BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediación Monitoreo Control de la ambiental polución

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnóstico
Vacunas Terapéutica

MEDICINA

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de células y tejidos Ingeniería genética Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniería de proteínas

Bioquímica Ingeniería Bioquímica Microbiología

Biología Celular Inmunología

CONOCIMIENTO Computación CIENTIFICO
Genética Fisiología

Biología Molecular

en manos de científicos. combustibles o alimentos.Nos encontramos frente a una nueva ³Revolución Industrial´ llamada Biotecnología. . no basada en hierro y acero sino en microbios que. se convierten en minúsculas fábricas para producir fármacos. compuestos químicos industriales.

. levaduras y otras células vivas. llenos de microbios. así como a componentes de estas células. La ³TECNOLOGIA´ consiste en relucientes depósitos de acero.El prefijo ³BIO´ se refiere a bacterias. conectados a sus fuentes de alimentación y oxígeno mediante una intrincada red de válvulas que se cierran y abren según los ritmos que marca una computadora.

.DEFINICION Según la Organización de Cooperación y Desarrollo Económicos: Es la aplicación de los principios científicos y de la ingeniería al procesamiento de materiales por agentes biológicos para proveer bienes y servicios.

Inmunología e Ingeniería Bioquímica y Química. Bioquímica. Biología Molecular. . Genética.PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA: Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial énfasis en la Microbiología.

. en general. células animales. en particular. en tanto los agentes biológicos son.MATERIALES: Incluye a aquellos orgánicos e inorgánicos. células vegetales. virus y enzimas. microorganismos. catalizadores biológicos.

productos farmacéuticos. .BIENES: Todos los productos (alimentos.) SERVICIOS: Lo relacionado específicamente con las prestaciones tales como purificación de agua o tratamiento de efluentes y extracción de derrames de petróleo. etc. recuperación de metales.

Reactivos de diagnóstico: Desarrollo de reactivos por técnicas inmunológicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniería genética). .AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniería genética).

Desarrollo de agentes de control biológico y plantas. Modificación del contenido celular en macromoléculas. Aceleración en la obtención de híbridos. Identificación y caracterización de genes de interés. Desarrollo de plantas transgénicas resistentes a las plagas. enfermedades y herbicidas. Métodos de mejoramiento de especies a través de técnicas no convencionales. Utilización de marcadores moleculares. .AREA AGRICOLA: Diagnóstico de fitopatógenos en plantas de interés económico.

AREA PECUARIA: SANIDAD ANIMAL: Desarrollo de métodos para el diagnóstico de enfermedades animales. Hormonas para el mejoramiento de la producción animal. bacterianas y parasitarias por técnicas de avanzada. Producción de nuevas vacunas virales. PRODUCCION ANIMAL: Manipulación y sexado de embriones. .

incluyendo derivados lácteos. Tratamiento biológico de efluentes. .PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos. vinos y cervezas.

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA .

‡4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. Bebió del vino. ‡Libro del Génesis (9: 20.21): ³Noé se dedicó a la labranza y plantó una viña.‡6000 AC: Arte de fermentar. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza. se embriagó«´ .

‡Siglo XIX: El desarrollo técnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la ³generación espontánea´. ‡Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (1632-1723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos. . Uso de bacterias de ácido acético para fabricar vinagre.‡Siglo XIV DC: Destilación de bebidas alcohólicas. por ejemplo). de bacterias de ácido láctico para conservar la leche (yogur.

Hablando de ³generación espontánea´. veamos algunas recetas interesantes« .

sin que hubiera en la piedra la menor apariencia de abertura« . escribe: ³Hallándome en una viña de mi propiedad. próxima al pueblo de Meudon. hice romper una enorme cantidad de grandes piedras sólidas.Ambroise Paré (1517-1590). el más célebre cirujano de su siglo. Dentro de una de ellas se encontró un grueso sapo vivo.

sin que existiese el menor indicio de una abertura.«Me maravilló el hecho de que este animal hubiese podido nacer. pues varias veces había hallado animales de ésta y de otras clases en lo más recóndito de las piedras. crecer y vivir allí. produce tales seres. Pero el cantero me dijo que no había por qué asombrarse. Se puede explicar así el nacimiento y la vida de estos animales: son engendrados a partir de alguna sustancia húmeda de las piedras. cuya humedad. al entrar en putrefacción.´ .

convierte el trigo mismo en ratones. preferentemente de mujer. ³Un fermento originado en la camisa y transformado por el olor de los granos.Van Helmont (1577-1644).´ Esta metamorfosis dura cerca de veintiún días. indica lo siguiente para la obtención de ratones: un vaso lleno de trigo se cubre con una camisa sucia. el más grande fisiólogo de la época. o sea el tiempo de gestación de ratón y nuestro naturalista se asombre de su notable rapidez« .

ni deformes.«´Ello.´ . nos dice. sino muy bien formados y pueden saltar. ni minúsculos. es tanto más admirable cuanto que los ratones originados por el trigo y la camisa no son pequeños ni lactantes.

‡Francesco Redi (1626-1697): Médico italiano que demostró que los gusanos de la carne son larvas de mosca y que no aparecen si la carne se guarda bien tapada (³fiambrera´). ‡Lázaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano, demostró que los microbios son transportados por el aire; los mismos no invaden los frascos cerrados herméticamente. ‡Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros procedimientos de enlatado.

‡Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sentó las bases de la futura industria biotecnológica al demostrar que todos los procesos de fermentación eran el resultado de la actividad microbiana. ‡Edward Buchner (1860-1917): Descubre, dentro de las células microbianas, las sustancias vitales responsables de todas las transformaciones químicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas progresó la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como ³segunda era biotecnológica.´

para la producción de disolventes como la acetona (fabricación de cordita). . ‡Proceso Weizmann. usando Clostridium acetobutylicum. Agregando álcali y bisulfito de sodio al depósito de fermentación alcohólica se fomentaba la producción de glicerol.‡La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas biotecnológicas: ‡Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la ³fermentación dirigida´ de Saccharomyces cerevisiae.

Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibióticos.‡Los descubrimientos de Pasteur. ‡Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnológica. . por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las víctimas no murieran de sepsis bacteriana.

.Puede decirse que la ³cuarta era biotecnológica´ comienza a principios de la década de 1970. ‡Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formación de hibridomas con la posterior utilización para la producción de anticuerpos monoclonales (1975). con el advenimiento de la Ingeniería Genética. ‡El descubrimiento de los sistemas de restricción y modificación en bacterias y la aplicación de las endonucleasas.

A esto siguieron los interferones.Un hito que merece resaltarse ocurrió en 1982 cuando la compañía Eli Lilly consiguió la aprobación de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamérica para la utilización de ³insulina humana´ clonada y producida en Escherichia coli. hormonas de crecimiento humana y bovina. . etc. el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B.

Entrando ya en tema« .

. en forma exitosa. generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequeña escala. es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original.El desarrollo de un proceso de producción a gran escala.

.La actividad de desarrollo se concentra en tres áreas principales: ‡Desarrollo de los organismos. ‡Ingeniería de fermentación. ‡Desarrollo del medio de cultivo.

EL FERMENTADOR .

DEFINICION OPERATIVA: ‡Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operación de un proceso biológico deseado. .

optimizado para el crecimiento celular y actividad metabólica.En cuanto al biorreactor: Para cada proceso biotecnológico. el sistema de contención más apropiado debe diseñarse para brindar el mejor medio ambiente. .

‡Válvulas de seguridad ‡Manómetros ‡Válvulas de control ‡Tuberías ‡Control de temperatura ‡Control de pH ‡Control de espumas ‡Puntos de muestreo .Equipos accesorios.

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

‡BIOLOGICO

‡QUIMICO

‡FISICO

AIREACION Y AGITACION. La agitación es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolución.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno y nutrientes. 3- impedir la formación de agregados celulares. 4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.

aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador. .5.

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Tipos de fermentador: ‡Crecimiento en suspensión. . ‡Crecimiento con soporte.

encontramos organismos dispersos en el medio nutritivo. En los sistemas con soporte. En la práctica. sin embargo. los organismos están sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio. los sistemas en suspensión poseen una película de organismos en la superficie del contenedor y en sistemas con soporte.los organismos crecen como una monocapa o película sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo.En el crecimiento en suspensión. .

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION .

. esencialmente.Las etapas en la manufactura de productos en la tecnología de bioprocesos son. similares independientemente del organismo utilizado. del medio elegido y del producto buscado.

Los organismos deben cultivarse y ´motivarseµ para formar el producto deseado.En todos los ejemplos. se cultiva gran número de células en condiciones controladas. tales como temperatura y aireación. mediante un sistema de contención técnica y física (el biorreactor) y un medio correcto en su composición y parámetros reguladores del crecimiento. .

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO .

. expresado en términos de masa o número de células.El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular. El incremento en biomasa puede determinarse gravimétricamente o numéricamente para sistemas unicelulares.

. Tiempo de generación: Se refiere al tiempo necesario para duplicar el número de células.Tiempo de duplicación: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa.

existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes (batch) -Semi-continuo -Continuo .En un proceso biotecnológico.

cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. . se vacía el reactor. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reacción. Son procesos que no se encuentran en estado estacionario. se limpia y el proceso se repite. a medida que procede la reacción.Modos de operación de los fermentadores: ‡Operación por lotes: El reactor se carga con la especie reactiva y.

.El ambiente nutricional dentro del biorreactor cambia en forma continua y. Eventualmente. por lo tanto. fuerza cambios en el metabolismo celular. la multiplicación celular cesa por desaparición o limitación de nutrientes y acumulación de productos tóxicos de excreción.

se muestra tal como sigue: .La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes.

pero estudios bioquímicos demuestran actividad metabólica. eventualmente.La fase 1 o ´lagµ. es un tiempo de aparente no crecimiento. indicando que las células están en proceso de adaptación a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzará. .

rápidamente. el crecimiento microbiano ocurre a la máxima velocidad posible para ese microorganismo. En la fase exponencial. una fase de aceleración transitoria cuando el inóculo comienza a crecer que es seguida. parámetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores.Existe. por una fase de crecimiento exponencial. luego. . con nutrientes en exceso.

por falta de nutrientes. la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleración. el crecimiento exponencial es de duración limitada y. . seguida de la fase estacionaria. a medida que las condiciones nutricionales cambian.Sin embargo. donde el crecimiento global no se obtiene. en cultivos por lote.

.La fase final del ciclo es la fase de muerte. debido a la disminución en el metabolismo y a la lisis celular. cuando la velocidad de crecimiento ha cesado. La mayoría de los procesos biotecnológicos por lotes se detiene antes de esta fase.

. -Adición de medio al cultivo (perfusión) y extracción de un volumen igual de medio usado.Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adición gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos). libre de células (utilizado para cultivos de células animales). aumentando el volumen del cultivo (utilizado para producción industrial de levadura).

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En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el líquido fluye a través del sistema y salen del sistema junto con el medio.‡Operación continua: Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera. .

las condiciones son uniformes en todo el reactor. La alimentación del sistema es medio nutriente libre de organismos y. . En un sistema continuo con mezcla completa. un inóculo de organismos reciclados. en algunos casos. en un equilibrio de mezcla de nutrientes. organismos y productos.Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el líquido de alimentación.

Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes. metabolitos. provee un crecimiento casi balanceado.Esta práctica de cultivo continuo. con pequeña fluctuación de nutrientes. en fase de crecimiento exponencial. con una remoción correspondiente de medio más células. . número celular o biomasa.

permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario.Este método de cultivo continuo. en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante. .

. a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio.En un sistema de cultivo perfectamente mezclado. productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad. manteniendo el volumen total del cultivo. se pasa medio estéril al biorreactor. dentro del biorreactor. constante.

flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos.Ventajas de un proceso por lotes: Las principales son: menor riesgo de contaminación. un control más cercano de la estabilidad genética del organismo. . una mejor coordinación con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores.

dificultad de diseño y la operación de procesos que no están en estado estacionario y la variabilidad entre lotes.Desventajas del proceso por lotes: La principal es la alta proporción de tiempo improductivo en la operación del fermentador. .

esterilizados y recargados antes de cada fermentación. En un proceso continuo. estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentación misma. En procesos por lotes. por el contrario. es decir que el tiempo no productivo es. operaciones todas esenciales pero no productivas. . pequeño. limpiados. una corrida puede durar semanas o meses.Los fermentadores deben ser vaciados. en proporción.

salvo en casos muy especiales y se utiliza. ‡En el laboratorio. al menos. el calor seco es prohibitivamente caro. 1 hora.Esterilización: ‡Esterilización de fermentadores. habitualmente. la esterilización por calor húmedo. . el método estándar de esterilización es el calor: 120ºC de calor húmedo durante 15 min o 160ºC de calor seco durante. A escala industrial.

por lo que el medio se prepara ligeramente más concentrado para compensar la dilución por el vapor condensado. . haciendo pasar vapor por la camisa de termostatización. ‡El calentamiento se consigue mediante: ‡Inyección de vapor en el medio.‡Esterilización del fermentador y el medio conjuntamente. ‡El medio se calienta por conducción.

. ‡Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentación es improductivo: un fermentador vacío se esteriliza con relativa rapidez.‡Esterilización por separado del fermentador y el medio.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseño de medios para procesos de fermentación -Fermentación en sustratos sólidos -Tecnología de cultivos de células de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra .

. Purificación.Procesamiento posterior de la muestra.

El diseño y la operación eficiente de los procesos de purificación. . son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial. Deberían reflejar la necesidad de no perder más que lo absolutamente necesario del producto final.

la separación inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase líquida y una sólida. . con la subsecuente concentración y purificación del producto deseado. principalmente.Este procesamiento final involucrará.

El procesamiento involucrará más de una etapa: -Destilación -Centrifugación -Filtración -Ultrafiltración -Extracción con solventes -Adsorción -Tamices moleculares -Electroforesis -Cromatografía de afinidad -Liofilización .

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS .

purificación. uso en forma soluble y. aislamiento.La tecnología de enzimas involucra la producción. finalmente. la inmovilización de las enzimas para su utilización en gran variedad de biorreactores. .

En fermentación. presenta ventajas respecto de los procesos químicos que involucran un número de reacciones secuenciales.La utilización de sistemas enzimáticos libres de células. el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones: .

El aislamiento y purificación del producto deseado. . puede ser dificultoso. Una alta proporción del sustrato será utilizada para convertirse en biomasa 2. Pueden ocurrir reacciones secundarias inútiles 3. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formación del producto 4. a partir de la mezcla de fermentación.1.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS .

.La utilización de estas técnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza.

Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad Purificación de la enzima Purificación de mARN total Determinación de la secuencia parcial de aminoácidos Síntesis de oligonucleótidos mARN ADN Clonación del ADN en E. coli Identificación de clones Transformación de microorganismos Producción industrial de enzima .

Objetivos en la preparación de enzimas modificadas: 1. Aumentar la actividad de las enzimas 2. Cambiar el pH o temperatura óptimos 5. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4. Aumentar la eficiencia de un proceso . Cambiar la reacción catalizada 7. Mejorar la estabilidad 3. Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente 6.

ENZIMAS INMOVILIZADAS .

tales como membranas o partículas. en general. actuando como portadores de la actividad enzimática. debe considerarse como un posible derroche dado que.El uso de enzimas en forma soluble o libre. la enzima no puede recuperarse al final de la reacción. . Una nueva área de tecnología enzimática es la relacionada con la inmovilización de las enzimas en polímeros insolubles.

Permite el reuso de las enzimas 2. Los productos están libres de enzima 4. Ideal para operaciones continuas 3. Ofrece un potencial considerable en uso médico e industrial 8. Permite un mejor control de los procesos catalíticos 5. Permite el desarrollo de sistemas de reacción multienzimáticos 7. Mejora la estabilidad de las enzimas 6. Reduce los problemas de tratamiento de efluentes .Las ventajas de los catalizadores inmovilizados: 1.

ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD .

pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados. si se le protege contra la contaminación. para la que no existen grados: un objeto. la condición estéril permanecerá indefinidamente.La esterilización es el proceso de conseguir la esterilidad. superfcie o sustancia es. Si es estéril no contiene organismos viables o células presentes y. estéril. La desinfección implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patógenos. o no es. .

Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado 2. Permitir la utilización segura de los productos 3. Impedir el deterioro de un producto . Evitar la contaminación ambiental 4.La esterilización se utiliza para: 1.

gamma o X 3. Irradiando con radiaciones ultravioleta. Tratando con productos químicos en solución o en forma gaseosa . Calentando en presencia o ausencia de agua 2.La esterilización se lleva a cabo: ‡ Eliminando los organismos viables como en la filtración ‡ Matándolos de una de las siguientes formas: 1.

La esterilización debe ser capaz de eliminar las esporas más resistentes de las especies más resistentes. 15 min) y.Las esporas bacterianas resisten el calor (termófilas: 200 kPa a 134oC. las altas dosis de radiación (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). 1-10 min. vapor de agua o calor seco a 180oC. algunas. .

o al menos mantienen el nivel de hidratación dentro de la espora. .Muerte por calentamiento: En la esterilización húmeda. Las propias moléculas de agua aumentan. el vapor a presión tiene dos funciones importantes: 1. Condensándose sobre el material permite que el calor se transfiera rápidamente causando un aumento rápido de la temperatura 2.

Las esporas son considerablemente más resistentes al calor seco que al calor húmedo. el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir más el nivel de hidratación y. se protegen las proteínas de las esporas. .En la esterilización por calor seco. de esta forma.

. Los rayos gamma y X son más útiles debido a su alto poder de penetración. a menos que se pueda garantizar la exposición directa del organismo contaminante.Radiación La radiación ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante.

.Determinación de la destrucción de microorganismos: ‡Tiempo térmico letal: tiempo más corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada ‡Punto térmico letal: temperatura más baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. Para ambos se necesita saber el tamaño inicial de la población y las condiciones precisas. No son particularmente útiles.

. a una temperatura determinada. ‡Valor-Z: es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.Un parámetro más útil es: ‡Tiempo de reducción decimal o valor D: tiempo en minutos. que se requiere para reducir la población viable al 10% de su valor previo.

T= temperatura en oC y z= aumento de temperatura requerido para reducir el período de calentamiento en un 90% (es decir el valor z). . se requiere una unidad de letalidad. La unidad escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento.Métodos prácticos: Calentamiento: Para comparar las capacidades relativas de esterilización de los diferentes procesos de calentamiento. F = t * 10(T-121)/z Donde t= tiempo de aplicación del tratamiento letal. a la temperatura de 121oC.

el formador de esporas patogénico más resistente al calor. 20 min . 3 min Vapor a 126oC (20 psi). 15 min Vapor a 115oC (10 psi). En esterilización clínica: Calor húmedo: Vapor a 134oC (30 psi). 10 min Vapor a 121oC (15 psi).En la industria alimentaria el peligro más serio para la salud es la presencia de Clostridium botulinum. así como el agente más tóxico.

. del orden de 0. a 121oC.Como los valores de D para las esporas son.2 min. botulinum casi imposiblemente remota. lo que hace la probabilidad de fallo en relación a la supervivencia de C. un tiempo de mantenimiento de 15 min de vapor a 121oC equivale a 75xD.

. ya que mezclas de aire y vapor a una presión determinada alcanzarán una temperatura más baja que la del vapor puro a la misma presión.Procesos discontinuos: Autoclaves: Todo el aire debe ser eliminado antes del ciclo de calentamiento.

Inyección directa del vapor: Si se utilizan inyecciones directas de vapor se debe tener en cuenta que entre el 10 y el 20% del volumen final se deberán a condensación. . la fuerte formación de espuma durante el burbujeo puede limitar la transferencia del calor. Mientras la eficiencia térmica de este proceso es alta.

Calentamiento indirecto: Pasando vapor de agua a través de una espiral de intercambio de calor o de una camisa. . permanecen los problemas de enfriamiento. generalmente conseguido mediante espirales. El calor en este procedimiento es menos eficiente que por inyección directa y. en ambos casos.

Un rápido enfriamiento .Esterilización por flujo continuo: En el diseño del equipo deben considerarse las tres etapas del ciclo. para conseguir: 1. Un rápido calentamiento 2. Un tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterilización 3.

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. equivalente a una energía de absorción de 100 ergs/g de aire. El efecto letal es siempre mayor en presencia de oxígeno y alto contenido en agua. El Roentgen (R) es 83 ergs/g de aire.Esterilización por radiaciones: Normalmente se lleva a cabo con una fuente de cobalto-60 o de cesio-137. La unidad de medida de la dosis de radiación es el rad.

Sus productos de degradación son inocuos. temperatura y normalmente pH. ‡Peróxido de hidrógeno: poderoso agente oxidante que mata células vegetativas y esporas con actividad creciente con la concentración. Solamente en casos especiales. Pobre difusibilidad y poder de penetración. Olor picante y duradero.Esterilización química: ‡Formaldehído: solamente efectivo si se puede garantizar que entre en contacto con los organismos contaminantes. .

. irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire. El de etileno es más efectivo pero altamente tóxico. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad. las condiciones óptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h. para una concentración de gas de 8001000 mg/l.‡Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser dañado por altas temperaturas.

lana mineral. celulosa moldeados como planchas. ‡Filtros de pantalla: membranas hechas de ésteres de celulosa u otros polímeros .Esterilización por filtración: ‡Filtros profundos: capa relativament gruesa de fibra de vidrio. algodón. tapones o cilindros.

Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0. Tiras de papel impregnadas con esporas: bioindicadores. Termosensores 2. Se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia 4. alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras.15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor 3. . Tiras indicadoras: responden al calor húmedo entre 115-123oC. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5. Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor.Evaluación de la eficiencia de esterilización: 1. a un mínimo de 120oC. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor.

02-0. Prueba del bacteriófago T3: 0. Prueba del azul de metileno: para distribución de partícula de 0.2 micrones 2.7-1 micrón 4.Pruebas de eficiencia de filtración: 1. Subtilis y de 0. Prueba del cloruro sódico: para que haya esterilización.000005% B.997% 3.001% tiene un equivalente de 0.03 micrones. el filtro debe retener el 99. Esporas de Bacillus: rango de tamaño 0. Un filtro con penetración de llama de sodio de 0. .00005% de T3.

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