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ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

Acción de agentes físicos y químicos


sobre la partícula viral
ASIGNATURA :

Virología

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo.

ALUMNO :

Rómulo Aycachi Inga.

CICLO :

2007 - I

Lambayeque, Agosto del 2007.


Acción de los agentes físicos y químicos sobre la
partícula viral
I. INTRODUCCIÓN :

Los virus reaccionan de diferentes maneras a los agentes tanto físicos


como químicos y esto depende tanto de su naturaleza, su composición (con o
sin envoltura) y muchos otros factores mas. Por lo general, en lo referente al
calor y frío, los virus icosaédricos tienden a ser estables y pierden poca
infectividad después de varias horas a 37º C y los virus cubiertos son mucho
mas termolábiles, además la infecciosidad viral generalmente desaparece por
calentamiento de 50 a 60 ºC durante 30 minutos, aunque existen algunas
excepciones notables (virus de la hepatitis B, poliomavirus, agente de la
encefalitis espongiforme). Los virus que resisten a la liofilización resisten
temperaturas mayores cuando se calientan en estado seco. Los virus envueltos
tienden a perder la infecciosidad luego de almacenamiento prolongado incluso
a -90 ºC y son particularmente sensibles a congelación y descongelación
repentinos.
En cuanto al pH, los virus son generalmente estables a valores de entre
5.0 y 9.0. Algunos virus (p.ej. enterovirus) resisten condiciones ácidas. Todos
se destruyen en condiciones alcalinas. En las reacciones de hemoaglutinación,
las variaciones menores de una unidad de pH pueden influir el resultado.
Con respecto a la radiación, los rayos UV, rayos X y las partículas de alta
energía, estas inactivan a los virus, aunque las dosis varían para diferentes
virus; además las partículas irradiadas incapaces de replicarse pueden aun
expresar algunas funciones específicas en la célula huésped.
En la referente a los agentes químicos tenemos p. ej. la inactivación
fotodinámica, en la cual los virus pueden dejarse penetrar en grado variable por
colorantes vitales, como el azul de toluidina, rojo neutro y proflavina. Estos
colorantes se unen al ácido nucleico viral, y el virus adquiere susceptibilidad a
la inactivación por la luz visible. Comúnmente se usa el rojo neutro. También
los virus son susceptibles al éter y mediante esto se puede distinguir un virus
que posee cubierta del que no lo posee. Los detergentes son también agentes
químicos que pueden afectar a los virus p. ej. los detergentes no aniónicos
como el Nonidet P40 y Tritón X-100 solubilizan el elemento lipídico de la
membrana viral. Liberan (desnaturalizan) las proteínas virales de la envoltura.
Los detergentes aniónicos como el dodecilsulfato de sodio también solubilizan
la envoltura viral; además, fragmentan las cápsides en polipéptidos separados.
Por último, el formaldehído también puede afectar a la partícula viral, ya
que suprime la infectividad del virus al reaccionar con su ácido nucleico. Los
virus que contienen una sola cadena se inactivan con mucha facilidad en
comparación con aquellos cuyo genoma contiene dos cadenas. El
formaldehído demuestra efectos adversos mínimos sobre la antigenicidad de
las proteínas, por eso se lo emplea con frecuencia en la producción de vacunas
a base de virus inactivados.

II. OBJETIVO:

• Enfrentar la partícula viral con diferentes agentes físicos y químicos.

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III. Materiales:

Material Biológico:

- Particulas virales
- Cepa problema

Material de Laboratorio:

- Agar Triptosa.
- Agar Agua.
- Caldo triptosa
- Pipetas.
- Placas Petri.
- Mechero.
- Lámpara UV.
- Agentes químicos (éter, cloroformo, formaldehído).
- Baño María.
- Asas Bacteriológicas.

IV. Procedimiento:

A. Acción del Calor sobre la partícula viral :

• Distribuir en 4 tubos un inóculo viral a título conocido.


• Se distribuye en cada tubo 0.5 ml. de suspensión vírica a titulo
conocido.
• Luego, colocar a Baño María (60 ºC por 30 min.), considerara este
momento como Tiempo cero.
• Cada 15 minutos retirar un tubo y dejar a medio ambiente por 20
minutos cada tubo conforme se retiren.
• Rotularlos los tubos como T15, T30, T45, T60.
• Luego titular: tomar 4 tubos con Agar Agua diluido y a cada uno de
ellos agregarles 0.1 ml. de suspensión vírica, mantenerlos a 45°C.
Agregar luego 4 a 5 gotas de la bacteria (4 - 6 horas de desarrollo).
Mezclar y verter en placa con Agar Triptosa.
• Incubar a 37 ºC por 18 a 24 h
• Pasado el tiempo hacer la lectura correspondiente.

B. Acción de la Radiación UV sobre la partícula viral :

• Usar inóculo viral (10-5)


• Repartir el inóculo (0.5 ml) sobre una placa de agar triptosa (en total
4 placas).

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• Luego exponer las placas a la luz UV. A una distancia de 20 – 30
cm., las placas deben estar destapadas en esta área, se contabiliza
como tiempo cero (T0). Cada 5 min. retirar una placa.
• Luego titular: tomar 4 tubos con Agar Agua diluido. Agregar luego de
4 a 5 gotas de la bacteria (4 - 6 horas de desarrollo). Mezclar y verter
en placa con Agar Triptosa ( que quede sobre toda la superficie).
• Luego, incubar a 37 ºC por 18 a 24 h
• Pasado el tiempo observar.

C. Acción del Formaldehído sobre la partícula viral :

• Diluir el formaldehído 1/1000 (0.25:250 ml)


• En un tubo tapa rosca colocar 1 ml. de formaldehído diluido (1/1000)
y mezclarlo con 1 ml. de la suspensión del virus a titulo conocido.
• Al mezclar marcar con Tiempo cero (T0) y de inmediato el tubo lo
enviamos a estufa (37 ºC por 15 min.), esto cada 15 min. hasta
completar los 60 min.
• Luego se retira el tubo y titular: tomamos 0.1 ml.; lo llevamos a un
tubo con Agar Agua, se agrega 3 - 4 gotas de la cepa y se coloca
sobre Agar Triptosa en placa.
• Una vez hecho esto, se lleva a estufa a 37°C/15’ más.
• Se repite lo mismo y se lleva a estufa, se repite lo mismo cada 15’
hasta completar la hora (un total de 3 repeticiones más).
• Se marcan los tubos como T15, T30, T45 y T60.
• Hacer la lectura, después de incubado.

D. Acción del Cloroformo sobre la partícula viral :

• En un tubo tapa rosca colocar 0.5 ml de cloroformo (50 µl).


• Luego agregar 1 ml. de la suspensión vírica y luego agitar por 10
min.
• Se observará en el tubo la formación de 2 capas: superficial y
profunda (el cloroformo y la suspensión vírica).
• Pasado el tiempo, dejar el tubo en reposo por 15 min. (se observará
en el tubo la formación de 2 capas: superficial y profunda, o sea, el
cloroformo y la suspensión vírica), transcurrido ese tiempo, titular.
• Coger 0.1 ml. de la suspensión viral y llevar a Agar Agua, agregar
luego 3 a 4 gotas de la bacteria. Mezclar y verter en placa con Agar
Triptosa (que quede sobre toda la superficie).
• Luego, incubar a 37 ºC por 24h y observar.

E. Acción del éter sobre la partícula viral :

• En un tubo con tapa rosca colocar 1 ml de éter y 1 ml. del filtrado


• Luego agitar por 15 min. (el tubo debe estar bien tapado para que el
éter no se volatilice).

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• Llevar a refrigeración con el tubo semiabierto para que esta vez si se
volatilice el éter. Esto es por toda una noche.
• De lo que ha quedado, recoger el filtrado y pasar 0.1 ml del filtrado a
un tubo (con agar agua) y agregar de 4 a 6 gotas de cepa
• Luego pasar a placa (agar triptosa).
• Incubar a 37 ºC por 24 horas y luego observar.

IV. Resultados:

- Con respecto a la acción del calor, en la titulación no se obtuvo


formación de calvas en ninguno de los tiempos (t15, t30, t45, t60).
- Con respecto a la acción de la radiación UV sólo se obtuvo la formación
de calvas en la primera placa (una calva tubo t5), en los otros tubos (t10,
t15, t20), no se obtuvo la formación de calvas.
- Con respecto a la acción del formaldehído, se obtuvo los sgtes.
resultados:
15 min. = 10 calvas
30 min. = 1 calva
45 min. = No calvas
60 min. = No calvas

- Con respecto a la acción del cloroformo, al titular la suspensión se


obtuvo formación de calvas en la placa de titulación (no se pudo
determinar el número exacto de calvas).
- Con respecto a la acción del éter, de la titulación de la suspensión no se
obtuvo formación de calvas en la placa de titulación.

V. Conclusiones:

• La acción del calor afectó considerablemente a la partícula viral, lo


que demuestra la gran susceptibilidad de las partículas virales a la
desnaturalización e inactivación por calor.
• Los rayos UV también afectan considerablemente a los fagos,
mientras más exposición, más afectado se ve el fago, esto se puede
explicar porque los rayos UV alteran el ácido nucleico de la partícula
viral, volviéndola no infectiva.
• El formaldehído tubo una efecto parcial en la partícula viral, por lo
visto en los resultados, a más exposición, más afectado se verá la
partícula viral, esto se puede deber a que bloquea la infectividad del
fago ya que reacciona directamente con el ácido nucleico.
• La acción del cloroformo no tuvo ningún efecto en las partículas
virales en este caso, ya que al realizar la titulación se obtuvieron un
gran número de calvas.
• El éter tuvo supuestamente una acción letal en nuestras partículas
víricas, ya que al realizar la titulación, no se obtuvo ningún tipo de
calvas, lo que nos hace suponer que su inactivación se debió a que
era un fago con envoltura, algo que es incoherente, ya que los fagos
en su mayoría son desnudos y además la prueba con cloroformo no

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afecto a la partícula viral, lo que nos hace suponer que un hubo un
error de manipulación.

VI. Referencias:

• JAWETZ E., J. MELNICK, E. SDELBERG (1996) Microbiología


Médica. 15º edic. Edit. El Manual Moderno. México D.F.

Anexos:

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ALGUNAS VISTAS DE LOS RESULTADOS EN PLACA DE LOS EFECTOS DE
LOS EGENTES FISICOS Y QUIMICOS