BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediación Monitoreo Control de la ambiental polución

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnóstico
Vacunas Terapéutica

MEDICINA

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de células y tejidos Ingeniería genética Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniería de proteínas

Bioquímica Ingeniería Bioquímica Microbiología

Biología Celular Inmunología

CONOCIMIENTO Computación CIENTIFICO
Genética Fisiología

Biología Molecular

en manos de científicos. no basada en hierro y acero sino en microbios que. combustibles o alimentos. . se convierten en minúsculas fábricas para producir fármacos.Nos encontramos frente a una nueva ³Revolución Industrial´ llamada Biotecnología. compuestos químicos industriales.

La ³TECNOLOGIA´ consiste en relucientes depósitos de acero. así como a componentes de estas células. llenos de microbios. levaduras y otras células vivas. conectados a sus fuentes de alimentación y oxígeno mediante una intrincada red de válvulas que se cierran y abren según los ritmos que marca una computadora. .El prefijo ³BIO´ se refiere a bacterias.

DEFINICION Según la Organización de Cooperación y Desarrollo Económicos: Es la aplicación de los principios científicos y de la ingeniería al procesamiento de materiales por agentes biológicos para proveer bienes y servicios. .

Biología Molecular.PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA: Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial énfasis en la Microbiología. . Bioquímica. Genética. Inmunología e Ingeniería Bioquímica y Química.

microorganismos. células animales.MATERIALES: Incluye a aquellos orgánicos e inorgánicos. catalizadores biológicos. en general. . virus y enzimas. células vegetales. en particular. en tanto los agentes biológicos son.

.) SERVICIOS: Lo relacionado específicamente con las prestaciones tales como purificación de agua o tratamiento de efluentes y extracción de derrames de petróleo. recuperación de metales. productos farmacéuticos. etc.BIENES: Todos los productos (alimentos.

. Reactivos de diagnóstico: Desarrollo de reactivos por técnicas inmunológicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniería genética).AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniería genética).

Métodos de mejoramiento de especies a través de técnicas no convencionales. enfermedades y herbicidas. Identificación y caracterización de genes de interés. .AREA AGRICOLA: Diagnóstico de fitopatógenos en plantas de interés económico. Modificación del contenido celular en macromoléculas. Utilización de marcadores moleculares. Desarrollo de agentes de control biológico y plantas. Desarrollo de plantas transgénicas resistentes a las plagas. Aceleración en la obtención de híbridos.

PRODUCCION ANIMAL: Manipulación y sexado de embriones. Producción de nuevas vacunas virales.AREA PECUARIA: SANIDAD ANIMAL: Desarrollo de métodos para el diagnóstico de enfermedades animales. Hormonas para el mejoramiento de la producción animal. . bacterianas y parasitarias por técnicas de avanzada.

Tratamiento biológico de efluentes.PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos. incluyendo derivados lácteos. . vinos y cervezas.

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA .

‡4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. se embriagó«´ .‡6000 AC: Arte de fermentar.21): ³Noé se dedicó a la labranza y plantó una viña. ‡Libro del Génesis (9: 20. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza. Bebió del vino.

‡Siglo XIV DC: Destilación de bebidas alcohólicas. ‡Siglo XIX: El desarrollo técnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la ³generación espontánea´. . por ejemplo). Uso de bacterias de ácido acético para fabricar vinagre. ‡Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (1632-1723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos. de bacterias de ácido láctico para conservar la leche (yogur.

veamos algunas recetas interesantes« .Hablando de ³generación espontánea´.

hice romper una enorme cantidad de grandes piedras sólidas. el más célebre cirujano de su siglo. sin que hubiera en la piedra la menor apariencia de abertura« . escribe: ³Hallándome en una viña de mi propiedad. próxima al pueblo de Meudon.Ambroise Paré (1517-1590). Dentro de una de ellas se encontró un grueso sapo vivo.

´ . pues varias veces había hallado animales de ésta y de otras clases en lo más recóndito de las piedras.«Me maravilló el hecho de que este animal hubiese podido nacer. crecer y vivir allí. cuya humedad. Pero el cantero me dijo que no había por qué asombrarse. sin que existiese el menor indicio de una abertura. Se puede explicar así el nacimiento y la vida de estos animales: son engendrados a partir de alguna sustancia húmeda de las piedras. produce tales seres. al entrar en putrefacción.

el más grande fisiólogo de la época. preferentemente de mujer. ³Un fermento originado en la camisa y transformado por el olor de los granos.´ Esta metamorfosis dura cerca de veintiún días.Van Helmont (1577-1644). o sea el tiempo de gestación de ratón y nuestro naturalista se asombre de su notable rapidez« . convierte el trigo mismo en ratones. indica lo siguiente para la obtención de ratones: un vaso lleno de trigo se cubre con una camisa sucia.

ni minúsculos.«´Ello.´ . ni deformes. nos dice. sino muy bien formados y pueden saltar. es tanto más admirable cuanto que los ratones originados por el trigo y la camisa no son pequeños ni lactantes.

‡Francesco Redi (1626-1697): Médico italiano que demostró que los gusanos de la carne son larvas de mosca y que no aparecen si la carne se guarda bien tapada (³fiambrera´). ‡Lázaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano, demostró que los microbios son transportados por el aire; los mismos no invaden los frascos cerrados herméticamente. ‡Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros procedimientos de enlatado.

‡Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sentó las bases de la futura industria biotecnológica al demostrar que todos los procesos de fermentación eran el resultado de la actividad microbiana. ‡Edward Buchner (1860-1917): Descubre, dentro de las células microbianas, las sustancias vitales responsables de todas las transformaciones químicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas progresó la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como ³segunda era biotecnológica.´

usando Clostridium acetobutylicum. para la producción de disolventes como la acetona (fabricación de cordita).‡La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas biotecnológicas: ‡Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la ³fermentación dirigida´ de Saccharomyces cerevisiae. . ‡Proceso Weizmann. Agregando álcali y bisulfito de sodio al depósito de fermentación alcohólica se fomentaba la producción de glicerol.

por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las víctimas no murieran de sepsis bacteriana. . Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibióticos. ‡Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnológica.‡Los descubrimientos de Pasteur.

‡Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formación de hibridomas con la posterior utilización para la producción de anticuerpos monoclonales (1975). . ‡El descubrimiento de los sistemas de restricción y modificación en bacterias y la aplicación de las endonucleasas.Puede decirse que la ³cuarta era biotecnológica´ comienza a principios de la década de 1970. con el advenimiento de la Ingeniería Genética.

hormonas de crecimiento humana y bovina. etc. el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B.Un hito que merece resaltarse ocurrió en 1982 cuando la compañía Eli Lilly consiguió la aprobación de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamérica para la utilización de ³insulina humana´ clonada y producida en Escherichia coli. . A esto siguieron los interferones.

Entrando ya en tema« .

en forma exitosa. es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original. .El desarrollo de un proceso de producción a gran escala. generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequeña escala.

‡Desarrollo del medio de cultivo. .La actividad de desarrollo se concentra en tres áreas principales: ‡Desarrollo de los organismos. ‡Ingeniería de fermentación.

EL FERMENTADOR .

.DEFINICION OPERATIVA: ‡Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operación de un proceso biológico deseado.

. el sistema de contención más apropiado debe diseñarse para brindar el mejor medio ambiente.En cuanto al biorreactor: Para cada proceso biotecnológico. optimizado para el crecimiento celular y actividad metabólica.

‡Válvulas de seguridad ‡Manómetros ‡Válvulas de control ‡Tuberías ‡Control de temperatura ‡Control de pH ‡Control de espumas ‡Puntos de muestreo .Equipos accesorios.

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

‡BIOLOGICO

‡QUIMICO

‡FISICO

AIREACION Y AGITACION. La agitación es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolución.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno y nutrientes. 3- impedir la formación de agregados celulares. 4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.

5. .aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador.

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. ‡Crecimiento con soporte.Tipos de fermentador: ‡Crecimiento en suspensión.

los organismos están sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio. En la práctica. encontramos organismos dispersos en el medio nutritivo. En los sistemas con soporte. los sistemas en suspensión poseen una película de organismos en la superficie del contenedor y en sistemas con soporte. . sin embargo.los organismos crecen como una monocapa o película sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo.En el crecimiento en suspensión.

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION .

similares independientemente del organismo utilizado. del medio elegido y del producto buscado.Las etapas en la manufactura de productos en la tecnología de bioprocesos son. esencialmente. .

mediante un sistema de contención técnica y física (el biorreactor) y un medio correcto en su composición y parámetros reguladores del crecimiento. .En todos los ejemplos. Los organismos deben cultivarse y ´motivarseµ para formar el producto deseado. tales como temperatura y aireación. se cultiva gran número de células en condiciones controladas.

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO .

El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular. expresado en términos de masa o número de células. . El incremento en biomasa puede determinarse gravimétricamente o numéricamente para sistemas unicelulares.

Tiempo de duplicación: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa. . Tiempo de generación: Se refiere al tiempo necesario para duplicar el número de células.

En un proceso biotecnológico. existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes (batch) -Semi-continuo -Continuo .

cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reacción. se vacía el reactor. . a medida que procede la reacción. Son procesos que no se encuentran en estado estacionario.Modos de operación de los fermentadores: ‡Operación por lotes: El reactor se carga con la especie reactiva y. se limpia y el proceso se repite.

fuerza cambios en el metabolismo celular. Eventualmente. . la multiplicación celular cesa por desaparición o limitación de nutrientes y acumulación de productos tóxicos de excreción.El ambiente nutricional dentro del biorreactor cambia en forma continua y. por lo tanto.

se muestra tal como sigue: .La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes.

es un tiempo de aparente no crecimiento.La fase 1 o ´lagµ. pero estudios bioquímicos demuestran actividad metabólica. eventualmente. . indicando que las células están en proceso de adaptación a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzará.

rápidamente. una fase de aceleración transitoria cuando el inóculo comienza a crecer que es seguida.Existe. parámetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores. luego. . con nutrientes en exceso. En la fase exponencial. por una fase de crecimiento exponencial. el crecimiento microbiano ocurre a la máxima velocidad posible para ese microorganismo.

el crecimiento exponencial es de duración limitada y. la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleración. .Sin embargo. donde el crecimiento global no se obtiene. en cultivos por lote. a medida que las condiciones nutricionales cambian. por falta de nutrientes. seguida de la fase estacionaria.

debido a la disminución en el metabolismo y a la lisis celular. .La fase final del ciclo es la fase de muerte. La mayoría de los procesos biotecnológicos por lotes se detiene antes de esta fase. cuando la velocidad de crecimiento ha cesado.

libre de células (utilizado para cultivos de células animales). aumentando el volumen del cultivo (utilizado para producción industrial de levadura). .Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adición gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos). -Adición de medio al cultivo (perfusión) y extracción de un volumen igual de medio usado.

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‡Operación continua: Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera. En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el líquido fluye a través del sistema y salen del sistema junto con el medio. .

en algunos casos. En un sistema continuo con mezcla completa. en un equilibrio de mezcla de nutrientes. La alimentación del sistema es medio nutriente libre de organismos y.Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el líquido de alimentación. un inóculo de organismos reciclados. las condiciones son uniformes en todo el reactor. . organismos y productos.

provee un crecimiento casi balanceado. . en fase de crecimiento exponencial. con una remoción correspondiente de medio más células. metabolitos. Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes. número celular o biomasa.Esta práctica de cultivo continuo. con pequeña fluctuación de nutrientes.

en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante. permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario. .Este método de cultivo continuo.

productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad. a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio. . se pasa medio estéril al biorreactor. constante.En un sistema de cultivo perfectamente mezclado. manteniendo el volumen total del cultivo. dentro del biorreactor.

Ventajas de un proceso por lotes: Las principales son: menor riesgo de contaminación. . una mejor coordinación con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores. flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos. un control más cercano de la estabilidad genética del organismo.

. dificultad de diseño y la operación de procesos que no están en estado estacionario y la variabilidad entre lotes.Desventajas del proceso por lotes: La principal es la alta proporción de tiempo improductivo en la operación del fermentador.

pequeño. en proporción. es decir que el tiempo no productivo es. limpiados. una corrida puede durar semanas o meses. estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentación misma. . por el contrario. operaciones todas esenciales pero no productivas. En un proceso continuo.Los fermentadores deben ser vaciados. En procesos por lotes. esterilizados y recargados antes de cada fermentación.

al menos. la esterilización por calor húmedo. el calor seco es prohibitivamente caro. A escala industrial. salvo en casos muy especiales y se utiliza. . 1 hora.Esterilización: ‡Esterilización de fermentadores. habitualmente. el método estándar de esterilización es el calor: 120ºC de calor húmedo durante 15 min o 160ºC de calor seco durante. ‡En el laboratorio.

por lo que el medio se prepara ligeramente más concentrado para compensar la dilución por el vapor condensado. . haciendo pasar vapor por la camisa de termostatización. ‡El medio se calienta por conducción.‡Esterilización del fermentador y el medio conjuntamente. ‡El calentamiento se consigue mediante: ‡Inyección de vapor en el medio.

.‡Esterilización por separado del fermentador y el medio. ‡Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentación es improductivo: un fermentador vacío se esteriliza con relativa rapidez.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseño de medios para procesos de fermentación -Fermentación en sustratos sólidos -Tecnología de cultivos de células de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra .

Purificación. .Procesamiento posterior de la muestra.

El diseño y la operación eficiente de los procesos de purificación. son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial. Deberían reflejar la necesidad de no perder más que lo absolutamente necesario del producto final. .

la separación inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase líquida y una sólida.Este procesamiento final involucrará. . principalmente. con la subsecuente concentración y purificación del producto deseado.

El procesamiento involucrará más de una etapa: -Destilación -Centrifugación -Filtración -Ultrafiltración -Extracción con solventes -Adsorción -Tamices moleculares -Electroforesis -Cromatografía de afinidad -Liofilización .

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS .

La tecnología de enzimas involucra la producción. aislamiento. finalmente. uso en forma soluble y. . purificación. la inmovilización de las enzimas para su utilización en gran variedad de biorreactores.

En fermentación. el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones: .La utilización de sistemas enzimáticos libres de células. presenta ventajas respecto de los procesos químicos que involucran un número de reacciones secuenciales.

Pueden ocurrir reacciones secundarias inútiles 3. puede ser dificultoso. Una alta proporción del sustrato será utilizada para convertirse en biomasa 2. . El aislamiento y purificación del producto deseado. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formación del producto 4. a partir de la mezcla de fermentación.1.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS .

.La utilización de estas técnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza.

coli Identificación de clones Transformación de microorganismos Producción industrial de enzima .Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad Purificación de la enzima Purificación de mARN total Determinación de la secuencia parcial de aminoácidos Síntesis de oligonucleótidos mARN ADN Clonación del ADN en E.

Aumentar la actividad de las enzimas 2. Cambiar la reacción catalizada 7. Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente 6. Cambiar el pH o temperatura óptimos 5. Mejorar la estabilidad 3. Aumentar la eficiencia de un proceso .Objetivos en la preparación de enzimas modificadas: 1. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4.

ENZIMAS INMOVILIZADAS .

Una nueva área de tecnología enzimática es la relacionada con la inmovilización de las enzimas en polímeros insolubles. debe considerarse como un posible derroche dado que. tales como membranas o partículas.El uso de enzimas en forma soluble o libre. . la enzima no puede recuperarse al final de la reacción. actuando como portadores de la actividad enzimática. en general.

Reduce los problemas de tratamiento de efluentes . Permite el desarrollo de sistemas de reacción multienzimáticos 7. Ideal para operaciones continuas 3. Los productos están libres de enzima 4. Mejora la estabilidad de las enzimas 6. Permite un mejor control de los procesos catalíticos 5.Las ventajas de los catalizadores inmovilizados: 1. Permite el reuso de las enzimas 2. Ofrece un potencial considerable en uso médico e industrial 8.

ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD .

o no es. . Si es estéril no contiene organismos viables o células presentes y. la condición estéril permanecerá indefinidamente. La desinfección implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patógenos. si se le protege contra la contaminación. estéril. pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados. superfcie o sustancia es. para la que no existen grados: un objeto.La esterilización es el proceso de conseguir la esterilidad.

Permitir la utilización segura de los productos 3. Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado 2. Evitar la contaminación ambiental 4. Impedir el deterioro de un producto .La esterilización se utiliza para: 1.

gamma o X 3.La esterilización se lleva a cabo: ‡ Eliminando los organismos viables como en la filtración ‡ Matándolos de una de las siguientes formas: 1. Tratando con productos químicos en solución o en forma gaseosa . Irradiando con radiaciones ultravioleta. Calentando en presencia o ausencia de agua 2.

Las esporas bacterianas resisten el calor (termófilas: 200 kPa a 134oC. . las altas dosis de radiación (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). vapor de agua o calor seco a 180oC. La esterilización debe ser capaz de eliminar las esporas más resistentes de las especies más resistentes. algunas. 15 min) y. 1-10 min.

Condensándose sobre el material permite que el calor se transfiera rápidamente causando un aumento rápido de la temperatura 2. . Las propias moléculas de agua aumentan. o al menos mantienen el nivel de hidratación dentro de la espora. el vapor a presión tiene dos funciones importantes: 1.Muerte por calentamiento: En la esterilización húmeda.

de esta forma. Las esporas son considerablemente más resistentes al calor seco que al calor húmedo. el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir más el nivel de hidratación y. . se protegen las proteínas de las esporas.En la esterilización por calor seco.

.Radiación La radiación ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante. a menos que se pueda garantizar la exposición directa del organismo contaminante. Los rayos gamma y X son más útiles debido a su alto poder de penetración.

Determinación de la destrucción de microorganismos: ‡Tiempo térmico letal: tiempo más corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada ‡Punto térmico letal: temperatura más baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. . No son particularmente útiles. Para ambos se necesita saber el tamaño inicial de la población y las condiciones precisas.

que se requiere para reducir la población viable al 10% de su valor previo. ‡Valor-Z: es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10. a una temperatura determinada. .Un parámetro más útil es: ‡Tiempo de reducción decimal o valor D: tiempo en minutos.

F = t * 10(T-121)/z Donde t= tiempo de aplicación del tratamiento letal.Métodos prácticos: Calentamiento: Para comparar las capacidades relativas de esterilización de los diferentes procesos de calentamiento. La unidad escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento. se requiere una unidad de letalidad. T= temperatura en oC y z= aumento de temperatura requerido para reducir el período de calentamiento en un 90% (es decir el valor z). a la temperatura de 121oC. .

así como el agente más tóxico.En la industria alimentaria el peligro más serio para la salud es la presencia de Clostridium botulinum. 3 min Vapor a 126oC (20 psi). En esterilización clínica: Calor húmedo: Vapor a 134oC (30 psi). 15 min Vapor a 115oC (10 psi). 20 min . el formador de esporas patogénico más resistente al calor. 10 min Vapor a 121oC (15 psi).

un tiempo de mantenimiento de 15 min de vapor a 121oC equivale a 75xD.Como los valores de D para las esporas son. del orden de 0. . botulinum casi imposiblemente remota. a 121oC.2 min. lo que hace la probabilidad de fallo en relación a la supervivencia de C.

. ya que mezclas de aire y vapor a una presión determinada alcanzarán una temperatura más baja que la del vapor puro a la misma presión.Procesos discontinuos: Autoclaves: Todo el aire debe ser eliminado antes del ciclo de calentamiento.

la fuerte formación de espuma durante el burbujeo puede limitar la transferencia del calor. Mientras la eficiencia térmica de este proceso es alta.Inyección directa del vapor: Si se utilizan inyecciones directas de vapor se debe tener en cuenta que entre el 10 y el 20% del volumen final se deberán a condensación. .

en ambos casos. generalmente conseguido mediante espirales. permanecen los problemas de enfriamiento. El calor en este procedimiento es menos eficiente que por inyección directa y. .Calentamiento indirecto: Pasando vapor de agua a través de una espiral de intercambio de calor o de una camisa.

Un rápido calentamiento 2. Un tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterilización 3.Esterilización por flujo continuo: En el diseño del equipo deben considerarse las tres etapas del ciclo. para conseguir: 1. Un rápido enfriamiento .

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equivalente a una energía de absorción de 100 ergs/g de aire. . El Roentgen (R) es 83 ergs/g de aire.Esterilización por radiaciones: Normalmente se lleva a cabo con una fuente de cobalto-60 o de cesio-137. La unidad de medida de la dosis de radiación es el rad. El efecto letal es siempre mayor en presencia de oxígeno y alto contenido en agua.

Esterilización química: ‡Formaldehído: solamente efectivo si se puede garantizar que entre en contacto con los organismos contaminantes. Pobre difusibilidad y poder de penetración. temperatura y normalmente pH. . Solamente en casos especiales. Olor picante y duradero. Sus productos de degradación son inocuos. ‡Peróxido de hidrógeno: poderoso agente oxidante que mata células vegetativas y esporas con actividad creciente con la concentración.

las condiciones óptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h. para una concentración de gas de 8001000 mg/l. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser dañado por altas temperaturas. irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire. El de etileno es más efectivo pero altamente tóxico.‡Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa. .

algodón. tapones o cilindros. celulosa moldeados como planchas. lana mineral.Esterilización por filtración: ‡Filtros profundos: capa relativament gruesa de fibra de vidrio. ‡Filtros de pantalla: membranas hechas de ésteres de celulosa u otros polímeros .

Evaluación de la eficiencia de esterilización: 1. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5. alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. Tiras indicadoras: responden al calor húmedo entre 115-123oC. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor. Tiras de papel impregnadas con esporas: bioindicadores.15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor 3. a un mínimo de 120oC. . Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor. Termosensores 2. Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0. Se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia 4.

Prueba del cloruro sódico: para que haya esterilización. Un filtro con penetración de llama de sodio de 0. .02-0.2 micrones 2.03 micrones. Prueba del azul de metileno: para distribución de partícula de 0.Pruebas de eficiencia de filtración: 1. Esporas de Bacillus: rango de tamaño 0.7-1 micrón 4. Prueba del bacteriófago T3: 0.001% tiene un equivalente de 0. Subtilis y de 0. el filtro debe retener el 99.997% 3.000005% B.00005% de T3.

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