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Laboratorio Química Orgánica

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a) Cromatografía, tipos, técnicas, fundamento teórico de la cromatografía de
adsorción y partición.

a1) La cromatografía puede definirse como la técnica de separación de una
mezcla de solutos, basándose esta separación en la diferente velocidad con que
se mueve cada uno de los solutos a través de un medio poroso, arrastrados por
un disolvente en movimiento.
La cromatografía agrupa un grupo importante de métodos que permite separar
componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en
muchas ocasiones resulta imposible en otros métodos.

En todas las separaciones cromatográficas la muestra se desplaza con una fase
móvil que puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil
se hace pasar a través de una fase estacionaria con la que es inmiscible y que se
fija a una columna o a una superficie sólida. Las dos fases se eligen de tal forma
que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase
móvil y la fase estacionaria.

Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se
mueven lentamente con el flujo de la fase móvil por el contrario los
componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez.

Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
Clasificación de los métodos cromatográficos

Los métodos cromatográficos se pueden clasificas de dos modos distintos. El
primero de ellos se basa en la forma en que las fases estacionarias y móvil se
ponen en contacto.

En la cromatografía en columna un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a
través de la cual hace pasar la fase móvil por preparación. En la cromatografía en
plano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o a los intersticios de un
papel, en este caso la fase móvil se desplaza a través de la fase estacionaria por
capilaridad o por gravedad.

Una clasificación más fundamental de los métodos cromatográficos se basa en el
tipo de fase móvil y estacionaria y en la clase de equilibrios implicados en la
transferencia de los solutos entre las fases.

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La tabla siguiente da la relación de las tres clases generales de cromatografía:
cromatografía de líquidos, cromatografía de gases y cromatografía de fluidos
supercríticos. Como su nombre lo indica, las fases móviles en las tres técnicas
son, respectivamente, líquidos, gases y fluidos supercríticos.

Clasificación
General

Método
especifico

Fase
estacionaria

Tipo de
equilibrio

Cromatografía(L
C) fase móvil

Liquido-
Liquido o
reparto

Liquido-
solido
adsorción

Intercambio
iónico

Liquido
adsorbido sobre
un solido

Solido

Resina de
intercambio
iónico

Distribución
entre líquidos

Adsorción

Intercambio
iónico

Cromatografía
de gases

Gas-liquido

Gas-solido

Gas –fase
unida
químicament
e

Liquido
adsorbido sobre
un solido

Solido

Especies
orgánicas
enlazadas a una
superficie solida

Distribución
entre un gas y
un liquido
Adsorción

Distribución
entre el liquido
y la superficie
enlazada

Cromatografía
de fluidos

Especies
orgánicas
enlazadas a una
superficie solida

Distribución
entre el fluido
supercrítico y la
superficie en
lazada

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Fundamentos teóricos de la cromatografía de adsorción y partición

a2) Cromatografía de partición

La mayoría de las sustancias tendrán distinta solubilidad en diferentes solventes.
Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre
sí, se distribuirá entre los dos solventes en relación a su solubilidad en cada uno.

Se llama efecto de partición a la distribución de un soluto entre dos o más
solventes que no se mezclan.

El solvente o el liquido que es atrapado por el medio del sostén sea este papel,
gel, sílice o alúmina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama
fase móvil. Se puede obtener una fragmentación completa si se permite al soluto
equilibrarse entre las fases estacionaria y móvil.

a3) Cromatografía de adsorción

La cromatografía de adsorción o liquido-sólido, es la forma clásica de
cromatografía de líquidos. La adsorción se lleva a cabo cuando hay una
concentración más alta en la superficie de un sólido que en la solución
circundante. La adsorción se refiere al enlace de una sustancia a la superficie de
otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografía son el carbón
mineral, el gel de sílice, y la alúmina.

b) Cromatografía en columna, cromatografía en capa fina: placa preparativa y
analítica: adsorbentes, eluyentes y equipo utilizado.

b1) Cromatografía en columna: Las separaciones en la cromatografía en columna
pueden realizarse por reparto, adsorción o intercambio iónico. Puede usarse
cualquier medio adsorbente siendo los más generales la celulosa, gel de sílice,
alúmina oxido de magnesio, oxido de cálcico y carbón activo (para separaciones
por adsorción y de intercambio iónico). En todos los casos solo pueden
obtenerse óptimos resultados si se tiene cuidado en la selección del medio. El
estado físico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el
empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a través
de ella.

Llenado de la columna

Las columnas cromatográficas pueden adquirirse en una gran variedad de tipos y
tamaños, e incluso muchas veces pueden construirse con materiales sencillos de
laboratorio.

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El primer paso en el montaje de la columna cromatográfica es colocarla fija en
posición vertical. A continuación se pone en el fondo de la columna un pequeño
disco de porcelana con varios orificios (si es posible) y encima de este un poco
de lana de vidrio. Este dispositivo retiene el material sólido de la columna
mientras que el liquido Eluyente puede circular libremente.

El adsorbente puede introducirse en seco, pero lo más frecuente es agregarlo en
forma de una papilla con el eluyente. Antes de introducir el adsorbente se agrega
en el interior de la columna un poco de disolvente puro (2 a 4 cm. por encima de
la lana de vidrio) y se elimina el aire que puede permanecer retenido en las
paredes, agitando por medio de una varilla larga de vidrio.

La papilla formada por el adsorbente y el disolvente se agrega lentamente en
porciones, lo que permite que se pose el adsorbente por la fuerza de la
gravedad, hasta alcanzar la altura deseada. Es recomendado el golpear la
columna durante el llenado con un tubo de goma para favorecer la formación del
lecho adsorbente. Finalmente se abre la llave inferior de la columna para que
salga el exceso de disolvente contenido. La altura del disolvente no debe exceder
de 2 a 5 mm sobre el sólido. Una vez realizado todo esto, la columna esta lista
para introducir la muestra que se desea separar.

b2) Cromatografía en capa fina

Los métodos de cromatografía en plano, incluyen la cromatografía en capa fina,
cromatografía en papel y electrocromatografía. En todos los casos se emplea una
capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o
bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se
mueve a través de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por
gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. En la actualidad la
cromatografía en plano se centra en la técnica de la capa fina, que es mas rápida,
tiene mejor resolución y es mas sensible que su alternativa en papel.

b2.1) Placa preparativa

Las separaciones en capa fina características se realizan en placas de vidrio o
plástico que se recubren con una capa delgada y adherente de partículas
finamente divididas; esta capa constituye la fase estacionaria. Las partículas son
semejantes a las de la cromatografía en columna.
Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas
simplemente.
Las placas de capa fina se obtienen de varias fuentes comerciales. Los tamaños
comunes de la placa en centímetros son 5 x 20, 10 x 20 y 20x 20. Las placas
comerciales se presentan en dos categorías la convencional y la de alta eficacia.

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b2.2) Adsorbentes

La sustancia adsorbida se llama adsorbato y la fase sobre cuya superficie se
acumula el adsorbato se llama adsorbente. En un sólido, las interfaces son fijas,
cuando es liquido la interface es móvil y la superficie de contacto puede variar
debido a la tensión superficial. Los adsorbentes se dividen en dos grupos
principales: los polares (alúmina, sílice, carbonato cálcico) y los no polares
(carbón activo, talco). Entre los del primer grupo la intensidad de la adsorción es
determinada por la polaridad de las moléculas. En el comportamiento de los del
segundo grupo el papel fundamental es desempeñado por las dimensiones y
formas de las moléculas.

Adsorbentes en orden de menor a mayor
Azúcar, almidón, insulina, talco, carbonato sódico potásico, magnesia, gel de
sílice, alúmina.

b2.3) Eluyentes

El poder de la adsorción depende tanto de la naturaleza del disolvente como de
la del adsorbente. Por lo general para llevar la mezcla de compuestos a columna
se utiliza un disolvente relativamente poco polar para el desarrollo del
cromatograma y para la elusión de los productos adsorbidos un disolvente mas
polar todavía. Los disolventes más frecuentes se pueden ordenar según su
polaridad creciente.

b2.4) Disolventes
Disolvente en orden creciente a su polaridad
Éter de petróleo, tetracloruro de carbón, sulfuro de carbono, éter, acetona,
benceno, esteres de ácidos orgánicos, cloroformo, alcoholes, piridina, mezclas
de ácidos o bases con agua, alcohol o piridina.

c) Tres características principales que intervienen en las propiedades del
adsorbente.

Influyen tres variables independientes. Estas son el adsorbente, el disolvente y
las sustancias a cromatografiar.

El adsorbente ideal debe retener cantidades relativamente grandes de las
sustancias a separar y debe permitir el desarrollo del cromatograma, el
adsorbente no debe de descomponer a las sustancias adsorbidas ni a los
disolventes y bajo las condiciones usuales no debe ser soluble en ninguno de
estos, el tamaño de las partículas del adsorbente debe ser el adecuado para una

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rápida y uniforme precolación y las partículas no deben ser porosas al
disolvente.

d) Precauciones al preparar y efectuar la cromatografía en columna y capa fina;
parámetros que afecten la separación

d1) Cromatografía en columna

Separar más de 100 mg

Se optimiza el sistema absorbente-eluyente para la separación

Sujetar verticalmente la columna

Llenar la columna con el eluyente o disolvente menos polar

Comprimir un pedazo de algodón en el fondo de la columna con una varilla
de vidrio y cubrirla con una capa de arena limpia

Vaciar al adsorbente previamente pesado. La alúmina en forma de flujo
delgado y el gel de sílice como una papilla de disolvente.

Disolver la sustancia en la mínima cantidad del disolvente no siendo más polar
que el eluyente, aplicar con cuidado y uniformemente en la parte superior de
la columna (llave cerrada), abrir la llave y correr el disolvente hasta que quede
una capa de 1mm por arriba del adsorbente, varias veces.

Las velocidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es 3 a
4ml/min. en una columna de 40 cm. de altura.

d2) Cromatografía en capa fina

Preparación de las placas

Conservar la placa en una solución concentrada de carbonato sódico,
enjuagándose en agua antes de su uso

Las capas compactas se preparan aplicando una papilla del medio elegido en
un disolvente adecuado, sobre las placas de vidrio.

Si el material se adhiere mal es necesario agregar una pequeña cantidad de un
agente aglomerante como el sulfato cálcico.

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El espesor habitual de la placa suele ser de 0.25 mm. Placas más finas dan
separaciones más rápidas pero menos eficaces.

Activar las placas preferiblemente antes de usarlas.

La elección del disolvente dependerá de la naturaleza del compuesto que se va
a separar y del material en que la separación se lleve a cabo. Una regla general
para la elección del disolvente es la comparación de la polaridad del mismo y
de la sustancia que se desea separar.

e) Preparación de las placas, activación y almacenamiento de estas

e1) Las placas compactas se preparan aplicando una papilla del medio elegido en
un disolvente adecuado, sobre las placas de vidrio. Para conseguir la mejor
limpieza de las placas, éstas se conservan en una solución fuertemente
concentrada de carbono sódico, enjuagándose con agua muy bien, antes de su
uso. Es esencial para conseguir los mejores resultados asegurarse que la capa
sea uniforme.

Si el material se adhiere mal, es necesario agregar una pequeña cantidad de un
agente aglomerante, tal como el sulfato cálcico.

Normalmente las papillas se hacen con agua que, si es necesario puede contener
ácidos, bases, tampones o reactivos acomplejantes. Un método muy útil para
prepara papillas de gel de sílice y celulosa libres de aglomerante es colocando en
un mortero una cantidad adecuada de polvo seco, agregándose agua destilada,
lentamente y con agitación, hasta que se obtiene una crema espesa. Se agrega
más agua hasta que la papilla fluye suavemente por las paredes del recipiente.

El extendido de las placas se realiza sujetando a los lados de la placa unas tiras
de cinta adhesiva, extendiendo la papilla mediante una varilla de vidrio que se
rueda a lo largo de la placa.

e2) Activación de las placas
Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para
retirar el agua que actúa como una impureza y evita una buena separación. La
magnitud de calor depende del tipo de separación que se requiere para
compuestos hidrofilicos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son
generalmente adecuados, para los compuestos hidrofobicos o no polares es
necesario un calentamiento más intenso. Las placas de oxido de aluminio y de
gel de sílice con adhesivo requieren ser secadas al aire durante
aproximadamente 30 min. Y después ser activadas en un horno a 100°C
alrededor de 30 min. Las placas de celulosa deberán secarse al aire libre durante
30 min. y activarse al horno durante 10 min. A 105°C.

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e3) Almacenaje de las placas
Es esencial el almacenaje en una atmósfera perfectamente seca una vez que se
hayan activado las placas. Es preferible secas las placas al aire, guardarlas en un
gabinete desecador y activarlas inmediatamente antes de usarlas.

f) Aglutinante o adhesivos en los adsorbentes para cromatografía en capa fina

Aglutinante es una sustancia química que permite que una sustancia en la cual
sus partículas son en polvo o secas, en este caso el adsorbente, permanezcan
juntas.
Por ejemplo:
Almidón
CaSO4 * H2O
Yeso
Harina de maíz.

g) Cámaras de elusión para el desarrollo de la cromatografía en capa fina

Una cámara de elusión en un recipiente, preferentemente de vidrio transparente
para observar la separación de componentes en la cromatografía en capa fina, en
el cual se lleva a cabo el siguiente desarrollo:

El desarrollo se lleva a cabo en frascos por el método ascendente, en el interior
del frasco debe colocarse un papel filtro empapado de disolvente, que cubra las
paredes interiores del mismo para conseguir que la atmósfera este saturada de
vapor del disolvente. El fondo del frasco se cubre de disolvente hasta una altura
de 0.5 a 1 cm y después de un periodo de tiempo apropiado en el que se consiga
el equilibrio, se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse el
frasco.

h) Reveladores empleados en cromatografía y su clasificación. Lámpara de luz
ultravioleta, indicadores fluorescentes.

h1) Los reveladores empleados son: sulfuro de hidrogeno para iones metálicos,
agentes corrosivos tales como ácidos concentrados y compuestos fuertemente
oxidantes. A alta temperatura debido a la naturaleza inorgánica de la placa, el
vapor del yodo, la fluorescencia y radioactividad no afectan los productos o con
la luz ultravioleta.

El revelado puede dividirse en dos: los métodos físicos que utilizan propiedades
particulares de los compuestos, tales como la fluorescencia y los métodos
químicos que consiste en hacer reaccionar a las sustancias con algún agente
químico con el que formen algún compuesto coloreado

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h11) Métodos físicos

Fluorescencia: Compuestos invisibles con luz ordinaria pueden detectarse con
una lámpara de luz ultravioleta, la longitud de onda de luz emitida y el color que
presentan es característico del componente (componentes orgánicos no
saturados presentan fluorescencia, debido a la propiedad de adsorber
radiaciones ultravioleta y emitir radiaciones de mayor longitud de onda).
Radiactividad: Hay varios compuestos radiactivos para la identificación de
sustancias.

h12) Métodos Químicos
Técnica de bañado: En una bandeja de material inerte se coloca la solución
reveladora y se sumerge el cromatograma, no tocando las paredes de la bandeja.
Es esencial que el compuesto coloreado formado al revelar, sea insoluble en el
disolvente, sino, las manchas aparecerán difuminadas o desaparecerán.

Técnica de pulverización: Se pulveriza uniformemente el revelador sobre la
superficie del cromatograma por medio de un atomizador. Si se emplean dos o
más reveladores se aplicara uno detrás del otro sin importar el secado.

Lámpara U.V: Utilizada cuando no se ven los compuestos separados en una CCP.
La lámpara lleva dos focos de luz U.V. una de 254 amperes y una larga de 336
amperes, utilizándola en una capa oscura

i) Definiciones de los términos de Rf y Rx, en qué casos se usa cada uno,
reproducibilidad de los valores de Rf

Constantes Rf Y Rx

La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la
posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal, mide la
retención de un componente. Se define como:

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de
la mancha, los cálculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF
sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la
placa, fase móvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El máximo valor de RF
que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.

Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma
placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los
RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del

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mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden
ser iguales o no serlo.

Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma
placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una
separación mínima. En este caso no se pueden usar reveladores químicos, ya que
alterarían los compuestos, sino indicador ultravioleta.

También se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto
(X), que tenga una posición de desarrollo conveniente; todos los demás
compuestos sobre la placa se relacionan con éste. De esta manera se tiene el,
RX, ya que:

j) Aplicaciones de la cromatografía en capa fina analítica y preparativa, ventajas
y desventajas con respecto a cromatografía en columna

j1) Aplicaciones de la cromatografía en capa fina

Para comprobar las impurezas

Son rápidas y económicas

Se usan en pruebas preliminares antes de la separación

Para llevar el control en reacciones

En la comparación cualitativa con sustancias conocidas

Por medio de la CCF se optimiza el sistema para la separación en la
cromatografía en columna

j2) Ventajas
La separación ocurre más rápido, las manchas son más directas y compactas y se
pueden usar reactivos detectores corrosivos sin dañar el sustrato o el
adsorbente.

j3) Aplicaciones de la cromatografía en columna

Separaciones de grandes cantidades de material (mayor a 100mg)

Filtración en geles

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Intercambio iónico

k) Condiciones experimentales para la realización correcta de la cromatografía
en columna

No permitir que la columna se seque, cerrar la llave

La temperatura del entorno debe ser constante

Cuando se utilizan eluyentes con punto de ebullición bajo y cuando se
cambian los disolventes se suelen formar burbujas en las columnas
(acanalamiento) evitando una buena separación, se deben usar columnas en
frío.

Otras condiciones ya se han mencionado en el inciso C

l) Tamaño de la columna, diámetro y cantidad de adsorbente para diferentes
cantidades de muestra.

El tamaño de la columna es determinado por la cantidad de mezcla que se va a
fraccionar. En el laboratorio son adecuadas las columnas de 20 a 30 cm. Y para
la mayoría de los experimentos de 100 cm de largo.
El diámetro suele ser de 10mm, si la cantidad de muestra no es muy limitada, es
más fácil trabajar con columnas de 20 a 30 cm de largo. Las columnas para la
cromatografía en gel van de 1cm hasta 20cm de largo.

m) Coeficiente de partición en cromatografía

El coeficiente de partición tiene un valor constante para cada soluto, depende de
la naturaleza del solvente usado en casa caso.

K= C2
C1

Donde C1 y C2 son las concentraciones de equilibrio, en g/L de un soluto A en
solvente 1 y un solvente 2, respectivamente.

n) Polaridad en cromatografía

La polaridad indica la separación de cargas dentro de la molécula, o el carácter
iónico de esta. Debido a esto los compuestos iónico son altamente polares.
La polaridad influye notablemente en el comportamiento de una sustancia en
disolución y por otra, el poder absorbente sobre una molécula aumenta
directamente con la polaridad de la misma.

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Las sustancias sólidas tienden a disolverse en líquidos de polaridad semejante,
por lo tanto los compuestos polares se disolverán en disolventes polares tales
como el agua. La polaridad de una molécula depende de la naturaleza de los
átomos de que está constituida y de forma de la misma.

La polaridad de los componentes de una mezcla puede ser mayor en la
cromatografía liquido- liquido que en las de gas-liquido.

o) Velocidad de flujo en cromatografía en columna

La velocidad de flujo depende de muchos factores cuando menos sea el tamaño
de las partículas del adsorbente menor será la velocidad con la que el disolvente
o la solución pasaran a través de la columna. Por lo tanto el adsorbente no debe
ser ni de grano muy grueso ni muy fino, el diámetro medio de las partículas debe
ser de unas 8-12 micras.
La aplicación de una succión suave o de cierta presión puede también acelerar la
velocidad del solvente a través de la columna.

La velocidad de separación de los componentes de una mezcla en una columna
depende de la velocidad de flujo del solvente. Si esta varia se puede echar a
perder la separación. Por lo tanto el flujo del solvente se mantiene constante
conservando el solvente a nivel constante arriba de la superficie de la columna.

p) Tipos de elusión, simple, fraccionada, por gradientes y análisis frontal

Elución: Proceso mediante el cual un solvente fluye a través de una columna de
adsorbente, produciendo separación de los componentes de la mezcla. El
solvente que aparece en la parte inferior de la columna se llama eluído y el
solvente que pasa dentro de la columna es el eluyente.

p1) Simple: La composición del eluyente no varía, no tiene que ser el solvente
original usado para empacar la columna, pero no debe de ser muy diferente para
provocar el enjuntamiento de las cuentas de resinas de intercambio iónico.

p2) Fraccionada: Se usa una mezcla de solventes o el solvente se cambia por
completo. (Polaridad diferente)

p3) Por gradientes: El solvente se modifica gradualmente. Generalmente produce
bandas más concentradas que la elusión fraccionada o simple. Un gradiente
lineal puede obtenerse usando un dispositivo con cabeza de sifón etc. En este
caso se debe agitar el solvente de la cámara unida directamente a la columna,
con lo que se asegura una mezcla constante y uniforme, y con ellos un gradiente
lineal.

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p4) Análisis Frontal: Únicamente se realiza en la cromatografía por adsorción.
Aquí nunca ocurre una separación completa, en lugar de usar un solvente como
eluyente, la propia mezcla se agrega continuamente en la columna hasta que
esta se satura, la técnica es útil para determinar el número de componentes que
hay en una mezcla y la presencia de huellas de impureza en sustancias por otra
parte puras.

q) Elución y recolección de fracciones

Cuando la muestra aplicada a la columna es coloreada se observa fácilmente el
progreso de la separación, pero si la sustancias son incoloras se emplean dos
procedimientos.

Eluir y secar de la columna el cuerpo del adsorbente, con mucho cuidado para
evitar que se desmorone, ya que el disolvente se ha evaporado de la columna se
corta esta en rodajas, se extrae con disolvente cada rodaja y se analiza el
compuesto (extracto). Antes de cortar la columna, si los compuestos no son
coloreados se aprieta contra ellos una tira de papel para que adsorba un poco de
disolvente. El papel una vez seco se pulveriza con un revelador que indica la
posición de cada uno de los compuestos, el papel se coloca de nuevo al lado de
la columna y así sabemos que componente contiene cada sección de la columna.

Para un número grande de fracciones se usa un colector automático de
fracciones (disco en el que se coloca una serie de tubos, el disco gira). En el
contador de gotas (aparato), las gotas del eluyente pasan a través de un rayo de
luz que activa una célula fotoeléctrica. El aparato puede ajustase de tal manera
que pase un número fijo de gotas antes del cambio de tubo. Los contadores de
gotas son apropiados para recoger pequeñas fracciones.

r) Como se lleva a cabo cromatografía de sustancias incoloras

Aunque algunos compuestos incoloros pueden formar bandas bien definidas en
una columna de absorción se necesitan la utilización de métodos especiales para
la localización de las bandas de los productos adsorbidos. Para la localización de
las bandas de los productos adsorbidos se emplean lámparas ultravioletas para
los que presentan fluorescencia, un reactivo con el que los compuestos
adsorbidos formen coloración. Se pinta una banda en la columna.

s) Capacidad de adsorción de los grupos funcionales de los compuestos
orgánicos

Es determinada por la naturaleza y numero de los grupos polares existentes en
sus moléculas. Orden decreciente de la capacidad de adsorción:

Ac. Carboxílico, alcoholes, amidas y tioles

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Alcoholes, amidas, tioles

Aldehídos, cetonas y esteres

Haluros orgánicos

Hidrocarburos no saturados (mayor grado de instauración, mayor

capacidad de adsorción)

Hidrocarburos saturados

t) Compuestos que dan color a los vegetales

Clorofila: Cera microcristalina azul-verdosa, libremente soluble en éter, etanol,
acetona, cloroformo, sulfuro de carbono, benceno. La solución alcohólica es
azul-verdosa con fluorescencia rojo-oscura.

Caroteno: Precursor de vitamina A que se encuentra de forma natural en las
plantas. El caroteno es un hidrocarburo miembro de una amplia clase de
pigmentos llamados carotenoides. Cristales rojo rubí, se oxida fácilmente en
contacto con el aire. Procede de los pigmentos amarillo-anaranjados de las
plantas.

Xantofila: Pigmento amarillo carotenoide oxigenado que acompaña a la clorofila
en las hojas verdes, es insoluble en agua, ligeramente soluble en alcohol y etes.
Se encuentra en la vegetación verde y en algunos productos animales.

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