a) Cromatografa en columna. Caractersticas y aplicaciones. La cromatografa en columna es una tcnica basada en la adsorcin y solubilidad.

Es una tcnica de particin solido-liquido, puesto que existe un equilibrio dinmico entre la adsorcin y desorcin (elucin). Existen diferentes clases de interacciones intermoleculares que originan que los compuestos orgnicos se una a la superficie del adsorbente con mayor fuerza dependiendo de la naturaleza no polar de los compuestos la fase mvil y la fase estacionaria, son las mismas que para el caso de cromatografa en capa fina, variando para el caso del adsorbente,, el tamao de la partcula. La columna de cromatografa est constituida por un tubo de vidrio en posicin vertical, en el cual, por la parte baja se colectaran las diferentes fracciones. En el fondo del tubo se introduce un pequeo trozo de algodn que cumple la funcin de un filtro que impide que el gel de alice salga. Existen otros tipos de empacados, el empacado por va seca, consiste en introducir el adsorbente y posteriormente el eluyente seleccionado, la cantidad de muestra requerida de fase estacionaria se determina de acuerdo a la cantidad de muestra. Una regla comn es usar de 30 a 100 el peso de la muestra a separar de adsorbente. Las dimensiones de la columna se disean segn las caractersticas de la muestra a separar, siendo por lo general de una relacin de 10:1 de largo de la columna respecto a el radio de esta. b) Cromatografa de adsorcin y de particin o reparto. Esta es una tcnica para particin solido-liquido. La fase slida, fase estacionaria, corresponde al adsorbente que debe ser un material que no se disuelva en la fase liquida; los ms comunes utilizados son: celulosa, silicato de magnesio, sulfato de calcio, acido silcico, gel de slice, almina, oxido de magnesio, carbn activado; la fuerza de interaccin de enlace aumenta hacia los compuestos polares. La accin del adsorbente se basa en la atraccin intermolecular tal como atraccin dipolodipolo o de enlaces de hidrogeno. Diferentes tipos de adsorbente atraen diferentes tipos de molculas. Un adsorbente altamente polar, atrae molculas fuertemente polares, pero no presenta gran atraccin por molculas no polares, como hidrocarburos. El eluyente corresponde a la fase mvil de la cromatografa, siendo por lo general disolventes o mezclas de estos, dependiendo de la muestra a separar. Dentro de los ms utilizados podemos mencionar: ter de petrleo, ciclohexanos, tetracloruro de carbono, benceno, cloroformo, cloruro de metileno, dietileter, acetato de etilo, acetona, etanol, metanol, agua y cido actico. La polaridad y poder de disolvente de estos aumenta hacia los grupos polares. c) Factores que influye en una separacin por cromatografa en columna (en una cromatografa de adsorcin). La versatilidad de la cromatografa depende de muchos factores que deben ser considerados:

Eleccin del adsorbente adecuado. Polaridad del disolvente o disolventes seleccionados. Velocidad de elucin. Formacin de burbujas.

d) Seleccin de eluyentes y adsorbentes para la separacin de compuestos por cromatografa en columna. Adsorbentes: existen muchos factores que rigen la eleccin del adsorbente para una cromatografa. Deben ser insolubles en los disolventes que se utilicen para la separacin y no reaccionar con las sustancias que se vas a separar ni actuar como catalizador de su descomposicin, transposicin o isomeracion. Debe poseer una composicin uniforme independiente de su procedencia y ha de ser incoloro si se emplea para compuestos colorados cuyas zonas respectivas hayan de localizarse visualmente. Disolventes: lo normal es emplear un disolvente relativamente no polar para llevar a la columna la mezcla de compuestos que se quiere separar; luego, utilizar un disolvente alfo ms polar para revelar el cromatograma y finalmente un disolvente todava ms `polar para eluir las sustancias adsorbidas.