BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediación Monitoreo Control de la ambiental polución

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnóstico
Vacunas Terapéutica

MEDICINA

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de células y tejidos Ingeniería genética Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniería de proteínas

Bioquímica Ingeniería Bioquímica Microbiología

Biología Celular Inmunología

CONOCIMIENTO Computación CIENTIFICO
Genética Fisiología

Biología Molecular

no basada en hierro y acero sino en microbios que. en manos de científicos.Nos encontramos frente a una nueva ³Revolución Industrial´ llamada Biotecnología. se convierten en minúsculas fábricas para producir fármacos. . compuestos químicos industriales. combustibles o alimentos.

El prefijo ³BIO´ se refiere a bacterias. así como a componentes de estas células. . levaduras y otras células vivas. llenos de microbios. La ³TECNOLOGIA´ consiste en relucientes depósitos de acero. conectados a sus fuentes de alimentación y oxígeno mediante una intrincada red de válvulas que se cierran y abren según los ritmos que marca una computadora.

.DEFINICION Según la Organización de Cooperación y Desarrollo Económicos: Es la aplicación de los principios científicos y de la ingeniería al procesamiento de materiales por agentes biológicos para proveer bienes y servicios.

Biología Molecular. Bioquímica. Genética. Inmunología e Ingeniería Bioquímica y Química.PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA: Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial énfasis en la Microbiología. .

MATERIALES: Incluye a aquellos orgánicos e inorgánicos. células vegetales. catalizadores biológicos. virus y enzimas. en general. en particular. células animales. en tanto los agentes biológicos son. microorganismos. .

BIENES: Todos los productos (alimentos. etc. productos farmacéuticos. . recuperación de metales.) SERVICIOS: Lo relacionado específicamente con las prestaciones tales como purificación de agua o tratamiento de efluentes y extracción de derrames de petróleo.

AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniería genética). Reactivos de diagnóstico: Desarrollo de reactivos por técnicas inmunológicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniería genética). .

Identificación y caracterización de genes de interés. enfermedades y herbicidas. . Utilización de marcadores moleculares.AREA AGRICOLA: Diagnóstico de fitopatógenos en plantas de interés económico. Desarrollo de plantas transgénicas resistentes a las plagas. Modificación del contenido celular en macromoléculas. Métodos de mejoramiento de especies a través de técnicas no convencionales. Desarrollo de agentes de control biológico y plantas. Aceleración en la obtención de híbridos.

PRODUCCION ANIMAL: Manipulación y sexado de embriones.AREA PECUARIA: SANIDAD ANIMAL: Desarrollo de métodos para el diagnóstico de enfermedades animales. bacterianas y parasitarias por técnicas de avanzada. . Producción de nuevas vacunas virales. Hormonas para el mejoramiento de la producción animal.

incluyendo derivados lácteos. . vinos y cervezas. Tratamiento biológico de efluentes.PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos.

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA .

‡4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. se embriagó«´ . ‡Libro del Génesis (9: 20. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza.‡6000 AC: Arte de fermentar.21): ³Noé se dedicó a la labranza y plantó una viña. Bebió del vino.

Uso de bacterias de ácido acético para fabricar vinagre.‡Siglo XIV DC: Destilación de bebidas alcohólicas. . por ejemplo). ‡Siglo XIX: El desarrollo técnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la ³generación espontánea´. de bacterias de ácido láctico para conservar la leche (yogur. ‡Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (1632-1723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos.

veamos algunas recetas interesantes« .Hablando de ³generación espontánea´.

próxima al pueblo de Meudon. hice romper una enorme cantidad de grandes piedras sólidas. sin que hubiera en la piedra la menor apariencia de abertura« . escribe: ³Hallándome en una viña de mi propiedad. el más célebre cirujano de su siglo.Ambroise Paré (1517-1590). Dentro de una de ellas se encontró un grueso sapo vivo.

«Me maravilló el hecho de que este animal hubiese podido nacer. pues varias veces había hallado animales de ésta y de otras clases en lo más recóndito de las piedras. sin que existiese el menor indicio de una abertura. al entrar en putrefacción. cuya humedad. Se puede explicar así el nacimiento y la vida de estos animales: son engendrados a partir de alguna sustancia húmeda de las piedras.´ . crecer y vivir allí. produce tales seres. Pero el cantero me dijo que no había por qué asombrarse.

´ Esta metamorfosis dura cerca de veintiún días. o sea el tiempo de gestación de ratón y nuestro naturalista se asombre de su notable rapidez« . convierte el trigo mismo en ratones.Van Helmont (1577-1644). preferentemente de mujer. ³Un fermento originado en la camisa y transformado por el olor de los granos. indica lo siguiente para la obtención de ratones: un vaso lleno de trigo se cubre con una camisa sucia. el más grande fisiólogo de la época.

sino muy bien formados y pueden saltar.«´Ello. nos dice. ni deformes. ni minúsculos.´ . es tanto más admirable cuanto que los ratones originados por el trigo y la camisa no son pequeños ni lactantes.

‡Francesco Redi (1626-1697): Médico italiano que demostró que los gusanos de la carne son larvas de mosca y que no aparecen si la carne se guarda bien tapada (³fiambrera´). ‡Lázaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano, demostró que los microbios son transportados por el aire; los mismos no invaden los frascos cerrados herméticamente. ‡Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros procedimientos de enlatado.

‡Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sentó las bases de la futura industria biotecnológica al demostrar que todos los procesos de fermentación eran el resultado de la actividad microbiana. ‡Edward Buchner (1860-1917): Descubre, dentro de las células microbianas, las sustancias vitales responsables de todas las transformaciones químicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas progresó la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como ³segunda era biotecnológica.´

.‡La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas biotecnológicas: ‡Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la ³fermentación dirigida´ de Saccharomyces cerevisiae. ‡Proceso Weizmann. usando Clostridium acetobutylicum. Agregando álcali y bisulfito de sodio al depósito de fermentación alcohólica se fomentaba la producción de glicerol. para la producción de disolventes como la acetona (fabricación de cordita).

‡Los descubrimientos de Pasteur. Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibióticos. ‡Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnológica. por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las víctimas no murieran de sepsis bacteriana. .

‡Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formación de hibridomas con la posterior utilización para la producción de anticuerpos monoclonales (1975). . ‡El descubrimiento de los sistemas de restricción y modificación en bacterias y la aplicación de las endonucleasas. con el advenimiento de la Ingeniería Genética.Puede decirse que la ³cuarta era biotecnológica´ comienza a principios de la década de 1970.

. A esto siguieron los interferones. hormonas de crecimiento humana y bovina. etc.Un hito que merece resaltarse ocurrió en 1982 cuando la compañía Eli Lilly consiguió la aprobación de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamérica para la utilización de ³insulina humana´ clonada y producida en Escherichia coli. el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B.

Entrando ya en tema« .

El desarrollo de un proceso de producción a gran escala. generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequeña escala. en forma exitosa. . es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original.

La actividad de desarrollo se concentra en tres áreas principales: ‡Desarrollo de los organismos. ‡Desarrollo del medio de cultivo. ‡Ingeniería de fermentación. .

EL FERMENTADOR .

DEFINICION OPERATIVA: ‡Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operación de un proceso biológico deseado. .

el sistema de contención más apropiado debe diseñarse para brindar el mejor medio ambiente. . optimizado para el crecimiento celular y actividad metabólica.En cuanto al biorreactor: Para cada proceso biotecnológico.

‡Válvulas de seguridad ‡Manómetros ‡Válvulas de control ‡Tuberías ‡Control de temperatura ‡Control de pH ‡Control de espumas ‡Puntos de muestreo .Equipos accesorios.

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

‡BIOLOGICO

‡QUIMICO

‡FISICO

AIREACION Y AGITACION. La agitación es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolución.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno y nutrientes. 3- impedir la formación de agregados celulares. 4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.

aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador. .5.

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Tipos de fermentador: ‡Crecimiento en suspensión. ‡Crecimiento con soporte. .

los organismos están sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio. sin embargo. En los sistemas con soporte. encontramos organismos dispersos en el medio nutritivo.los organismos crecen como una monocapa o película sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo. los sistemas en suspensión poseen una película de organismos en la superficie del contenedor y en sistemas con soporte.En el crecimiento en suspensión. . En la práctica.

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION .

del medio elegido y del producto buscado.Las etapas en la manufactura de productos en la tecnología de bioprocesos son. esencialmente. . similares independientemente del organismo utilizado.

En todos los ejemplos. . tales como temperatura y aireación. Los organismos deben cultivarse y ´motivarseµ para formar el producto deseado. mediante un sistema de contención técnica y física (el biorreactor) y un medio correcto en su composición y parámetros reguladores del crecimiento. se cultiva gran número de células en condiciones controladas.

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO .

. expresado en términos de masa o número de células. El incremento en biomasa puede determinarse gravimétricamente o numéricamente para sistemas unicelulares.El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular.

Tiempo de duplicación: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa. Tiempo de generación: Se refiere al tiempo necesario para duplicar el número de células. .

existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes (batch) -Semi-continuo -Continuo .En un proceso biotecnológico.

Son procesos que no se encuentran en estado estacionario. cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. se limpia y el proceso se repite. se vacía el reactor. a medida que procede la reacción.Modos de operación de los fermentadores: ‡Operación por lotes: El reactor se carga con la especie reactiva y. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reacción. .

. por lo tanto. Eventualmente.El ambiente nutricional dentro del biorreactor cambia en forma continua y. fuerza cambios en el metabolismo celular. la multiplicación celular cesa por desaparición o limitación de nutrientes y acumulación de productos tóxicos de excreción.

La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes. se muestra tal como sigue: .

pero estudios bioquímicos demuestran actividad metabólica.La fase 1 o ´lagµ. eventualmente. es un tiempo de aparente no crecimiento. indicando que las células están en proceso de adaptación a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzará. .

luego. una fase de aceleración transitoria cuando el inóculo comienza a crecer que es seguida. con nutrientes en exceso. . En la fase exponencial. el crecimiento microbiano ocurre a la máxima velocidad posible para ese microorganismo. por una fase de crecimiento exponencial.Existe. parámetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores. rápidamente.

por falta de nutrientes. en cultivos por lote. donde el crecimiento global no se obtiene. . a medida que las condiciones nutricionales cambian. el crecimiento exponencial es de duración limitada y. la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleración. seguida de la fase estacionaria.Sin embargo.

cuando la velocidad de crecimiento ha cesado. .La fase final del ciclo es la fase de muerte. La mayoría de los procesos biotecnológicos por lotes se detiene antes de esta fase. debido a la disminución en el metabolismo y a la lisis celular.

Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adición gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos). . -Adición de medio al cultivo (perfusión) y extracción de un volumen igual de medio usado. aumentando el volumen del cultivo (utilizado para producción industrial de levadura). libre de células (utilizado para cultivos de células animales).

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‡Operación continua: Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera. . En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el líquido fluye a través del sistema y salen del sistema junto con el medio.

La alimentación del sistema es medio nutriente libre de organismos y.Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el líquido de alimentación. un inóculo de organismos reciclados. en un equilibrio de mezcla de nutrientes. . las condiciones son uniformes en todo el reactor. organismos y productos. en algunos casos. En un sistema continuo con mezcla completa.

metabolitos. provee un crecimiento casi balanceado. en fase de crecimiento exponencial. número celular o biomasa. con pequeña fluctuación de nutrientes. . con una remoción correspondiente de medio más células.Esta práctica de cultivo continuo. Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes.

. permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario. en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante.Este método de cultivo continuo.

manteniendo el volumen total del cultivo. a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio. productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad. constante. . dentro del biorreactor. se pasa medio estéril al biorreactor.En un sistema de cultivo perfectamente mezclado.

una mejor coordinación con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores. .Ventajas de un proceso por lotes: Las principales son: menor riesgo de contaminación. flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos. un control más cercano de la estabilidad genética del organismo.

. dificultad de diseño y la operación de procesos que no están en estado estacionario y la variabilidad entre lotes.Desventajas del proceso por lotes: La principal es la alta proporción de tiempo improductivo en la operación del fermentador.

. estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentación misma. es decir que el tiempo no productivo es. En procesos por lotes. operaciones todas esenciales pero no productivas. pequeño. por el contrario.Los fermentadores deben ser vaciados. una corrida puede durar semanas o meses. limpiados. en proporción. En un proceso continuo. esterilizados y recargados antes de cada fermentación.

1 hora. ‡En el laboratorio. el método estándar de esterilización es el calor: 120ºC de calor húmedo durante 15 min o 160ºC de calor seco durante. salvo en casos muy especiales y se utiliza. al menos. . habitualmente.Esterilización: ‡Esterilización de fermentadores. la esterilización por calor húmedo. el calor seco es prohibitivamente caro. A escala industrial.

‡El medio se calienta por conducción.‡Esterilización del fermentador y el medio conjuntamente. por lo que el medio se prepara ligeramente más concentrado para compensar la dilución por el vapor condensado. haciendo pasar vapor por la camisa de termostatización. . ‡El calentamiento se consigue mediante: ‡Inyección de vapor en el medio.

. ‡Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentación es improductivo: un fermentador vacío se esteriliza con relativa rapidez.‡Esterilización por separado del fermentador y el medio.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseño de medios para procesos de fermentación -Fermentación en sustratos sólidos -Tecnología de cultivos de células de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra .

Purificación.Procesamiento posterior de la muestra. .

El diseño y la operación eficiente de los procesos de purificación. Deberían reflejar la necesidad de no perder más que lo absolutamente necesario del producto final. . son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial.

Este procesamiento final involucrará. principalmente. . con la subsecuente concentración y purificación del producto deseado. la separación inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase líquida y una sólida.

El procesamiento involucrará más de una etapa: -Destilación -Centrifugación -Filtración -Ultrafiltración -Extracción con solventes -Adsorción -Tamices moleculares -Electroforesis -Cromatografía de afinidad -Liofilización .

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS .

La tecnología de enzimas involucra la producción. purificación. la inmovilización de las enzimas para su utilización en gran variedad de biorreactores. finalmente. uso en forma soluble y. . aislamiento.

presenta ventajas respecto de los procesos químicos que involucran un número de reacciones secuenciales. En fermentación. el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones: .La utilización de sistemas enzimáticos libres de células.

puede ser dificultoso. . a partir de la mezcla de fermentación. El aislamiento y purificación del producto deseado. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formación del producto 4. Pueden ocurrir reacciones secundarias inútiles 3. Una alta proporción del sustrato será utilizada para convertirse en biomasa 2.1.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS .

La utilización de estas técnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza. .

coli Identificación de clones Transformación de microorganismos Producción industrial de enzima .Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad Purificación de la enzima Purificación de mARN total Determinación de la secuencia parcial de aminoácidos Síntesis de oligonucleótidos mARN ADN Clonación del ADN en E.

Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente 6. Mejorar la estabilidad 3. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4. Cambiar la reacción catalizada 7. Aumentar la actividad de las enzimas 2. Aumentar la eficiencia de un proceso . Cambiar el pH o temperatura óptimos 5.Objetivos en la preparación de enzimas modificadas: 1.

ENZIMAS INMOVILIZADAS .

debe considerarse como un posible derroche dado que. tales como membranas o partículas. Una nueva área de tecnología enzimática es la relacionada con la inmovilización de las enzimas en polímeros insolubles. en general.El uso de enzimas en forma soluble o libre. la enzima no puede recuperarse al final de la reacción. actuando como portadores de la actividad enzimática. .

Permite el reuso de las enzimas 2. Reduce los problemas de tratamiento de efluentes . Permite el desarrollo de sistemas de reacción multienzimáticos 7. Los productos están libres de enzima 4. Ideal para operaciones continuas 3. Ofrece un potencial considerable en uso médico e industrial 8.Las ventajas de los catalizadores inmovilizados: 1. Mejora la estabilidad de las enzimas 6. Permite un mejor control de los procesos catalíticos 5.

ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD .

La esterilización es el proceso de conseguir la esterilidad. superfcie o sustancia es. pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados. Si es estéril no contiene organismos viables o células presentes y. . si se le protege contra la contaminación. para la que no existen grados: un objeto. La desinfección implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patógenos. estéril. o no es. la condición estéril permanecerá indefinidamente.

La esterilización se utiliza para: 1. Permitir la utilización segura de los productos 3. Evitar la contaminación ambiental 4. Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado 2. Impedir el deterioro de un producto .

La esterilización se lleva a cabo: ‡ Eliminando los organismos viables como en la filtración ‡ Matándolos de una de las siguientes formas: 1. gamma o X 3. Tratando con productos químicos en solución o en forma gaseosa . Irradiando con radiaciones ultravioleta. Calentando en presencia o ausencia de agua 2.

algunas.Las esporas bacterianas resisten el calor (termófilas: 200 kPa a 134oC. 15 min) y. vapor de agua o calor seco a 180oC. La esterilización debe ser capaz de eliminar las esporas más resistentes de las especies más resistentes. las altas dosis de radiación (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). 1-10 min. .

.Muerte por calentamiento: En la esterilización húmeda. o al menos mantienen el nivel de hidratación dentro de la espora. Condensándose sobre el material permite que el calor se transfiera rápidamente causando un aumento rápido de la temperatura 2. Las propias moléculas de agua aumentan. el vapor a presión tiene dos funciones importantes: 1.

el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir más el nivel de hidratación y. Las esporas son considerablemente más resistentes al calor seco que al calor húmedo. . de esta forma. se protegen las proteínas de las esporas.En la esterilización por calor seco.

Radiación La radiación ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante. Los rayos gamma y X son más útiles debido a su alto poder de penetración. . a menos que se pueda garantizar la exposición directa del organismo contaminante.

Para ambos se necesita saber el tamaño inicial de la población y las condiciones precisas. .Determinación de la destrucción de microorganismos: ‡Tiempo térmico letal: tiempo más corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada ‡Punto térmico letal: temperatura más baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. No son particularmente útiles.

a una temperatura determinada. que se requiere para reducir la población viable al 10% de su valor previo. . ‡Valor-Z: es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.Un parámetro más útil es: ‡Tiempo de reducción decimal o valor D: tiempo en minutos.

a la temperatura de 121oC. La unidad escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento. se requiere una unidad de letalidad. F = t * 10(T-121)/z Donde t= tiempo de aplicación del tratamiento letal. . T= temperatura en oC y z= aumento de temperatura requerido para reducir el período de calentamiento en un 90% (es decir el valor z).Métodos prácticos: Calentamiento: Para comparar las capacidades relativas de esterilización de los diferentes procesos de calentamiento.

15 min Vapor a 115oC (10 psi). En esterilización clínica: Calor húmedo: Vapor a 134oC (30 psi). 3 min Vapor a 126oC (20 psi). así como el agente más tóxico. 20 min .En la industria alimentaria el peligro más serio para la salud es la presencia de Clostridium botulinum. 10 min Vapor a 121oC (15 psi). el formador de esporas patogénico más resistente al calor.

del orden de 0. . a 121oC. lo que hace la probabilidad de fallo en relación a la supervivencia de C. botulinum casi imposiblemente remota.Como los valores de D para las esporas son. un tiempo de mantenimiento de 15 min de vapor a 121oC equivale a 75xD.2 min.

. ya que mezclas de aire y vapor a una presión determinada alcanzarán una temperatura más baja que la del vapor puro a la misma presión.Procesos discontinuos: Autoclaves: Todo el aire debe ser eliminado antes del ciclo de calentamiento.

. la fuerte formación de espuma durante el burbujeo puede limitar la transferencia del calor.Inyección directa del vapor: Si se utilizan inyecciones directas de vapor se debe tener en cuenta que entre el 10 y el 20% del volumen final se deberán a condensación. Mientras la eficiencia térmica de este proceso es alta.

. en ambos casos. generalmente conseguido mediante espirales. El calor en este procedimiento es menos eficiente que por inyección directa y.Calentamiento indirecto: Pasando vapor de agua a través de una espiral de intercambio de calor o de una camisa. permanecen los problemas de enfriamiento.

Un rápido calentamiento 2.Esterilización por flujo continuo: En el diseño del equipo deben considerarse las tres etapas del ciclo. Un rápido enfriamiento . Un tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterilización 3. para conseguir: 1.

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El efecto letal es siempre mayor en presencia de oxígeno y alto contenido en agua.Esterilización por radiaciones: Normalmente se lleva a cabo con una fuente de cobalto-60 o de cesio-137. El Roentgen (R) es 83 ergs/g de aire. equivalente a una energía de absorción de 100 ergs/g de aire. La unidad de medida de la dosis de radiación es el rad. .

Solamente en casos especiales. ‡Peróxido de hidrógeno: poderoso agente oxidante que mata células vegetativas y esporas con actividad creciente con la concentración. Pobre difusibilidad y poder de penetración. .Esterilización química: ‡Formaldehído: solamente efectivo si se puede garantizar que entre en contacto con los organismos contaminantes. Olor picante y duradero. temperatura y normalmente pH. Sus productos de degradación son inocuos.

para una concentración de gas de 8001000 mg/l. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser dañado por altas temperaturas. irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire.‡Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa. . El de etileno es más efectivo pero altamente tóxico. las condiciones óptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad.

celulosa moldeados como planchas. tapones o cilindros. lana mineral. algodón.Esterilización por filtración: ‡Filtros profundos: capa relativament gruesa de fibra de vidrio. ‡Filtros de pantalla: membranas hechas de ésteres de celulosa u otros polímeros .

Tiras de papel impregnadas con esporas: bioindicadores. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5. Se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia 4. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor. Termosensores 2. Tiras indicadoras: responden al calor húmedo entre 115-123oC. Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor. Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0. alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. a un mínimo de 120oC.15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor 3. .Evaluación de la eficiencia de esterilización: 1.

001% tiene un equivalente de 0.03 micrones. Subtilis y de 0.00005% de T3.000005% B.7-1 micrón 4. Esporas de Bacillus: rango de tamaño 0. Prueba del bacteriófago T3: 0. Prueba del cloruro sódico: para que haya esterilización.02-0. Un filtro con penetración de llama de sodio de 0.2 micrones 2.Pruebas de eficiencia de filtración: 1.997% 3. . el filtro debe retener el 99. Prueba del azul de metileno: para distribución de partícula de 0.