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Prac 16 Cultivo Para E. Histolytica

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PRACTICA No.

16 MEDIO DE CULTIVO PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ENTAMOEBA HISTOLYTICA
Tipo de práctica: Individual OBJETIVOS:
1. Que el alumno aprenda a realizar el medio de cultivo LES (suero de huevo

de Locke) de Boeck y Drbohlav.
2. Observar las formas morfológicas de E. histolytica en un cultivo.

INTRODUCCION: La E. histolytica es un protozoo peteneciente a la familia Entamoebidae, orden amébida, clase lobosea, phyllum sacomastigophora, descubierta en 1875 por Lösch en las heces de un ruso que presentaba disentería grave, este parasito causante de la amebiasis que es una infección que se manifiesta a nivel intestinal y extraintestinal ya que es invasiva y recurrente, E. histolytica ocupa el primer lugar de los protozoos entéricos que atacan al hombre. E. histolytica presenta una morfología en su trofozoíto con un tamaño de 15 a 20 micras, con una movilidad activa en progresión, presenta pseudópodos grandes en forma de dedos, un núcleo que difícilmente se logra observar. Los primeros éxitos logrados para el cultivo de E. histolytica, los obtuvieron Boeck y Drbohlav en 1925, con su medio. Ellos han descrito dos variantes: LES (suero de huevo de Locke) y LEA (Albúmina de huevo de Locke) los cuales se diferencian en la composición del sobrenadante. Los medios de cultivo son de gran ayuda para realizar un diagnostico completo en las protozoos humanas aunque en la mayoría de laboratorios de Parasitología no se utilizan. MUESTRAS BIOLOGICAS REQUERIDAS: 1 Muestra de materia fecal

............2g Cloruro de magnesio MgCl2 ..... 0.0 ml Cloruro de sodio NaCl . 0..............................................4g  Suero humano estéril EQUIPO  Autoclave  Incubadora TECNICA: Medio de cultivo LES (suero de huevo de Locke) de Boeck y Drbohlav PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR LA SOLUCION DE LOCKE ..MATERIAL  1 matraz erlenmeyer  1 matraz aforado de 1000 ml  2 tubos de ensayo  2 vasos de precipitados  1 pipeta Pasteur con bulbo  3 aplicadores  4 huevos  5 perlas de vidrio REACTIVOS  Alcohol        Agua destilada ..0........... 1.2g Dextrosa ..................2g Bicarbonato de sodio ........................4g Cloruro de calcio anhidro....000..... 2.... 9 g Cloruro de potasio KCl ..... 0................

3. se limpian con alcohol.2 g de bicarbonato de sodio. Se colocan los tubos en un coagulador y se calienta a 70° C hasta que se solidifique. Se sacan los tubos y se esterilizan en autoclave a 15 lbs de presión. 2. durante 20 min. Se mezclan las dos soluciones 3.1. Se agregan 50 ml de solución de Locke y se agita enérgicamente 3. se rompen y se vacían en un matraz con perlas de vidrio 2. Proceso de Esterilización 1. Se coloca suficiente mezcla de huevo con Locke. Se prepara el sobrenadante con una mezcla de 8 partes de solución de Locke estéril son una parte de suero humano estéril e inactivado a 56°C durante 30 minutos.4 g de dextrosa 3.2.2. Se disuelven en 500 ml de agua destilada 1. de tal manera que se inclinen los tubos a 30° 4. Por separado se disuelven 2. 3.2 g de cloruro de calcio anhidro.4 g de cloruro de potasio 1. 0. Se agregan 2. Se lavan 4 huevos. 0.1.1. 9 g de cloruro de sodio 1. PROCEDIMIENTO PARA EL MEDIO DE CULTIVO 1.1. Se vacía la mezcla a un matraz aforado de 1000 ml y se afora hasta la marca. Recomendaciones: . 0.

1. OBSERVACIONES . Sembrado  El inoculo se hace de la muestra preferentemente donde haya moco. Si las heces son formadas la inoculación deberá hacerse con un aplicador de madera 2. Si son liquidas con una pipeta Pasteur 2. Se coloca el sobrenadante en cantidad suficiente para cubrir la parte inclinada. sangre o ambos. se filtra a través de una membrana. Se incuba durante 24 hrs para comprobar su esterilidad.En caso de que se dude de la esterilidad del suero. 1. Un gramo será suficiente para la inoculación RESULTADOS: Dibuje o pegue lo que observo en la práctica.

histolytica? El quiste tetranucleado 3. 48 y 72 horas. histolytica debe ser analizado? Se revisan microscópicamente a las 24. generalmente un cultivo positivo aparece a más tardar a las 48 horas.__________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ CONCLUSIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ CUESTIONARIO 1. tomando una gota del sedimento que se forma en el fondo del bisel para buscar trofozoítos. ¿ De acuerdo al control de esterilidad cuales son los factores a los que se debe de conservar el cultivo? Debe incubarse durante 24 horas a 37 °C 2. ¿Cuál es la fase infectante de E. . ¿ Durante que periodos de tiempo un cultivo de E.

C. El instructor proveerá envases adecuados previamente rotulados para dicho propósito. 2. el mismo tiene que estar recogido todo el tiempo que trabaje en el laboratorio. Gafas de Seguridad . Entre el ojo y el lente puede alojarse alguna sustancia nociva causando daño permanente a su visión. Desperdicios .Es indispensable que conozca donde están los equipos de seguridad del laboratorio. Tampoco puede utilizar los lentes de contacto. B. están estrictamente PROHIBIDO mientras usted esté en el área de los laboratorios y pasillos cercanos. Siempre que utilice cualquier sustancia química. NO se permite dejar al descubierto áreas considerables de su piel cuando utiliza pantalones. Bata de Laboratorio . Todo estudiante que tenga sandalias. no dudes en preguntar al instructor del laboratorio. comer o beber envuelve el acercar las manos a la boca. Ingerir cualquier tipo de alimento y fumar. Recuerde que fumar. así como también pueden reaccionar con algún compuesto volátil. La misma tiene que estar abrochada para que pueda proteger su ropa y su piel en caso de que alguna sustancia química o de organismos vivos se derrame sobre usted. Entre ellos puede encontrar: extintor de incendio.Se prohíbe descartar reactivos por los fregaderos.MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL A. ducha de seguridad y lavadero de cara y ojos. 4. Los espejuelos recetados no sustituirán las mismas. 3. chancletas o zapatos abiertos en la cual su piel queda expuesta. durante y después de terminar su práctica de laboratorio. De tener alguna duda de su localización o uso.Todo el tiempo que permanezca en el laboratorio. siendo ésta la manera más directa de intoxicarse con sustancias químicas o infecciosas. Manejo y Localización del Equipo de Seguridad . Materiales y Equipo de Uso Personal 1. debe utilizar bata de laboratorio. Vestimenta . debe manejar la misma en las campanas de extracción localizadas en el laboratorio. de esta manera se minimiza la posibilidad de que caiga sobre las personas si ocurre un accidente y evitará cualquier intoxicación con los gases o vapores de los químicos. faldas o blusas cortas. El calzado también está incluido con la vestimenta. frazada (manta) para sofocar llamas en la ropa.La vestimenta deberá ser apropiada para trabajar en el laboratorio. Antes. Cabello Largo .Durante todo el tiempo que esté llevando a cabo su ejercicio de laboratorio.Se recomienda que lave sus manos frecuentemente. FISICOS Y BIOLÓGICOS E. Los desperdicios biomédicos deben ser depositados en las bolsas rotuladas y . DISPOSICION DE DESECHOS QUIMICOS. Higiene . deberá tener sus gafas de seguridad adecuadas. no podrá hacer su experimento.Si tiene cabello largo.

cerrar el frasco y desechar a la basura común. 2. Editorial Méndez Editores. Segunda edición. 1998. 2003. Paz María y Cabrera Bravo Margarita. DAVID BOTERO MARCOS RESTREPO. Salazar Schettino. Parasitología Médica. De Haro Arteaga. Segunda edición. TERCERA EDICION. Editorial: Mac Graw Hill 2008. Medellín. Parasitosis Humana. El frasco que contiene materia fecal adicionarle solución de hipoclorito de sodio a 5000 ppm o cal. 3.destinadas para dicho propósito. en otro vaso se debe de colocar los aplicadores de madera durante unos 30 minutos aproximadamente. Diagnóstico morfológico de las parasitosis. Colocar en tres vasos desechables solución e hipoclorito de sodio a una concentración de 5000 ppm y en uno colocar los tubos y lavar muy bien con hipoclorito de sodio para quitarle los residuos de materia fecal. Marco Antonio Becerril. Colombia. BIBLIOGRAFIA 1. .

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