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EL ANTIBIOGRAMA

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Published by: Andrea Cortés Maestre on Aug 20, 2011
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EL ANTIBIOGRAMA

Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones. Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos (modificación química de un compuesto natural). La historia moderna de los antibióticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilización de antibióticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecías procesos infecciosos, aunque desgraciadamente también supuso un aumento en los niveles de resistencia antibiótica.

EL ANTIBIOGRAMA TIENE CUATRO UTILIDADES PRINCIPALES:  La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.  En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.  Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas correctoras.  Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la identificación bacteriana. Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el número sigue creciendo porque el desarrollo de más mecanismos de resistencia por parte

. Los macrólidos por ejemplo se unen irreversiblemente a los ribosomas bacterianos y no les permiten sintetizar proteínas. Las sulfamidas se clasifican en este grupo. Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia antibiótica más habituales para cada especie. y condicionan así su lisis Antibióticos que actúan a nivel de membrana. y y y y Para medir objetivamente la capacidad antimicrobiana de los antibióticos se han establecido parámetros específicos que dan idea de la potencia de cada fármaco respecto frente a cada cepa. Antibióticos que se unen específicamente al ADN bacteriano e impiden su replicación. FACTORES DEL PACIENTE:Tipo de infección. distribución y eliminación. Las penicilinas y la vancomicina impiden la polimerización de las moléculas que constituyen la pared bacteriana. Factores de riesgo y estado general de salud. No es necesario contrastar la eficacia de todos los antibióticos para cada aislamiento bacteriano. PRINCIPALES FAMILIAS ANTIBIÓTICAS. MECANISMOS DE ACCIÓN Los antibióticos son sustancias que a través de diversos mecanismos logran destruir o al menos neutralizar el crecimiento bacteriano. FACTORES FARMACOLÓGICOS:Tipo de antimicrobiano y parámetros de absorción. Situación inmunológica e hipersensibilidad. La colistina se une a la membrana plasmática por debajo de la pared y la disgrega comprometiendo la viabilidad de la bacteria Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas. Actúan a diversos niveles estructurales de las bacterias: y Antibióticos que actúan sobre la pared bacteriana.de los microorganismos se traduce en un esfuerzo mayor por fabricar más y mejores antibióticos. Es el caso de las quinolonas Antibióticos que bloquean una ruta metabólica esencial para la bacteria de modo que le resulta imposible sobrevivir sin ella. Los criterios que se siguen para seleccionar que antimicrobianos se ensayan respondes a factores de diversa índole: y y y y FACTORES MICROBIOLÓGICOS:Tipo de agente infeccioso y mecanismos de resistencia descritos previamente en su especie.

No tiene utilidad en el laboratorio porque no está estudiada su correlación con la interpretación clínica. En función de los requerimientos del microorganismo puede enriquecerse con sangre. Debe conservarse en buenas condiciones. En las terapias combinadas hay que tener muy presentes los posibles efectos sinérgicos y antagónicos. se produce antagonismo entre los dos antibióticos. Es la concentración de antibiótico necesaria para asegurar la muerte de todos los microorganismos del inóculo empleado.La concentración mínima inhibitoria (CMI) es la concentración de antibiótico necesario para provocar la inhibición del 90% de los microorganismos en el ensayo. ANTIBIÓTICO:Ha de tener la concentración previamente establecida. El inóculo estandarizado es de 108 células/ml. sensibilidad parcial o resistencia. Inóculos mayores o menores pueden derivar en falsos niveles de resistencia o sensibilidad. INCUBACIÓN:Las estandarizadas son 37ºC y 20-24 h en atmósfera aerobia o rica en CO2 según el microorganismo. y y y En ocasiones la actividad antimicrobiana de dos antibióticos se potencia si se administran simultáneamente. Se dispone en forma líquida y sólida. La concentración mínima bactericida (CMB). Gracias a estudios con gran número de cepas se establecieron criterios de manera que conociendo la CMI frente a un determinado antibiótico podemos saber si el microorganismo en cuestión es o no resistente a dicho fármaco. Esta circunstancia se conoce como sinergia y se produce por ejemplo con los antibióticos ß-lactámicos y los glicopéptidos (vancomicina). Si pierde actividad cepas sensibles pueden informarse como resistentes. FACTORES DE INFLUENCIA Para la correcta realización e interpretación de las técnicas de antibiograma deben considerarse los siguientes factores: y INOCULO: El número de microorganismos aplicados en el ensayo debe reproducir lo más posible las condiciones en el paciente. Otras veces el efecto es el contrario. . MEDIO DE CULTIVO:El medio de Mueller-Hinton es el estandarizado para los métodos de antibiograma. Es el parámetro más empleado en el laboratorio de microbiología porque es el que se ha aplicado para fijar los criterios que definen a cada cepa dentro de las categorías clínicas de sensibilidad.

MÉTODOS DE ANTIBIOGRAMA BASADOS EN DIFUSIÓN Los métodos de difusión se basan en la distribución homogénea del antibiótico sobre los medios sólidos de cultivo. barata. Dicho halo es más grande cuanto mayor es el grado de sensibilidad de la cepa al antimicrobiano. En términos generales los antibióticos se impregnan en discos de papel que se colocan sobre placas de medio de cultivo en las que previamente se ha extendido la bacteria que se considera. El inóculo para sembrar las placas suele ajustarse por turbidez y debe corresponder con el nivel 0. El antibiótico difunde por el agar creando un gradiente de concentración decreciente según se aleja del disco.5 en la escala arbitraria de McFarland. Esta técnica. aceptada por los organismos de estandarización y abierta en el sentido que permite analizar cualquier microorganismo y cualquier antibiótico. Incluso puede aplicarse directamente sobre muestras clínicas en infecciones graves como la meningitis. denominada de disco-difusión es fácil de realizar. Tras la incubación se miden los diámetros de los halos de inhibición y se interpretan los resultados con ayuda de los . Tanto la cantidad de antibiótico como el número de bacterias (inóculo) deben controlarse cuidadosamente. Los discos con antibiótico deben conservarse en frió. La bacteria si resulta susceptible no crece en las inmediaciones del disco y forma un halo de inhibición .

Pueden utilizarse medios líquidos o sólidos. La intersección del halo de inhibición con la tira de papel indica la CMI del microorganismo para dicho antibiótico. En términos generales consisten en fabricar varios tubos de medio de cultivo con diferentes concentraciones del antibiótico en cuestión e inocularlos con la cepa que se estudia. El principal inconveniente es su carácter sólo cualitativo y su limitación en bacterias anaerobias y de crecimiento lento. El sistema Epsilon-Test es un ingenioso método de antibiograma por difusión que en lugar de discos utiliza tiras de papel graduadas con valores de CMI e impregnadas con un antibiótico en forma de gradiente de concentración.puntos de corte establecidos internacionalmente para cada microorganismo y para cada antibiótico. También presenta problemas con antibióticos molecularmente grandes que difunden poco sobre el agar. La CMI corresponde con el tubo de concentración más baja que logre inhibir el 90% del crecimiento bacteriano. MÉTODOS DE ANTIBIOGRAMA BASADOS EN DILUCIÓN Son los métodos clásicos de antibiograma. .

La lectura del antibiograma se realiza por turbidez si el medio de cultivo es líquido y por recuento de colonias en medios sólidos. Se utilizan para confirmar resultados de difusión y en los estudios de sinergia y antagonismo antibiótico. Se basan en métodos de microdilución e incluso algunos integran en el mismo panel pruebas bioquímicas de identificación de modo que ofrecen resultados completos de diagnóstico. SISTEMAS AUTOMATIZADOS Los laboratorios grandes con muchas muestras clínicas están obligados a realizar muchas pruebas de antibiograma y necesitan sistemas automatizados que ahorren tiempo. Aunque existen muchos todos ellos se parecen bastante entre si. Una vez obtenida la CMI correspondiente a cada antibiótico se interpreta siguiendo los puntos de corte establecidos y la cepa se clasifica como sensible o resistente a efectos clínicos. Las técnicas de dilución no pueden aplicarse directamente sobre muestras clínicas y en ocasiones la interpretación de resultados es difícil. Tienen más facilidad para contaminarse y no son tan abiertos como la difusión en cuanto al número de antibióticos. Son mas caros y más laboriosos. Los métodos de dilución son en muchos casos los de referencia por su mayor exactitud y por su carácter cuantitativo (CMI). La inoculación.En función del soporte donde se realizan los sistemas de dilución se consideran métodos de macrodilución con tubos independientes y métodos de microdilución que usan placas integradas con múltiples pocillos en cada uno de los cuales se coloca una concentración diferente de antibiótico Los sistemas automatizados de antibiograma se basan en métodos de microdilución. la incubación y la lectura están automatizadas. .

de modo que hay que tomar los resultados con precaución. Por supuesto todos los métodos deben realizarse asegurando la ausencia de oxígeno. Aun no para hongos filamentosos. Sólo se realizan en aislamientos valorables clínicamente en los no existe intervención de microorganismos aerobios.ANTIBIOGRAMA DE MICROORGANISMOS EXIGENTES ANAEROBIOS Pueden utilizarse técnicas de dilución (microdilución) y de difusión (EpsilonTest). El aumento en los últimos años del número de casos de tuberculosis hace que se trabaje cada vez más en la resistencia antibiótica de M. El más utilizado es el método de las proporciones que compara crecimiento en tubos con y sin antibiótico. . Son sistemas de microdilución en los que el crecimiento de la levadura se detecta por turbidez.tuberculosis. HONGOS Sólo se dispone de métodos estandarizados para levaduras. Se utilizan medios de cultivo específicos muy enriquecidos porque suele tratarse de microorganismos exigentes. MICOBACTERIAS Las micobacterias crecen muy lentamente. Las técnicas de difusión tienen dificultades porque los antifúngicos difunden mal por el agar. lo que dificulta enormemente las técnicas de antibiograma y las limita a laboratorios de referencia. Existen varios sistemas pero ninguno de ellos esta estandarizado. Se testan los antibióticos más eficaces frente a estos agentes.

ANTIBIOGRAMA MICROBIOLOGIA LABORATORIO HELENA ARAGON MANJARREZ YELMIS CARRILLO GOMEZ LUZ AMALIA GUTIERREZ ANA LUZ MARTINEZ DRA. DIANA DUARTE CORPORACION UNIVERSITARIA RAFAEL NUÑEZ FACULTAD DE MEDICINA CARTAGENA 2011 .

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