CARACTERISTICAS DE LA REPLICACION

1. Semiconservativa (Expto de Meselson y Stahl,1958). 2. Sitios de inicio: 1 en bacteria y varios en eucaria. 3. Crecimiento bidireccional (Estructuras Teta). 4. Sntesis en direccin 5--> 3 en ambas cadenas. 5. Sntesis por enzimas y otros factores proteicos. 6. Semidiscontinua (Exptos de Okazaki) 7. Iniciada por sntesis de RNA (Cebadores o primers). 8. Alta fidelidad de copiado

Replicacin semiconservativa del DNA

Matthew Meselson

Franklin Stahl
RP3

Replicacin semiconservativa
Experimento de Meselson y Stahl

14N15N

RESULTS OF CsCl GRADIENT ULTRACENTRIFUGATION EXPERIMENT SHOWING DISTRIBUTION OF DNA DENSITY IN E. coli CELLS AFTER 0 TO 4.1 GENERATIONS OF GROWTH THIS EXPERIMENT ESTABLISHED THAT DNA REPLICATION IS SEMICONSERVATIVE

WEAVER: FIG. 20.4

Orquilla o tenedor de replicacin

Cadena original Cadena nueva Cebador o primer de RNA

Cadena retrasada

Cadena lider

Las flechas indican la direccin de la replicacin del DNA

Fragmento deOkazaki

Polimerizacin en direccin 5 -> 3

Esto ocurre
crece de 5 hacia 3

Esto NO ocurre

COMPARACIN DE LA REPLICACIN EN BACTERIA Y EUCARIA E. coli: un solo origen de replicacin en su cromosoma circular (4.2 kb), el tenedor se mueve a 50,000 pb/min (hay 2 tenedores) Ratn: 25,000 replicones, a 150 kb cada uno, distribuidos entre los cromosomas lineares, el tenedor se mueve a 2,200 pb/min

Estructuras teta ( )
Indican un sitio de origen de la replicacin en Bacteria

Estructuras teta ( )

SITIOS DE ORIGEN DE LA REPLICACIN: Uno solo en Bacteria (Procariontes): Locus oriC: consiste de tres secuencias repetidas de 13 pb y cuatro de 9 pb: 3 x (----GATCTNTTNTTTT-----) 4 x (----TTATNCANA----) Mltiples en cromosomas de Eucaria: (~25 000 en ratn) ARS: autonomously replicating sequence contiene mltiples copias of un fragmento de 11 pb : ATTTATRTTTA (R = purine)

DETECCION DE REPLICACION BIDIRECCIONAL DEL DNA

Sntesis de DNA en esporas de Bacillus subtilis iniciada sincronicamente y marcada por corto tiempo con bajo nivel de radioactividad y luego con un pulso de alto nivel de radioactividad; una interpretacin de la autoradiografa a la derecha.

DNA Replication
- in all cells (eukaryotic, prokaryotic) and with circular or linear DNA molecules, DNA replication begins at defined sequences termed ORIGINS of REPLICATION

Origin of Replication
5
If you just look at this part it looks like the replication fork in the text

There often are multiple origins of replication in a genome Ori C in E. coli: - 245 base pairs (bp) long 3 5 - contains four DnaA binding sites - DnaA is the replication initiator protein that controls the rate limiting step in replication

leading strand

5 3

5 3 5

lagging strand
RNA Primers

Replicn

Replicn

REPLICACION BIDIRECTIONAL DE DNA EN EUCARIONTES

Eukaryotic replicons are small and replicate more slowly than bacterial DNA
Organism Bacterium Yeast Fruit fly Toad Mouse Plant Replicons 1 500 3,500 15,000 25,000 35,000 Length 4200 kb 40 kb 40 kb 200 kb 150 kb 300 kb Movement 50,000 bp/min 3,600 bp/min 2,600 bp/min 500 bp/min 2,200 bp/min ?

Proteins in DNA replication

Gene dnaA,I,P dnaB,C dnaE,N,Q,X ,Z dnaG gyrA,B lig oriC polA polB rep s sb Function Initiation Helicase at oriC S ubunits of DNApolym erase III Prim ase Subunits of gyrase Ligase Origin of Replication D polym NA erase I DNA polym erase II Helicase S ingle-stranded DNA binding proteins

Prokaryotic DNA Polymerases

Arthur Kornberg - Nobel Prize for isolating DNA polymerase I

DNA polymerase
Properties Initiate Chain Synthesis 5 to 3 polymerization 3 to 5 exonuclease activity 5 to 3 exonuclease activity I
_

II
_

III
_

+ + +

+ +
_

+ +
_

RP7

o 5-3 polimerasa

DNA pol III

Pinza deslizante

Clamp loader o cargador de la pinza

DNA pol I (polA) de E. coli

1. Cortada en 2 fragmentos por tripsina: a. fragmento grande (Klenow fragment) contiene polimerasa 5- 3 y exonucleasa 35 (dominio editor). Usada in vitro para reacciones de sntesis (secuenciacin de DNA).
Fragmento Klenow (68 kD) N exonucleasa sitio de 3-5 3polimeras Funcin editora a cataltico Fragmento pequeo (35 kD) C C 5-3 exonucleasa 5reparacin

Nick translation by intact DNA pol I

1.
5 3 add DNA polI to nick DNA 3 -OH 5 -P 3 5 excised DNA fragments
32P

2.
5 3 add 5
32P-dNTP, dNTP,

3 5

cold dNTPs and DNA pol I

note: nick moves 5 to 3

DNA polimerasas de eucaria

Enzima Alfa Delta Beta Epsilon Papel Inicio de ambas cadenas Elongacin de ambas cadenas Reparacin del DNA Reparacin del DNA

Replicacin del DNA

Primosoma: complejo de proteinas que inicia sntesis de DNA en una cadena, con sntesis de RNA. Replisoma: complejo de proteinas involucradas en la elongacin de DNA iniciado por el primosoma. Se ensamblan en el tenedor de replicacin. k.

ROLLING-CIRCLE MODEL OF BACTERIOPHAGE PDNA REPLICATION THIS SCHEME RELATES TO THE SYNTHESIS OF DOUBLE-STRANDED DNA

WEAVER: FIG. 20.15

DNA ligase

Topoisomerasas

Synthesis Phase (S phase)

S phase in interphase of the cell cycle. Nucleus of eukaryotes

DNA replication takes place in the S phase.

phase

G1

interphase

G2

Mitosis
-prophase -metaphase -anaphase -telophase

Reparacin del DNA

Reparacin directa:
Fotorreactivacin Desmetilasas: O-metil-guanina

Reparacin indirecta:
Por corte:
De bases: AP endonucleasas, glicosilasas De nucletidos: UVR ABC Malapareamiento o Mismatch

Por recombinacin: rec A SOS: lex A

Reparacin del DNA Fotorreactivacin

Reparacin por corte de bases

(Uracil-N-Glicosilasa)

Reparacin por corte de nucleotidos

uvrABC (nucleasa dependiente de ATP)

(Hueco de 12 a 13 nucletidos)

Reparacin de malapareamiento o Mismatch repair

Reparacin del DNA

Recombinacin
Homloga Sitio especifica: e.g. insercin de P Transposicin Ilegtima o no homloga

Recombinacin homloga en eucaria

Recombinacin homloga en E. coli

Posibilidad 1 Posibilidad 2

Rec BCD (nucleasa y helicasa) Sitios Chi: GCTGGTGG Rec A

(1 RecA / 5 nucletidos)

Recombinacin Sitio Especfica Indirectos

Directos

Transposones y secuencias de insercin