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ANALISIS INSTRUMENTAL

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Técnicas espectrofotométricas. Espectrometría de masas. Cromatografía. Algo de potenciometría, voltamperometría y coulombimetría.
Técnicas espectrofotométricas. Espectrometría de masas. Cromatografía. Algo de potenciometría, voltamperometría y coulombimetría.

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ANALISIS INSTRUMENTAL ESPECTROSCOPÍA Estudio de la interacción entre la radiación electromagnética (luz) y la materia, con absorción o emisión de la energía radiante

. Espectroscopía atómica Luz se comporta como onda y partícula. Espectro electromagnético: Distribución energética del conjunto de las ondas electromagnéticas.
Técnica Espectroscopía de emisión atómica Espectroscopía de absorción atómica Excitación Calor UV-vis Relajación UV-vis Calor

Referido a un objeto se denomina espectro Espectroscopía de UV-vis UV-vis electromagnético o fluorescencia atómica simplemente espectro a la radiación Espectroscopía de Rayos X Rayos X rayos X electromagnética que emite (espectro de Espectroscopía molecular emisión) o absorbe (espectro de absorción) Técnica Radiación electromagnética una sustancia. Dicha radiación sirve para Espectroscopía de identificar la sustancia de manera análoga resonancia magnética Radiofrecuencias a una huella dactilar. Los espectros se nuclear Espectroscopía de microondas Microondas pueden observar Espectroscopía infrarroja Infrarrojo mediante espectroscopios que, además de Espectroscopía permitir observar el espectro, permiten Ultravioleta-visible ultravioleta-visible realizar medidas sobre éste, como Espectroscopía de la longitud de onda, la frecuencia y la fluorescencia Ultravioleta-visible ultravioleta-visible intensidad de la radiación. El espectro electromagnético se extiende desde la radiación de menor longitud de onda, como los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz ultravioleta, la luz visible y los rayos infrarrojos, hasta las ondas electromagnéticas de mayor longitud de onda, como son las ondas de radio.

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION 1. Molecular 2. Atómica El analito absorbe la energía transportada por un fotón pasando a un estado de mayor energía. Intensidad de fotones que pasa a través de una muestra se atenúa debido a absorción, medida = absorbancia. Instrumentación Fuente de energía • de radiación electromagnética: fuente continua: radiación dentro de una amplia gama de λ fuente lineal: emiten radiación en algunas gamas estrechas de λ • • de energía térmica: llamas y plasmas de energía química: reacciones exotérmicas

Selección de λ: se intenta seleccionar solo una, para que sólo el analito absorba. • • Filtros de absorción o interferencia (no permiten selección continua de λ) Selectores monocromáticos: utiliza red de difracción o prisma que permite la variación continua de la λ que se deja pasar

Slit: rendija por la que pasa la luz Slit pequeño: baja sensibilidad y alta resolución (análisis cualitativo) Slit grande: alta sensibilidad y baja resolución (análisis cuantitativo) Detectores: utilizan un transductor que convierte la señal formada por fotones en señal eléctrica fácil de medir. Lo ideal es que la señal del detector sea una función lineal de la potencia de la radiación electromagnética. Detector Fototubo Fotomultiplicador Fotodiodo de Si Fotoconductor Célula fotovoltaica Termopar Termistor Neumático Piroeléctrico Transductores de fotones Rango λ 200-1000nm 110-1000nm 250-1100nm 750-6000nm 400-5000nm Transductores térmicos 0,8-40 mm 0,8-40 mm 0,8-1000 mm 0,3-1000 mm Señal emitida Corriente Corriente Corriente Cambio de resistencia Corriente o voltaje Voltaje Cambio de resistencia Desplazamiento membrana Corriente

Procesadores de la señal: La señal eléctrica generada por el transductor se envía a un procesador que la presenta de forma más cómoda para el analista. El procesador puede usarse también para calibrar la respuesta del detector, amplificar la señal procedente del detector, eliminar ruido mediante filtración o transformar matemáticamente la señal. 1. ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR • UV/VISIBLE

Cuando una molécula o ión absorbe radiación UV o visble sufre un cambio de su configuración de electrones de valencia. Transiciones en que un electrón pasa de un orbital ocupado a otro no ocupado σ  σ* n  σ* π  π* n  π* Los enlaces y grupos funcionales que originan la absorción de radiación UV y visible = cromóforos. Transmitancia: cuociente entre la luz transmitida y la incidente. T= P/Po x 100 se obtiene transmitancia porcentual 100%T es una sustancia totalmente transparente 0% T una sustancia totalmente opaca Ley de Lambert Beer: relación lineal entre la absorbancia (o transmitancia) y la concentración de la muestra. A=εbc A = log 1/T ε coeficiente de extinción molar: probabilidad de que el analito absorba un fotón de una energía determinada, por lo tanto depende de λ y del disolvente. En muestras con múltiples componentes las absorbancias son aditivas. Limitaciones ley L-B: - fundamentales: válida solo para concentraciones bajas de analito (concentraciones altas se pierde la independencia de partículas del analito de las demás. Las interacciones pueden cambiar el valor del coeficiente de extinción molar) - químicas: cuando las especies absorbentes participan en una reacción de equilibrio - instrumentales: válida solo para radiación monocromática. Radiación policromática produce desviación negativa. Radiación difusa (alanza detector pero no sigue el camino óptico entre fuente y detector) por

Se obtiene corriente proporcional a intensidad fotónica. Fe. Espectrómetro: utiliza un monocromador. La absorbancia medida tiene en cuanta la tasa de absorción muestra/banco y permite corregir desviaciones en el detector y en la fuente de salida. se liberan electrones y huecos +. Electrones pasan a circuito externo para recombinarse con huecos que migran hacia el metal base. Fuentes: dependiendo de la zona de trabajo. alta resolución Slit grande: alta sensibilidad y baja resolución (se puede perder linealidad pq deja entrar luz policromática) Detectores (de fotones): conversión de radiación en flujo de electrones y posteriormente en corriente o voltaje en el circuito de lectura: célula fotovoltaica: Consisten en un electrodo (ánodo) de un metal (Cu.Lámpara tungsteno: continua: 320-2400nm (VIS) Cubetas: vidrio o sílice (VIS) cuarzo (UV) Monocromador: debe tener: rendija de entrada. rendija de salida. Al incidir radiación el semiconductor se vuelve conductor. Rápida adquisición de espectros. se crea una corriente cuya magnitud es proporcional al número de fotones que inciden. La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un blanco. (es difícil amplificar la señal de salida. Al) en el que se deposita un material semiconductor como selenio y después se recubre con fina película de Ag o Au. espejos que guían los haces.imperfecciones del selector de λ que permiten que luces extrañas se cuelen también interfieren. Doble haz: se puede desdoblar haz a intervalos regulares. elemento dispersante (prisma o red de difracción).Lámpara H2 y D2: continua 160-380 (UV) . Slit pequeño: baja sensibilidad. Deben ser uniformes en intensidad . manifiestan fatiga) fototubo: fotón incide en cátodo recubierto con una superficie fotoemisora. Se pueden miniaturizar y utilizar en series lineales de fotodiodos Detector de arreglo de diodos: permite detectar simultáneamente la radiación de varias λ. Esto sirve como electrodo colector (Ag). Instrumentación: Fotómetro de filtro: utiliza un filtro de absorción o interferencia. Puede ser mono haz o doble haz (con ayuda de un chopper). - . Tubos producen pequeñas corrientes oscuras debidas a efectos térmicos Tubo fotomultiplicador: la señal se amplifica mediante el uso de dinodos en serie. Cada dinodo se conecta a una fuente externa de 90V generando en el colector una avalancha de 106-107 electrones por fotón incidente Fotodiodos de silicio: la absorción de la radiación electromagnética aumenta la conductividad a través de una unión pn de polarización inversa. La energía radiante genera una corriente en la interfase entre el semiconductor y el metal.

Precisión: limitada por errores indeterminados o ruido instrumental . el enlace que une 2 átomos se estira y comprime un poco más Cada frecuencia de luz absorbida por la molécula corresponde a la frecuencia de vibración de un enlace específico. la vibraciones molecular con frecuencia igual a la luz aumenta en intensidad. Es fácilmente demostrable que calibrado que suponga un 2080% de transmitancia. interferir con absorción . es decir. ESPECTROSCOPIA VIBRACIONAL IR Región que se utiliza en espectro infrarrojo: 2500-16000nm.Determinación de 2 compuestos que absorben a 2 λ distintas Evaluación: . Cada molécula dará lugar a un IR diferente.Titulaciones fotométricas . Así observando su IR podemos saber qué enlaces hay y por lo tanto los grupos funcionales que existen en un compuesto orgánico. Mejora cuando se selecciona la λ en el máx de absorbancia o cuando se aumenta longitud del paso de luz Error fotométrico: ∆c/c= (0. Está limitada por la calidad del blanco . La frecuencia exacta de una transición para un enlace determinado va a depender entre otras cosas de la fuerza de enlace y de la masa de los átomos en los extremos del enlace. En esta zona se consigue excitar transiciones vibracionales de la molécula: estiramientos y flexiones de los enlaces.Factores que influyen en absorción: .Determinación constantes de equilibrio .Estequiometría de un complejo ML . Cuando una molécula se irradia con radiación electromagnética de la zona IR. Cuando una molécula absorbe radiación IR.solventes: pueden absorber luz.Sensibilidad: equivalente a la pendiente de la curva de calibrado de ley lambert-beer. . el enlace de vibración absorbe energía radiante si la frecuencia de vibración es igual a la de la radiación.ancho slit Aplicaciones espectrometría de absorción molecular . Espectro IR: % transmitancia v/s número de onda (cm-1). interaccionar con analito y disminuir absorción. el error es mínimo.Determinación constante de acidez .pH . Intensidad se puede expresar como transmitância o absorbancia.Exactitud: 1-5% errores relativos.434 * ∆T ) / TlogT ∆T: característica del instrumento Es conveniente ajusta el intervalo óptimo de transmitancia en que el error de concentración es mínimo.

Hay más desviaciones a ley de beer.Bombilla nerst (oxidos de tierras raras): continua. Si está constituido por Si se llama termistor. Espectro: % T v/s n° de onda (cm-1) 2.Laser de CO2 Constan de um sólido interte que se calienta eléctricamente a 1500-2200K y se obtiene una radiación continua. En IR se puede acoplar al detector un procesador de Transformada de Fourier (FTIR): se sustituye el monocromador por un interferómetro (hace que todas las λ lleguen al mismo tiempo al detector) Aplicaciones: útil para identificar compuestos orgánicos e inorgánicos puros. Determinación de contaminantes en el aire. 04-20mm . 600-20. Detectores: energía de IR no es suficiente para producir una corriente medible cuando se utiliza un detector de fotones.000nm Detectores piroeléctricos: Cambia la polarización en función de la temperatura generando un potencial eléctrico producido por movimiento de cargas + y – a los extremos opuestos de la superficie a través de la migración. La absorción de fotones infrarrojos por detectores térmicos aumenta su temperatura cambiando sus propiedades.Instrumentación Fuentes: . 600-20. Se usa un material piroeléctrico como el sulfato de glicina.Lámpara tungsteno em IR cercano .termopar: la radiación incide sobre la unión de 2 metales (ej Bi y Sb) la cual genera una diferencia de potencial que varía en función de la temperatura. Así se mide la absorción UV-VIS. Instrumentación: . Se pueden determinar hidrocarburos totales por enlace C-H.000nm . ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN ATÓMICA Moléculas se atomizan hasta átomos o iones elementales en estado gaseoso. Analisis cuantitativo menos útil que rango uv-vis. Detecta variaciones del orden de 10-6K. la emisión o la fluorescencia de las especies. Detectores térmicos: .Globar nicrom (carburo de silício): continua. 1-40 mm .Filamento de wolframio .bolómetro: tipo de termómetro de Pt o Ni en los cuales cambia la resistencia en función de un pequeño cambio de temperatura.

metal) . . Ionización: si hay exceso de energía se produce ionización además de atomización.ablación por arco o chispa (sólido conductor) . Iones interfieren.chisporroteo de descarga luminiscente (sólido conductor) Atomización de llama y electrotérmica requieren muestra líquida o en disolución.Métodos introducción de la muestra: sometida a un proceso de preparación en que pasa a disolución orgánica o acuosa: . Agregar otro elemento con potencial de ionización mayor.inserción directa (sólido. líquido. disolución) . Autoabsorción: desviaciones a concentraciones altas. A concentraciones bajas.ablación por laser (sólido. etc Sistema de lectura y procesamiento de la señal • Absorción atómica con llama (FAAS): Atomización: llama (cámara de aerosol. vapor en frío (Hg) Fuente: lámpara cátodo hueco Monocromador Detector: fototubos. Átomos absorben la radiación de átomos vecinos y no de la fuente de excitación. electrotérmico. buena sensibilidad y exactitud Desventajas: solo metales (otros elementos forman óxidos rápidamente). Análisis cuantitativo: A = KbC K: involucra eficiencia de la atomización y el paso al estado excitado (sensibilidad) b: paso a través de la llama C: concentración de átomos en la llama Se pueden analizar 67 elementos. generador hidruros.generación de hidruros (disolución de ciertos elementos) .nebulización ultrasónica (disolución) .vaporización electrotérmica (sólido. pequeña dependencia de la temperatura. polvo) . o HClO4. si no es solublel deben digerirse usando HNO3. tubos fotomultiplicadores.nebulización neumática (disolución o suspensión) . la muestra debe estar líquida y disponer de al menos 2-4 mL. gases de combustión: combustible y oxidante) Ventajas: mínimas interferencias espectrales. Atomizador: llama. análisis cuantitativo. Las muestras sólidas deben disolverse en solvente adecuado. H2SO4. Para concentrar los analitos suele recurrirse a extracción líquido-líquido.

• Atomización electrotérmica Se utiliza calentamiento por resistencia en lugar de por llama. LD menor. Atomizador típico: Horno de grafito: por el tubo pasa una corriente eléctrica que produce un calentamiento por resistencia. 3 fases: 1. Secado 50-200 °C 2. Calcinación 200-800°C 3. Atomización 2000-3000°C Muestras entre 5-50uL. Señal de salida: abs v/s ug/ml. Se deben utilizar patrones. • Atomización por generador de hidruros Reacción química que produce un producto volátil. Elementos como As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Te y Tb forman hidruros volátiles cuando reaccionan con NaBH4 en medio ácido. Un gas inerte transporta hidruros volátiles a una llama o tubo de observación de cuarzo calentado situado en la vía óptica. • Atomización en vapor frío Sólo para mercurio. Se trata muestra con ácido nítrico y sulfúrico (Hg2+) y luego reducción del mercurio con SnCl2. mercurio elemental conducido a tubote absorción en camino óptico largo. Elección método de atomización: depende principalmente de la concentración de analito. LD menor para atomización electrotérmica, gran sensibilidad. Atomización con llama mayor precisión, menos interferencias, mayor cantidad de muestra y menos experiencia por lo tanto se elige este cuando la concentración del analito es mayor al LD, sino se utiliza la atomización electrotérmica. Selección λ y amplitud de rendija: lámpara de cátodo hueco proporciona líneas de emisión que corresponden con el espectro de absorción del analito. La sensibilidad de una línea de absorción atómica se describe por su concentración carácterística (concentración del analito que proporciona un 99% de transmitancia) en general se elige la λ que proporciona mejor sensibilidad (y que absorba solo analito y no interferente) Interferencias de matriz: se produce por el cambio en la viscosidad y densidad de la muestra con respecto a las disoluciones estándares. Hay que igualar propiedades físicas de patrones y muestras: método de la adición de estándar. Si la composición de la matriz es conocida se pueden preparara patrones de matriz idéntica. Si el fondo se debe a un componente conocido de la matriz se puede agregar un exceso de él a todas las muestras. Interferencias espectrales: cuando la línea de absorción de un analito se superpone con la línea o banda de absorción de un interferente. Absorción y dispersión se corrigen analizando un blanco. Interferencias químicas: presencia de compuestos que forman productos estables con el analito. Se pueden añadir agentes protectores y liberadores. Ionización.

Estandarización método: ley de beer también se aplica pero en general no hay buena linealidad. Curvas se pueden adaptar usando ecuaciones cuadráticas y cúbicas. Lo mejor es hacer análisis cuantitativo con patrones externos, aunque las interferencias de matriz son frecuentes. A menudo se recurre al método de adición del patrón aunque tiene la limitación de que debe haber relación lineal entre absorbancia y concentración. Sensibilidad: depende de la composición de la llama y la posición. Se puede mejorar aspirando un patrón y ajustando las condiciones de funcionamiento. En atomización electrotérmica depende de las fases de secado y formación de cenizas. Para cada tipo de muestra han de establecerse la temperatura y tiempo utilizados en cada fase. Excelente selectividad. ESPECTROSCOPIA DE EMISIÓN (molecular) Relajación: analito pasa de estado de alta energía a baja energía, la liberación puede ser en forma de calor o radiación electromagnética. Fluorescencia: emisión de un fotón cuando el analito regresa a un estado de menor energía con el mismo espin que el estado de mayor energía Fosforescencia: emisión de un fotón cuando el analito regresa al estado de baja energía con espin contrario al estado de alta energía. Espectro de excitación: controlando la emisión en una λ fija y variando la λ de excitación. Permite seleccionar la mejor λ para análisis cuantitativos o cualitativos. Una molécula solo tiene 1 espectro de excitación, pero 2 de emisión (fluorescencia y fosforescencia). Instrumentación: Para fluorescencia: 2 diseños para medirla 1. Fluorímetro: las λ de excitación y emisión se seleccionan mediante filtros de absorción o interferencia. Fuente de excitación: lámpara de vapor de mercurio de baja presión que proporciona intensas líneas distribuidas por toda la región UV/VIS. 2. Espectrofluorímetros: utilizan selectores monocromáticos para λ de emisión y excitación. Fuente de excitación: lámpara de arco de Xe de alta presión con espectro de emisión continuo. Cubetas: similares a absorción óptica molecular. Ambos útiles para análisis cuantitativos, para obtener espectro de emisión o excitación solo puede usarse espectrofluorímetro.

Fosforescencia: se debe discriminar entre fosforescencia y fluorescencia. Esta última tiene menor tiempo de vida, se logra retrasando la medición entre la excitación y la medición de la emisión de fosforescencia. 2 hélices controlan esto. Aplicaciones cuantitativas de luminiscencia molecular: fluorescencia (en mayor medida que fosforescencia) utilizada para análisis cuantitativo directo o indirecto. Indirecto cuando analito no fluorescente y se hace reaccionar con reactivo para formar producto con propiedades fluorescentes. También se puede medir la disminución en la fluorescencia debida al analito. Analitos inorgánicos generalmente no tienen fluorescencia suficiente. Los orgánicos muchas veces contienen anillos aromáticos que suelen ser fluorescentes. Alta selectividad. Sensibilidad depende de: rendimiento cuántico, fuente de excitación, volumen muestra. ESPECTROSCOPÍA DE EMISIÓN ATÓMICA Emisión atómica: cuando un electrón de valencia pasa a un nivel de mayor energía a uno menor. Equipo similar al de absorción atómica. Atomización y excitación La misma fuente de energía térmica suele servir también como fuente de excitación Por llama o plasma Fuentes de llama: atomización y excitación con el mismo conjunto de nebulizador y cámara de aerosol utilizado en absorción atómica. Poca utilidad (mejor plasma) salvo para el análisis de metales alcalinos y ocasionalmente calcio. Estos elementos se excitan a temperaturas relativamente bajas y dan espectros sencillos y exentos de interferencias. Debido a la simplicidad fotómetros de filtros son suficientes para las determinaciones. Dependencia con temperatura de la llama. Fuentes de plasma: plasma: gas caliente y parcialmente ionizado con concentración abundante de cationes y electrones que lo convierten en conductor. Frecuentemente se emplea plasma de argón. Elevadas temperaturas se alcanzan por el calor de la resistencia desarrollado por el movimiento de electrones y iones de argón. 3 tipos: 1. Plasma de acoplamiento inductivo (ICP) 2. Plasma de corriente continua (DCP) 3. Plasma inducido por microondas (MIP) 1. Plasma de acoplamiento inductivo: antorcha: 3 tubos concéntricos de cuarzo a través de los cuales fluye corriente de argón. Ionización de argón se inicia por medio de una chispa proveniente de bobina tesla. Iones resultantes y sus electrones interaccionan con el campo magnético oscilante producido por bobina de inducción. Esto hace que iones y electrones se muevan en trayectorias circulares; calentamiento es consecuencia de la resistencia que presentan iones y electrones a este movimiento. - circular Ar por la antorcha - se aplica radiofrecuencia

la muestra atraviesa la antorcha Se puede hacer análisis multielemental: porque todos los analitos se excitan al mismo tiempo. Conversión de una fracción significativa de átomos en iones (generalmente +) 3. Etapas: 1. 1 y 2 igual que en espectroscopía atómica. 3 y 4 se hacen en espectrómetro de masas. O se puede usar un aparato de canales múltiples que permita controla de forma simultánea muchos analitos (red de difracción con 48-60 rendijas de salida separadas y detectores colocados en disposición semicircular alrededor de la red de difracción) Introducción de la muestra: mediante flujo de argón a través de tubo central de cuarzo. Desventajas: caro. Puede medir relaciones isotópicas atómicas.. Selección fuente de atomización y excitación: mejor plasma Selección λ: (harta interferencia por superposición). . Estandarización método: intensidad de emisión proporcional a la población del estado excitado de la que se origina la línea de emisión. Se utilizan nebulizadores (con corriente de argón) gotitas se introducen en plasma. deriva del instrumento del 5-10% por hora. Interferencias espectrales: más importantes son una fuente continua de emisión de fondo a partir de llama o plasma. forma más fácil es obtener espectro de emisión de la muestra y después buscar una línea de emisión del analito que proporcione señal intensa y que se encuentre separada de las demás líneas de emisión. ESPECTROSCOPIA DE DISPERSIÓN ESPECTROMETRÍA DE MASAS ATÓMICA Muy utilizada para identificar elementos presentes en muestras de materia y determinar sus concentraciones. Interferencias químicas: se disminuyen añadiendo agentes protectores. se hace insignificante a altura 10-30 mm por encima del centro.una chispa produce electrones libres en argón . donde se hacen las mediciones. espectros sencillos únicos y fácilmente interpretables. Puede programarse selector monocromático variable para que se mueva rápidamente entre λ. Atomización 2. liberadores y supresores de ionización. Ventajas: mejores LD. Separación de iones según masa/carga 4. Recuento del número de iones de cada tipo o medida de la corriente iónica producida cuando iones inciden en detector.se aceleran electrones en la antorcha causando más ionización .

capaces de proporcionar ganancias de corriente elevadas y tiempos de respuesta de nanosegundos.Canales multiplicadores de electrones: similar a fotomultiplicador. descarga luminiscente (GDMS). Elevada velocidad de barrido. plasma por inducción de microondas (MIPMS). Antorcha de ICP sirve como atomizador y ionizador. que están desfasados 180 grados. Cada dinodo se mantiene a un potencial más alto que el anterior. almacenada y registrada de alguna forma.cuadrupolar . plasma de corriente continua (DCPMS). Iones que alcanzan el detector tiene suficiente energía como para expulsar electrones desde la primera zona del dispositivo. Son robustos y fiables. microonda láser (LMMS). 3 tipos más corrientes . Se aplican a cada par de barras potenciales variables de corriente alterna de radiofrecuencia. fuente de chispa (SSMS).Copa de Faraday. Componentes requieren bajas presiones (salvo procesador). El detector convierte el haz de iones en una señal eléctrica que pueda ser procesada. su relación masa/carga y la magnitud de la señal de corriente alterna y continua. 4 barras paralelas que actúan como electrodos. Se obtienen espectros .de tiempo de vuelo .Distintos tipos de espectrometría de masas: plasma de acoplamiento inductivo (ICPMS). Se introduce muestra por nebulizador. Cátodo y los dinodos tienen superficies de Cu/Be de las que se emiten ráfagas de electrones cuando son alcanzados por los iones o electrones de alta energía. Analizador de masas cuadrupolar: más común. Iones producidos en la antorcha se introducen a través de interfase de vació diferencial unido a un espectrómetro de masas cuadrupolar.de doble enfoque Componentes de espectrómetro de masas Fuente de iones gaseosos Entrada Analizador de masas Detector iones Procesador La función del analizador de masas es análoga a la de un monocromador. Espectrómetro de masas: separa los inoes que se desplazan rápidamente según su relación carga/masa. Detectores: . alto grado de selectividad y su razonable buena precisión y exactitud lo han hecho muy importante para el análisis elemental. . La dispersión se realiza en función de la relación masa/carga de los iones del analito. Bandas opuestas se conectan elléctricamente. Espectrometría de masas con plasma de acoplamiento inductivo (ICPMS) Bajo limite de detección. El que un ión choque o no contra la barra depende de la velocidad del movimiento del ión a lo largo del eje z-y. ionización térmica(TIMS). ión secundario (SIMS).

sencillos que se utilizan para determinación cualitativa y cuantitativa (por curvas de calibrado en que se representa el cuociente entre el recuento de iones para el analito respecto del recuento para un patrón interno en función de la concentración). Análisis cuantitativos: el más utilizado emplea un conjunto de patrones de calibración para preparar curva e calibrado. Un patrón único en disolución acuosa adecuado si muestra problema esta lo suficientemente diluida (<2000ug/ml) de sólidos disueltos totales. Para concentraciones elevadas de elementos de matriz se intenta igualar los elementos presentes en la matriz de las muestras con los patrones. las inestabilidades y los efectos de matriz. Patrón interno (elemento ausente de las muestras y que tiene una masa atómica y un potencial de ionización próximo al de los analitos) para compensar la deriva del instrumento. .

CROMATOGRAFÍA Eficiencia cromatografía: Resolución: separacion de 2 picos cromatográficos ∆ t = tR2 – tR1 Factor de capacidad (k´) : Medida de la fuerza con que la FE retiene el analito K´= t´R/tm Factor de selectividad (α ) : Selectividad relativa de la FE para un par de analitos α = k´1/k´2 Al comenzar una separación cromatográfica el soluto ocupa una estrecha banda de anchura finita. A medida que el soluto atraviesa la columna la anchura de su banda va .

Difusión longitudinal: una contribución al ensanchamiento de la banda debida a la difusión del soluto desde las áreas de mayor concentración a las de menor concentración. Transferencia de masa: una contribución al ensanchamiento de la banda debida al tiempo necesario para que un soluto se desplace desde las fases móvil o estacionaria a la interfaz entre las dos fases. 3 y 4. . La eficacia de la columna proporciona una medida cuantitativa de la magnitud del ensanchamiento de banda. Así moléculas inyectadas al mismo tiempo se mueven con tiempos distintos. o platos. Factores que contribuyen al ensanchamiento de banda: (altura del plato se establece a partir de 4 contribuciones: 1. Plato teórico: medio cuantitativo para evaluar la eficacia de una columna y que consiste en tratar la columna como si estuviera compuesta de pequeñas zonas. 2.auementando. La eficacia de una columna mejora con el aumento del número de platos teóricos o con la disminución de la altura del plato. Difusión en remolino: moléculas en disolución que atraviesan una columna cromatográfica siguen remolinos distintos de longitud variada. en las que tiene lugar el reparto entre las fases móvil y estacionaria. Ecuación de Van Deemter: ecuación que demuestra el efecto de la velocidad de flujo de la fase móvil sobre la altura de un plato teórico (cuenta los 4 factores antes mencionados). Capacidad del pico: número máximo de solutos que pueden separarse en una columna dada.

(ej escualeno no polar. baja volatilidad. Debe ser químicamente inerte. acero. se puede aumentar polaridad cambiando sus grupos metilo) Problema común a fase estacionaria líquida: sangrado (tendencia de la fase estacionaria a eluir de la columna). polaridad adecuada.CROMATOGRAFIA DE GAS Cromatografía gas-líquido: Fase móvil: gas inerte (He. N2) Columna: empaquetada o capilar • Empaquetada: de vidrio. Ar. límites de temperatura disminuyen esto Separación mejor cuanto más fina es la película de fase estacionaria (para solutos muy volátiles hay que usar películas más gruesas) ELECCIÓN DE LA COLUMNA: • Polaridad: Las fases móviles no polar separan los compuestos basados principalmente en sus temperaturas de ebullición. Se llena co soporte sólido en forma de partículas (tierra datomeas) • capilar: FSOT: columna cubierta de sílice fundida recubierta con polímero protector WCOT: columna abierta de pared recubierta (fina capa de fase estacionaria que reviste pared interna de capilar) SCOT: columna abierta recubierta con soporte (sobre pared interna existe fina capa de sorte sólido revestido por fase estacionaria líquida) Fase estacionaria: depende de lo que se quiera separar. polidimetil siloxano ligeramente polar. térmicamente estable. Las fases de polaridad intermedia separan los compuestos de acuerdo a la temperatura de ebullición y a la interacción de los dipolos inducidos o a los puentes de hidrógeno. Da selectividad. polar apolar. cobre o aluminio. polietilenglicol polar. Las fases .

1 . Detectores: Detector Límite de Rango detección g lineal TCD 10-5-10-6 103-104 FID ECD NPD MSD 10-12 10-14 10-8-10-14 10-12 Comentarios Tratamiento analito No destructivo Destructivo No destructivo Destructivo Destructivo Detector universal 6 7 10 -10 Detector universal 2 3 10 -10 Detector selectivo 5 7 10 -10 Detector Selectivo N.1 µ m: son ideales para compuestos de alto peso molecular y que eluyen sobre los 300 oC. solventes y compuestos de temperatura de ebullición cercana a la ambiente. Ventajas: universal (señal para cualquier analito). Por regla general debería usarse film delgados para compuestos con temperaturas de ebullición altas y film mas gruesos para compuestos que eluyen rápidamente. Inyector: Con divisor: solo entra pequeña parte de la muestra a la columna capilar (0. la estabilidad térmica disminuye. 0. Espesor del film. 0.• • • • • • • • móviles polares y altamente polares retienen los compuestos polares debido a la interacción dipolo-dipolo entre los grupos funcionales de la muestra y de la fase estacionaria. tiempos de retención muy largos para solutos con mayor punto de ebullición.25 . se aumenta la temperatura).P Según tipo Detector detector universal TCD: detector de conductividad térmica (helio como fase móvil). De esta forma.1-1%) Sin divisor: permite paso de más muestra (columna empaquetada) En columna: para muestras termolábiles Control de temperatura: columna se encuentra en horno con termostato. los compuestos se produce interacción con la fase estacionaria y se retarda la elución. 3 -5 µ m: gases.1. su respuesta a las concentraciones de soluto es lineal en .5 µ m: muestras que eluyen entre 100 a 200 oC. favoreciendo interacción de solutos con fase estacionaria (problema. se soluciona con hornos de temperatura regulable. ligeramente por debajo del punto de ebullición más bajo de los solutos. Generalmente. triglicéridos. ceras).5 µ m: muestras que eluyen sobre los 300 oC (esteroides. Estabilidad térmica de columnas Polares y Apolares. a medida que la polaridad de una columna aumenta. a medida que separación progresa. Separación isotérmica: T constate.0.

MSD: espectro de masas. respuesta lineal. Igual el volumen puede diferir en 5% o más. ECD: detector de captura de electrones: fase móvil N2. Desventajas: peores LD (imposibilita la utilización en columnas capilares debido al pequeño tamaño de muestras) FID: detector de ionización de llama. Para trabajos en los que se require de gran exactitud y precisión se efectúan usando un patrón interno (corrige variaciones entre una inyección y otra). que es directamente proporcional a la cantidad de analito inyectado. Curvas de calibración suelen hacerse analizando una serie de patrones externos y representando la señal del detector en función de concentraciones conocidas.un amplio rango. alcoholes e hidrocarburos. . Altura fácil de medir pero utilidad limitada por la relación inversa ente altura y anchura del pico. Desventajas: muestra se destruye. detector para muestras ambientales y acuosas. bajo ruido. NPD: ionización de llama alcalina: responde a compuestos que contienen nitrógeno o fósforo. que un sistema sensible a concentración. Selectivo para solutos con grupos halógenos o nitro. Aplicaciones cuantitativas: la altura o área del pico cromatográfico permiten determinar su concentración. El espectro de masas proporciona información cualitativa que permite identificar el analito. No producen señal los grupos carbonilo ni carboxilo (ni alcohol. Insensible para aminas. Una mejor opción: área bajo el pico. Mientras volumen inyectado sea igula en patrones y muestras la curva de calibración proporcionará resultados exactos y precisos. Ventajas: LD. halógeno y amina). Solutos Que eluyen pasan directamente a la cámara de ionización del espectrómetro de masas. El detector responde al número de átomos de carbono que entra en el detector por unidad de tiempo por ello es más un detector sensible a la masa. Número de iones que se produce es relativamente roporcional al número de átomos de carbono reducidos en la llama. Importante para detección de contaminantes clorados. Excelente LD pero respuesta lineal abarca solo 2 órdenes de magnitud. no destructivo.

El índice de retención para un alcano normal es igual a 100 veces el número de átomos de carbono del compuesto independiente del relleno de la columna. Por ejemplo hacer una adición de patrón a la muestra añadiendo una alícuota del presunto analito y buscando un aumento en la altura del pico. la temperatura. 300. También se pueden usar tablas con tiempos de retención de patrones pero está limitado porque las condiciones nunca son iguales. 400. 200. 500 etc. Solución: Indice de retención de Kovat: método para normalizar los tiempos de retención de un soluto con los de alcanos normales.Aplicaciones cualitativas: cuando se usa como detector un IR-TF o un espectrómetro de masas la información espectral disponible se emplea para identificar solutos individuales. flujos. Con los detectores convencionales no espectroscópicos hay que recurrir a oros métodos. etc./log(t´Rz+1/t´Rz) α zi = t´Ri/t´Rz . • Índice de retención de Kovats Es una relación lineal-logarítmica entre el volumen de elución y el número de carbonos. El índice de retención para otros tipos de compuestos se define por la ecuación: I = 100z + 100 log (t´Ri/t´Rz). El índice de retención para los compuestos que no son alcanos normales varía según las condiciones cromatográficas. El índice de Kovats I definido para todos los n-alcanos en cualquier conjunto de condiciones y para cualquier columna es: • • • • I C2H2z+2 = 100 z Los valores del índice para los alcanos son 100.

.6mm y longitudes entre 30-300mm. altas presiones de salida. Controlador de gradiente • Bomba Inyector Fases móviles Columna Detector Con objeto de alcanzar un caudal de eluyente razonable con rellenos de tamaño de partícula entre 2 y 10 um se requieren presiones de algunos cientos de kg-fuerza por centímetro cuadrado. Control y reproducibilidad del caudal mejor del 0.00060. Se empaquetan con partículas de sílice poroso. el intercambio de iones y la exclusión por tamaño. En HPLC: una muestra líquida o una muestra sólida disuelta en un disolvente adecuado se hacen pasar por una columna cromatográfica junto con una fase móvil líquida. Como consecuencia de estas elevadas presiones se requiere un equipo más sofisticado. Bombas recíprocas: son las que se usan en un 90%. Flujo libre de pulsaciones 3.CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN De las técnicas más utilizadas (no tiene la limitación de que las muestras sean térmicamente estables y fáciles de volatilizar como en cromatografía de gases). y las interacciones entre las fases soluto y móvil.1 a 10 ml/min 4. Columnas: más utilizadas de acero inoxidable con diametro interno de 2. Intervalo de caudales de 0. Dos válvulas que se abren y cierran alternativamente. Requisitos para un sistema de bombeo: 1. el reparto liquido-liquido. componentes resistentes a la corrosión (acero inox o teflón).000 platos teóricos. fácil adaptación a la elución con gradiente y sus caudales constantes. Generaciones de presiones por encima de 6. tales como la adsorción liquido.000 psi 2. El disolvente está en contacto directo con el pistón.1-4. controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia fuera de un cilindro.5% relativo 5. Disolvente es impelido por el movimiento de vaivén de un pistón accionado por un motor de arrastre. Desventaja: producen flujo pulsado que debe amortiguarse. Ventajas: pequeño volumen interno.sólido. La separación se efectúa gracias a las interacciones de las fases soluble y estacionaria. 40.

Detectores HPLC: . acetonitrilo. y las que no hayan reaccionado se cubren con Si(CH3)Cl.fase inversa: soluto más polar eluye primero. Se introduce muestra en interior con jeringa (lo que sobra a desagüe). Para mejorar la separación también se puede modificar pH.en fase normal: soluto menos polar eluye primero. C18) fase móvil polar (mas habitual) Sustrato de sílice se hidroliza en soluciones básicas por lo tanto pH de fase móvil debe ser menor a 7. Se usa un bucle de inyección. metanol.5. Propiedades de fase estacionaria depende del grupo alquilo R del organosilano. El uso de una fase móvil menos polar alargará los tiempos de retención (mejora separación si una separación es mala pq los solutos eluyen muy rápido) . Hay que desgasificar solventes de fase móvil con bomba de vacío o purga con gas inerte como el He. Partículas capaces de ocluir la columna deben ser filtradas. Disolvente se mueve por las bombas mencionadas antes. Si se aumenta polaridad de fase móvil se prolonga el tiempo de retención. Elección de la fase móvil: útil el índice de polaridad. THF se usan en disolventes para cambiar tiempo de elución) Elución isocrática: uso de fase móvil cuya composición permanece constante durante la separación Elución en grandiente: cambio de la composición de la fase móvil a lo largo del tiempo (para esto hay varios depósitos de fase móvil). Una vez cargada se gira el inyector. Se une mediante enlaces covalentes a las partículas de sílice (reacción con organoclorosilano. Mezclando 2 o varias fases móviles puede obtenerse una polaridad intermedia. En posición de carga el bucle está separado de la fase móvil y abierto a la atmósfera. Cromatografía de fase normal: fase estacionaria polar y fase móvil no polar Cromatografía de fase inversa: fase estacionaria no polar (C8. variar uno o más de los disolventes de la fase móvil también (ejemplo agua.Guarda columna: para proteger columna del matrial que la ocluya o solutos que se forman irreversiblemente a la fase estacionaria. la fase móvil pasa a través del bucle y arrastra a la muestra a través de la columna. Fases móviles: el orden de elución de solutos depende de la polaridad. Fases estacionarias: (liq-liq) película líquida que reviste material empaquetado. . Si R es polar fase estacionaria será polar. Introducción muestra: imposible inyectar la muestra como en GC por las altas presiones.

no son tan sensibles. EVALUACION: .1000 Electroquímico (amperométrico) 0.0.001 . Detectores de fluorescencia: semejantes a fluorómetros y espectrofluorímetros. son fiables y no dependen del caudal. Detector de arreglo de diodos: registran la totalidad del espectro proporcionando un cromatograma tridimensional que muestra absorbancia en función de λ y tiempo de elución.1 .01 . La fluorescencia se detecta por detector fotoeléctrico colocado perpendicular respecto al haz de excitación. Los más sofisticados consisten en fuente de radiación de xenón y emplean monocromador en red para aislar la radiación fluorescente. pero son muy sensibles a cambios de temperatura. estructural que puede ayudar a identificar el analito.Detector LD Ultravioleta 0.5 . Cromatorama: absorbancia en función de tiempo de elución. Buena sensibilidad porque no todos los compuestos son fluorescentes. Los detectores más sencillos utilizan fuente de excitación de mercurio y 1 o más filtros para la radiación emitida.01 Conductividad 0. más fácil que GC ya que inyección se hace con bucle de inyección de volumen fijo así las variaciones en cantidad de muestra se reducen al mínimo y se pueden utilizar patrones externos y curva de calibración normal. El sistema más simple emplea emisión a 254 nm de una lámpara de mercurio y detección de una sola λ.1 . Proporciona información cualitativa. Detector por espectrometría de masas: problema: enorme contraste entre los volúmenes relativamente grandes de disolvente de cromatografía y los requerimientos de vacío de la espectrometría de masas. LD: 100pg-1ng de analito inyectado (mejor fluorescencia) Limitación: fase móvil no debe absorber a λ elegida. Detectores de índice de refracción: disolvente en su camino hacia columna pasa a través de una mitad de la cubeta y el eluyente de la columna pasa por la otra mitad.1 Espectrofotometría de masa 0. Para resolver esto se han desarrollado varias interfases. Los dos compartimientos separados por una placa de vidrio montada en ángulo tal que si las 2 disoluciones difieren en índice de refracción se produce una desviación del haz incidente.1 Infrarrojo de transformada de Fourier 1000 ¿útil con gradiente? si no no si no si si Detector UV/VIS: el más utilizado porque muchos solutos absorben dicha radiación. Responden a casi todos los solutos (universal).1 Fluorescencia 0.1 Indice de refracción 100 . El desplazamiento del haz con respecto a superficie fotosensible del detector provoca señal la cual una vez amplificada y registrada proporciona el cromatograma. También se utiliza lámpara de deuterio y un monocromador para mediciones a λ variable. Aplicaciones cuantitativas: cálculos.

isooctano. cloruro de metileno). sensibilidad. Ofrece ventaja (vs cromatografía liq-liq) solo para análisis de isómeros.HPLC no se limita a analitos volátiles. que forman en laces de coordinación con los metales. sales insolubles de heteropoliácidos. sales insolubles de metales polivalentes.Las diferencias entre cromatografía gaseosa y HPLC son escasas en cuanto a escala de operación. Regeneración columna: iones unidos a grupos funcionales de fase estacionaria se pueden eluir por compuestos que compitan (ác o bases que regeneren el H)l Intercambiadores iónicos inorgánicos: . carboxílico –COOH . 3 respectivamente) * resinas quelantes: el gruop funcional es el quelante o complejante. La cromatografía líquida puede usarse para una gama mayor de compuestos sin embargo los detectores más utilizados (UV. sulfúrico –SO3H . Los contraiones de estas cargas fijas son móviles y pueden ser reemplazados por iones que compiten por unión. sílice o aluminio. 4 tipos de resinas: . polar). CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IONICO: Fase estacionaria: resina polimerizada mediante enlaces cruzados. . precisión. fuerte): grf ác. arcillas minerales y feldespatos . . Son caras y reaccionan lentamente.la precisión de HPLC es mejor gracias al bucle de inyección .Sintéticos: óxidos metales hidratados. O. se pueden analizar más compuestos que en GC. P. de fluorescencia y electroquímicos) no son tan universales como los detectores de ionización de llama utilizados en GC. NR2 (1. zeolitas sintéticas Intercambiadores iónicos orgánicos: . Fase móvil suele ser disolvente no polar o moderadamente polar (hexano. selectividad.resinas aniónicas (base fuerte): grf sal de amonio cuaternaria R4N+ .resinas aniónicas (base débil): grf -NH2. Muestran selectividad por iones metálicos.resinas catiónicas (ác. pero sólo para analitos volátiles o que puedan hacerse volátiles por derivación adecuada. habitualmente poliestireno con enlaces cruzados de divinilbenceno unidos covalentemente a grupos funcionales iónicos. tiempo y costo. débil): grf AC. 2. exactitud. -NHR. Los átomos más frecuentes son S.Las columnas capilares de GC tienen más platos teóricos lo que proporciona mayor poder de resolución para matrices complejas. sales complejas basadas en hexanofierratos.volúmenes de inyección suelen ser significativamente mayores en HPLC que en CG dada la mayor capacidad de las columnas de HPLC . La GC con columnas capilares proporciona rápidas separaciones con una resolución excelente. Cromatografía de adsorción líquido-sólido: fase estacionaria es un adsorbente sólido (empaquetado de columna sirve de fase estacionaria.resinas catiónicas (ac.Naturales: aluminosilicatos como zeolitas. N.

Las resinas de intercambio iónico se introducen en columnas de HPLC como perlas de polímero poroso o recubriendo con ellas las partículas de sílice porosa. Para disminuir al mínimo la contribución de la fase móvil a la conductividad. todos los solutos de mayor tamaño eluyen juntos Entre el límite de inclusión y el de exclusión. La mayoría basada en la estructura estierno-divinilbenceno por su buena resistencia química.Naturales: celulosa. Son los más habituales en aplicaciones de intercambio iónico en la industrial.. Si los iones del soluto absorben radiación UV/VIS podrá utilizarse un detector uv-vis. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSION POR TAMAÑO Base de la separación es la capacidad del soluto de penetrar en los poros del empaquetamiento de la columna. Es posible realizar elusiones en gradiente en que la fuerza iónica o el pH de la fase móvil cambian con el tiempo. azúcares. todos los solutos de menor tamaño eluyen juntos. La selectividad depende en cierta medida de si la resina tiene un lugar de intercambio fuerte o débil y de la magnitud de los enlaces cruzados Fase móvil: suele ser un tampón acuoso cuyo pH y composición iónica determinan el tiempo de retención del soluto. quitosano. física. etc. quitina. muestras clínicas. Util para análisis de: proteínas. Sin embargo la elevada concentración de iones de la fase móvil es un problema porque los iones de esta fase son los dominantes en la conductividad. . productos farmacéuticos. Límite de inclusión: soluto más pequeño que puede separarse de otros solutos. estabilidad en todo el rango de pH y temperatura. agarosa . Límite de exclusión: soluto más grande que puede separarse de otros solutos. Por ejemplo si la fase móvil es HCl acuoso la columna supresora tiene resina de intercambio aniónico. nucleótidos. Para esto se desactivan las partículas de sílice y las resinas de polímeros se sintetizan de forma que no posean lugares de intercambio. entre la columna analítica y el detector se coloca una columna supresora de iones que elimina selectivamente los iones electrolitos de la fase móvil sin eliminar los iones del soluto. cada soluto pasa en el espacio poroso en un cierto tiempo. que es proporcional a su tamaño.Sintéticas: matriz polimérica reticulada por la acción de un agente entrecruzante y derivatizada con grupos inorgánicos que actúan como grupos funcionales. aminoácidos. dextran. En instrumentos de HPLC se puede sustituir columna por una de intercambio iónico. Se exige que la exclusión por tamaño sea la única interacción entre soluto y fase estacionaria. Las que no absorben pueden detectarse indirectamente cuando la fase móvil tiene especies que absorben: se mide la reducción de la absorbancia cuando el soluto pasa por el detector. El detector más utilizado mide la conductividad de la fase móvil a medida que eluye de la columna.

baja inflamabilidad. • • • • Viscosidad: similar a la de los gases: mejor difusión (se mueven por columnas sin necesidad de aplicar presión como en HPLC) Baja tensión superficial: penetrabilidad Densidad: similar a líquido: buenas propiedades disolventes Alta difusividad: mayor transporte de masa Por lo tanto fase móvil se comporta más como fase líquida de HPLC que como la gaseosa de CG. fácil eliminación desde solutos. no absorbe UV. bajo costo. aunque no tan buenos como GC. no contamina. Fase móvil más utilizada: CO2 por: Tc= 31°C Pc= 72. este efecto es una consecuencia del aumento de la densidad de la fase móvil . Instrumentos: similar a HPLC o CG. La única adición importante ES um limitador de presión para mantener la presión crítica. baja reactividad. Presión: tiene un marcado efecto en el factor de capacidad k’. La adición de un modificador orgánico (ej metanol) mejora la fuerza de elución de la fase móvil. Las elusiones en gradiente se logran cambiando la presión a lo largo del tiempo. En HPLC se puede sustituir la columna por una de exclusión por tamaño. En estas condiciones la fase móvil no es ni gaseosa ni líquida sino que está constituida por un fluido supercrítico de propiedades intermedias entre la de los gases y líquidos.9 atm (1071 psi) Baja toxicidad. no corrosivo. El tiempo de análisis y la resolución. suelen ser mejores que los obtenidos con HPLC convencional.Las mezclas que contienen una amplia gama de PM pueden separarse reuniendo varias columnas en serie. Aplicación en determinación de PM: las curvas de calibración (usando proteínas de PM conocido) del logPM vs volumen de retención se establecen entre el límite de inclusión y el de exclusión. Es un buen disolvente para compuestos orgánicos no polares y menos útil para polares. no tiene olor. El detector más utilizado para obtener cromatograma es el de radiación UV/VIS. Fase móvil: es un gas que está a una presión y temperatura que superan su punto crítico. CROMATOGRAFÍA DE FLUIDOS SUPERCRÍTICOS Útil para algunas muestras que no se pueden separar por GC ni HPLC. alta pureza.

Detectores: además de todos los detectores para HPLC se puede usar también el FID.Fase estacionaria: columnas capilares de sílice fundida y empacadas. productos alimenticios. etano.1 mm. donde a la salida el fluido supercrítico se expande y pasa a estado gaseoso y se puede mantener simultáneamente la presión al interior de la columna Aumento de la presión aumenta la velocidad de elución ya que aumenta la densidad del disolvente lo que permite mayor interacción analito-fase móvil y disminuye los tiempos de elución. amoníaco. inestabilidad con la temperatura (GC). Análisis de polímeros. pentano. THF.05-0. fármacos. dietiléter. diámetro interno. Es un tubo capilar de 2-10 cm de longitud y díametro interno 1/10 del de la columna. Reacciones para mejorar detección (p ej para usar detector de fluorescencia) Derivatización cromatografía de gases . diclorofluorometano y óxido nitroso. Se puede emplear en las diluciones una primera etapa isobárica para luego aumentar la presión lineal o asintóticamente hasta el final de la elución. Restrictor: para poder mantener por una parte la presión en el interior de la columna y por otra parte permitir la bajada de la resión a la salida para que el fluído supercrítico pase al estado gaseoso y pueda ser detectado correctamente el analito. DERIVATIZACIÓN EN CROMATOGRAFÍA (GC. Técnicas precolumna y post columna. HPLC) se convierte el analito en otro compuesto por reacciones con la fase estacionaria. para que sea más sensible con un determinado detector. Longitud 10-20m. ceras. Fase móvil: CO2. 0. combustibles fósiles. Horno termostático: para controlar con precisión la temperatura de la fase móvil.

Reacción de alquilación para formar éteres: ROH + Ag2O + MeI DMF> ROMe + 2AgI + H2O Acilación ROH + (CF3CO)2O Sililación ROH SiMe3 > piridina > ROCOCF3 ROSiMe3 MÉTODOS EXTRACCIÓN Y TRATAMIENTO DE MUESTRAS: • • • • • • • • Líquido-líquido Soxhlet Extracción en fase sólida Extracción con fluido supercrítico Extracción con solvente acelerada Microondas Baño ultrasónico Mezclador EXTRACCIÓN LIQ-LIQ Embudo de decantación Se usan 2 solventes inmiscibles para separar un analito desde una fase a otra. En el solvente acuoso se disuelve solutos polares e ionicos. La distribución de un analito entre dos fases es una condición de equilibrio descrita por la teoría de partición. . La reacción de derivatización tiene como objetivo principal modificar la molécula tratada para evitar la formación de puentes de hidrógeno. responsables de uniones intermoleculares.Los compuestos a analizar deben transformarse en otros que tengan un menor punto de ebullición y puedan transformarse en gases sin someterlos a una temperatura muy alta y causar su descomposición.

Gasto de energía.SOXHLET • • • • • • La muestra se coloca envuelta en un papel de filtro y se introduce en la columna de extracción (2) mientras que el solvente a extraer en el balón 1. Desventajas: Solventes caros y tóxicos. Es muy adecuado para extraer compuestos orgánicos desde matrices sólidas: extracción de pesticidas en suelo. Arriba se pone un refrigerante para evitar la evaporación del solvente (4) Se calienta el balón y el solvente llega a la base del refrigerante el cual lo condensa y cae al reservorio que contiene la muestra (2) El solvente se empieza a acumular en el reservorio para la muestra y luego que llega al nivel superior cae al balón (1) que contiene el solvente. etc. Ventajas: Técnica muy efectiva. normalmente se logra extracciones con 100 % de eficiencia. HPA en sedimentos. Este proceso se repite en el tiempo que dura la extracción que normalmente son horas. .

EXTRACCIÓN CON FLUIDO SUPERCRÍTICO El analito se pone en una celda. comercializada desde 1978. Para esta técnica existe. para concentrar. Además no se utiliza solventes orgánicos los cuales son de alto costo y toxicidad. El mecanismo es el mismo que para LC / HPLC. Se aplica una presión alta (sobre la presión crítica de la muestra y una temperatura alta (sobre la presión crítica) y este fluido pasa por la muestra disolviendo los analitos de acuerdo a las polaridades. la opción de discos. Metanol. Al salir del horno en el restrictor ocurre la despresurización y se recibe en un frasco colector (vacío. de acuerdo a la volatitilidad • Ventajas: Las extracciones son mas rápidas que con Soxhlet. Introducida en los 70s. Se utilizan para limpiar muestras con matrices complejas (clean up). Esto depende de la polaridad del solvente que se utilice para eluir. El liquido es pasado a través de una fase sólida la cual selectivamente remueve el analito (o la matriz). Se puede fijar el analito en la muestra o fijar las impurezas y eluir el analito. • Desventajas: Muchas veces las extracciones no son del 100 % • Se considera dentro de los métodos de “screening” . el analito es eluído con un solvente más fuerte. la cual se introduce en el horno. etc. con solvente o con baño frío. además de la variante en cartuchos. El solvente es normalmente CO2 y como este es muy apolar se agrega un co-solvente como por ej. que permite mayores flujos. automatizable y que facilita aún más la extracción.Extracción en fase sólida (SPE) Se utilizan jeringas que contienen una fase estacionaria y se hace pasar una fase móvil líquida.

Ventajas: R疳idez y menor cantidad de muestra y de 當idos para el ataque. La temperatura no es muy alta por lo que no hay descomposici de muestra ni del 當 ido necesario para el ataque. Se aplica la radiaci de microondas y los 當idos minerales se calientan r疳idamente disminuyendo el tiempo de reacci. . (m騁odo de screening) Reacci con microondas Se usa peque s cantidades de muestra y de solvente.ANALISIS CON SOLVENTE DE ACELERADA Se realiza una extracci poniendo en la matriz con un solvente a una temperatura y presi alta. Ventajas: Rapidez y menor gasto de solventes. Desventajas: Al disminuir la cantidad de muestra disminuye la concentraci del analito y se necesita un m騁odo de cuantificaci m疽 sensible. (no hay evaporaci de 駸tos) Desventajas: Aveces la efectividad est�bajo el 100 %. A mayor presi la temperatura de ebullici de los solventes aumenta y con ello la efectividad de la extracci.

Se emplea una fase acuosa y una fase orgánica no miscible. La vibraci a alta intensidad (20 kHz rang) permite la penetraci del solvente en la matriz solubilizando los analitos. .BAÑO ULTRASÓNICO Normalmente el ba ultrasico se emplea para extraer analitos desde muestras de suelos. Algunos pesticidas requieren extracciSoxhlet de 4-18 horas. El generador ultrasico produce una sel el馗 trica a una frecuencia determinada. EXTRACCIÓN CON SOLVENTES: Convencional: • • • Es un proceso por el cual se transfiere uno o más solutos de una fase a otra. La fase orgánica puede ser más densa o menos densa que la fase acuosa. lodos etc. Es mucho m疽 r疳ido que la extracci Soxhlet. mientras que el ba ultrasico requiere solo de 8 a 10 minutos. • Se emplea una fase acuosa y una fase orgánica no miscible. sedimentos. Por ej. generalmente entre dos líquidos inmiscibles entre si. generalmente entre dos líquidos inmiscibles entre si. Extractantes: • Es un proceso por el cual se transfiere uno o más solutos de una fase a otra.

compatible con el solvente orgánico extractante. Cs+ (C6H5)4B- Relación de distribución: A partir de las expresiones de K y KA K= [HA] [HA] 2 1 . • II. Por ejemplo. Por ejemplo GeCl4 2. etc. Ejemplo.• La fase orgánica puede ser más densa o menos densa que la fase acuosa. Aminas. Sustancias inorgánicas: Se debe reemplazar el agua de coordinación por otro ligante que forme una especie neutra. Sistemas de extracción. carbonilos. KA = [H +]2 [A-]2 [HA]2 Sustituyendo en la expresión de DC DC = [HA] 1 [HA] 2 + [A-]2 DC = = <[HA] K [HA] 1 1 1 + KA [HA] K [H +]2 K [H +]2 [H +]2 + KA demuestra la influencia del pH en el valor de Dc . Cd(morin)2 4. Métodos para formar especies extractables: 1. Coordinación simple. Formación de pares iónicos. Heteropoliácidos: El ión central es un complejo monoatómico. Ej. Quelación: Ejemplo. Cu(DDC)2. Sustancias orgánicas: Se extraen sin mayor transformación química. Al(Quinolina)3. alcoholes. H3PO4x12MoO3 3. •I.

Procesos frecuentes de la extracción Liq-Liq Especie a extraer Compuestos orgánicos poco polares Compuestos orgánicos ionizables Metales (quelatos) Complejos de asociación iónica Fundamento “Lo similar disuelve a lo similar” Debe de controlarse el pH Se requiere formar complejos neutros. Extracción de quelatos cupferrón oxina Extracción de pares iónicos *Se necesita formar iones muy voluminosos (complejos) a los que se debe de asociar un contra-ion. * El disolvente debe de poseer propiedades fuertemente solvatantes. Se requiere formar pares iónicos neutros. poco solubles en agua. .

Ejemplos: Fe 3+ HCl (6M) Fe Cl4 .+ H+ Ka = (H+)(A-) / (HA) El coeficiente de distribución D se define: D = (HA) total en fase 2 / (HA) total en fase 1 El coeficiente de reparto para las formas moleculares es: K = (HA)2 / (HA)1 Se supone que la forma iónica sólo está presente en la fase acuosa y que se reparte la forma molecular.(formación del ión) Especie extraída: HFeCl4 (extracción en metil-isobutil-cetona o éter dietílico) Determinados tipos de nitratos metálicos. Bi(III) y Fe(III)) Efecto del pH Sea el ácido débil HA cuyo equilibrio de disociación es: HA  A. A partir de K: D = (HA)2 / ( (HA)1 + (A-)1 ) K(HA)1 = (HA)2 D = K(HA)1 / ( (HA)1 + (A-)1 ) A partir de Ka: (A-)1 = Ka(HA)1 / (H+) y sustituyendo: D = K(H+) / Ka + (H+) Agentes quelantes: Sea un agente quelante HL que se disocia de acuerdo a: HL H+ + LKa = (H+)(L-) / (HL) La complejación viene dada por: . pueden ser extraidos de forma parecida ( U(VI).

Mn+ + nL- MLn β = (MLn) / (Mn+)(L-)n El coeficiente de distribución: D = (metal total)2 / (metal total)1 = (MLn)2 / (Mn+)1+)1 MÉTODOS ELECTROQUÍMICOS DE ANÁLISIS Electrodo de trabajo o indicador: electrodo cuyo potencial es sensible a la concentración del analito Contraelectrodo: segundo electrodo que completa el circuito en una célula de dos electrodos .

Potenciostato: dispositivo utilizado para controlar el potencial de una celda electroquímica. 4. Se necesita: a) Un electrodo de Referencia: Potencial conocido y cte → Insensible a la composición de las disoluciones. POTENCIOMETRÍA Se mide la diferencia de potencial en función de la concentración del analito. Existen electrodos de trabajo de distinto tipo útiles para distintos cationes o aniones. 3. . 5. Potenciometría: Se mide la diferencia de potencial en función de la concentración del analito (Ec. La respuesta del electrodo indicador es Nerstsiana. Voltamperometría: Se mide la corriente en función del potencial aplicado. Conductimetría: Se mide la resistencia de la disolución. Es una técnica electroanalítica con la que se puede determinar la concentración de una especie electroactiva en una disolución empleando un electrodo de referencia (un electrodo con un potencial constante con el tiempo y conocido) y un electrodo de trabajo (un electrodo sensible a la especie electroactiva).Electrodo de referencia: electrodo cuyo potencial permaece constante y frente al que pueden medirse otros electrodos Electrodo auxiliar: tercer electrodo que completa el circuito en una célula de tres electrodos Ley Ohm: declaración según la cual la corriente que pasa a través de un circuito es directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente proporcional a la resistencia de ese circuito (E=IR) Potenciómetro: dispositivo para medir el potencial de una célula electroquímica sin producir una corriente ni alterar la composición de dicha célula Galvanostato: dispositivo que se emplea para controlar la corriente de una célula electroquímica. Electrogravimetría: Se pesa un electrodo sobre el cual se ha depositado electroquímicamente el analito. Fundamento: Se mide el ∆ E que se establece entre dos electrodos (en ausencia de corriente). 6. Amperometría: Se mide la corriente en función de la concentración (i = KC). Coulombimetría: Se mide los coulombs necesarios para electrolizar el analito Q=it=nmF). Nerst) 2. 1.

059 0. por convención.000 V 2) El valor numérico del potencial de electrodo viene definido teóricamente por la ecuación de Nernst.059 [H + ]2 log K = E 0 − log n 2 [Zn 2+ ] ⋅ PH 2 Electrodos de referencia: • Potencial constante y reproducible • Potencial conocido • Insensible a la composición de la solución • Resistente • Fácil de usar Ejemplos: • Electrodo normal de hidrógeno • Electrodo de calomelanos • Electrodo de Ag/AgCl Consiste en un electrodo de Pt sumergido en una disolución en la que la actividad del ión hidrógeno es 1 y en la que se burbujea gas H2 a una presión de 1 atm. Potencial de electrodo 1) Definición: Potencial de una celda formada por el electrodo de trabajo.b) Un electrodo Indicador: Potencial dependiente de la composición de analito en la disolución. Pese a su importancia como electrodo de referencia fundamental con el que se miden y .Bajo esas condiciones el electrodo de hidrógeno recibe el nombre de electrodo estándar de hidrógeno y se le asigna. Para la reacción: Zn2+ + H2 ↔ Zn + 2H+ E = E0 − 0. actuando como cátodo y un electrodo de hidrógeno (de referencia) que actúa como ánodo .Potencial normal de electrodo (E0): Potencial de electrodo cuando las actividades de todos sus reactivos y productos son la unidad . un valor de potencial de 0. Un puente salino convencional conecta el electrodo de hidrógeno con la semicelda indicadora. El potencial estándar para la reacción es por definición 0V a todas las temperaturas.

Este movimiento de iones en el puente salino es el que completa el circuito eléctrico. evitando el paso de la corriente por la celda e impidiendo la medición del potencial.comparan todos los demás potenciales. Celdas electroquímicas: Se divide en 2 mitades. Se acepta por conveniencia que el electrodo de referencia es el ánodo. El potencial de un electrodo de calomelanos depende de la concentración de Cl-.utilizada en su preparación. Punte salino: comunicación entre 2 disoluciones que permite el movimiento de la corriente en forma de carga iónica. Ventaja es que puede usarse a temperaturas más altas. Los extremos del puente salino se fijan con vidrios porosos que permiten el desplazamiento libre de los iones entre las semiceldas y el puente salino. Un puente salino que contiene un electrodo inerte (ej KCl) conecta las dos semiceldas. (Se reduce el H+) Calomelanos: Hg2Cl2 (s) + 2 e 2 Hg (l) + 2 Cl- Par redox formada por Hg2Cl2 y Hg. cada una de ellas con un electrodo sumergido en una disolución que contiene iones. Ánodo: electrodo donde tiene lugar la oxidación (referencia) Cátodo: electrodo donde tiene lugar la reducción (indicador) La celda electroquímica potenciométrica se construye de tal forma que una de las semiceldas proporciona un potencial de referencia conocido y el potencial de la otra semicelda indica la concentración del analito. Se basa en par redox AgCl y Ag. . al tiempo que impiden el paso del contenido del puente salino a las semiceldas. de cuyas concentraciones depende el potencial del electrodo. El potencial también depende de la concentración de Cl. Esta separación es necesaria para evitar que se produzca una reacción redox espontánea sobre la superficie de uno de los electrodos. apenas se utiliza pues es difícil de preparar e incómodo de manejar. Por otro lado tiene mayor tendencia a reacciones con disoluciones para formar complejos insolubles de plata que pueden bloquear el puente salino entre el electrodo y la disolución.

0592xLog areducida /aoxidada Electrodos indicadores: Respuesta rápida y reproducible a los cambios de concentración de un analito.Primera especie (electrodos metálicos en los que el metal está en contacto con una disolución que contiene su ión) . El potencial del electrodo indicador es proporcional a la concentración del analito. Ecuación de Nernst: El potencial de una celda electroquímica potenciométrica viene dado por: Ecel= Ecat – Ean (E potenciales de reducción) Estos potenciales dependen de las concentraciones de las especies responsables de los potenciales del electrodo.membrana líquida . Ered = E0red – 0. Electrodos de membrana: -vidrio .membrana cristalina . según la ecuación de Nernst n Actividades se pueden reemplazar por concentraciones molares solo en el caso de soluciones diluidas.Metales inertes .Segunda especie electrodo de Ag (indicador de Cl-) (cuando un electrodo responde AL potencial de otro ión que está en equilibrio.El electrodo de referencia ideal sería el que proporcionara un potencial estable de forma que cualquier cambio de Ecel pudiera atribuirse al electrodo indicador y por tanto a un cambio en la concentración del analito. Electrodo de vidrio • Se mide la diferencia de potencial a través de una membrana de vidrio que separa una disolución de concentración desconocida de una disolución de referencia cuya [H+] es conocida .gases Electrodos indicadores metálicos: .

El diseño es también muy distinto.etc). . Si existe diferencia entre las concentraciones de analito a ambos lados de la membrana. Potencial de membrana: potencial que se desarrolla a través de una membrana conductora cuyas caras opuestas están en contacto con disoluciones de composición diferente. Históricamente el electrodo de pH fue el primero.pH-metro ESC electrodo de vidro alambre de plata HCl O. Uno de los lados de la membrana está en contacto con una disolución interna que contiene una concentración fija del analito. PCa. Emem debe ser 0 cuando la concentración del analito sea igual en ambos lados de la membrana.1 M saturado c/ AgCl agitador magnético Fina membrana de vidro (responsable dela respuesta del pH) Electrodos de membrana La generación de potencial es muy diferente al de los electrodos metálicos: los metálicos transfieren electrones y las membranas iones. Se denominan electrodos selectivos de iones (su potencial de membrana es función de la concentración de un ión dado en la solución). El potencial de membrana viene dado por una ecuación tipo nernst: Emem = Easim – RT/zF ln [A]int/[A]mues Z: carga del analito. Los potenciales de membrana se deben a una interacción química entre el analito y los lugares activos de la superficie de la membrana. mientras que el otro lado está en contacto con la muestra. La corriente pasa a través de la membrana gracias al movimiento del analito o de un ión que ya se encuentre presente en la matriz de la membrana. El término Easim se denomina potencial de asimetría representa el hecho de que el potencial de la membrana no suele ser igual a 0 en estas condiciones (soluciones idénticas a ambos lados y se observa potencial no igual a 0). la interacción del analito con ésta producirá un potencial de membrana.. Su respuesta se relaciona como función px (pH. Por lo que el potencial de membrana será proporcional a la concentración de todos los iones existentes en la disolución de muestra que sean capaces de establecer interacciones con los lugares activos de la membrana.

Clasificación: Las membranas pueden ser cristalinas y no cristalinas. genera un potencial eléctrico (de membrana EM). 6% CaO. El electrodo de referencia externo se incorpora dentro del dispositivo. Electrodo simple de pH. . 72 % SiO2. Las no cristalinas pueden ser de vidrio (electrodo de pH). La composición del vidrio fija selectivamente el tipo de ión a retener. Típicamente en el caso del electrodo de pH:22% Na2O. o líquidas (electrodo de calcio). Fundamento: Los iones H3O+ se fijan parcialmente sobre la pared externa e interna de la membrana de SiO2 y la diferencia de concentraciones. Electrodo combinado de pH.

Cs. La mayoría de los electrodos de pH de membrana de vidrio suelen presentarse en forma combinada que incluye un electrodo indicador y otro de referencia. K. Ag y Ti (diferente composición de la membrana). Sustituyendo el Na2O y CaO por Li2O y Bao se amplían los límites útiles de pH de los electrodos de membrana de vidrio hasta valores de pH superiores a 12. Los iones de hidrógeno de la disolución difunden hacia la membrana y. lo que simplifica mucho la medida de pH. Los electrodos de vidrio no deben dejarse secar para que no se destruya la capa hidratada de la membrana. También se fabrican electrodos de vidrio para el análisis de Li.el potencial de los electrodos de vidrio tipo corning obedecen a la ecuación Ecel= K + 0.059 log [H+] a lo largo de una gama de pH que varía desde alrededor de 0. La hidratación da lugar a la formación de lugares de carga negativa. . NH4. desplazan a éstos produciendo la selectividad de la membrana para el H+.Se hidratan aproximadamente los 10nm más externos de la membrana. que forman parte de la estructura de silicio de la membrana de vidrio. Rb. A valores superiores a 9 la membrana responde mejor a otros cationes como Na+ y K+.5 a 9. Los iones sodio capaces de moverse a través de la capa hidratada actúan como contraiones. el transporte de carga a través de la membrana depende de los iones Na+. como se unen con mayor fuerza al vidrio que los iones de Na.

A pH<1 → pHmedido> pHreal → Errores por exceso 5) Deshidratación del electrodo → Medidas no reproducibles Electrodo de membrana líquido: (se incorporan um agente quelante a uma membrana hidrófoba) Ejemplo el de calcio. Consiste en una membrana de plástico poroso saturada con di-(ndecil)-fosfato.Errores en electrodo de vidrio 1) Tampones de calibración estropeados → pH ≠ al indicado → Recta de calibrado errónea 2) Matriz de tampones de calibración ≠ de la muestra → Ej (potencial de unión líquida) ≠ → Recta de calibrado errónea 3) Error alcalino . La membrana se coloca en el extremo de un tubo cilíndrico no conductor y en contacto con dos reservorios. El reservorio interno contiene una disolución acuosa patrón de Ca2+ y el electrodo de referencia Ag/AgCl. El reservorio externo contiene di-(n-decil)fosfato en forma de di-n-octilfenil-fosfonato. que empapa la membrana porosa.Base: El E de la capa hidratada tb se debe a la [Na+]vidrio (en menor medida) no sólo a [H+] vidrio . .A pH<12 (depende del tipo de vidrio) → E(H+)>>E(Na+) pero a pH>12 → E(Na+) no es despreciable → Eind es > de lo que corresponde a la [H+]vidrio → pHmedido< pHreal → Errores por defecto 4) Error ácido .

se sella en extremo de un cilindro de plástico no conductor. en el que se introduce una disolución interna que contiene el analito y el electrodo de referencia. El potencial de membrana de la perla de Ag2S se desarrolla a causa de la diferencia de la posición de equilibrio de la reacción de solubilidad a ambos lados de la membrana. (c) complejación. Los iones Ag+ transportan la carga a través de la membrana. Electrodo enzimático: corresponde a la concentración de un sustrato al que se hace reaccionar con una enzima inmovilizada para producir un ión que pueda determinarse con un electrodo selectivo de iones. Es un método más exacto y preciso que la utilización de indicadores visuales. redox y de precipitación y en las valoraciones realizadas con disolventes acusoso y no acusoso. Las valoraciones potenciométrica ácido-base.Electrodo de membrana cristalino: Tienen una membrana formada por Sales inorgánicas policristalinas o de un solo cristal.Determinación del PE . Los electrodos se fabrican construyendo una fina perla de Ag2S o una mezcla de ésta y una segunda sal de plata u otro sulfuro metálico. Aplicaciones cuantitativas . Titulaciones potenciométricas .Tipos de valoraciones: (a) Precipitación.Definición: Valoraciones en las que el seguimiento de la reacción se hace por medidas potenciométricas. aunque también pueden usarse electrodos selectivos para el agente valorante o para el producto de la reacción. . Titulación potenciométrica Utilización de la medida de potencial de un electrodo indicador para determinar el punto de equivalencia de una titulación. (d) redox La determinación potenciométrica de los puntos de equivalencia es factible en las valoraciones ácido base. Para las redox se usan electrodos redox del tipo alambre de pt y un electrodo de referencia.Medidas de potencial: Tras cada adición hay que esperar a que se alcance el Eeq .Curva de valoración → Logarítmica . La perla de 1-2 mm de espesor. (b) ácido-base. de complejación y de precipitación suelen controlarse con electrodos de membrana selectivos para el analito. de complejación.

Se hace una adición de patrón añadiendo un pequeño volumen. por lo que podrá lograrse la estandarización con un solo patrón externo. resulta imposible acoplarla a la del patrón. dependiendo del pH previsto . uno de pH cercano a 7 y otro mucho más ácido o básico. 2. Para determinar la concentración del analito de una muestra es necesario estandarizar el electrodo. La ecuación de Nernst relaciona el potencial medido de la celda con la concentración del analito. Pero en realidad esta ecuación involucra actividades. Como es frecuente observar pequeñas desviaciones de la pendiente “nernstiana” ideal la estandarización suele hacerse utilizando 2 o más patrones externos. Por lo tanto una manera correcta de escribir la ecuación es: Ecel= K’ – 0. muhos métodos potenciométricos cuantitativos recurren a la adición de patrón. Si la respuesta del electrodo sigue la ecuación de Nernst sólo será necesario determinar la constante K. 1. la gráfica del potencial en relación con la concentración puede ser curva para las concentraciones más altas de analito. K’ comprende el coeficiente de actividad. Calibración: se calibran usando un tampón cuya composición se elige de forma que el pH establecido se encuentre lo más cerca posible del obtenido mediante la ecuación de actividad *. lo que interesa es determinar la concentración del analito. Vp. En la mayoría de los análisis cuantitativos. Siempre que Vp sea significativamente menor que Vx. de un patrón que contiene una concentración conocida de analito Cp. Cuando no se conoce la composición exacta de la matriz de la muestra como a menudo sucede. Medida del pH: Complicaciones. a la muestra y se vuelve a medir el potencial Ecels . Significado de pH = -log [H+] Sin embargo el pH de una disolución se define por la respuesta de un electrodo al ión H+ y por tanto es una medida de su actividad: * pH=-log(aH+) Como es lógico la composición de la matriz influye sobre el pH verdadero de una disolución. no dependiente del conocimiento de la composición exacta de la matriz de la muestra consiste en añadir una concentración elevada de un electrolito inerte a todas las muestras y patrones. En ausencia de interferentes. debido a los cambios de su coeficiente de actividad. Habitualmente los electrodos de pH se estandarizan usando dos tampones. podrá ignorarse el cambio de la matriz de la muestra y el coeficiente de actividad del analito permanecerá constante. Si la concentración de electrolito que se añade es suficiente. Una curva de calibración con curvatura permitirá determinar la concentración del analito siempre que la matriz del patrón se similar a la de la muestra. la curva de calibración del potencial en relación con la actividad es una línea recta. las diferencias entre la matriz de la muestra y la de los patrones perderá importancia y el coeficiente de actividad permanecerá esencialmente constante. Otra posibilidad. Sin embrago la respuesta del electrodo está en función de la actividad. Incertidumbre de la relación entre potencial y actividad 3.059/n log 1/[Mn+] M ión metálico. Sin embrago.La medición más habitual quizás sea la medición de pH de una disolución. La disolución de un electrolito inerte añadida a la muestra y a los patrones recibe el nombre de tampón de ajuste de fuerza iónica total. no concentraciones. En la celda de la muestra se pone una muestra de volumen Vx y concentración del analito Cx y se mide el potencial Ecelx. no su actividad. Analisis cuantitativo usando el método de adición de patron: debido a la dificultad para mantener una matriz constante en las muestras y patrone.

El electrodo de pH se sumerge en el primer tampón y se ajusta el control de estadarización o calibración hasta que el equipo de medida lee el pH correcto.Se puede medir la concentración de Ag+ con un segundo electrodo. Q = it Ejemplo: Titulación coulombimétrica de cloruros usando un electrodo de plata Reacción electroquímica: Ag (s) => Ag+ + eReacción química: Ag+ + Cl.de la muestra. COULOMBIMETRÍA Los métodos de análisis columbimétricos se basan en la electrolisis (separación de los elementos de un compuesto mediante electricidad) exhaustiva del analito. Se determina la cantidad de analito midiendo la corriente durante el tiempo necesario para que la reacción se complete. Es un método electroquímico basado en la oxidación o reducción cuantitativa de un analito. se introduce el electrodo en el segundo tampón y se ajusta el control pendiente o temperatura al pH del tampón. A continuación. -Se puede usar un indicador .=>AgCl (s) ¿Cómo sabemos cuando la reacción química se ha completado? .

2 minutos.0605 g O2 . consumido.6 C)(1 mol e-/96. Q = i.485 C)(1 mol O2/4 mol e-)(32.8 A para depositar cobre en el cátodo y O 2 en el ánodo.+ O2 + 4H+ Resolución.240 g Cu Cantidad de O2 : =(729.Q = It Q = carga requerida (coulombs = amp .t Q = (0.5g Cu/mol Cu) = 0.0g O2/mol O2) = 0. sec) I = corriente (amp.800 A)(15. Ejemplo: Se aplica una corriente constante de 0.2min) (60 sec/min) Q = 729. Ley de Faraday: corriente o carga que pasa en una reacción redox es proporcional a los moles de los reactivos y productos de esa reacción. etc.) t = tiempo (sec La relación entre carga y moles está dado por la constante de Faraday Faraday (F) = 96.=> Cu (s) 2H2O =>4e.485 Coulombs (C)/mole eO de otra forma Q = it = nmF n: número electrones transferidos por mol de analito M: moles de analito (1:1 Ag+/e-) Ag (s) => Ag+ + e- Con lo cual se obtiene el número de moles de analito generado.485 C)(1 mol Cu/2 mol e-)(63.sec) Cantidad de cobre: =(729.6 C (amp.6 C)(1 mol e-/96. Si la reacción duró 15. ¿Qué cantidad de gramos se forma de cada producto? reacciones: Cu2+ + 2e.

Tipos de métodos a) Amperostático (titulación coulombimétrica) b) Potenciostática Requisito fundamental 100% de eficiencia en corriente Titulaciones coulombimétricas Se titula el analito aplicando una corriente constante para generar el titulante electroquímicamente.La reacción debe ser rápida. .+ H2 El OH. c.Titulación de un ácido .Fácil de dosificar pequeñas cantidades de reactivo y mayor exactitud y precisión.error en la medida del tiempo .error en la medida de la corriente .) Titulaciones redox c) Fuentes de error 4+ Ce3+ => Ce + e. . .+ NH4+ + 2e.) Titulaciones de complejación . redox y complejacíón. (diferencia entre punto de equivalencia y punto final de titulación . H2O => 2H+ + ½ O2 + 2eEl H+ es el titulante generado electroq. cuantitativa y sin reacciones laterales.Corriente Similitud con el estándar . HgNH3Y2.es el titulante generado electroq.se puede automatizar completamente.utilización en reacciones ácido-base.=> Hg + 2NH3 + HY3.reacciones4+ secundarias (100 % eficiencia de corriente) Ce + Fe2+ => Ce3+ + Fe3+ .error de titulación. Titulación de una base .Tiempo y corriente son fácil de medir con exactitud. HY => H+ + Y4.Time Similitud con el volumne agregado 2H2O + 2e.=>2OH.variación de la corriente durante la electrólisis . precipitación. Comparación con la volumetría tradicional. b) Ventajas de la coulombimetría b.Se utiliza para titulantes inestables. que al medir 3pequeños volúmenes. Aplicaciones a) Tienen un pto de equivalencia observable a) Titulaciones ácido base .Se debe conocer estquiometría de la reacción.

2) Ventajas: .Puede ser utilizada para mas de 55 elementos 3) Desventajas .=> Cu (s) reacción inicial Cuando todo el Cu2+ es consumido ocurre otra reacción electroquímica.Es más específica que la amperostática (evita reacciones redox que pueden interferir) . a) En los sistemas de corriente constante. La corriente decrece con el tiempo .Es mas larga que la amperostática.) Se aplica un potencial constante para convertir por completo el analito en algún producto.=> H2 (g) Coulombimétria potenciostática 1.d) Cambio en el potencial durante la medición. Cu2+ + 2e. Por ejemplo generación de H2 2H+ + 2e. el potencial de la celda cambia cuando el analito es consumido.

8 DA/Vδ D = Coeficiente de difusión A = Area del electrodo V = volumen δ = espesor del film de la capa de difusion donde hay un gradiente de difusion VOLTAMPEROMETRÍA Y POLAROGRAFÍA Se aplica un potencial dependiente del tiempo a una celda electroquímica y se mide la corriente que pasa a través de ella como función de dicho potencial. Electrodos de trabajo • Mercurio: Goteante-Colgante-Film. mientras que los de referencia habituales son ECS o uno de Ag/AgCl. • Electrodos sólidos: Pt. como la coulombimetría. Au. En el electrodo de trabajo se aplica una señal de excitación que es un potencial dependiente del tiempo. La voltamperometría moderna utiliza un potenciostato de 3 electrodos. Ru. • Ventana electroquímica . La corriente medida es la que se establece entre los electrodos de trabajo y auxiliar. otencial que cambia en relación con el potencial fijo aplicado al electrodo de referencia. C vítreo. Cu etc. Rh. • La voltamperometría difiere de otras técnicas.It = Ioe-kt k = 25. Voltamperograma: equivalente del espectro en espectroscopía y proporciona información cuantitativa y cualitativa sobre las especies que intervienen en la reacción de oxidación o reducción. por lo tanto la cantidad de analito que sufre electrolisis es muy pequeña y laconcentración del analito en el seno de la disolución prácticamente no se modifica). • Se aplica una diferencia de potencial entre un electrodo de trabajo y un electrodo de referencia y se mide la corriente que circula. en que se caracteriza por tener un consumo mínimo del analito mientras que la coulombimetría prácticamente todo el analito pasa a otro estado (el área de la superficie del electrodo de trabajo es significativamente menor que el de los utilizados en coulombimetría. Este último suele ser un alambre de platino.

donde tiene lugar la reducción del disolvente o de otros componentes de la matriz de la disolución. Las corrientes anódicas se deben a reacciones de oxidación y tienen carga negativa. La corriente producida por la reducción del analito se llama corriente catódia y por convención se considera positiva.Tipico polarograma Cuando un analito se oxida en el electrodo de trabajo. las reacciones redox producen una corriente entre los electrodos de trabajo y auxiliar a la que se denomina corriente faradaica. su magnitud depende de la velocidad de la reacción de oxidación o reducción que tiene lugar en la superficie del electrodo. migración y convección Difusión: movimiento de un material como respuesta a un gradiente de concentración Convección: movimiento del material en respuesta a una fuerza mecánica. Existen3 métodos de transporten que influyen en la velocidad con que los reactantes y productos son transportados desde y hacia la superficie del electrodo: difusión. Existen 2 factores que determinan la velocidad de la reacción electroquímica: la velocidad a la que los reactantes y productos son transportados desde y hasta la superficie del electrodo y la velocidad a la que los electrones se desplazan entre el electrodo y los reactantes y productos existentes en la disolución. como la agitación de una disolución . se produce una corriente de electrones que atraviesa el circuito eléctrico externo hasta el electrodo auxiliar. La reducción de un analito en el electrodo de trabajo requiere una fuente de electrones capaz de generar una corriente que fluya desde el electrodo auxiliar hasta el cátodo. Aunque el flujo de la corriente faradaica depende del potencial aplicado en el electrodo de trabajo. En cualquier caso.

70 V E° de mercurio: se efectúa en una disolución no agitada. • Id = K x C El oxígeno interfiere porque es electroactivo Solución saturada en aire es ≈ 4 mM y se obtiene una corriente de difusión de ≈ 5  A + – O2 + 4 H + 4 e ¾ 2 H2O E° = +1. cada nueva gota de Hg que cae crece en una Se desgaza con N2 u Ar de alta pureza disolución composición es idéntica a la de la disolución total inicial. llamada corriente de difusión porque la difusión es la principal contribución al flujo de material electroactivo en este momento de la vida gota de Hg. • D es el coeficiente de difusión (cm2/s). ytes el tiempo de vida de la gota en segundos. Las oscilaciones de la corriente se deben al crecimiento de la gota de Hg. se relaciona con la concentración del analito mediante la ecuación de Ilkovic: Donde D es el coeficiente de difusión del analito en el medio (cm2/s). Como método de barrido lineal controlado por el transporte de masa por difusión/convección. que causa un cambio proporcional al tiempo del área del electrodo de trabajo. la respuesta corriente vs. m es la velocidad del flujo de mercurio a través del capilar (miligramos/segundos). potencial en un experimento de polarografía muestra las oscilaciones de corriente correspondientes a las gotas de mercurio que caen desde el capilar. Relación ente i y C Id(promedio) = 607 n D1/2 m2/3 t1/6 C Id(máxima) = 706 n D1/2 m2/3 t1/6 C t es el tiempo de goteo (segundos). la caída de las gotas de Hg que se mezclan con la disolución hace que la corriente obtenida sea limitante.Migración: movimiento de un catión o anión en respuesta al potencial aplicado. La polarografía es un tipo específico de medida que cae en la categoría general de voltamperometría de barrido lineal. potencial de un experimento polarográfico tiene la típica forma sigmoidal. Ecuación de Ilkovic. Una gráfica de la corriente vs. • C es la concentración del analito (Moles/mL) • I es la intensidad en Amperes. Por tanto.23 V Polarografía+ 2 e– ¾ en2O2 O2 + 2 H+ clásica H electrodo de goteo= +0. Si se conecta el máximo de corriente de cada gota resultaría una forma sigmoidea. La polarografía es una medida voltamperométrica cuya respuesta está determinada por el transporte combinado de masa difusión/convección.Nes el número de electrones transferidos por mol de analito.mes el flujo másico de Hg a través del capilar (mg/s). donde el potencial de electrodo se encuentra alterado en forma lineal desde el potencial inicial hasta el potencial final. Máximos polarográficos • Fenómeno de adsorción entre el electrodo cargado y el analito • • • • • • . yCes la concentración del analito en mol/cm3. Lo que hace a la polarografía diferente de otras medidas de voltamperometría lineal de barrido es que polarografía hace uso delelectrodo de gota de mercurio (DME). La corriente limitante (la meseta en el sigmoide).

etc. • Complejos • Oxyaniones. • Adición de estándar • Estándar interno o ión piloto. Ni. Zn. H2O2.• Se elimina agregando un agente surfactante como Tritón X-100 Celda con electrodos Analisis cuantitativo • iD ∝ c • Curva de calibrado. Carbonilos. SO32–. etc. Pb. e. BrO3–.g. • Moléculas inorgánicas e. Desventajas polarografía clásica • Límite de detección 10-4 a 10-5 M aprox. etc.g. • Límite de detección 10-4-10-5 M • Precisión 2-5% aprox Especies electroactivas: • Iones metálicos de transición: Cu. IO4–. NOx etc. Fe. Tl. • Compuestos orgánicos con grupos nitro-. SOx. C=N. O2. Cd. Polarografía de Tast .

• Corriente de difusión medida durante los últimos 20 ms. La corriente de carga decae durante los ultimos 20 ms. • Mas sensible que la polarografía convencional DC y la de Tast. Para ello se utiliza un martillo mecánico que despega la gota después de un intervalo de tiempo. • Mayor sensibilidad • Mayor resolución Polarografía clásica vs de pulso De acuerdo al programa de potencial aplicado se ha dado origen a las siguientes técnicas: Técnicas de barrido: Polarografía clásica Voltamperometría de barrido lineal (LSV).• La medición de la intensidad se realiza durante un período cercano al final de la vida de cada gota. Técnicas de pulso: Voltamperometría y polarografía de pulso diferencial (DPV–DPP). . Voltamperometría cíclica (CV). Se mejora sensibilidad y resolución Polarografía de pulso • Durante un tiempo muy corto se aplica un pulso de potencial durante el ultimo 1/4 de tiempo de vida de la gota. • La corriente se muestrea antes y cerca del final del pulso. Voltamperometría y polarografía de pulso normal (NPV-NPP). Técnicas de redisolución: Voltamperometría de redisolución de pulso diferencial (DPSV). Polarografía diferencial de pulso • Pulsos de 5-100 mV se superponen con la aplicación linear de potencial. Técnicas de onda cuadrada: Voltamperometría de onda cuadrada (SWV). • Pulsos sucesivos con incremento de E en función del tiempo.

1x10-8M Onda triangular Voltamperometría cíclica E Curva i-E E T ie m p o T ie m p o .Voltamperometría de redisolución de barrido lineal (LSSV). LD aprox. Polarografía o voltamperometría diferencial de pulso. Forma de la señal Pulso diferencial La i se muestrea 2 veces. 1x10-7M Onda cuadrada Voltamperometría o Polarografía de onda cuadrada LD aprox. Voltamperometría de onda cuadrada de redisolución anódica (SWASV) y catódica (SWCSV).

CV. SWAdV. etc. Depósito. SWSV. PDV.Resumen técnicas polarográficas Técnicas de stripping • • • • Técnicas en 2 etapas: a) acumulación. adsorción b) barrido. Sensibilidad: bajo ppb Redisolución anódica .

Cd. • Capacidad complejante. • Determinación de constantes de equilibrio. Voltamperometría cíclica ELECTROFORESIS Técnica de separación que se basa en la capacidad de un soluto para desplazarse en un medio conductor por influencia de un campo eléctrico. Mo(VI). etc. La separación es posible debido a que iones con diferente relación q/R migran a diferentes velocidades. Zn. Pb. Voltaje aplicado por unidad de longitud del medio de separación Medio de separación E ↑ v↑ conductor de la corriente eléctrica controla la carga eléctrica medio tamponado . Ni(II).Aplicaciones • Metales traza en matrices biológicas. Cr(III) y Cr(VI). ambientales y alimentos: Principalmente: Cu.

Cuando se aplica un campo eléctrico a este tubo. En general el tampón se mueve hacia el cátodo arrastrando a los analitos • La electroosmosis se produce porque las paredes del tubo capilar poseen carga eléctrica. los componentes de la muestra migran debido a 2 tipos de movilidades. la muestra se inyecta en una disolución tamponada retenida en el interior de un tubo capilar. η es la viscosidad del solvente tampón y r es el radio del analito). Vef : µ efdelsoluto x E µ ef = q/6Π η r (q es la carga del analito. Al aplicar campo eléctrico El resto de las cargas (+) se mueven hacia el polo (-) Se genera un flujo de tampón que arrastra todo lo que hay en el interior del capilar . Movilidad electroforética y Movilidad electroosmótica. Los cationes de la doble capa migran hacia el cátodo y como están solvatados arrastran disolución. Flujo electroosmótico se produce cuando la disolución tampón se mueve por el capilar en respuesta al campo eléctrico. formando una doble capa. aniones al ánodo y las neutras permanecen estacionarias). La movilidad electroforética es la respuesta del analito al campo eléctrico aplicado (cationes al cátodo. produciendo flujo electroosmótico.En la electroforésis capilar. A pH superior a 2 o 3 los grupos silanol (Si-OH) se ionizan formando silanatos atrayendo a los cationes del tampón en forma mas fuerte y más débil.

VENTAJAS electroforesis capilar electroforesis convencional MEJOR DISIPACIÓN DE CALOR ( ↑S /V ) et x in t POTENCIALES DE VARIAS DECENAS DE kV (E↑) TIEMPOS DE ANÁLISIS CORTOS DETECCIÓN EN CONTINUO AUTOMATIZACIÓN (sencillez. rapidez) Características electroforesis capilar RAPIDEZ ALTAS EFICACIAS PEQUEÑOS VOLÚMENES DE MUESTRA (nanolitros) AMPLIO RANGO DE APLICACIONES (Modos de EC) AUTOMATIZACIÓN DETECCIÓN EN LÍNEA (“on column”= en el propio capilar) .

DETECCIÓN EN LÍNEA (“on column”) Monocromador Rendija Haz de luz UV Fotodiodo Fuente de luz Capilar Lente Absorción UV-Vis Fluorescencia (no todos los compuestos fluorescen) Amperométrica (no se disipa la corriente residual) MS (problemas de interfase) ELECTROFORESIS CAPILAR ⇔ HPLC PROPIEDADES ELECTRICAS DEL ANALITO DIFERENTE DISTRIBUCION ENTRE FASES t Flujo Flujo t - Perfil de flujo plano (mayor eficacia) Diferentes mecanismos de separación Mayor rapidez Menor requerimiento de muestra Peor reproducibilidad en analisis cuantitativo Problemas a escala micropreparativa .

compuestos cargados y neutros. Alimentos: Cationes y aniones inorgánicos. Química Ambiental: pesticidas. iones inorgánicos. estabilidad. Biociencia: Péptidos. Determinación de pureza. . chequeo de productos finales. surfactantes. colorantes. Reacciones quirales. metales de transición. etc. carbohidratos. DNA. Estudios de especiación. aminoácidos. carbohidratos.- • • • • • Análisis Farmacéutico: Moléculas de baja masa molar. proteínas. ácidos orgánicos.

Alcohol. Sacarosa.Menor tiempo de ensayo .Amperométricos: Glucosa. Alcohol 3.Lectinas x Carbohidratos .Enzimas x Sustratos .Repetitividad Tipos y usos mas comercializados: 1. .Complementariedad de ácidos nucleicos.Potenciométricos: Glucosa. Lactato. Lactosa.Ópticos: BIAcore: Ag proteicos. Glicerol.Menor manipulación . Electroquímicos: .Anticuerpos x Antígenos .BIOSENSORES “Instrumentos analíticos que transforman procesos biológicos en señales eléctricas u ópticas y permiten su cuantificación” Utilizan la especificidad de los procesos biológicos: . Colesterol . Laminoácidos.Reutilización . Tiras colorimétricas 2. Ventajas: .

Aplicaciones in vivo: – Páncreas artificial – Corrección de niveles de metabolitos – Problemas : Miniaturización y Biocompatibilidad 5. 2. Consultas y Urgencias Hospitalarias: – Obvia análisis caros y lentos en laboratorios centrales – Acelera la diagnosis y el comienzo del tratamiento – Menor riesgo de deterioro de la muestra 3. Biosensores electroquímicos – Amperométricos: Determinan corrientes eléctricas asociadas con los electrones involucrados en procesos redox . Control de metabolitos críticos durante las operaciones quirúrgicas. Diagnóstico Doméstico: – Ensayos de Embarazos – Control de Glucosa en diabéticos 4.1. militares y medio ambientales: – Alimentación – Cosmética – Control de Fermentaciones – Controles de Calidad – Detección de Explosivos – Detección de gases nerviosos y/o toxinas biológicas – Control de polución. Tipos de biosensores 1. Aplicaciones Industriales.

Biosensores piezoeléctricos 4. Inmunosensores Material biolico + Analito Analito Respuesta unido biolica Respuesta Electr ica Respuest a electric a (M痊ima respuesta electrica posible) x (Concentraci del analito) (Constante de semisaturaci) + (Concentraci del analito) – – = .Potenciométricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones Conductimétricos: Determinan cambios en la conductancia asociados con cambios en el ambiente iónico de las soluciones 2. Biosensores ópticos – De onda envanescente – Resonancia de plasma superficial 5. Biosensores termométricos 3. Biosensores celulares 6.

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