Bachillerato Internacional

Monografía

Influencia de la temperatura y el ph en la acción del hongo

Penicillium notatum (Género Eupenicillium) sobre la bacteria
Staphylococcus aureus (Género Staphylococcus).

Candidato: Isabel Pulgar Sedó

Código: cfb 035 (1051 035)

Asignatura: Biología

Supervisor: Jaime Ortiz Panta

Número de palabras: 3837

Colegio: Liceo Naval “Almirante Guise”

Lima – Perú

2005

4
 Resumen

El objetivo de la siguiente monografía es determinar la influencia de la

temperatura y el ph en la acción del hongo Penicillium notatum sobre la
bacteria Staphylococcus aureus.

La hipótesis planteada fue que el hongo tendrá una acción sobre la

bacteria al crecer considerablemente el diámetro de la siembra, y que esta se
verá afectada por la temperatura y el ph, y al ser el Penicillium un hongo
ambiental que crece en medios ácidos como en frutas cítricas se espera un
mejor desarrollo a la temperatura de 23ºC y a ph 4,01.

Para poder determinar si la temperatura y el pH influyen en la acción del

hongo sobre la bacteria se realizó un experimento utilizando el método de
disco de difusión.

En el Capítulo I se hace una revisión de toda la bibliografía encontrada

que permite argumentar el tema estudiado. En el Capítulo II se describe el
proceso experimental desarrollado. En el Capítulo III se anotan los resultados
obtenidos del experimento, debidamente ordenados. Finalmente en el
Capítulo IV se muestran las conclusiones que parten del análisis de los
resultados y además las limitaciones que surgieron en la realización del
trabajo y las recomendaciones para superar los problemas.

Al realizar esta monografía se concluyó que el hongo Penicillium notatum

se desarrolla mejor sobre la bacteria a una temperatura de 23ºC por
presentarse el promedio más alto del diámetro de crecimiento (2,685cm). Se
comprobó también que el ph ácido (4,01) fue el óptimo para el desarrollo del
hongo sobre la bacteria al tener un diámetro de crecimiento promedio de 2,61
cm. Por lo tanto son a estos valores de temperatura y ph los que influyen en
el crecimiento del Penicillium notatum.

5
 Introducción

Son diversas las enfermedades que afectan al ser humano, causando

terribles efectos como el deterioro de órganos, sistemas e inclusive la muerte.
Un gran grupo de estas enfermedades son causadas por bacterias, es por eso
que se realizan numerosas investigaciones para descubrir sus tratamientos y
curas.

La afección respiratoria sufrida por mi hermano hace unos meses atrás,

llamó mi atención, al observar que le aplicaron el antibiótico penicilina, que es
elaborado a base del hongo Penicillium notatum, y que a los pocos días se
produjo su mejoría y restablecimiento completo.

Al realizar la investigación sobre las características el hongo Penicillium

encontré que posee propiedades antimicrobianas lo que detiene el crecimiento
y desarrollo de las bacterias. Debido a esta propiedad las diversas clases de
este hongo son utilizadas en la elaboración de fármacos.

El hongo que se utilizará en el presente trabajo monográfico es el

Penicillium notatum por ser el más común y el más utilizado en la industria
farmacéutica. Para comprobar las propiedades antimicrobianas del hongo se
utilizará la bacteria Staphylococcus aureus perteneciente al grupo de los
cocos Gram positivos, y que además es considerado un importante patógeno
humano, causante de diversas enfermedades como neumonía, síndrome de
shock tóxico, infecciones a la piel, etc.

En base a lo investigado el problema ha analizar y resolver de esta

monografía es:

Influencia de la temperatura y el ph en la acción del hongo Penicillium

notatum (Género Eupenicillium) sobre la bacteria Staphylococcus aureus
(Género Staphylococcus).

6
 En base a este problema se realizó el experimento utilizando el método
de disco de difusión. Se inoculó el moho Penicillium notatum y la bacteria
Staphylococcus aureus, en treinta placas petri sometidas a tres temperaturas
distintas, frío (10ºC), medio ambiente (23ºC) y caliente (37ºC) para determinar
cuál es la óptima. Se realizó el mismo procedimiento en treinta placas, pero
con la variante de insertar tres soluciones buffer con pH ácido (4,01), pH
neutro (7,01), y pH alcalino (10,01) en el medio de cultivo para determinar el
pH óptimo en el cual el moho tiene efecto. Para la determinar la acción del
hongo sobre la bacteria se midió el diámetro de crecimiento del Penicillium.

La investigación parte del supuesto que el moho Penicillium notatum

crece y tiene efecto óptimo sobre las bacterias a la temperatura de 23ºC y a
pH ácido.

Los resultados que se obtendrán permitirán comprobar si es que la

temperatura de 23ºC y a pH ácido son óptimas para la acción del Penicillium
notatum sobre las bacterias patógenas, lo cual permitirá dar una base
científica en el uso del Penicillium para la elaboración de antibióticos.

7
 Capítulo I

Fundamento Teórico

8
 1. Fundamento Teórico

1.1. El Penicillium

1.1.1. Definición

El Penicillium (del latín penicillus, que significa pincel) es un género de

hongo conocido como mohos verdes y azules y son tan comunes y
cosmopolitas como los Aspergillus. “Los encontramos frecuentemente
sobre las frutas cítricas, jaleas, conservas y sobre otras sustancias
alimenticias que hayan sido contaminadas con sus esporas. Los conidios
de Penicillium están en todas partes en el aire y en el suelo.”1

Estos mohos pertenecen a la clase Ascomicete, sin embargo, son

también catalogados como Deuteromicetes (Deuteromycota) es decir
hongos imperfectos, que “comprenden todas las especies que no tienen
fructiferaciones perfectas, sino que se reproducen exclusivamente por
esporas asexuales o por fragmentación del micelio.”2

El Penicillium es utilizado para la industria alimentaria, en especial en

la elaboración de quesos, gracias a sus distintas especies como
Penicillium roqueforti que dan un sabor y color característico, a los quesos
Roquefort. Pero el gran aporte de estos mohos fue cuando se descubrió
sus propiedades antimicrobianas, y apartir de estas se fabricó el antibiótico
penicilina.
Figura Nº 1.1

1
ALEXOPOULOS, J. Introducción a la Micología. Editorial Eudeba. Buenos Aires 1966. p. 280-281.
2
SMITH, George. Introducción a la Micología Industrial. Editorial Acribia. Zaragoza 1963. p. 104
2

9
 Penicillium notatum creciendo en naranja3

1.1.2. Tipos

Existen más de 100 tipos de Penicillium que se distinguen por la forma

del penicilio, disposición de la cadena de esporas, la textura de la colonia y
la presencia o ausencia de peritecios o esclerotios. Resulta difícil clasificar
los tipos de Penicillium que existen porque “casi todas las especies
cosmopolitas son en cierto grado inestables. Algunas formas aisladas
tienden a variar ligeramente al hacer subcultivos en el laboratorio en
condiciones de apariencia idéntica.”4 A pesar de esto, para los autores de
micología moderna han considerado tres clasificaciones y dentro de estas
se subdividen en series.

1. Monoverticillata: Corresponden a la sección Aspergiloides y tienen

penicilios que constan de un solo verticilo (conjunto de métulas) de
fiálides (verticilio sencillo de órganos esporóforos).

2. Biverticillata-Symmetrica: Tienen un verticilo compacto de métulas que

llevan fiálides dispuestas de modo que el conjunto del penicilio es
aproximadamente simétrico con respecto al eje. Las esporas son casi
siempre ovales y se encuentran en fiálides adelgazadas (acuminadas).

3. Asymmetrica: Incluye todas las especies en las cuales el penicilio se

ramifica más de una vez y es asimétrico con respecto al eje, carece de
fiálides acuminadas.5

3
AUDESIRK, T., AUDESIRK, G. BYERS, B. Biología la Vida en la Tierra. Editorial Pearson. México,
2003. p. 401
4
SMITH, George. Introducción a la Micología Industrial. Editorial Acribia. Zaragoza 1963. p.218
5
Ibíd p. 216
10
 Figura Nº 1.2

Características del Penicillium consideradas en su clasificación

Conidio

Fiálide

Métula

Conidióforo

Penicilio

Hifa

Fuente: BILAI, V. Antibiotic- Producing Microscopio fungi. Editorial Elsevier

Publishing Company. Washington D.C, 1963. p.25

11
 Cuadro Nº 1.1
Tipos de Penicillium y algunas de sus series y especies más
representativas

Tipo de Penicillium Serie Características Especies

Monoverticillata Penicillium Colonias P. citreo-viride
decumbens aterciopeladas, en las P. fellutanum
que los conidióforos se
presentan en hifas
aéreas.
Biverticillata- Penicillium Colonias con cordones P. funiculosum
Symmetrica funiculosum de hifas de las cuales P. verruculosum
arrancan en su
mayoría los
conidióforos.
Asymmetrica Penicillium Forman colonias P. chrysogenum
chrysogenum extensas con un claro P. notatum
contorno circular.

12
 1.1.3. Taxonomía del moho Penicillium notatum6

Cuadro Nº 1.2
Dominio: Eukarya

Reino: Fungi

División: Amastigomicotes (Amastigomycota)

Subdivisión: Ascomicotinas ( Ascomycotina)

Clase: Ascomicetes (Ascomycetes)

Subclase: Plectomicétidas (Plectomycetidae

Orden: Eurotiales

Familia: Eurotiáceas (Eurotiaceae)

Género: Eupenicillium

Especie: Penicillium Notatum

1.1.4. Morfología del moho Penicillium notatum

El Penicillium notatum (del latin notatus que significa notable,

marcado). Crece en colonias muy extensas de color verde azulado, con
ancho reborde blanco. Crecimiento de hifas blancas, y produce penicilios
sencillos, rara veces con ramificaciones y con esporas globosas, de unas

6
BOLD, ALEXOPOULOS, DEVELORYAS. Morfología de las plantas y los hongos.
Editorial Omega. Barcelona 1989. p. 763

13
 3µ de diámetro o ligeramente mayores, que se presentan en columnas mal
definidas o incluso en cadenas enmarañadas.

Figura Nº 1.3

Penicillium notatum creciendo en un medio de cultivo

Fuente: Penicilina (Members tripod), en Internet:

http://members.tripod.com/fotografia/textos/penicilina.htm (14 de agosto
de 2005)

Figura Nº 1.4

Conidio

Penicilio de Penicillium notatum

Fuente: Penicillium notatum (School science), en Internet:

http://www.schoolscience.co.uk/content/4/biology/sgm/images/penicillin.jpg
(14 de agosto de 2005)

14
 1.1.5 Influencia del medio ambiente sobre el Penicillium notatum

Los hongos están sujetos a la influencia de elementos como la

temperatura, aunque no poseen un control termostático pueden adaptarse
a los cambios de temperatura. Casi todos, se desarrollan en condiciones
de aerobiosis en los medios de cultivos bacteriológicos usuales, a
temperaturas que varían entre 20 y 30 ºC. Soportan la congelación por
espacio de meses, no mueren y permanecen a la espera de tiempos
mejores.7 Con respecto a la acidez- alcalinidad de los mohos, estos se
desarrollan en medios ácidos (ph 5,6) con concentraciones relativamente
elevadas de azúcar; son tolerados bien por los mohos pero inhiben
muchas bacterias.8

Además la intensidad de la luz afecta al moho porque estimula la

producción de esporas u órganos reproductores. La humedad también es
esencial para el crecimiento del Penicillium.

1.1.6. Penicillium notatum en la industria (Antibióticos)

El Penicillium notatum fue utilizado para la elaboración de la penicilina,

un antibiótico que inhibe el crecimiento de algunas especies bacterianas
particularmente sobre el estafilococo, estreptococo y neumococo, así como
sobre la mayor parte de los microorganismos gram positivos. Sin embargo
“en la actualidad la penicilina es obtenida de Penicillium chrysogenum, por
ser más eficiente en la manufactura de esta droga.

CHRISTENSEN, Martin. Los Hongos y el Hombre. Editorial Limusa. México D.F, 1965. p. 11
8
Monografías, en Internet:
http://www.monografias.com/trabajos15/micrococcaceae/micrococcaceae.shtml (14 de agosto de 2005)
9
DEACON, J. Introducción a la Micología Moderna. Editorial Limusa. México D.F, 1993.p.148
15
 La penicilina no es sólo un compuesto, sino más bien un grupo de
compuestos basados en el ácido 6-amino penicilámico.”9 De la penicilina
se derivan otros antibióticos como las penicilina G y V, la ampicilina y
amoxicilina.

1.1.7. Historia del descubrimiento de la Penicilina

Mientras realizaba una investigación sobre la gripe en 1928, el inglés

Alexander Fleming observó accidentalmente cómo en un cultivo que
realizaba de Staphylococcus aureus desaparecían por efecto del
Penicillium notatum.

Esta observación llevaría a la concentración, elaboración y depuración

10 años más tarde por el bioquímico británico Ernst Chain, el patólogo Sir
británico Howard Florey y otros científicos de la efectiva penicilina.10

Figura 1.5

Penicillium notatum en el que se observa la zona de inhibición bacteriana11

910
La penicilina, en internet: http://www.educar.org/inventos/Penicilina.asp (14 de agosto de 2005)

10

11
Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005. Artículo penicillium notatum.
16
 1.1.8. Importancia de la Penicilina

Millones de personas han salvado sus vidas, al tratarse con penicilina

enfermedades como la endocarditis bacteriana subaguda, la septicemia, la
gangrena gaseosa, la gonorrea y la escarlatina, para las cuales antes no
existían tratamientos seguros ni curación y eran consideradas mortales.

En la actualidad, sin embargo, varias bacterias han desarrollado

resistencia a la penicilina y a otros medicamentos y antibióticos, causando
preocupación entre médicos y científicos por un posible regreso a nuestra
vulnerabilidad del pasado frente a las enfermedades e infecciones.12

12
La penicilina, en internet: http://www.educar.org/inventos/Penicilina.asp (14 de agosto de
2005)

17
 1.2. Staphylococcus aureus

1.2.1. Definición

El Staphylococcus aureus es un cocogram positivo, considerado un

importante patógeno humano que coloniza e infecta a pacientes
hospitalizados con defensas disminuidas y a personas sanas
inmunológicamente competentes. El S. aureus se aloja en las fosas nasales,
la faringe, en la piel, en la ropa y rara vez en la vagina. Desde estos sitios el
agente puede contaminar cualquier zona de la piel o mucosa y a otros
individuos por transferencia interersonal, por contacto directo o aéreo.13

1.2.2. Taxonomía del Staphylococcus aureus14

Cocos Gram positivos

Familia I: Micrococcaceae
Género I: Micrococcus
Género II: Stomatococcus
Género III: Planococcus
Género IV: Staphylococcus
Especie: Staphylococcus aureus

13

BASUALDO, J. COTO, C. DE TORRE, R. Microbiología Biomédica. Editorial Atlante. Buenos Aires

1996. p. 233
14
MADIGAN, T., MARTINKO, J., PARKER, J. Brock Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice
Hall Iberia. Madrid, 1999. p. A-8
14
KINGSBURY, D. WAGNER, G. SEGAL, G. Microbiología médica. Editorial Limusa, México D.F,
1989. p.127
18
 1.2.3. Morfología del Staphylococcus aureus

Estos cocos positivos se desarrollan formando racimos irregulares. El

diámetro de las células individuales oscila entre 0.7µ y 1.2µ. Sus colonias
tienen bordes bien definidos, son de forma redonda y convexa y miden
alrededor de 4mm de diámetro. El Staphylococcus aureus suele producir
un pigmento amarillo dorado cuando crece sobre medio sólido debido a los
carotenoides; a pesar de ello, el color de las colonias puede variar desde
blanco a naranja. Sus colonias tienen bordes bien definidos, son de forma
redonda y convexa y miden alrededor de 4mm de diámetro.15

Figura Nº 1.4

Fuente: Estafilococo, en
Internet:http://translate.google.com/translate?hl=es&sl=en&u=http://textbookof
bacteriology.net/staph.html&prev=/search%3Fq%3Dstaphylococcus%2Baureu
s%2B%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN

1515
KINGSBURY, D. WAGNER, G. SEGAL, G. Microbiología médica. Editorial Limusa, México D.F,
1989. p.127
19
 1.2.4. Influencia de la temperatura y el ph sobre el S. aureus

La temperatura óptima de crecimiento es de 35ºC a 40ºC; el ph óptimo

está entre el rango de 7 a 7,5 (neutro).16

1.2.5. Enfermedades caudadas por S. aureus

Las dos formas de enfermedades producidas por S. aureus son la

invasiva y la toxigénica:

a) Invasivas: Se caracterizan por la formación de abscesos que se

producen en el tejido cutáneo de individuos que no padecen otras
afecciones. Por ejemplo la furunculosis, endocarditis, neumonía
estafilocócica, la Hypoderma, el ántrax, entre otras.

b) Toxigénicas: Se caracterizan por la producción de sustancias

extracelulares por S. aureus, como la exfoliatina, intoxicación por
alimentos, la necrólisis epidermal y el síndrome de shock tóxico.17

1.2.6. Diagnóstico y tratamiento

Se debe realizar una recolección de muestra de la zona infectada para

el diagnóstico de laboratorio. Es necesario un examen microscópico para
evidenciar la presencia de estafilococo. Además la muestra se siembra en
un medio de cultivo y se incuba a 37ºC. Pasada las 48 horas se hace una
observación macro y microscópica seguida por una tinción de Gram. Una
vez realizado el diagnóstico, el tratamiento para estafilococos es
mayormente la penicilina o sus derivadas, sin embargo “se debe tener
presente la gran capacidad de estos microorganismos para adquirir
16
BASUALDO, J. COTO, C. DE TORRE, R. Microbiología Biomédica. Editorial Atlante. Buenos Aires
1996. p. 235
17
KINGSBURY, D. WAGNER, G. SEGAL, G. Microbiología médica. Editorial Limusa, México D.F,
1989. p. 132-133.
20
 resistencia a los antibióticos, ya que la múltiple resistencia a estos
complica el tratamiento.”18 Para evitar la resistencia y mutación de la
bacteria se efectúa la sensibilidad a antibióticos (Antibiogramas).
Gráfico Nº 1.1

El levantamiento en la resistencia a la penicilina por el S. aureus. Casi

en cuanto esta droga maravillosa fue introducida, se identificaron las cepas
resistentes. La incidencia de tales cepas aumentó firmemente hasta los
1990s y con el tiempo la mayoría de las cepas eran resistentes a todas las
formas de penicilina.19

18
BASUALDO, J. COTO, C. DE TORRE, R. Microbiología Biomédica. Editorial Atlante. Buenos Aires
1996. p. 239-240
19
HENDERSON, B., WILSON, M., MACNAB, R., LAX, A. Cellular Microbiology, Bacteria-host interaction
in health and disease. Editorial John Willey & Sons. England 1999. p. 4

21
 1.2.7. Antibiogramas por el método de disco de difusión

Los antibiogramas son los métodos utilizados para determinar la

sensibilidad de los antibióticos a una bacteria específica. La actividad
antimicrobiana se mide determinando la cantidad más pequeña del agente
que necesita inhibir el crecimiento de un organismo control, valor que se
conoce como concentración mínima inhibitoria (MIC). Uno de los métodos
es el de disco de difusión.20 Mediante éste, se aplican discos que contienen
diferentes antibióticos (Oxacilina, Penicilina, Eritromicina, etc.) en las
placas inoculadas con alguna bacteria. Después de una incubación de 24
horas a 35ºC se hace la lectura e interpretación de los diámetros críticos.
Dependiendo de éstos, se determina si la bacteria es sensible o resistente
al antibiótico.21

Los discos de papel filtro contienen una cantidad mínima de antibiótico,

durante la incubación el agente difunde desde el papel filtro al agar: cuanto
más se aleja del papel, menor es la concentración del agente. A una cierta
distancia del disco se alcanza la MIC. Pasado este punto hay crecimiento,
pero más cerca del disco no hay crecimiento. Se ha creado por tanto una
zona de inhibición y el diámetro de esta zona es proporcional a la cantidad
de agente antimicrobiano añadida al disco y a la efectividad total del
agente.22

20
MADIGAN, T., MARTINKO, J., PARKER, J. Brock Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice
Hall Iberia. Madrid, 1999.p. 406
21
SACSAQUISPE, R. Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad antimicrobiana por el
método de Disco Difusión. Instituto Nacional de Salud. Lima, 2002. p. 21.
22
MADIGAN, T., MARTINKO, J., PARKER, J. Brock Biología de los Microorganismos. Editorial
Prentice Hall Iberia. Madrid, 1999.p. 408
22
 Figura Nº 1.5

Método de disco de difusión para determinar la actividad antibiótica.23

23
MADIGAN, T., MARTINKO, J., PARKER, J. Broca. Biología de los Microorganismos. Editorial
Prentice Hall Iberia. Madrid, 1999.p. 407

23
 Figura Nº 1.6

Placa con Staphylococcus aureus en la que se ha colocado un disco de

penicilina y se forma alrededor de este un halo de inhibición.24

24
AUDESIRK, T., AUDESIRK, G. BYERS, B. Biología la Vida en la Tierra. Editorial Pearson. México,
2003. p. 11
24