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Publicado porLuis Rimarachín
LABORATORIO - SEMANA 1
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Finegoldia magna

1

2

2

1

+/-

1

Micromonas

micros

1

2

2

1

+/-

1

Clostridium

+/-

+/-

2

+/-

+/-

+/-

Actinomices

0

1

1

0

0

+/-

Bifidobacterium

0

1

2

0

0

+/-

Eubacterium

0

1

2

D

D

1

Lactobacillus

0

1

1

0

+/-

2

Propionibacterium 2

1

+/-

+/-

+/-

1

D:Desconocido; 0: No se encuentra o raro; +/-: irregular; 1: por lo común presente; 2
: Presente en grandes cantidades

CUADRO N°2 : Muestras que no deben cultivarse en medios para anaerobios

HISOPADOS FARÍNGEOS O NASOFARÍNGEOS
Hisopados gingivales
Muestras broncoscópicas o esputo
Contenido gástrico, contenido de intestino delgado, heces, hisopados rectales,
fístulas colonocutáneas
Superficies de úlceras por decúbito, hisopados de muestras de costras de
abscesos, revestimientos mucosos
Materiales adyacentes a la piel o las mucosas
Orina de micción espontánea
Hisopados cervicales o vaginales

MATERIALES
Placas con agar Chocolate
Jarra anaerobia

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RESULTADOS

EVALUACIÓN

1. ¿Qué personas son más susceptibles a la contaminación con Mycobacterium

tuberculosis?
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2. ¿A quiénes se les llama multidrogorresistentes?
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3. ¿En qué casos se hace necesario realizar una prueba de susceptibilidad antibiótica
a los pacientes con tuberculosis?
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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PRÁCTICA 9

CULTIVO DE MUESTRAS CLÍNICAS: UROCULTIVO Y COPROCULTIVO

OBJETIVOS
Conocer el procedimiento para el cultivo de una muestra clínica.
Identificar los microorganismos más frecuentes causantes de patologías clínicas.
Conocer las condiciones para una adecuada toma de muestra para cultivo de una
muestra clínica.

CULTIVO DE ORINA: UROCULTIVO

La infección del tracto urinario (ITU) , se define como la presencia y multiplicación de
microorganismos en el tracto urinario con invasión de tejidos adyacentes. La
presencia de leucocitos en la orina , indica una respuesta inflamatoria del tracto
urinario, la mayoría de las veces debido a una invasión tisular por bacterias. Por lo
general la piuria, está presente en las ITU , por lo que se le considera un criterio
diagnóstico para ésta enfermedad.

La mayoría de las ITU son causadas por bacilos Gram negativos de las
enterobacterias , siendo la Escherichia coli y Klebsiella sp, los más frecuentemente
aislados , en infecciones no complicadas. También pueden ser causa de ITU otros
bacilos Gram negativos como Proteus sp , Enterobacter sp y Pseudomona aeruginosa
sobre todo en pacientes sometidos a instrumentación, portadores de catéteres
urinarios, con anomalías anatómicas o funcionales del tracto urinario y en pacientes
hospitalizados.

Entre las bacterias Gram positivas pueden estar Staphylococcus epidermidis y

Enterococcus sp. En la mayoría de las ITU , se recupera un único microorganismo en
la orina. La presencia de más de una especie bacteriana puede deberse a una
contaminación de la muestra o pacientes con infecciones complicadas como por
ejemplo litiasis , abscesos renales o sondaje prolongado.

El diagnóstico definitivo de la ITU se hace mediante el cultivo de orina : urocultivo .
Hay que considerar que por cuidadosa que sea la técnica de toma de muestra ( salvo
punción suprapúbica) , es difícil excluir la contaminación de la orina con las
bacterias del tramo distal de la uretra , lo que puede causar interpretaciones erradas.

La orina de micción media es la más recomendable para el urocultivo. En pacientes
femeninas es recomendable el lavado de genitales externos, en el paciente masculino
retraer la piel del prepucio. La primera parte de la micción casi siempre estás
contaminada con la flora bacteriana uretral, por lo cual se debe descartar . La
micción media debe recogerse en un envase estéril. Se recomienda obtener la primera
muestra de orina de la mañana , donde se encuentra mayor número de bacterias.

El cultivo de orina se realizará para identificar y cuantificar el número de bacterias
presentes por mililitro en la orina, lo que se expresa en unidades formadoras de
colonias (UFC) . La muestra de orina debe enviarse el laboratorio en el plazo máximo
de 2 horas a temperatura ambiente, puesto que la orina es un buen medio de cultivo
para muchas bacterias y la multiplicación de los gérmenes
entre el momento de la toma de muestra y el cultivo, alterará los resultados.

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Es recomendable que en todas las muestras de orina para urocultivo , se realice un
examen microscópico cuantitativo , para determinar el número de leucocitos por
milímetro cúbico.

MATERIALES

Frasco estéril de 100 ml
Asa de siembra calibrada 0,01ml
Pipetas graduadas de 1ml estériles
Placas con agar Mac Conkey y Eosina azul de metileno
Láminas portaobjetos , laminilla
Equipos de coloración para tinción de Gram
Centrífuga y microscopio

METODOLOGÍA

Evitar la contaminación de la muestra, utilizando equipos estériles: frascos, pipetas,
placas de Petri, tubos de pruebas estériles.
Examen directo:

‡ Centrifugar aproximadamente 10 ml de orina por tres (3) minutos a 3 000 rpm y
luego decantar el sobrenadante y observar el sedimento al microscopio a lente de
40X

Cultivo

Con el asa de siembra calibrada : 0,01 ml, previa agitación de la muestra , tomar
una muestra con el asa y sembrar por estrías en agar Mac Conkey, previamente
dividida en cuatro cuadrantes , empezando las estrías por el primer cuadrante y
sin esterilizar el asa continuar la siembra en el segundo, tercer y cuarto
cuadrante.
Rotular la placa e incubar 24 horas a 37º C.

66

RESULTADOS

Realizar la lectura de la placa y a partir de una colonia bien aislada realizar las
pruebas bioquímicas para la diferenciación.
Realizar el contaje de colonias para obtener el recuento total de UFC/ml.

CULTIVO DE HECES: COPROCULTIVO

La diarrea puede definirse como el proceso de eliminación frecuente de heces,
disminución de su consistencia o ambas cosas. El diagnóstico etiológico se realiza
mediante el cultivo de los microorganismos presentes en la materia fecal :

TSI

Citrato

LIA

SIM

Sedimento urinario

Agar Mac Conkey

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Coprocultivo , realizándose primero el aislamiento y luego la identificación de las
bacteria presentes en las heces.

Las bacterias causantes de diarreas más frecuentes son : Salmonella, Shigella y
Escherichia coli enteropatógena .También puede producirse cuadros diarreicos por :

Campylobacter sp, Yersinia enterocolítica ,Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus y

Clostridium difficile.

Para realizar este procedimiento se requiere que la muestra se colecte en el curso de
la enfermedad, antes de iniciar tratamiento y que se deposite en un frasco estéril,
procurando no mezclarla con la orina. Si esto no es posible es conveniente conservar
la muestra en un medio de transporte adecuado manteniendo en refrigeración hasta
su siembra.

Muestras inaceptables:
Muestras no conservadas de más de 4 a 6 horas.
Muestras múltiples el mismo día
Muestras contaminadas con orina.

METODOLOGÍA

Examen Directo
El examen microscópico directo de las heces permite la observación de
polimorfonucleares, lo que sugiere la infección de por un patógeno invasivo.
Examen en fresco y/o tinción de Azul de metileno de Loeffler.
Tinción de Gram : permite observar polimorfonucleares y flora predominante.

Inoculación
El coprocultivo se realiza a partir de muestras recién emitidas de preferencia, de las
cuales se inoculan los medios de cultivo.

‡Medios diferenciales
Para diferenciar a los bacilos entéricos fermentadores de lactosa (L+) de los no
fermentadores de lactosa (L -), e inhibir el crecimiento de la flora Gram positiva
aerobia: agar Mac Conkey, agar Eosina azul de metileno, agar Endo.

‡Medios selectivos
Para inhibir el crecimiento de la mayoría de las enterobacterias y permitir el
crecimiento de Salmonella spp y Shigella spp : agar Xilosa-lisina-desoxicolato (XLD) y
agar Salmonella ² Shigella (SS)

‡Medio líquido
Utilizar medio Selenito F para suprimir el crecimiento de la flora normal durante las
horas iniciales de incubación. Se resiembran en medio sólido a partir de las 6 horas.
Este medio de cultivo es fundamental para el estudio de portadores asintomáticos.

‡Medios especiales

Vibrio spp

Medio de enriquecimiento: agua peptonada alcalina a partir de 6 horas , subcultivar
en agar Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sucrosa (TCBS)
Medio selectivo :TCBS

Campylobacter medio selectivo : medio CAMP

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MATERIALES
‡Muestra de heces
‡Placas de Petri con agar SS, EMB
‡Tubos con caldo Selenito
‡Láminas portaobjetos y laminillas
‡Asas de siembra
‡Tubos con medios diferenciales o bioquímicos.

RESULTADOS

Realizar la lectura de los medios de cultivo y las colonias sospechosas , realizar las
pruebas bioquímicas para diferenciar las especies de enterobacterias.

CULTIVO DE SANGRE: HEMOCULTIVO

TSI

Citrato

LIA

SIM

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Mielocultivo

La detección de microorganismos viales en muestras de sangre tiene gran
importancia diagnóstica.
Cuando bacterias u hongos se multiplican a una razón que supera la capacidad del
sistema retículoendotelial del torrente sanguíneo , se produce bacteriemia y
fungemia. Bacteriemia persistente o crónica ocurre cuando no se ha podido localizar
o drenar adecuadamente, el foco de la infección.

La entrada directa de bacteria al torrente sanguíneo ocurre en infecciones
intravasculares como : endocarditis, fístulas arteriovenosas, aneurismas micóticos,
flebitis supurativas, catéteres intravenosos infectados y arteriales permanentes. Es
importante comprender las circunstancias en que puede desarrollar una bacteriemia
para planificar los métodos de diagnóstico así como la interpretación de los
resultados. Las fuentes de bacteriemias son : sistema genitourinario 25 %, sistema
respiratorio 20 % , abscesos 10%, heridas quirúrgicas 5 % , otros sitios conocidos
10 % y sitios desconocidos 25 %.

Siempre que exista una razón para sospechar de bacteriemia se debe practicar el
cultivo de la sangre, periférica o medular. Ya que en muchas ocasiones solo se puede
establecer el diagnóstico mediante este procedimiento. El aislamiento de un
microorganismo de los hemocultivos es transcendente porque establece el diagnóstico
etiológico de la bacteriemia y permite la elección del tratamiento.

Sepsis agudas, osteomielitis, meningitis , neumonía , pielonefritis: en estos casos el
hemocultivo debe considerarse un procedimiento de urgencia.
Bacteriemia continua de origen intravascular como endocarditis, infecciones
asociadas a catéteres , de origen desconocido, con sospecha de fungemia e
inmunodeprimidos, la muestra se puede tomar en cualquier momento.
Bacteriemias intermitentes: lo ideal es realizar la prueba cuando el paciente presenta
escalofríos o poco después o durante del pico febril. Entre el 14 y 25 % de los
pacientes hospitalizados, tienen sospecha de bacteriemia y en un 14 % de los casos
esta prueba establece el diagnóstico.

INDICACIONES
‡ Fiebre alta aunque en neonatos y ancianos la bacteriemia puede cursar con
hipotermia y deterioro general, shock no explicado, infecciones localizadas,
leucopenia, leucocitosis o trombopenia no relacionada con procesos hematológicos .
‡ Siempre se deben realizar en un mínimo de dos (2) horas.
‡ Nunca debe refrigerarse antes de su envío , puede conservarse en estufa.

MATERIALES
Cultivos en medios Ruíz -Castañeda

METODOLOGÍA
Se observarán los medios usados para hemocultivo.

RESULTADOS
Grafique lo observado en la práctica.

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EXUDADOS VAGINALES (exocervicales)
La mucosa vaginal tiene una flora microbiana normal , cuyo crecimiento y
consideración son importantes para el estudio microbiológico de las infecciones
vaginales. Se pueden considerar tres situaciones :
‡ Conocer cuando se altera el equilibrio de esta flora colonizante
‡ Búsqueda de agentes exógenos , trasmitidos normalmente por vía sexual
‡ Detección de portadoras de determinados microorganismos

La mayoría de las situaciones clínicas que pueden ser objeto de estudios
microbiológicos para el aislamiento o visualización del agente etiológico son :

‡ Vulvovaginitis : agentes etiológicos más frecuentes : Cándida spp , principalmente

C. albicans; Trichomonas vaginalis y virus Herpes simple.
La presencia de un cultivo puro de otros microorganismos observados en tinción de
Gram con leucocitos , puede tener significación.

‡ Vaginosis : desde el punto de vista microbiológico se caracteriza por la ausencia o
disminución de la flora mixta compuesta por Gardnerella vaginalis, anaerobios
(Mobilluncus, Bacteroides, cocos anaerobios) y Mycoplasma hominis.

‡ Infección gonocócica : la endocervicitis gonocócica cursa con leucorrea , el exudado
vaginal no es la muestra adecuada para el diagnóstico por lo que se recomienda la
obtención de exudado endocervical.

Tipos de estudios microbiológicos
‡Cultivo bacteriano
‡Cultivo de levaduras
‡Despistaje de Streptococcus agalactiae
‡Cultivo de virus Herpes simple ya que requiere de toma de muestra y medio de
transporte y cultivos especiales, se realiza por petición expresa del clínico.

Toma de muestra

‡ No debe usarse antiséptico previo a la toma de la muestra . Si se utiliza espéculo,
lubricar con agua caliente.
‡ Se recomienda tomar dos (2) hisopados .
‡ Se introduce un hisopo estéril en la vagina y se recoge la muestra de la zona de
mayor exudado o en su defecto del fondo del saco vaginal posterior. Se introduce el
hisopo en el medio de transporte.
‡ El envío de la muestra al laboratorio debe de ser de inmediato siempre que sea
posible. Cuando no se pueda procesar la muestra de inmediato, se mantendrá en
refrigeración o a temperatura ambiente.
‡ Si se sospecha de infección gonocócica, no refrigerar la muestra.
‡ Tiempo máximo de procesamiento con medio de transporte : 24 horas.

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

Uno de los hisopos se empleará para el examen microscópico y el otro para el cultivo.

Examen microscópico : es el único método aceptado para el diagnóstico
microbiológico de la vaginosis bacteriana. Se hará una extensión del hisopo en lámina
y tinción de Gram.

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Cultivo : se pueden establecer diferentes combinaciones de medios en función de la
orientación diagnóstica : agar Sangre en atmósfera de CO2 , agar Chocolate en
atmósfera de CO2, Mac Conkey, agar Thayer Martin en atmósfera de CO2, medio para

Gardnerella en atmósfera de CO2 , Sabouraud con antibiótico u otro medio para
Cándida, caldo para cultivo de Trichomona vaginalis.
Examen de la muestra

Examen microscópico : en el exudado vaginal normal se observará flora regional con
predominio de morfotipo Lactobacillus sp y células epiteliales
Presencia de leucocitos
Presencia de levaduras o pseudohifas
Presencia única o abundante , de cualquier otro microorganismo

Exudado característico de vaginosis bacteriana
Presencia de células clue : células epiteliales recubiertas por bacilos o cocobacilos
Gram variables.
Ausencia o escasos leucocitos.
Flora mixta alterada.

Examen en medios de cultivo

El examen en medios de cultivo : examinar todos los medios a las 18 y 24 horas. Si
no hay crecimiento de patógenos , incubar hasta la 48 horas , a excepción del cultivo
en agar Mac Conkey que se descarta a las 18 horas. El agar Thayer Martin se
incubará hasta 72 horas si es negativo.

‡Agar Sangre : presencia de microorganismos en cantidad variable , en especial

Streptococcus pyogenes o Streptococcus pneumoniae.
‡Agar Chocolate : presencia de microorganismos en cantidad variable , en especial

Haemophilus sp.

‡Agar Mac Conkey : presencia de enterobacterias.
‡Agar Thayer Martin : presencia de colonias grises brillantes de distintos tamaños,
oxidasa positivo, compatibles con gonococo.
‡Medio Gardnerella : presencia de colonias hemolíticas puntiformes en gran
cantidad posiblemente Gardnerella vaginalis.
‡Agar Sabouraud : presencia de levaduras.

SECRECIÓN URETRAL

La uretritis es el síndrome más común dentro de las Enfermedades de Transmisión
Sexual (ETS), aunque muestra un claro descenso en las últimas décadas en relación
con otras ETS, tanto en España como en otros países desarrollados. Atendiendo a su
etiología se clasifican en uretritis gonocócica y no gonocócica (UNG) , siendo estas
últimas las más frecuentes en países desarrollados.

N. gonorrhoeae es responsable en nuestro medio de menos del 25 % de todos los
episodios de uretritis. Los restantes son causados por C. trachomatis, Ureaplasma

urealyticum y por un número variable de otros potenciales patógenos en los que la
asociación causa-efecto con la uretritis está menos aclarada . La asociación de más
de un patógeno como causa de la uretritis es más que anecdótica y la más frecuente
de ellas es la asociación de C. trachomatis y N. gonorrhoeae. Un dato significativo es la
presencia de T. vaginales como único agente encontrado hasta en un 4 % de las

72

uretritis no gonocócicas. Cuadros de uretritis pueden estar causados por la presencia
de condilomas intrauretrales.

La gonorrea usualmente se desarrolla a los 2 a 6 días tras la exposición, en tanto que
la UNG es variable, desde 1 a 5 semanas. Tanto las uretritis gonocócicas como las no
gonocócicas producen supuración uretral, disuria y escozor.
El diagnóstico de uretritis se establece si al menos se dan de los siguientes supuestos
Síntomas : historia de secreción uretral y/o disuria
Demostración con tinción Gram : más de 5 leucocitos polimorfonucleares por
campo de 1 000 aumentos en el examen directo de la secreción uretral.

Los pacientes con síntomas de uretritis, sin secreción, visible, deben ser
examinados, pidiéndoles que no miccionen en las 4 a 8 horas previas a la toma de
muestra . Se obtienen los 5 a 10 primeros ml de orina y tras la centrifugación a 400
rpm se examinan al microscopio de 400 aumentos. La presencia de más de 15
leucocitos polimorfonucleares por campo confirma el diagnóstico de uretritis.
Los síntomas de la uretritis gonocócica puede permanecer hasta más de 7 días, por
ello la uretritis postgonocócica se suele diagnosticar después de transcurrido este
período. En el examen con tinción de Gram, la presencia de diplococos Gram
negativos (DGN) intracelulares , establece el diagnóstico de uretritis gonocócica. La
presencia de células inflamatorias en el exudado uretral en ausencia de diplococos
Gram negativos y cultivo negativo para establecer el diagnóstico de UNG.

El éxito del diagnóstico microbiológico de la uretritis gonocócica depende de la
correcta obtención, transporte y procesamiento de muestras. En cada muestra deben
emplearse dos hisopos, uno para el cultivo y otro para la extensión del exudado
uretral para realizar la tinción de Gram. Las muestra para cultivo deberán inocularse
en medios selectivos (Thayer Martin modificado, Martin- Lewis ) e incubarse de modo
inmediato a 35 a 37ºC durante 72 horas en una atmósfera de 3 a 10 % de CO2 y
humedad. Cuando esto no sea posible , es necesario inocular las muestras en medio
de transporte (Stuart o Amies ) .

Examen microscópico : en la secreción uretral se debe observar presencia de células y
bacterias, en especial diplococos Gram negativos intra y extracelulares.
Evaluar : presencia de leucocitos polimorfonucleares.

Examen en medios de cultivo : examinar, todos los medios a las 18 y 24 horas. Si no
hay crecimiento de patógenos , incubar hasta la 48 horas. El agar Thayer Martin se
incubará hasta 72 horas si es negativo.
Agar Sangre : Streptococus pyogenes o Streptococus pneumoniae
Agar Chocolate : Haemophilus sp, Thayer Martin ,gonococo.

Pruebas bioquímicas : a las colonias sospechosas realizar las pruebas bioquímicas :
Prueba de oxidasa y fermentación de carbohidrato para Neisseria.

EVALUACIÓN

1. Esquematizar un flujograma de urocultivo

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2 .¿Cuáles son los agentes bacterianos más frecuentes, que se aislan en los cultivos
de catéteres intravenosos?

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3. Esquematizar un flujograma de secreción de herida.

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS
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