deseados ( Formación de callos .5 2.-Se recomienda utilizar un medio que contenga micro-macronutrientes.-Es importante como fuente de energía. Cattleya y otros.1977. a veces se utiliza una mezcla de glucosa y fructosa. triptona. mientras las epífitas necesitan un medio más rico en sales. a veces estimulan el crecimiento . die orquidae. 2. 7. pobre en sales.8 .5-10 w/m2.-MEZCLAS COMPLEJAS.-MINERALES.. piridoxina.

-MATERIALES Y METODOS. A.MATERIALES.-REACTIVOS Y OTROS.-MATERIALES VEGETALES.6 III.OBJETIVOS. a. -Musgo . -Medio Knudson C (1946) -Agar -Gel-Rite.. Semillas provenientes de cápsulas dehiscentes. b. Frutos inmaduros (cápsulas). -Carbón vegetal -Polipropileno. -Sucrosa -Tiamina -Carbón activado -Kinetina -Alcohol etilico al 96% -Hipoclorito de calcio -Hipoclorito de sodio al 10% -Teween 20 -Trifenil tetrazolium -Tubos de ensayo -Tapones de tubos -Macetas de plásticos y arcilla. IV.. Brotes vegetativos de 5-15 cm de longitud. -Sales Nutritivas Básicas del medio de cultivo Murashige Skoag (1962).

mediante el corte en la parte basal. Se eliminaron los restos de tejidos muerto que podría ser fuente de contaminación. Se realiza la segunda esterilización de los brotes sumergidos por 10 minutos en una solución de Hipoclorito de sodio al 2% a la cual se agregó 2 gotas /l00 ml de tween 20.5mg/L de Acido nicotínico. 2g/L de Carbón activado.4mg/L de Tiamina. a partir de semillas (Arditti. Se aplican las técnicas de cultivo in vitro en la propagación de las especies de orquídeas. 1982) y de yemas (Marel. Para su esterilización las semillas pueden colocarse en un pequeño sobre de papel de filtro bien cerrado. suplementado con 0. 2. Se utiliza el Hipoclorito de calcio ó sodio al 2%. Pasado este tiempo el brote se ubica en una placa petri estéril y se eliminan las hojas envolventes descubriendo las yemas. 0. 1. agua y detergente para luego ser sumergido por unos segundos en alcohol al 75 %.En la primera esterilización los brotes fueron sumergidos por 20 minutos en una solución de Hipoclorito de sodio al 4% a la cual se agregó Tween -20 (2 gotas/100ml). y en el medio Knudson C suplementado en 20 g/L de sucrosa. 2g/L de Carbón activado.(Tesis. durante 15-25 minutos.7 METODOS. León Fenández.( León Fernández Marco 1995).Los brotes fueron lavados con una escobilla suave. 2g/L de Gel-Rite o 8g/L de Agar . Se hicieron dos esterilizaciones superficiales.-SIEMBRA DE SEMILLAS PROVENIENTES DE CAPSULA DEHISCENTE. Luego se procede a sembrar las semillas en condiciones asépticas en el medio basal de Muraashige y Skoog (1962).1984) de la siguiente manera. Se enjuaga con agua destilada estéril y se ubican en placa estéril .-PROPAGACI0N POR YEMAS DE BROTES VEGETATIVOS. Los explantes sembraron en medio basal de Murashije y Skoog (1962). 2g/L de Gel-Rite o 8g/L de Agar y 20g/L sucrosa. . a fin de evitar que se pierdan las semillas durante el enjuague. 1995). El aislamiento de las yemas de brote vegetativo se realiza mediante cortes laterales a las yemas expuestas. Se colectaron brotes vegetativos de Cattleya Máxima y Cattleya Rex en pleno crecimiento de 5 a 15 cm de longitud. Pasado este tiempo el sobre es trasladado a agua destilada estéril para el enjuague.

TESIS.-MICROPROPAGACION. (Tesis León Fernández.. Royal Botanic Gardens. Se sembró por grupos en macetas comunitarios cuyo tercio inferiior fue llenado con pedazos pequeños de polipropileno y dos tercios superior rstante con el sustrato estéril (Wright-Tippit. 1994). 1.E Kester. 2.M. 3.6ta Edición. medianos y pequeños.. 3. Plant Propagation Principles and Practices. Se seleccionaron plántulas por tamaños: Grandes.1995. Luego de ser sembrados las plántulas se trasfieren a la cámara de Aclimatación que esta condiocionado para proporcionar una alta humedad y evitar su deshidratación. Este sustrato fue esterilizado en una estufa a 80°C por 6 horas. CONSERVACION DE ESPECIES PERUANAS DE ORQUIDEAS UTILIZANDO TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO . D.BIBLIOGRAFIA. fueron extraídos de los frascos y sometidos al proceso de aclimatación. 1997. Kew: Information sheets: . Luego del segundo replante.L.-ALEX D. Las plantas fueron retiradas de los frascos limpiados y lavados eliminando el agar adherida a las raices. 5.T Hartmann. El sustrato en el que se sembraron las plántulas fue una mezcla de musgo y pequeños trozos de carbón 3 partes de musgo: 1 parte de carbón) que permite una buena retención de humedad y a la vez un buena ventilación de las raíces. Encyclopaedia of cultivated Orchids. http:/grffin.-PREPARACION DE LAS PLANTULAS.8 ACLIMATACION DE LAS ORQUIDEAS.-PIERIK R. 1995). 4. Se eliminan las raíces delgadas que podría ser una vía de infección para la plántula.-SIEMBRA.-H. V.-LEON MARTINEZ.F. 2. Marco A.-PREPARACION DEL SUSTRATO. 1989. 1. Cultivo in vitro de las plantas superiores.uk/microprop. davies.T.rbgkew. HAWKES . cuando las plantas desarrollaron varias hojas y un buen sistema radicular.org.

http:/aggie-horticulture.-THE Many Dimensions of Plant Tissue Culture Research.tamu..edu/tissult/pltissue/pltissue .9 6.

You're Reading a Free Preview

Descarga
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->