INFORME #11

MATERIA:

BIOQUMICA II
INTEGRANTES:

MARIA GRACIA LITUMA ELIZABETH PALACIOS SAMUEL QUIMI CRISTINA RODRIGUEZ DIEGO SANCHEZ KAREN CARPIO

TITULO:

DETERMINACIN DE UREA

INTRODUCCIN:
La urea se forma en el hgado por el amonio obtenido de la desaminacin de los aminocidos el ciclo se cumple por cinco reacciones que consumen cuatro enlaces fosfatos por cada molecula de urea producida, la primera reaccin es la formacin del carbamilfosfato en la que se condensa el amoniaco, CO2 y fosfato se necesita de la enzima carbamilfosfato sintetasa I, seguido la sntesis de citrulina que se forma por tranferencia del carbamilo a ornitina aqu interviene la ornitina trascarbamilasa, las dos reacciones descritas se llevan a cabo en la matriz mitocondrial la reacciones siguientes continan el citosol; luego la sntesis de argininosuccinato se forma por la uni de aspartato a la citrulina tal raeccion es catalizada por la argininosuccinato sintetasa, seguido la ruptura de argininosuccinato por accin de la agininosuccinasa que es una liasa el esqueleto del aspartato se libera en forma de fumarato y el grupo amina pasa a formar parte de la cadena lateral de la arginina, finalmente la arginina es hidrolizada, el se separa el grupo guanidina y se forma urea y ornitina para regenerar el ciclo reaccin catalizada por la arginasa. Debido a la toxicidad del amoniaco el ciclo logra formar y eliminar, cada 24 horas en condiciones normales, de 5 a 50 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden ser lentos, requiriendo de 3 a 4 das para instalarse, por depender de la cantidad de enzimas presentes, o rpidos, bajo control hormonal, instalados en minutos, en este caso en relacin con el mayor acopio de sustratos, sobre todo de acetil-glutamato, el modulador alostrico positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato, alimentador del ciclo. Se pueden presentar patologas por bloqueos parciales del ciclo de la urea. Se caracterizan por hiperamonemia, retraso mental, vmitos y aversin a comidas ricas en protenas. Se mejoran si disminuyen las protenas en la dieta y se suministran cetocidos correspondientes a los aminocidos esenciales, pues estos al aminarse disminuyen la hiperamonemia. El amoniaco generado por las bacterias entricas se absorbe en la sangre de la vena porta, un hgado sano metaboliza rpidamente el amoniaco de la sangre portal, pero en la sangre perifrica se encuentra libre de amoniaco y cantidades mnimas de amoniaco son txicas para el sistema nervioso central para lo cual se debe cumplir el ciclo de forma correcta.

Toxicidad del amoniaco y sntomas. Se producen alrededor de 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas esta urea debe eliminarse por orina. Su concentracin normal promedio en el plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos como 2 mg/dl. Existen 2 factores en la excrecin de urea son: la concentracin de urea en el plasma y la intensidad de filtracin glomerular. Estos factores aumentan la concentracin de urea principalmente porque la carga de urea que penetra en tbulos proximales es igual al producto de la concentracin plasmtica de urea por la intensidad de filtracin glomerular. Cuando el flujo de filtracin glomerular es muy baja, el filtrado persiste en los tbulos por largo tiempo, antes de acabar en la orina y todos los tbulos son ligeramente permeables a la urea, cuanto ms tiempo persista el liquido tubular en los tbulos, mayor resorcin de urea hacia la sangre; la proporcin de urea filtrada que llega a la orina disminuye considerablemente.

Cistatina C La cistatina C es una protena no glicosilada producida por las clulas nucleadas que se filtra libremente en el glomrulo y es catabolizada en los tbulos proximales, se la emplea como marcador de funcin renal, aunque recientemente su utilidad como posible factor de riesgo cardiovascular ha despertado inters. Tambin se cree que esta protena ayudara al diagnstico de enfermedades del sistema nervioso central, debido a su presencia en el lquido cefalorraqudeo. Con este mtodo nefelomtrico se ha encontrado un intervalo de referencia para la concentracin de cistatina C en suero en adultos de 0,51 a 0,98 mg/l3. En recin nacidos, los valores de esta protena son el doble de los de los adultos y entre uno y 12 meses de edad el valor medio es de 0,95 mg/l. La concentracin es ya constante en nios mayores de un ao y similar a la de los adultos. La TFG se considera el mejor indicador de la funcin del rin y su valor se reduce antes de la aparicin de los sntomas de fallo renal. El mtodo gold standard para su determinacin es la medida del aclaramiento de sustancias exgenas como la inulina o compuestos marcados isotpicamente, como 51Cr-EDTA. Sin embargo, estos mtodos resultan caros y complejos, por lo que raramente se emplean. En cambio, la medida de sustancias endgenas para estimar la TFG es la prctica ms comn. La cistatina C presenta ciertas caractersticas que resultan adecuadas para su empleo como marcador endgeno de la TFG: Su produccin por las clulas nucleadas es estable, por lo que sus niveles son constantes y adems no estn influidos por la reaccin inflamatoria de fase aguda. Se filtra libremente en el glomrulo, no se secreta en los tbulos y no se excreta por ninguna otra va. Es absorbida y catabolizada en los tbulos proximales y no hay reabsorcin en la circulacin sangunea. Slo se detectan cantidades mnimas en la orina de personas con una funcin renal normal. Su concentracin no se ve influida por la edad, el sexo, la masa muscular o la ingesta de protenas. Adems, en su cuantificacin no interfieren sustancias que pueden estar presentes en el suero, como las protenas o la bilirrubina. La ventaja de la cistatina C como marcador de funcin renal frente a otros marcadores usualmente empleados, como la creatinina srica o el aclaramiento de creatinina, es su mayor sensibilidad a pequeos cambios del filtrado glomerular, lo que permite la deteccin temprana del fallo renal agudo, pero hay que tener en cuenta que el empleo de la cistatina C para estimar la TFG presenta tambin algunos inconvenientes: Su concentracin puede verse afectada si el paciente presenta enfermedad heptica disfuncin tiroidea (8, 9) o si est siguiendo una terapia con glucocorticoides. Su coste es mayor que el de otros marcadores endgenos y presenta variabilidad intraindividual.

FUNDAMENTO:
La urea presenta en la muestra origina, segn las reacciones descritas a continuacin, un indofenol coloreado que se cuantifica en el espectrofotmetro a 600 nm UREA + H2O
UREASA

2NH4+ + +CO2
NITROPRUSIATO

NH4+ + SALICILATO + NaClO

INDOFENOL

OBJETIVO:
Determinarla concentracin de urea en una muestra en interpretar los resultados obtenidos.

MATERIALES Y METODOS:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Kit de reactivos para determinacin de urea Material biolgico: suero o plasma (heparina como anticoagulante) Gradilla o tuberas Tubos de ensayo perfectamente limpios Pipetas serolgicas de 1ml Micropipetas de 10-100 ul (con tips o puntas) Auxiliar de macro pipeteo Espectrofotmetro

PROCEDIMIENTO:
Marcar tres tubos: blanco (B), estandar (E) y muestra (M) y proceder como sigue: Blanco Agua destilada Estndar de urea Muestra Reactivo A 1.5 ml 1.5 ml 15ul 15ul 15ul 1.5 ml Estandar Muestra

Mezclar bien e incubar durante 10 min a temperatura ambiente (18-25C)

Reactivo B

1.5 ml

1.5 ml

1.5 ml

Mezclar bien e incubar durante 10 min a temperatura ambiente. Leer la absorbancia de estndar y la muestra a 600 nm frente al blanco. Nota: el color es estable durante 2 horas.

CALCULOS DE RESULTADOS:
Valores de referencia: Para el mtodo utilizado los valores estn entre 15 39 mg/dl.

Blanco 0 Muestra 0.133 Standard 0.208

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CONCLUCIONES:
La muestra utilizada nos arroja un valor que se encuentra dentro del rango normal del mtodo utilizado.

BIBLIOGRAFIA:
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/ciclo%20urea.html http://www.pncq.org.br/biblioteca/actualidades2005_05.pdf