PRACTICA N 03 EXAMEN DE HECES I.

- MATERIALES: Heces fresco Hisopo Lamina cubreobjetos Lamina portaobjetos Tincin cristal violeta Agua destilada Lugol Decolorante Safranina Mechero Ron Microscopio

II.- PREPARACION: 1. Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teir o se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra. 2. El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. 3. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama del mechero. 4. La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tincin de GRAM. 5. La secuencia de la tincin es la siguiente: 6. En el frotis fijado con calor, se tie con unas gotas de cristal violeta durante dos minutos, luego se lava por la parte donde no se ha teido. 7. Echar unas gotas de agua destilada durante unos dos minutos y luego proceder a lavar el frotis. 8. Aplicar lugol durante dos minutos para luego lavar de nuevo con agua. 9. Proceder a echar decolorante por unos 10 segundos y lavar de inmediato para que la muestra no se destia demasiado. 10. Escurrir la muestra y cubrir con safranina (color de contraste) durante 30 segundos y lavar de nuevo con agua y ponerlo a secar al aire libre.

III.- INDICACIONES: Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tincin de Gram: 1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las clulas grampositivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos ms viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta - yodo. El carcter de grampositivo no es siempre un fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms grampositivos que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces grampositivos y otras gramnegativos.