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Wilberth Cupul 2009. Tesis Maestria

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CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA Y MOLECULAR DE Paecilomyces fumosoroseus (WIZE) BROWN & SMITH Y SU PATOGENICIDAD EN ESTADIOS INMADUROS DE Bemisia tabaci (GENNADIUS).
CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA Y MOLECULAR DE Paecilomyces fumosoroseus (WIZE) BROWN & SMITH Y SU PATOGENICIDAD EN ESTADIOS INMADUROS DE Bemisia tabaci (GENNADIUS).

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El hongo entomopatógeno Paecilomyces fumosoroseus es de amplia

distribución geográfica y rango de hospederos, capaz de infectar insectos de

diversos ordenes y de todos los estados de desarrollo. Por lo que algunos

aislamientos de P. fumosoroseus son producidos comercialmente en algunos

países, principalmente para el manejo de la mosquitas blancas como Bemisia

tabaci y Trialeurodes vaporariorum en invernadero y campo abierto (Osborne y

Landa, 1992; Wraigth et al., 2000). Por lo tanto la correcta caracterización

genotípica y fenotípica de este microorganismo antes de su liberación en

programas de biocontrol es de suma importancia (Azevedo et al., 2000; Fargues

et al., 2002; Gauthier et al., 2007).

Con la finalidad de agrupar e identificar las especies y biotipos de hongos

entomopatógenos, se aplican las técnicas moleculares como los estudios

isoenzimáticos, análisis de polimorfismo en la longitud de fragmentos de

restricción (RFLP), análisis de polimorfismo en la longitud de fragmentos

amplificados (AFLP) y análisis de polimorfismo de ADN amplificado al azar

(RAPD) (Vargas, 2003).

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Los marcadores moleculares del tipo RAPD´s son una poderosa herramienta

para la identificación de especies o cepas, la estimación de la variabilidad

genética entre aislamientos y la construcción de dendrogramas a partir de

distancias calculadas (Welsh y McClelland 1990; Williams et al.1990). Este

método por medio de la huella genética es considerado de una alta sensibilidad

para la detección de la variabilidad entre individuos relacionados cercanamente

y menos en especie polimórficas. Los marcadores RAPD han sido usados

exitosamente para estimar la variabilidad genética intraspecifica e

interespecifica de los hongos entomopatógenos (Tigano-Milani et al. 1995).

De los numerosos estudios de diversidad genética en hongos

entomopatógenos, únicamente unos pocos ha sido reportados en lo que

concierne a P. fumosoroseus. Tigano-Milani et al. (1995) Al estudiar la

variabilidad genética de 15 aislamientos de P. fumosoroseus, uno de

Paecilomyces lilacinus y un grupo de 9 Paecilomyces sp (sin especificación) por

RAPD-PCR empleando primers arbitrarios, encontraron que la mayoría de los

aislamientos de P. fumosoroseus y Paecilomyces spp. fueron agrupados en tres

grupos genéticos con un porcentaje por arriba del 56 % de similaridad interna.

Arbitrariamente dos de los tres grupos genéticos fueron estrechamente

relacionados con el tercer grupo (76% de similaridad) y completamente

diferentes del segundo grupo (únicamente 14% de similaridad), en conclusión

los grupos genéticos no se relacionaron entre si a pesar de ser aislados del

mismo hospedero y región geografía.

En otro estudio de variación molecular realizado con ADN ribosomal mediante

RAPD-PCR de 7 aislamientos de P. fumosoroseus, 5 de P. tenuipes y 5

Paecilomyces spp. Azevedo et al., (2000) encontraron una extensa variabilidad

en la huella digital para diferenciar todos los aislamientos amplificados. Los

aislamientos fueron separados en dos grandes grupos genéticos, el primer

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grupo estuvo formado por todos los aislamientos de P. fumosoroseus y los

cinco aislamientos sin identificación (Paecilomyces spp), el segundo grupo

incluyo todos los aislamientos de P. tenuipes. No obstante la alta divergencia

genética obtenida fue de 0.75 usando un amplificador común para todos los

aislamientos (primer OPAK-16). En consecuencia los aislamientos sin

identificación (Paecilomyces spp.) obtuvieron un promedio de similaridad entre

si de 92.5%. Esta alta similaridad genética se debió a que estos aislamientos

fueron obtenidos de una misma zona epizoótica (Paraná, Brasil)

Oborník et al., (2000) usaron marcadores moleculares RAPD-PCR para la

reconstrucción de la filogenia de los hongos entomopatógenos P.

fumosoroseus, P. lilacinus, P. farinosus y V. lecanii. Emplearon nueve primers

que producierón 107 características binarias reproducibles (2 constantes 107

variables). Las distancias genéticas fueron variables entre los hongos. Sin

embargo, todos los aislamientos de P. fumosoroseus evaluados pertenecieron

al mismo grupo

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III. HIPÓTESIS

Al menos uno de los cinco aislamientos polispóricos de Paecilomyces

fumosoroseus o alguno de sus cultivos monospóricos ocasiona mortalidad

mayor al 90% de los estados inmaduros de Bemisia tabaci bajo condiciones de

laboratorio.

Las huellas genéticas y la caracterización fisiológica permiten observar

diferencias entre los aislamientos polispóricos de Paecilomyces fumosoroseus.

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IV. OBJETIVOS

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