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wwUNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA.

LABORATORIO DE ANALISIS BIOQUIMICO CLINICO EXAMEN DE HECES- COPROPARASITOLOGIA EXAMEN DE HECES 1. OBJETIVOS: Capacitar al alumno para realizar un examen completo de heces. Lograr la destreza en los alumnos para el correcto reconocimiento de diferentes parsitos. 2. GENERALIDADES. El examen de heces tiene su mxima indicacin clnica en las diarreas crnicas; tanto en nios como en adultos y personas jvenes en las que se pudiera sospechar insuficiencia gstrica es decir que en general interesa en aquellos procesos que cursan con insuficiencia digestiva o en aquellos en que se buscan el germen o parsito causante de la enfermedad. RECOLECCION DE LA MUESTRA. Ya sea que hagamos un estudio bacteriolgico o parasitolgico, el resultado depender de la buena recoleccin de la muestra, de la cantidad de sta, y de la prontitud, con que sea llevada al laboratorio; por lo tal se debe tomar las siguientes precauciones: a.-La muestra de Heces debe recogerse en un recipiente limpio y seco, yestril si se realiza un coprocultivo; se recoge la primera deposicin del da, sin contener orina por ser contaminante de la muestra. b.-La cantidad a recolectarse debe ser de por lo menos 4gr , para facilitar la deteccin de los parsitos cuando se encuentran poco concentrados, y en diarreas su equivalente en ml. c.-Las heces deben examinarse en menos de una hora despus de que se hayan recolectado; sobre todo para el examen parasitolgico. d.-Deben examinarse primero las heces liquidas con moco y sangre ya que puede haber en ellas amebas que se mueren rpido. Examnese porciones caractersticas y en especial el moco teido de sangre. Puesto que los protozoarios se presentan intermitentemente en las heces fecales es preciso efectuar ms de un anlisis; se aconseja el estudio de 3 a 6 muestras.

3.

4.

EXAMEN FSICO.

4.1.

CANTIDAD. La cantidad de materia fecal eliminada por da es de 150 a 250 g. En el adulto sano. Esta cifra varia o depende fundamentalmente de los residuos alimentarios procedentes de la dieta, segn el contenido en verduras y frutas es decir en celulosa y la existencia de estreimiento o diarrea en el enfermo.

4.2.

CONSISTENCIA. Normalmente la deposicin debe ser slida y formada, es decir cilndrica y consistente debe mantener esta forma despus de excretada. La consistencia esta en relacin con la proporcin de agua.

4.3.

COLOR.- Normalmente y con dieta mixta, la deposicin es de color pardo o menos oscuro en el adulto, oscurecindose a medida que pasa el tiempo expuesto al aire. El color de las heces est en relacin al tipo de dieta lctea: amarillo canario, carnica: castaa oscuro/ rica en verduras heces verdosas; exceso de caf: heces oscuras. Los medicamentos alteran el color por ejemplo: El carbn, bismuto, hierro, le dan un color negruzco, la rifampicina color pardo rojizo.

4.4.

4.5.

4.6.

OLOR. El olor fecal caracterstico obedece a los productos aromticos formados en el intestino por accin de microorganismos, de la fermentacin de carbohidratos, putrefaccin de protenas. El olor de las heces es influido por la alimentacin, las medicaciones y los estados patolgicos. El olor anormal puede ser: rancio, ptrico, agrio. REACCIN. Las heces normalmente son neutras o ligeramente alcalinas y endgenas por lo que sus variaciones tanto en la salud como en la enfermedad son irregulares de escaso valor clnico. La prueba se realiza mezclando heces con agua destilada, con papel de tornasol rojo, azul y normalmente estos papeles no modifican su color MOCO. Normalmente se observa pequeas cantidades, que aumenta en el catarro intestinal, si est finamente dividido y mezclado en las heces dndoles un aspecto brillante procede del intestino delgado; grandes cantidades no bien mezclados pueden provenir del intestino grueso. La presencia de casi mucus puro se comprueba en la disentera y en la ileocoltis, etc

4.7.

4.8.

CONCRECIONES. Las ms importantes son los clculos biliares que se rompen con facilidad por su consistencia blanda, y se identifican por su superficie facetada. Los coprolitos son concreciones fecales grandes y duras, los enterocolitos son de tamao menor y se forman alrededor de cogulos sanguneos, restos vegetales, las arenillas intestinales estn constituidos por pequeas partculas de mucus. Restos alimentarios no Digeridos. Normalmente aparecen en las heces residuos macroscpicos de sustancias ingeribles como partculas seas, cartlagos, algunos vegetales ingeridos crudos (lechuga, cebollas), cscara de frutas, etc. Patolgico es hallar sustancias que normalmente son bien digeridos. El examen se realiza directamente o previa dilucin de las heces con solucin Fisiolgica, es aconsejable observar en una cubeta cuyo fondo tenga una mitad b.anca y otra de color negro.

5.

EXAMEN QUIMICO. 5.1. DETERMINACION DE SANGRE OCULTA. Antes de practicar la investigacin de sangre oculta en las heces es necesario que el paciente observe durante 3 das una dieta exenta de carne y de otros productos que contienen hemoglobina o un exceso de clorofila (vegetales verdes), as como suprimir cualquier medicacin frrica, nitritos, bismuto o cobre, tambin es aconsejable antes de la prueba no cepillarse los dientes. Dan aumento o falso positivo la ingestin de cido brico, los agentes oxidantes bromuros, colchicina, yoduros, etc. Se puede determinar por la prueba de la Bencidina. 5.2. DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LOS ACIDOS ORGANICOS TOTALES. Por el mtodo de Goiffom y Nepveux: para dosar cido actico, butrico, lctico, valerinico, frmico, etc. Normalmente las heces contiene 14 l6ml. de cidos orgnicos. Se observa un aumento en los procesos con predominio fermentativo. Hay disminucin en los procesos predominio de putrefaccin y en las diarreas. 5.3. DETERMINACIN CUANTITATIVA DEL AMONIACO. Mtodo de Goiffon y Nepveux. Los valores normales estn entre 2 y 4m NaOH 0.1 N par a 10 g heces. 5.4. DETERMINACIN DE PIGMENTOS BILIARES. Esta determinacin es importante en casos de acola. Debe hacerse aunque las heces aparezcan completamente decoloradas por que puede ocurrir que la estercobilina existente haya sido reducida por las bacterias a la correspondiente leucobase y en caso de que la materia fecal aparentemente aclica contiene una cantidad normal de pigmentos biliares, se debe a la detencin del trnsito clico. Se puede determinar por:

a. b. c.

5.5.

5.6.

Reaccin de Schmidt para estercobilina. Determinacin cuantitativa de la estercobilina. Reaccin de Grigut para la bilirrubina. Las reacciones proporcionan datos de mucho valor clnico si son negativos puede afirmarse que no pasa bilis al intestino la presencia de bilirrubina indica un trnsito intestinal acelerado a partir del ciego. DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LOS LPIDOS. El estudio de la digestin intestinal de los lpidos intestinales se realiza conociendo la cantidad ingerida, como han sido utilizados y que cantidad se ha eliminado con las heces an con una dieta libre de lpidos el organismo elimina aproximadamente 2g diarios con una composicin similar a los lpidos sanguneos. Para esta determinacin es necesario conocer la cantidad de lpidos ingeridos y tener la totalidad de las heces eliminadas. Se puede determinar por el mtodo de Saxn DETERMINACIN DE ENZIMAS. En la determinacin de tripsina y amilasa los resultados son variables, habitualmente es imposible encontrar lipasa. Normalmente la gelatina es licuada por la tripsina en una dilucin 1:100 lo que indica su presencia. Un resultado 1:50 o menos hace sospechar enfermedad fibroqustica del pncreas. La falta absoluta de enzimas es excepcional por lo que su determinacin tienes escaso valor clnico y apenas se practica actualmente.

6.

EXAMEN MICROSCOPICO. 6.1. RESTOS ALIMENTARIOS. A. FIBRAS MUSCULARES.- Bien digeridos aparecen como cuerpos ovales de extremos redondeados, es escaso pero mayor cuanto ms carne se han ingerido.

B.

TEJIDO CONJUNTIVO.- Se presentan como restos de aspecto fibroso en tejido fino y fibras sueltas. Su presencia sobre todo macroscpica indica insuficiencia gstrica.

C.

LIPIDOS. Se observan como gotas de tamao variable formando lagunas muy refringentes; las grasas neutras se colorean con Sudan III de color negro, forman el 5% de los lpidos normales en las heces. Los cidos grasos se presentan como agujas duras y largas o en conjuntos semiamorfos constituidos por cristales cortos, finos y entre cruzados y de puntas afiladas.

ALMIDN. CRUDO: En preparaciones sin teir se reconoce por sus lneas concntricas. Con solucin de lugol el almidn crudo aparece coloreado de negro. COCIDO: Puede ser amorfo en forma de pequeos acmulos fuera de las clulas vegetales con Lugol forma manchas irregulares de color azul. Incluido: Est dentro de la cubierta celulsica de las clulas de las legumbres cocidas, se tien de color azul con el Lugol. e. CELULOSA DIGERIBLE.- Se encuentra normalmente escasa cantidad de celulosa digerible, su aumento indica trnsito intestinal acelerado. 6.2 CRISTALES. Se pueden encontrar cristales de fosfato de amonio, fosfato de magnesio, oxalato de calcio y Charcot Leyden; tienen poca importancia clnica. 6.3. ERITROCITOS.- Son raramente observables y difciles de reconocer. Su presencia indica hemorragia rectal o anal. 6.4 LEUCOCITOS. Se observa de aspecto mas o menos granuloso. 6.5 CELULAS. Se encuentran clulas epiteliales generalmente alteradas por lo comn sin importancia clnica. 6.6 PARASITOS Y HUEVOS.- El examen directo es suficiente para observar la mayor parte de los parsitos y huevos. EXAMEN PARASITOLOGICO. Consiste en la deteccin de parasitos como: Helmintos(Gusanos) que se pueden observar a simple vista. Huevos o larvas de estos helmintos (visibles al microscopio). Protozoarrios(organismos unicelulares)que pueden estar provistos de movilidad(formas vegetativas) o carecer de ellas y ser inmviles,resistentes llamados quistes. 7.1. RECOLECCION. Las heces eliminadas por el paciente deben ser fijadas con una solucin de formol 10% en solucin fisiolgica al 9/00 que tiene la ventaja de conservar las muestras y de neutralizar el olor. Este mtodo permite una observacin seriada de las muestras. Se recomienda aplicar la tcnica del papel adhesivo en la zona perianal para investigar huevos o larvas. En el examen parasitolgico se recomienda efectuar primero el examen macroscpico y despus el examen microscpico. 7.2 EXAMEN MACROSCOPICO.- Se realiza en forma directa se pueden encontrar macroparsitos. Oxyuris vermicularis, Taena saginata, etc. Otras veces es necesario filtrar las muestras por medio de un tamiz. 7.3 EXAMEN MICROSCOPICO. Se hacen preparaciones entre portaobjetos y cubreobjetos en fresco, teidos y por enriquecimiento,

D.

con Hematoxilina frrica o tambin con el colorante Shorr, que da muy buenos resultados y es gran utilidad en el examen microscpico. Los parsitos que se pueden hallar en las heces de ms importancia son los siguientes:

Entamoeba histolytica Rizopodos

Trofozoito: 20-30u Prequiste: 15u, 1-4 ncleos Quiste: 5-20u Trofozoito: 20-40u Prequiste: 15-22u Quiste: 22-30u, 8 ncleos Trofozoito: 10-15u, 2 ncleos Quiste: 8-12u, 2-4 ncleos Trofozoito: 10-15u, 4 flagelos Quiste: 7-9u Trofozoito: 30-200u Quiste: 45-64u

PROTOZOARIOS

Entamoeba coli

Giardia lamblia Flagelados Chilomastix meslini Ciliados Balantidium coli

Nematelmintos

HELMINTOS O VERMES

Ascaris lumbricoides: huevos 45-70u Strongyloides Stercolaris: larva: 200-300u, huevo: 55u Ansylostoma duodenale: huevos 60u Necator americanos: huevos 70u Trichuris trichura: huevos 70u Taenia Saginata: huevos 30-40u Taenia solium: huevos 30-40u Quiste hidatdico: Quiste 20-25u Hymenolepsis nan: huevos 40-50u Hymenolepis diminuta: huevos 60-80u Fasciola heptica: huevos 130-140u

Cestodes Platel mintos Trematodes

8.

PARTE EXPERIMENTAL. 8.1 MATERIALES: Lminas portaobjetos Lminas cubreobjetos Tubos de Ensayo Paletas de madera Microscopio REACTIVOS: Solucin de Lugol Solucin fisiolgica MUESTRA: Heces 8.2 TECNICAS. EXAMEN FSICO: realizar tomando en cuenta las pautas sealadas anteriormente. EXAMEN MICROSCOPICO: a. Tomamos con una paleta de madera una pequea porcin de muestra: Si las heces son bien formadas tome esta porcin de una parte profunda de la muestra (puede haber huevos de parasitos). En caso de heces liquidas tome la muestra de la superficie la porcin que contenga moco sanguinolento o el liquido que lo rodea (puede haber amebas). Colocamos en un portaobjetos, luego aadimos unas gota de suero fisiolgico, se mezcla para luego colocar sobre la mezcla un cubreobjetos; y observamos en el microscopio a l0X o 40X trofozoito de Giardia lamblia, Entamoeha histoltida, E. coli. b. Preparamos otra lmina portaobjetos igual que la anterior pero con unas gotas de solucin de Lugol, mezclamos y colocamos un cubreobjetos sobre la mezcla y observamos al microscopio a 10X o 40X que nos permite observar quistes de parsitos y restos de almidn. c. Resultados

Reportar los resultados delas muestras observadas y realizar los dibujos correspondientes. CUESTIONARIO. 1. Seale y describa el mejor mtodo para detectar parsitos prevalentes en la regin Cusco. 2. Desarrolle Helycobacter Pylori y Cncer gstrico. Y su relacin con sangre oculta en heces 3. Haga un coprocultivo de heces diarreicas causadas por bacterias, seleccione el mejor medio.

4. 5.

Dibuje o pegue a todo color los diferentes parsitos segn la clasificacin anterior Realice y desarrolle el perfil heptico.