1.

SUELO

Aislamiento e identificacin de microorganismos hidrocarburoclastas. Una vez obtenida la muestra de suelo se procedi a identificar a algunos de los microorganismos presentes en la matriz suelo-contaminante.

Medios de cultivo. Se prepara medio A, rico en sales con la composicin siguiente en g/L: KNO3 1.0; FeCl3, 0.02; MgSO4, 0.2; NaCl, 0.1; K2 HPO4, 1.0; extracto de levadura, 0.05 y 1.0% (v/v) de petrleo crudo previamente emulsificado con una solucin acuosa de Tween 20 (1:1) al 1.0% (v/v). Ajustar a pH 6.3 con solucin de HCl 0.1N. Medio B contena los mismos compuestos que el medio A , pero se adiciona agar bacteriolgico al 1.5 % (w/v).Ajustar el pH a 6.3. Aislamiento de las cepas. La tcnica de aislamiento utilizada fue la de cultivo por enriquecimiento. Se colocaron por duplicado, 3.0g de suelo contaminado con hidrocarburos de 55,135.3 mg de HTPS/kg de suelo (ppm) en matraces erlenmeyer de 250ml, los cuales contenan 125.0 ml del medio A .los matraces fueron agitados durante 3 das a 180rpm a 26C. al tercer da , 12.0 ml del sobrenadante fueron transferidos nuevamente a matraces Erlenmeyer de 250ml con 125ml de media A fresco, tambin esta operacin se hizo por duplicado. En la tercera transferencia, 0.1 ml de muestra del medio recuperado fueron sombrados en placas con medio B, las cuales se incubaron durantes 24 horas de 26C. despus del perioso de incubacin, las colonias obtenidas, fueron sembradas en placas de agar nutritivo para su aislamiento e identificacin. Tambin se realizaron cultivos controles, que incluyeron matraces con medio A sin extracto de levadura y sin petrleo crudo para evitar falsos positivos (Rojas et al., 1999).