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UFPS

INFORME DE BIOLOGIA MOLECULAR

[Extracción del ADN de fusarium sp]
Luz Andrea Barriga Rodríguez 1610183, Carol Nataly Carrero Becerra 1610423, Sandra Patricia Rueda Díaz 1610425, Lady Johana Moreno Villamizar 1610461

[2] Electroforesis en gel de poliacrilamida. insolubles en agua.[3] OBJETIVO  Extraer el ADN de Fusarium sp y analizarlo en una gel de poliacrilamida. Forma.INTRODUCCIÓN La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.K. es químicamente inerte. conociendo la importancia de cada uno de los reactivos utilizados.Durrum y Arne W. METOOLOGIA Para la extracción del ADN genómico de Fusarium sp o para cualquier otra especie de hongo es necesario seguir la siguiente metodología: 1 . preparada según las indicaciones establecidas. Des de entonces hay varios tipos de geles donde se realiza electroforesis como electroforesis en geles de gradientes. impulsaron la electroforesis de zona. pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L. se puede modificar de manera controlada en el tamaño del poro. lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad. también se haba de electroforesis capilar. se ha convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular. electroforesis bidimensional e isoelectroenfoque. de poliacrilamida. Tiselius . capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros. nombre que se asignó a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo de soporte. de propiedades uniformes. además. relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. de agarosa. geles transparentes con estabilidad mecánica. estos geles se forman por polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecuzador.[1] Fue empleado por primera vez por en el año 1937. aunque este término se limitó originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscopicas .

4 se agita en el vortex Fig. 12) conaps al 10% y temed de edición comercial sobre la solución de acrilamida al 30%. 11 Aislamiento del par de vidrios para el gel de poliacrilamida. Fig. 13) se coloca el peine (Fig. Servir el gel con pipetas pauster. 2 . Ubicar los dos vidrios de orillo curvo bien alineados con los separadores de lado y lado. 10 Adicion de los 50 microlitros de Tris Edta (TE) Gel de Poliacrilamida: La polimerización deriva deltratamiento (Fig. Fig. 11 Fig.Descartar el isopropanol y dejar secar conservar en 50 microlitros de TE Fig 10 Fig. Fig. (Fig. 14) y seespera la polimerización. Fig. aislarlos para evitar fugas. Fig. Poner el vidrio muescado sobre el montaje anterior y se sella el complejo de vidrio. 8 Centrifugación Fig. 5 Centrifugación. 2 Se añade el buffer de extracción. 3 Se macera el hongo. 7 se añade fenol cloroformo. 1 Micelio del hongoFusarium sp Adicionar el buffer de corrida y correr en electroforesis gel de poliacrilamida Fig. 9 Adición fenol cloroformo del Fig. 6 Incubación Fig.

microlitros Cargar las muestras de por cada pozo conectar los oltios. para realizar la poli erizaci . SI ES ( ¨ ¨ # $ §   ¦¥ § ¨ §¨  ¤¨ ¦¥ ¤© ¦¥ ¤ £ ¢¡   "!      ebido a los inconvenientes presentados en el desarrollo de la práctica de laboratorio . 3 . Electroforesis en el de agarosa. sino ue se realizó en gel de agarosa. por lo que se tomó como segunda opción la preparación del gel de agarosa. ES S Servicio de la sol ci previa a la Fi . Fi . Se fijan los idrios con los anchos al lado opuesto se coloca un idrio para sellar la cámara. de los pocillos icando IS Una li i l l l an i i nl aradores en no l de los lados de la ara de electroforesis ertical rocurando dejar los ozos acia el interior con el fin de inundarlos con uffer de corrida. además se observa como todas las bandas migran con la mi sma velocidad debido a uepresentan el mismo peso. de la acrilamida por efectos poli erizaci del temed. En la igura 5 se ve la migración de las bandas de A genómico de Fusarium sp. Formaci el peine. no se pudo realizar la electroforesis en gel de poliacrilamida.retirando el peine con cuidado se inunda la cámara arri a abajo con buffer se eliminan las burbujas. Fi . el gel de poliacrilamida presento muchos inconvenientes para su polimerización. hacia el polo positivo a ue el A presenta una carga negativa. electrodos a la fuente de Para leer se sumerge en 5 ol menes de colorante. A i i de Aps y te ed l sol i de il id . por cuanto este presenta unas características muy importantes como: '& % Fi . un procedimiento conforme a lo requerido en la guía para la práctica. indi idual A pesar de ue se llevó a cabo.

poliacrilamida lineal e iones.El gel es vertido fácilmente. Pero el voltaje es limitado por el hecho de que calienta y hace en ltima instancia el gel derretir. Disponible en [Citado en internet:http://javeriana. os altos voltajes también disminuyen la resolución sobre cerca de 5 a 8 V/cm).]. Colombia. En geles vertidos a 5 ºC ocurre mayor variabilidad de los Rf si se comparan con los vertidos a bajas temperaturas . nos garantiza que no hubo una de este contaminación en el A hongo.5. Por ejemplo las principales impurezas son ácido acrílico residual que puede retardar la movilidad electroforética de algunas Proteínas). que migraron. Electroforesis.co/ acultad es/Ciencias/neurobioquimica/libros/celu lar/electroforesis. o hubo ningún inconveniente al preparar el gel de agarosa por lo que también se puede decir que es más fácil de preparar que el gel de poliacrilamida. en particular esto es muy importante para la acrilamida.html 4 . y las muestras pueden tambi n ser recuperadas. BIBLIOGRAFIA [ ] UNIVERSIDAD JAVERIANA. CONCLUSIONES El empleo de reactivos de alta calidad y agua desionizada es un prerrequisito para hacer geles reproducibles y de alta resolución. pues estas bandas debido a que deben presentar el mismo peso y tamaño emigraron a la misma velocidad. fuerza iónica y temperatura y Resistente a agentes desnaturalizante y uerza electroendosmótica reducida y Mecánicamente estable ácil de almacenar y y Amplia versatilidad para la detección de compuestos analizados[6]. [En línea]. moléculas más pequeñas viajan más lejos. sin embargo esto depende de la calidad de los reactivos desde su fabricación. ya que es el constituyente más abundante del gel. [ ] El aumento de la concentración de la agarosa de un gel reduce la velocidad de la migración y permite la separación de moléculas más pequeñas de la A. ambi n es preciso decir que puede existir la presencia de impurezas en los reactivos utilizados para la preparación del gel. facilidad para ser y densitometrado y Estable en amplio intervalo de pH.edu. [5] a técnica de electroforesis con gel de agarosa resulto ser muy eficaz al momento de observar las bandas de Fusarium sp. [ ] El factor más importante es la longitud de la molécula de A . Cuanto más alto es el voltaje. más rápidamente la A emigra. como pudo ser posible en esta práctica. no desnaturalizan las muestras. [5] Una observación en los resultados de la migración de las bandas del A genómico de Fusarium sp. posiblemente por una disminución del promedio de la longitud de cadena de estos ltimos. a eficiencia de polimerización incrementa comparativamente a ºC por lo que sus propiedades físicas son superiores para S S -PAGE a las de geles polimerizados a 5 ºC. . aunque no hay que dejar de tener encuanta las grandes ventajas que nos brinda el gel de poliacrilamida que son:  amiz molecular: tamaño de poro variable y Químicamente inerte frente a moléculas biológicas ransparente.[5] a electroforesis es una t cnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales.

pdf [ ]Dra.pdf 5 .[ ]Dra. [Citado en .fcen.5] Disponible en internet: http://www.pdf [3] B.Investigadora .medvet.]. [Citado en ] Disponible en internet:http://www.qb.sld. omonte. Gabriela Hernández Mora.ucr.5[5]Molecular station. poliacrilamida.ar/virologia/Clau dia/Cursos/ %E cnicas% Electrofor %E ticas/ 3% PAGE_Curso.Capítulo 3: Electroforesis en Gel de Poliacrilamida .icp.cu/revistas/uni/vol _ _ /uni .molecularstation. Disponible en internet: http://www.5].htm .una. Máster en Ciencias Bioquímicas. [Citado en Disponible en internet: http://www. Hilda Marilín García Pérez.co m/es/agarose-gel-electrophoresis/ [6] [Citado en .5. Agregada. Práctica Métodos de caracterización de proteínas: Electroforesis en gel de .cr/carrera/mv a5 5_Practica3.cr/nuevo/pdf/elect roforesis.ac.].[Citado en Disponible en internet:http://bvs.ac. [En línea]Inmunología General: Manual de aboratorio .5.uba.

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Bibliografía 7 .