REPLICACIN DEL ADN

El significado gentico de la replicacin es el de conservar la informacin gentica. La estructura del ADN en doble hlice permite comprender como dicha molcula puede dar lugar a copias sin perder su conformacin. En principio, las dos hebras deberan separarse. Despus, mediante la accin de otra enzima, a partir de desoxirribonucletidos sueltos y segn la complementariedad de bases, podra irse construyendo las hebras complementarias de las dos hebras modelo iniciales.

MODELOS DE REPLICACIN PROPUESTOS

Para explicar este proceso se propusieron tres hiptesis: Hiptesis Conservativa. Propone que tras la duplicacin, quedan, por un lado, las dos hebras antiguas juntas y, por otro, las dos hebras nuevas tambin espiralizadas. La Hiptesis Semiconservativa sobre la duplicacin del ADN se debe a Watson y Crick. En ella se sostiene que, en las dos molculas de ADN de doble hlice hijas, una de las hebras sera la antigua y otra la moderna. La Hiptesis Dispersiva supone que la primitiva molcula de ADN se fragmenta en multitud de pequeos trozos, copindose stos y reunindose tanto los fragmentos originales como las copias de modo que las dos nuevas molculas estn formadas por fragmentos antiguos y nuevos.

El experimento ms definitivo para dilucidar cul de estas tres hiptesis era la correcta fue el de Meselson y Stahl en 1957. La hiptesis confirmada fue la semiconservativa.

REPLICACIN IN VIVO DEL ADN

La enzima que lleva a cabo la replicacin del ADN es la ADN polimerasa, esta enzima tiene unos requerimientos especficos para trabajar, que le imponen restricciones: 1. Slo aade nucletidos en la direccin 5 3. 2. Necesita para poder empezar a copiar y unir nucletidos un molde de ADN. 3. Necesita un pequeo trocito de ARN al cual unir los nucletidos, ya que ella no puede empezar a unir los nucletidos sin tener una pequea cadena ya formada. 4. Utiliza nucletidos trifosfato. Dadas las necesidades de esta enzima y sabiendo que la molcula de ADN est formada por dos hebras antiparalelas, se plantea un problema en la cadena de ADN que va en la direccin 5 3, porque aqu la enzima estara trabajando en la direccin contraria, y sin embargo, se observa que las dos hebras se van replicando.

La solucin al dilema la dio el desabrimiento, en 1968, por Okazaki de unos fragmentos constituidos por unos 50 nucletidos de ARN y entre 1.000 y 2.000 nucletidos de ADN, denominados fragmentos de Okazaki. As se poda explicar como se copia esta cadena, siendo de forma discontinua en la direccin 5 3 y la otra cadena de forma continua. Tambin quedaba solucionado el problema de que la enzima necesitara una cadena de ARN a la cual unir los nucletidos.

Veamos ahora como se lleva acabo el proceso: Existe una secuencia de nucletidos en el ADN llamada origen de replicacin que acta como seal de iniciacin. Las cadenas de ADN estn unidas por puentes de hidrgeno, que debemos romper para facilitar la separacin de las cadenas para ser copiadas, esta separacin la lleva a cabo las enzimas helicasas. Como el desenrollamiento de la doble hlice da lugar a superenrollamientos en el resto de la molcula, capaces de detener el proceso, se hace preciso la presencia de las enzimas topoisomerasas que eliminen las tensiones en la fibra. A continuacin, para evitar que las dos hebras vuelvan a reunirse y formar los puentes de hidrgeno se colocan unas protenas llamadas SSB (Single-Strand DNA Binding proteins), que estabilizan las cadenas sencillas.

El proceso es bidireccional, es decir, hay una helicasa trabajando en un sentido y otra trabajando en sentido opuesto. Se forman pues las llamadas burbujas u ojos de replicacin.

Como ninguna ADN-polimerasa puede actuar sin cebador, interviene primero una ARN polimerasa (primasa) que si lo puede hacer, sintetiza un corto fragmento de ARN de unos 10 nucletidos denominado primer que acta como cebador. Despus interviene la ADN polimerasa III, que a partir de este cebador comienza a sintetizar en direccin 5 3 una hebra de ADN partir de nucletidos trifosfato. La energa necesaria para el proceso es aportada por los propios nucletidos que pierden dos de sus fsforos. Esta nueva hebra se sintetiza en el sentido que se abre la horquilla de replicacin, es de crecimiento continuo y se denomina hebra conductora. Sobre la otra hebra (hebra discontinua o retardada) la ARN polimerasa sintetiza unos 40 nucletidos de ARN en un punto que dista unos 1.000 nucletidos de la seal de iniciacin. A partir de ellos la ADN polimerasa III sintetiza unos 1.000 nucletidos de ADN, formndose un fragmento de Okazaki. Este proceso se va repitiendo a medida que se van separando las dos hebras patrn. A continuacin interviene la ADN polimerasa I, que, primero, gracias a su funcin exonucleasa, retira los segmentos de ARN, y que luego, gracias a su funcin polimerasa, rellena los huecos con nuceltidos de ADN. Finalmente la ADN ligasa unir los dos extremos, tanto en la cadena continua como los sucesivos fragmentos de Okazaki que se van formando en la cadena discontinua.

Cuando se observa como se produce la replicacin se ve que la cadena continua va ms rpida que la discontinua, esto es debido a que cada vez que se forma un fragmento de Okazaki hay que realizar todo este proceso como si se comenzara la sntesis de nuevo, formando el primer y el resto de pasos, sin embargo, en la continua solo se realizar una vez.

REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional. Existe una hebra conductora que sintetiza de manera continua y la retardada de forma discontinua con fragmentos de Okazaki. Sin embargo, la replicacin en eucariotas presenta ciertas peculiaridades: El ADN de los eucariontes est fuertemente asociado a los octmeros de histonas, en forma de nucleosomas, por lo que adems de replicarse el ADN, deben duplicarse tambin las histonas. Al parecer, tanto los nuevos nucleosomas como los antiguos se reparten de manera aleatoria entre las dos nuevas hebras hijas: en la retardada y en la conductora. eucaritico es mucho mayor que el ADN bacteriano, de ah que no haya un nico origen de replicacin. Para que el proceso sea ms rpido, existen numerosas burbujas de replicacin a lo largo de cada cromosoma.

La longitud del ADN de un cromosoma

CORRECCIN DE ERRORES
La actividad de la ADN polimerasa debe ser exacta, rpida y fiel, ya que la vida entera y su continuidad de generacin en generacin dependen de la exactitud y precisin con que se transmite la informacin, es decir de la fidelidad de la duplicacin del ADN. La seleccin de nucletidos por la ADN polimerasa y su actividad autocorrecctora, constituyen mecanismos de prevencin de errores, pero an as se comete un error de apareamiento por cada 10 millones de bases. Esta precisin podra resultar suficiente para una bacteria, cuyo genoma contiene 3 millones de pares de bases, pero resulta insuficiente para el genoma humano que contiene 3.109 pares de bases.

Un error por cada 10 millones de bases supondra 300 equivocaciones en cada duplicacin del ADN humano, y teniendo en cuenta que durante el desarrollo embrionario a partir del zigoto el genoma humano se duplica casi mil millones de veces, se producira una acumulacin del trescientos mil billones de errores, lo que evidentemente, es incompatible con la vida, ya que la formacin inicial se perdera pronto como consecuencia de las divisiones celulares. Por ello, para aumentar todava ms la precisin de la duplicacin, existe una maquinaria enzimtica que corrige los posibles errores cometidos por el ADN polimerasa en ADN recin sintetizados (correccin postreplicativa), con lo que la exactitud de la rplica alcanza la increble perfeccin de un error por cada diez mil millones de bases (1010). Esta correccin se realiza por medio de un conjunto de enzimas agrupados en un complejo multienzimtico que detecta el nucletido mal emparejado, lo elimina y regenera la secuencia correcta, del siguiente modo:

Para detectar el nucletido mal emparejado, el aparato de correccin debe reconocer la cadena recin sintetizada, donde se encuentra el error y diferenciarla de la cadena molde. Ambas cadenas son complementarias, pero mientras que la cadena molde tienen metiladas las adeninas de las secuencias GATC, existe un lapso de tiempo durante el cual las adeninas de estas secuencias en la cadena rplica aparecen sin metilar, y es en este intervalo cuando acta el complejo multienzimtico y detecta los posibles errores. La eliminacin se realiza mediante una endonucleasa que corta el segmento en el lugar donde se encuentra el error. Por ltimo, la secuencia correcta se regenera cuando la ADN polimerasa I rellena el hueco utilizando como molde la cadena original, y por ltimo una ligasa unir los fragmentos.

TELMEROS: ENVEJECIMIENTO Y MUERTE CELULAR

Los cromosomas eucariotas son lineales y presentan en sus extremos unas regiones, denominadas telmeros constituidas por secuencias repetitivas del tipo TTAGGGTTAGGG.Cuando se replica el ADN lineal, los extremos 5 de los telmeros, no pueden ser replicados. Cuando se elimina el ARN cebador del extremo 5 de cada una de las hebras recin sintetizadas, el hueco que queda no lo pueden rellenar los enzimas ADN polimerasas, porque no encuentran extremos hidroxilo libres sobre los que aadir nuevos nucletidos. La imposibilidad de replicar los extremos de cada cromosoma da lugar a que el telmero se vaya acortando en cada ciclo de replicacin, hasta llegar a una cantidad crtica. Esta prdida deja al descubierto los extremos de los cromosomas que se unen unos a otros producindose la imposibilidad de replicacin. Este acortamiento de los telmeros est relacionado con el envejecimiento celular y la muerte programada o apoptosis de las clulas.

El acortamiento de los telmeros, puede ser remediado mediante una enzima, la telomerasa, que repara el dao y hace a las clulas inmortales, es el caso de las clulas embrionarias y tumorales. La telomerasa es una ribonucleoproteina que acta como trasncriptasa inversa (sintetiza ADN a partir de un molde de ARN), ya que tienen una hebra de ARN con la secuencia apropiada para actuar como molde para la sntesis de la secuencia telomrica de ADN que se aade en los extremos 3 de cada cromosoma para evitar su acortamiento en cada proceso de duplicacin.

AGENTES MUTAGNICOS
El ADN es un compuesto que se encuentra sometido continuamente a las agresiones de sustancias qumicas, tanto de nuestro propio metabolismo como del exterior. Tambin es alterado por agentes fsicos. EFECTO DE LA TEMPERATURA. Las clulas humanas por el mero hecho de encontrarse a 37, pierden diariamente y de forma espontnea unas 5.000 bases pricas (A y G) en un proceso que implica la rotura del enlace N-glucosdico denominado despurinizacin. EFECTO DE LOS RAYOS ULTRAVIOLETA DE LA RADIACIN SOLAR. Esta radiacin induce la formacin de enlaces covalentes entre dos bases pirimidnicas sucesivas en la misma cadena, lo que da lugar a dmeros de timina y de citosina; como consecuencia se rompen los puentes de hidrgeno que mantenan con sus bases complementarias y la doble hlice se desorganiza alrededor de los dmeros. Estos dmeros pueden repararse fotoqumicamnete, pues las clulas poseen unas enzimas que pueden activarse por la accin de la luz ultravioleta.

METABOLITOS REACTIVOS. Algunos residuos del metabolismo, sobre todo los radicales libres derivados del oxgeno, son compuestos altamente reactivos y capaces de inducir lesiones en el ADN. RADIACIONES IONIZANTES. Se conocen con este nombre a determinadas radiaciones electromagnticas de longitud de onda muy corta y por ello altamente energticas, como los rayos (gamma) y los rayos X y los flujos de neutrones y protones originados en los reactores nucleares, que al colisionar con los tomos y las molculas que encuentran en su camino, los transforman en iones y radicales muy reactivos, capaces de atacar a numerosas molculas de las clulas, entre ellas el ADN, produciendo la rotura de sus cadenas.

Las consecuencias derivadas de su accin dependen de la intensidad de la radiacin y del tiempo de exposicin, ya que sus efectos son acumulativos. Si la radiacin es muy intensa, llegan a romperse los cromosomas y se produce la muerte celular. Son ms sensibles las clulas que s encuentran en divisin que las que no se dividen; por ello cuando se aplica radioterapia en el tratamiento contra el cncer, la radiacin destruye preferentemente a las clulas cancerosas, que estn continuamente dividindose, y deja intactas las restantes clulas del organismo. Si la radiacin afecta

a una mujer embarazada, se producen mutaciones de ADN en el feto que pueden ocasionar la paricin de malformaciones en el recin nacido, de ah que nunca se utilicen rayos X como mtodo de exploracin en las mujeres gestantes. RADIACIN CORPUSCULAR: PARTCULAS y . Son las partculas que se emiten en los procesos de desintegracin de istopos radiactivos, y sus efectos sobre el ADN son similares a los producidos por las radiaciones rayos o los rayos X, que ocasionan la rotura de las cadenas de ADN. El caso ms grave fue el sucedi en el accidente nuclear de Chernbil. SUSTANCIAS QUIMICAS. Constituyen una autntica legin de sustancias, habitualmente utilizadas y que nos rodean. El benzopireno y otros hidrocarburos policclicos, que son molculas planas que al intercambiarse entre los pares de bases establecen puentes, mediante enlaces covalentes, entre las dos hebras de ADN. El cido nitroso, que provoca la desaminacin de la citosina y la adenina. Los agentes alquilantes como el gas mostaza, que introducen grupos metilo, etilo en las bases del ADN y alteran la replicacin. Como la mayora de estos agentes mutagnicos favorecen el desarrollo de tumores carcingnicos.

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