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Pruebas de identificación bacteriana

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Pruebas de identificación bacteriana Identificación bacteriana

La identificación es un proceso por el cual debemos determinar a qué especie pertenece una determinada cepa bacteriana, mediante la comparación de una serie de características que pueden ser puestas en evidencia en el laboratorio y que han sido estudiadas para la gran mayoría de las especies importantes desde el punto de vista de la patología infecciosa humana. Cuanto más semejanza haya entre las características obtenidas en el laboratorio y las que habitualmente presenta una determinada especie, mayor será la probabilidad de que esa cepa problema pertenezca a dicha especie. Las características utilizadas en la identificación de cada grupo de microorganismos dependen de las posibilidades de cada laboratorio, fundamentalmente económicas y de cualificación del personal, así como de la epidemiología específica de la zona. Las características que se tienen en cuenta para lograr una correcta identificación son las siguientes: Características no bacterianas: ? Paciente: Edad Sexo Patología ? Muestra: Obtención Conservación Transporte

por eso es útil esta tinción de identificación primaria. morfología colonial. secundarias y Complementarias. La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos: • Tinción de Gram: Revela la forma de la bacteria. Pruebas Primarias Para la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus características morfológicas. • Tinción de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-Ácido resistentes (BAAR).Identificación bacteriana. por eso es conveniente realizar pruebas de identificacion. A estas pruebas se les ha como primarias. esto se hace a partir de un cultivo puro. Identificación bacteriana es el ejercicio práctico en el que se ejercercen las pruebas de identificación bacteriana. el determinar un diagnóstico y poder interpretar qué bacteria causó la molestia al paciente es aventurado. la reacción a la tinción de Gram. pues hay muchas bacterias que causan las mismas enfermedades. agrupación. propiedades. En la medicina general es común que llegue un paciente con síntomas de alguna infección bacteriana. inclusive especie. tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento. ya la bacteria aislada. son difíciles de cultivar. que son sumamente importantes para un buen diagnóstico de cualquier patología. con estas pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué especie es esta bacteria. Cada género. reacciones metabólicas como producción de enzimas y reacciones de óxidofermentación. tiene diferentes reacciones cuando se les enfrentan diferentes reactivos. agrupación y grupo taxonómico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo. .

en menos de 10 segundos. El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. muy útil en la identificación de bacterias Gram (-). por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones. Ejemplos: Catalasa (+): Staphylococcus aureus. Catalasa (-): Streptococcus spp. Pseudomonas sp. Escherichia coli. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia del sistema de citocromo-oxidasa. La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa. al contrario una reacción negativa. El sistema de citocromos está generalmente presente en organismos aeróbicos. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa. colocando 2 o 3 gotas al cultivo. • Prueba de oxidasa: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa. indica según los ejemplos: Oxidasa (+): Pasteurella multocida Oxidasa (-): Escherichia coli . se adiciona una pequeña cantidad a un cultivo bacteriano colocado sobre un papel filtro y obtenemos las siguientes reacciones: una reacción positiva (presencia de oxidasa) se indica por la apariencia de un color púrpura obscuro en el papel.• Tinción de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros Bacillus y Clostridium. • Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. Utilizando un tubo capilar con tetrametil-p-phenylendiamina al 1%. Un resultado positivo a la oxidasa consiste en una serie de reacciones en las cuales un componente autooxidable del sistema de citocromo es al final catalizado. la cual activa citocromos reducidos por oxígeno molecular. que consiste en una ausencia de color púrpura.

y un tubo de Durham. • Prueba de O/F: para realizar esta prueba se usa el medio básico de Hugh y Leisfon con un pH de 7. contiene carbohidratos como: glucosa.1. uno sin aceite y otro con acetie o vaselina sellándolo. lactosa. se observará una burbuja en el tubo de Durham. sacarosa o maltosa al 10%. por lo tanto el agua peptonada se observará rosa. En un tubo con agua peptonada al 1% tapado. Se determina si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir de dicho carbohidrato. si produce gas. Es un medio semisólido de color verde que se inocula por picadura. obteniéndose: TUBO ABIERTO TUBO SELLADO INTEPRETACIÓ N Amarillo Verde Oxidación (aerobio) Amarillo (anaerobio facultativo) Amarillo Fermentación Verde (anaerobio estricto) Amarillo Fermentación . Ejemplos: Ácido y gas a partir de la glucosa: Escherichia coli Negativo a producción de gas: Proteus stuartii. como parte importante de su metabolismo.• Ácido de la Glucosa: La mayoría de las bacterias de interés médico usan la glucosa como fuente de carbono. Si la bacteria usa la glucosa producirá ácido y/o gas. Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura y se mantiene a 37°C por 24 horas. Como indicador de pH tiene Azul de bromotimol. se inocula la bacteria por agitación teniendo cuidado de no mover el tubo de Durham e incubándolo 24 horas y 37°C se obtienen los siguientes resultados. Se usa en dos tubos.

Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo. Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada. Múltiples: TSI. Se coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio. LIA y SIM. La exactitud de la identificación depende de la eficacia del trabajo preparatorio así como su grado. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. Podremos observar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones. Motilidad (-): como en Pasteurella multocida. Ejemplos: Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa. Nitrato y Leche Tornasol.). los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados(monotricos. Estas pruebas se clasifican de la siguiente manera: • • • Simples: Citrato. peritricos. Especiales: Coagulasa. Pruebas Secundarias. La identificación se fundamenta en la comparación del microganismo que deseamos identificar con los microorganismos de identidad conocida. ect. Hialuronidasa y Acriflavina .Verde • Verde Negativo (NH3) Prueba de Motilidad: Llamada también de la gota suspendida. Malonato. MR-VP.

pero el más comúnmente utilizado es el Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. Consiste en la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada. Las características a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación.IDENTIFICACIÓN DE UNA CEPA BACTERIANA Existen diferentes sistemas de clasificación de bacterias. A continuación se propone un esquema de trabajo para la identificación de .

grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Estas dependerán del género o familia determinado. y los antisueros se identifican con esas letras y el número o letra del . denominadas pruebas primarias. somáticos (O) que corresponden al lipopolisacárido de la pared de los Gram negativos. etc. quimioheterótrofos. oxidasa. 5) Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. o cuando las pruebas bioquímicas no son concluyentes. producción de coagulasa. 3) Determinar las características nutricionales (en general se desprenden de los métodos empleados en el aislamiento y cultivo anteriores). 4) Realización de pruebas primarias: En la siguiente tabla. También es importante determinar la agrupación y la presencia de esporas y otras características morfológicas de interés. fotoautótrofos. con las cuales se puede determinar el género. morfología. fotoheterótrofos. Se determina así la forma y el Gram del microorganismo en estudio.una cepa bacteriana desde el punto de vista bioquímico (Biotipo): 1) Obtener un cultivo puro 2) Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram. OF. (ej: producción de pigmentos. Las pruebas primarias son: Gram. flagelares (H). modificada del Cowan & Steel's Manual of Identification of medical bacteria. de fenilalanina deaminasa. producción de indol a partir de triptofano. crecimiento en aerobiosis y anaerobiosisy movilidad.) Serotipo A los efectos de realizar identificaciones más rápidas. Los antígenos bacterianos pueden ser capsulares. quimioautótrofos. se utilizan un grupo de pruebas. se recurre al uso de antisueros específicos. fermentación de glucosa. catalasa. esporas.

Existen diferentes sistemas que facilitan la realización de tales ensayos.antígeno correspondiente. etc. E. llamadas pruebas bioquímicas convencionales. Shigella.coli. En una primera identificación se usan sueros polivalentes y para la caracterización serológica se usan sueros monovalentes dentro de cada tipo de antígeno. Haemophilus. Se puede expresar el nombre de una cepa de la siguiente manera: Yersinia género entercolítica especie 4 biotipo 03 serotipo ENSAYOS BIOQUIMICOS La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados. También se pueden utilizar métodos de cromatografía gaseosa para identificar productos metabólicos. Fusobacterium. en particular para la identificación de bacterias anaerobias no esporuladas como: Bacteroides. generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. etc. Existen en el comercio antisueros para caracterización de: Salmonella. porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano. porque simplifican la interpretación de .

. a) Los comerciales utilizan modificaciones de las pruebas bioquímicas convencionales. ya sea sustratos deshidratados.un resultado utilizando un valor numérico.) que puede ser diferente aún para el mismo ensayo si se trata de diferentes microorganismos. tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o pequeños compartimentos con medios listos para sembrar. o de algún producto de su degradación. porque proveen los reactivos listos para su uso o porque son totalmente automatizables. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. comerciales. Para llevarlas a cabo. crecimiento en presencia de inhibidores. revelador. se pueden utilizar diferentes sistemas de trabajo (medio de cultivo. En todos los casos se emplean códigos numéricos para la interpretación de resultados. Por ejemplo se debe suplir con factores de crecimiento el medio de cultivo para estudiar la fermentación de distintos azúcares cuando se sabe que el microorganismo en estudio es exigente. grupo de enzimas o determinada vía metabólica.). ya sea por viraje de un indicador o por agregado de un reactivo revelador de la presencia del sustrato. etc. indicador. crecimiento a una determinada temperatura. A la determinación de la especie se puede llegar según diversos sistemas (manuales de identificación. Las pruebas o ensayos bioquímicos. son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática. la realización de una prueba bioquímica implica: 1) Cultivar el microorganismo en un medio que contiene un determinado sustrato o inhibidor y luego de la incubación visualizar el crecimiento y la degradación de un sustrato. etc. etc.

ácidos orgánicos y otros 2. fuerza iónica. a pH. o ácido y gas Fermentación de carbohidratos 2.2) Cultivar el microorganismo en un medio de propagación que contenga el sustrato de una enzima inducible y luego de la incubación demostrar la actividad enzimática. Si bien existen una gran variedad de pruebas bioquímicas empleadas con fines de identificación. deben llevarse a cabo los correspondientes controles de calidad. 1) Enzimas vinculadas con la respiración a) b) catalasa 2) Descomposición de azúcares simples.1) Requerimientos de oxígeno OF (óxido-fermentación) oxidasa Crecimiento en caldo tioglicolato 2. de incubación) en un medio en que el microorganismo se desarrolla en forma óptima.2) Producción de ácido. atmósfera y temperatura adecuados. En todos los casos se debe tener un cultivo fresco (18-24 hrs. se enumerarán a continuación solo las que se utilizan más frecuentemente. sembrando en dicho medio una cepa positiva y otra negativa para ese test.3) Detección de enzimas y vías metabólicas . agrupadas según el tipo de ensayo y se denominan según su nombre corriente. Siempre que se prepara un nuevo lote de medio de cultivo para una prueba.

P.2) Descomposición de carbohidratos aminoácidos y otros a) b) c) d) e) Urea 5) Ensayos combinados a) b) TSI LIA (Triple (Agar Azúcar Hierro Hierro) Lisina) Lisina.N.G.1) Reducción de nitrato a) b) denitrificación 4.a) b) c) d) RM-VP (rojo de metilo nitro - Voges Proskauer) Gluconato O. (orto ß-D-galactopiranósico) Esculina e) Hipurato 3) Fuente única de carbono a) b) citrato malonato c) hipurato para coliformes 4) Utilización de compuestos nitrogenados 4. ornitina asimilación c) Bilis esculina 6) Detección de exoenzimas . indol H2S Fenilalanina arginina.

lecitinasa coagulasa amilasas celulasas desoxirribonucleasas microorganismos sobre la sangre KCN Bilis Temperatura NaCl .a) b) c) d) e) f) acción de (hemolisinas) 7) Misceláneos a) b) c) producción de pigmentos 8) Test de crecimiento o inhibición a) b) c) Antibióticos proteasas.

TABLA MODIFICADA DE COWAN´S & STEEL PARA IDENTIFICACION DE BATERIAS HETERÓTROFAS tinción gram (cultivo fresco) forma agrupación crecimiento + aerobio crecimiento – anaerobio esporas movilidad – – + – – + + + – – – + + – – – + + – – – + + + + + – + – – – + + – + + + + – – – + + – + + + + – + + + + + + + coco coco coco coco racim racim caden tetrad os os as as bast bast Bast bast bast bast bast bast ón ón ón ón ón ón ón ón coco pare s + + + + + + + + – – – – – catalase + oxidase fermentació – n de – – + o + o –+ o – + o –+ o – +o– – + + + + + + + – + (o+ – – – + –) .

glucosa acido o a a – X X X X X X X X X X X X X X X X X X X O F F O acido+gas O/F Micrococcu s Staphyloco ccus Streptococc us Lactococcu s Enterococc us Leuconosto c Pediococcu s Aerococcus Lactobacillu s Clostridium Bacillus Alcaligenes Pseudomon as Enterobact erias Aeromonas Chromobac terium Neisseria .

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