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Biotecnologia

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BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediación Monitoreo Control de la ambiental polución

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnóstico
Vacunas Terapéutica

MEDICINA

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de células y tejidos Ingeniería genética Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniería de proteínas

Bioquímica Ingeniería Bioquímica Microbiología

Biología Celular Inmunología

CONOCIMIENTO Computación CIENTIFICO
Genética Fisiología

Biología Molecular

en manos de científicos.Nos encontramos frente a una nueva ³Revolución Industrial´ llamada Biotecnología. no basada en hierro y acero sino en microbios que. . compuestos químicos industriales. se convierten en minúsculas fábricas para producir fármacos. combustibles o alimentos.

así como a componentes de estas células. llenos de microbios. .El prefijo ³BIO´ se refiere a bacterias. levaduras y otras células vivas. La ³TECNOLOGIA´ consiste en relucientes depósitos de acero. conectados a sus fuentes de alimentación y oxígeno mediante una intrincada red de válvulas que se cierran y abren según los ritmos que marca una computadora.

.DEFINICION Según la Organización de Cooperación y Desarrollo Económicos: Es la aplicación de los principios científicos y de la ingeniería al procesamiento de materiales por agentes biológicos para proveer bienes y servicios.

PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA: Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial énfasis en la Microbiología. Genética. Bioquímica. Biología Molecular. . Inmunología e Ingeniería Bioquímica y Química.

microorganismos. células animales. en general.MATERIALES: Incluye a aquellos orgánicos e inorgánicos. células vegetales. catalizadores biológicos. . en particular. virus y enzimas. en tanto los agentes biológicos son.

productos farmacéuticos.) SERVICIOS: Lo relacionado específicamente con las prestaciones tales como purificación de agua o tratamiento de efluentes y extracción de derrames de petróleo. recuperación de metales.BIENES: Todos los productos (alimentos. etc. .

AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniería genética). Reactivos de diagnóstico: Desarrollo de reactivos por técnicas inmunológicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniería genética). .

Desarrollo de plantas transgénicas resistentes a las plagas. Utilización de marcadores moleculares. Identificación y caracterización de genes de interés. . enfermedades y herbicidas.AREA AGRICOLA: Diagnóstico de fitopatógenos en plantas de interés económico. Aceleración en la obtención de híbridos. Desarrollo de agentes de control biológico y plantas. Modificación del contenido celular en macromoléculas. Métodos de mejoramiento de especies a través de técnicas no convencionales.

bacterianas y parasitarias por técnicas de avanzada. Hormonas para el mejoramiento de la producción animal. PRODUCCION ANIMAL: Manipulación y sexado de embriones. . Producción de nuevas vacunas virales.AREA PECUARIA: SANIDAD ANIMAL: Desarrollo de métodos para el diagnóstico de enfermedades animales.

Tratamiento biológico de efluentes. incluyendo derivados lácteos.PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos. vinos y cervezas. .

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA .

Bebió del vino.‡6000 AC: Arte de fermentar. ‡4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza. se embriagó«´ . ‡Libro del Génesis (9: 20.21): ³Noé se dedicó a la labranza y plantó una viña.

‡Siglo XIV DC: Destilación de bebidas alcohólicas. Uso de bacterias de ácido acético para fabricar vinagre. ‡Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (1632-1723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos. . de bacterias de ácido láctico para conservar la leche (yogur. por ejemplo). ‡Siglo XIX: El desarrollo técnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la ³generación espontánea´.

veamos algunas recetas interesantes« .Hablando de ³generación espontánea´.

escribe: ³Hallándome en una viña de mi propiedad. el más célebre cirujano de su siglo. hice romper una enorme cantidad de grandes piedras sólidas. sin que hubiera en la piedra la menor apariencia de abertura« .Ambroise Paré (1517-1590). próxima al pueblo de Meudon. Dentro de una de ellas se encontró un grueso sapo vivo.

cuya humedad.´ . Pero el cantero me dijo que no había por qué asombrarse. crecer y vivir allí. produce tales seres. pues varias veces había hallado animales de ésta y de otras clases en lo más recóndito de las piedras.«Me maravilló el hecho de que este animal hubiese podido nacer. sin que existiese el menor indicio de una abertura. al entrar en putrefacción. Se puede explicar así el nacimiento y la vida de estos animales: son engendrados a partir de alguna sustancia húmeda de las piedras.

o sea el tiempo de gestación de ratón y nuestro naturalista se asombre de su notable rapidez« .´ Esta metamorfosis dura cerca de veintiún días. el más grande fisiólogo de la época. indica lo siguiente para la obtención de ratones: un vaso lleno de trigo se cubre con una camisa sucia. preferentemente de mujer. convierte el trigo mismo en ratones.Van Helmont (1577-1644). ³Un fermento originado en la camisa y transformado por el olor de los granos.

«´Ello.´ . ni deformes. nos dice. es tanto más admirable cuanto que los ratones originados por el trigo y la camisa no son pequeños ni lactantes. sino muy bien formados y pueden saltar. ni minúsculos.

‡Francesco Redi (1626-1697): Médico italiano que demostró que los gusanos de la carne son larvas de mosca y que no aparecen si la carne se guarda bien tapada (³fiambrera´). ‡Lázaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano, demostró que los microbios son transportados por el aire; los mismos no invaden los frascos cerrados herméticamente. ‡Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros procedimientos de enlatado.

‡Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sentó las bases de la futura industria biotecnológica al demostrar que todos los procesos de fermentación eran el resultado de la actividad microbiana. ‡Edward Buchner (1860-1917): Descubre, dentro de las células microbianas, las sustancias vitales responsables de todas las transformaciones químicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas progresó la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como ³segunda era biotecnológica.´

Agregando álcali y bisulfito de sodio al depósito de fermentación alcohólica se fomentaba la producción de glicerol. para la producción de disolventes como la acetona (fabricación de cordita). usando Clostridium acetobutylicum.‡La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas biotecnológicas: ‡Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la ³fermentación dirigida´ de Saccharomyces cerevisiae. ‡Proceso Weizmann. .

por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las víctimas no murieran de sepsis bacteriana. ‡Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnológica.‡Los descubrimientos de Pasteur. Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibióticos. .

‡El descubrimiento de los sistemas de restricción y modificación en bacterias y la aplicación de las endonucleasas. ‡Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formación de hibridomas con la posterior utilización para la producción de anticuerpos monoclonales (1975). con el advenimiento de la Ingeniería Genética. .Puede decirse que la ³cuarta era biotecnológica´ comienza a principios de la década de 1970.

A esto siguieron los interferones.Un hito que merece resaltarse ocurrió en 1982 cuando la compañía Eli Lilly consiguió la aprobación de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamérica para la utilización de ³insulina humana´ clonada y producida en Escherichia coli. el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. etc. . hormonas de crecimiento humana y bovina.

Entrando ya en tema« .

. en forma exitosa. es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original.El desarrollo de un proceso de producción a gran escala. generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequeña escala.

. ‡Desarrollo del medio de cultivo.La actividad de desarrollo se concentra en tres áreas principales: ‡Desarrollo de los organismos. ‡Ingeniería de fermentación.

EL FERMENTADOR .

DEFINICION OPERATIVA: ‡Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operación de un proceso biológico deseado. .

optimizado para el crecimiento celular y actividad metabólica. . el sistema de contención más apropiado debe diseñarse para brindar el mejor medio ambiente.En cuanto al biorreactor: Para cada proceso biotecnológico.

Equipos accesorios. ‡Válvulas de seguridad ‡Manómetros ‡Válvulas de control ‡Tuberías ‡Control de temperatura ‡Control de pH ‡Control de espumas ‡Puntos de muestreo .

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

‡BIOLOGICO

‡QUIMICO

‡FISICO

AIREACION Y AGITACION. La agitación es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolución.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno y nutrientes. 3- impedir la formación de agregados celulares. 4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.

.aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador.5.

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Tipos de fermentador: ‡Crecimiento en suspensión. . ‡Crecimiento con soporte.

los organismos están sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio. En los sistemas con soporte. sin embargo. los sistemas en suspensión poseen una película de organismos en la superficie del contenedor y en sistemas con soporte. .los organismos crecen como una monocapa o película sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo. En la práctica.En el crecimiento en suspensión. encontramos organismos dispersos en el medio nutritivo.

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION .

del medio elegido y del producto buscado. similares independientemente del organismo utilizado.Las etapas en la manufactura de productos en la tecnología de bioprocesos son. esencialmente. .

. Los organismos deben cultivarse y ´motivarseµ para formar el producto deseado.En todos los ejemplos. mediante un sistema de contención técnica y física (el biorreactor) y un medio correcto en su composición y parámetros reguladores del crecimiento. tales como temperatura y aireación. se cultiva gran número de células en condiciones controladas.

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO .

expresado en términos de masa o número de células. . El incremento en biomasa puede determinarse gravimétricamente o numéricamente para sistemas unicelulares.El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular.

Tiempo de duplicación: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa. . Tiempo de generación: Se refiere al tiempo necesario para duplicar el número de células.

En un proceso biotecnológico. existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes (batch) -Semi-continuo -Continuo .

se limpia y el proceso se repite. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reacción.Modos de operación de los fermentadores: ‡Operación por lotes: El reactor se carga con la especie reactiva y. a medida que procede la reacción. se vacía el reactor. . cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. Son procesos que no se encuentran en estado estacionario.

El ambiente nutricional dentro del biorreactor cambia en forma continua y. Eventualmente. la multiplicación celular cesa por desaparición o limitación de nutrientes y acumulación de productos tóxicos de excreción. . por lo tanto. fuerza cambios en el metabolismo celular.

La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes. se muestra tal como sigue: .

indicando que las células están en proceso de adaptación a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzará.La fase 1 o ´lagµ. eventualmente. es un tiempo de aparente no crecimiento. . pero estudios bioquímicos demuestran actividad metabólica.

rápidamente.Existe. una fase de aceleración transitoria cuando el inóculo comienza a crecer que es seguida. En la fase exponencial. por una fase de crecimiento exponencial. luego. parámetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores. con nutrientes en exceso. el crecimiento microbiano ocurre a la máxima velocidad posible para ese microorganismo. .

Sin embargo. seguida de la fase estacionaria. a medida que las condiciones nutricionales cambian. en cultivos por lote. donde el crecimiento global no se obtiene. . el crecimiento exponencial es de duración limitada y. por falta de nutrientes. la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleración.

La mayoría de los procesos biotecnológicos por lotes se detiene antes de esta fase. .La fase final del ciclo es la fase de muerte. debido a la disminución en el metabolismo y a la lisis celular. cuando la velocidad de crecimiento ha cesado.

Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adición gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos). libre de células (utilizado para cultivos de células animales). aumentando el volumen del cultivo (utilizado para producción industrial de levadura). . -Adición de medio al cultivo (perfusión) y extracción de un volumen igual de medio usado.

.

En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el líquido fluye a través del sistema y salen del sistema junto con el medio. .‡Operación continua: Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera.

En un sistema continuo con mezcla completa.Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el líquido de alimentación. La alimentación del sistema es medio nutriente libre de organismos y. . organismos y productos. las condiciones son uniformes en todo el reactor. en un equilibrio de mezcla de nutrientes. en algunos casos. un inóculo de organismos reciclados.

en fase de crecimiento exponencial. con una remoción correspondiente de medio más células. metabolitos. con pequeña fluctuación de nutrientes. número celular o biomasa. Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes. provee un crecimiento casi balanceado.Esta práctica de cultivo continuo. .

permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario.Este método de cultivo continuo. . en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante.

En un sistema de cultivo perfectamente mezclado. constante. a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio. se pasa medio estéril al biorreactor. productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad. . manteniendo el volumen total del cultivo. dentro del biorreactor.

una mejor coordinación con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores. flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos.Ventajas de un proceso por lotes: Las principales son: menor riesgo de contaminación. . un control más cercano de la estabilidad genética del organismo.

.Desventajas del proceso por lotes: La principal es la alta proporción de tiempo improductivo en la operación del fermentador. dificultad de diseño y la operación de procesos que no están en estado estacionario y la variabilidad entre lotes.

por el contrario. una corrida puede durar semanas o meses. pequeño. En procesos por lotes. en proporción.Los fermentadores deben ser vaciados. limpiados. operaciones todas esenciales pero no productivas. esterilizados y recargados antes de cada fermentación. . En un proceso continuo. es decir que el tiempo no productivo es. estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentación misma.

A escala industrial. salvo en casos muy especiales y se utiliza. habitualmente. el calor seco es prohibitivamente caro. la esterilización por calor húmedo. el método estándar de esterilización es el calor: 120ºC de calor húmedo durante 15 min o 160ºC de calor seco durante.Esterilización: ‡Esterilización de fermentadores. 1 hora. . al menos. ‡En el laboratorio.

haciendo pasar vapor por la camisa de termostatización. ‡El calentamiento se consigue mediante: ‡Inyección de vapor en el medio.‡Esterilización del fermentador y el medio conjuntamente. . por lo que el medio se prepara ligeramente más concentrado para compensar la dilución por el vapor condensado. ‡El medio se calienta por conducción.

‡Esterilización por separado del fermentador y el medio. . ‡Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentación es improductivo: un fermentador vacío se esteriliza con relativa rapidez.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseño de medios para procesos de fermentación -Fermentación en sustratos sólidos -Tecnología de cultivos de células de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra .

.Procesamiento posterior de la muestra. Purificación.

Deberían reflejar la necesidad de no perder más que lo absolutamente necesario del producto final. .El diseño y la operación eficiente de los procesos de purificación. son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial.

con la subsecuente concentración y purificación del producto deseado. la separación inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase líquida y una sólida. . principalmente.Este procesamiento final involucrará.

El procesamiento involucrará más de una etapa: -Destilación -Centrifugación -Filtración -Ultrafiltración -Extracción con solventes -Adsorción -Tamices moleculares -Electroforesis -Cromatografía de afinidad -Liofilización .

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS .

purificación. . finalmente. aislamiento.La tecnología de enzimas involucra la producción. uso en forma soluble y. la inmovilización de las enzimas para su utilización en gran variedad de biorreactores.

el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones: . presenta ventajas respecto de los procesos químicos que involucran un número de reacciones secuenciales. En fermentación.La utilización de sistemas enzimáticos libres de células.

Pueden ocurrir reacciones secundarias inútiles 3. Una alta proporción del sustrato será utilizada para convertirse en biomasa 2. . El aislamiento y purificación del producto deseado. a partir de la mezcla de fermentación. puede ser dificultoso.1. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formación del producto 4.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS .

La utilización de estas técnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza. .

coli Identificación de clones Transformación de microorganismos Producción industrial de enzima .Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad Purificación de la enzima Purificación de mARN total Determinación de la secuencia parcial de aminoácidos Síntesis de oligonucleótidos mARN ADN Clonación del ADN en E.

Mejorar la estabilidad 3. Aumentar la actividad de las enzimas 2. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4. Aumentar la eficiencia de un proceso . Cambiar la reacción catalizada 7. Cambiar el pH o temperatura óptimos 5. Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente 6.Objetivos en la preparación de enzimas modificadas: 1.

ENZIMAS INMOVILIZADAS .

Una nueva área de tecnología enzimática es la relacionada con la inmovilización de las enzimas en polímeros insolubles. la enzima no puede recuperarse al final de la reacción. .El uso de enzimas en forma soluble o libre. tales como membranas o partículas. debe considerarse como un posible derroche dado que. en general. actuando como portadores de la actividad enzimática.

Las ventajas de los catalizadores inmovilizados: 1. Mejora la estabilidad de las enzimas 6. Reduce los problemas de tratamiento de efluentes . Permite el reuso de las enzimas 2. Permite el desarrollo de sistemas de reacción multienzimáticos 7. Permite un mejor control de los procesos catalíticos 5. Los productos están libres de enzima 4. Ideal para operaciones continuas 3. Ofrece un potencial considerable en uso médico e industrial 8.

ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD .

La esterilización es el proceso de conseguir la esterilidad. para la que no existen grados: un objeto. o no es. si se le protege contra la contaminación. La desinfección implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patógenos. . superfcie o sustancia es. pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados. estéril. Si es estéril no contiene organismos viables o células presentes y. la condición estéril permanecerá indefinidamente.

Impedir el deterioro de un producto . Evitar la contaminación ambiental 4.La esterilización se utiliza para: 1. Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado 2. Permitir la utilización segura de los productos 3.

Irradiando con radiaciones ultravioleta.La esterilización se lleva a cabo: ‡ Eliminando los organismos viables como en la filtración ‡ Matándolos de una de las siguientes formas: 1. gamma o X 3. Calentando en presencia o ausencia de agua 2. Tratando con productos químicos en solución o en forma gaseosa .

15 min) y.Las esporas bacterianas resisten el calor (termófilas: 200 kPa a 134oC. . algunas. vapor de agua o calor seco a 180oC. 1-10 min. las altas dosis de radiación (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). La esterilización debe ser capaz de eliminar las esporas más resistentes de las especies más resistentes.

Muerte por calentamiento: En la esterilización húmeda. el vapor a presión tiene dos funciones importantes: 1. Condensándose sobre el material permite que el calor se transfiera rápidamente causando un aumento rápido de la temperatura 2. Las propias moléculas de agua aumentan. o al menos mantienen el nivel de hidratación dentro de la espora. .

. de esta forma. Las esporas son considerablemente más resistentes al calor seco que al calor húmedo.En la esterilización por calor seco. se protegen las proteínas de las esporas. el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir más el nivel de hidratación y.

. Los rayos gamma y X son más útiles debido a su alto poder de penetración. a menos que se pueda garantizar la exposición directa del organismo contaminante.Radiación La radiación ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante.

. No son particularmente útiles.Determinación de la destrucción de microorganismos: ‡Tiempo térmico letal: tiempo más corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada ‡Punto térmico letal: temperatura más baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. Para ambos se necesita saber el tamaño inicial de la población y las condiciones precisas.

. ‡Valor-Z: es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.Un parámetro más útil es: ‡Tiempo de reducción decimal o valor D: tiempo en minutos. a una temperatura determinada. que se requiere para reducir la población viable al 10% de su valor previo.

T= temperatura en oC y z= aumento de temperatura requerido para reducir el período de calentamiento en un 90% (es decir el valor z). F = t * 10(T-121)/z Donde t= tiempo de aplicación del tratamiento letal. La unidad escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento. a la temperatura de 121oC.Métodos prácticos: Calentamiento: Para comparar las capacidades relativas de esterilización de los diferentes procesos de calentamiento. . se requiere una unidad de letalidad.

así como el agente más tóxico. el formador de esporas patogénico más resistente al calor. 15 min Vapor a 115oC (10 psi). 10 min Vapor a 121oC (15 psi). En esterilización clínica: Calor húmedo: Vapor a 134oC (30 psi). 3 min Vapor a 126oC (20 psi).En la industria alimentaria el peligro más serio para la salud es la presencia de Clostridium botulinum. 20 min .

lo que hace la probabilidad de fallo en relación a la supervivencia de C.2 min.Como los valores de D para las esporas son. a 121oC. un tiempo de mantenimiento de 15 min de vapor a 121oC equivale a 75xD. del orden de 0. . botulinum casi imposiblemente remota.

ya que mezclas de aire y vapor a una presión determinada alcanzarán una temperatura más baja que la del vapor puro a la misma presión. .Procesos discontinuos: Autoclaves: Todo el aire debe ser eliminado antes del ciclo de calentamiento.

Mientras la eficiencia térmica de este proceso es alta. .Inyección directa del vapor: Si se utilizan inyecciones directas de vapor se debe tener en cuenta que entre el 10 y el 20% del volumen final se deberán a condensación. la fuerte formación de espuma durante el burbujeo puede limitar la transferencia del calor.

. El calor en este procedimiento es menos eficiente que por inyección directa y. permanecen los problemas de enfriamiento. generalmente conseguido mediante espirales. en ambos casos.Calentamiento indirecto: Pasando vapor de agua a través de una espiral de intercambio de calor o de una camisa.

Un rápido calentamiento 2. para conseguir: 1.Esterilización por flujo continuo: En el diseño del equipo deben considerarse las tres etapas del ciclo. Un rápido enfriamiento . Un tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterilización 3.

.

Esterilización por radiaciones: Normalmente se lleva a cabo con una fuente de cobalto-60 o de cesio-137. El Roentgen (R) es 83 ergs/g de aire. El efecto letal es siempre mayor en presencia de oxígeno y alto contenido en agua. . equivalente a una energía de absorción de 100 ergs/g de aire. La unidad de medida de la dosis de radiación es el rad.

‡Peróxido de hidrógeno: poderoso agente oxidante que mata células vegetativas y esporas con actividad creciente con la concentración. temperatura y normalmente pH. Pobre difusibilidad y poder de penetración. . Solamente en casos especiales. Olor picante y duradero. Sus productos de degradación son inocuos.Esterilización química: ‡Formaldehído: solamente efectivo si se puede garantizar que entre en contacto con los organismos contaminantes.

Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad. El de etileno es más efectivo pero altamente tóxico. . para una concentración de gas de 8001000 mg/l. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser dañado por altas temperaturas. irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire. las condiciones óptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h.‡Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa.

celulosa moldeados como planchas. lana mineral. algodón. tapones o cilindros.Esterilización por filtración: ‡Filtros profundos: capa relativament gruesa de fibra de vidrio. ‡Filtros de pantalla: membranas hechas de ésteres de celulosa u otros polímeros .

. alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. a un mínimo de 120oC. Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5.15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor 3.Evaluación de la eficiencia de esterilización: 1. Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0. Se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia 4. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor. Tiras de papel impregnadas con esporas: bioindicadores. Tiras indicadoras: responden al calor húmedo entre 115-123oC. Termosensores 2.

. Prueba del cloruro sódico: para que haya esterilización.2 micrones 2. Prueba del bacteriófago T3: 0. Subtilis y de 0.02-0.001% tiene un equivalente de 0.997% 3. Esporas de Bacillus: rango de tamaño 0. Un filtro con penetración de llama de sodio de 0.Pruebas de eficiencia de filtración: 1.03 micrones. el filtro debe retener el 99.000005% B.00005% de T3.7-1 micrón 4. Prueba del azul de metileno: para distribución de partícula de 0.

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