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Informe de resultados del examen práctico de Microbiología

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Informe de resultados del examen práctico de Microbiología Pruebas con la cepa del alumno (Klebsiella penumoniae

)
Aislamiento de cultivo, agotamiento por estría
Medios y reactivos: Agar nutritivo en placa de 90 mm Método: Se toma la placa con agar nutritivo y con un rotulador, sobre la base de la placa, se divide en cuartos que se numeran del 1 al 4. Se toma la cepa y se siembra en la placa (en este caso Klebsiella pneumoniae) con un asa curva haciendo una estría en el primer cuarto, luego se esteriliza el asa, y después de enfriarla, se pasa por el final de la estría del primer cuarto y se hace una nueva estría en el 2º, y así sucesivamente hasta llegar al 4º. Luego se incuba durante 24h a 37º C. Incidencias: Hubo un error en la siembra y se hizo una estría por toda la placa. Además, el agar nutritivo se proporcionó en tubos, por lo que se fundió en baño maría y se paso a la placa de 90mm

Pruebas bioquímicas: KIA
Medios y reactivos: Tubo de agar hierro de Kligler en slant Objetivo: Observación de la capacidad de fermentación de glucosa y lactosa, además de la producción de H2S. Método: Hacer una siembra tanto en superficie como por picadura con un asa recta, dejándolo incubar después 24h a 37º C Resultados e interpretación: La zona del pico adquirió una coloración anaranjada amarillenta mientras que la base permaneció roja. El cambio de color del medio se debe a la capacidad de la bacteria de fermentar tanto lactosa como glucosa, lo que produce una variación de pH que es lo que motiva el cambio de color. La ausencia de burbujas y de ennegrecimiento determinan que no produce gases ni H2S. Incidencias: La picadura no fue lo suficientemente profunda, por lo que en la base no se produjeron cambios.

Pruebas bioquímicas: Catalasa
Objetivo: Determinar si la bacteria de la cepa posee la enzima catalasa. Método: Tomar con un asa curva una pequeña muestra de la cepa y depositarla sobre un portaobjetos de vidrio, después, depositar 2 ó 3 gotas de H2O2 al 10% sobre la misma y observar, si produce burbujas o no. Resultados e interpretación: Hubo burbujeo al realizar el ensayo por lo que la cepa posee la enzima catalasa.

Pruebas bioquímicas: Oxidasa
Medios y reactivos: Reactivo de Kovacs Objetivo: Determinar si la cepa bacteriana posee la encima oxidasa. Método: Coger el reactivo de Kovacs (solución acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina) y depositar 1 ó 2 gotas en un papel de filtro, sobre el que se depositará una pequeña muestra de la cepa bacteriana tomada con un asa curva si la prueba es positiva torna a un color azulado, en caso contrario, no se produce cambio. Resultados e interpretación: El reactivo no cambio de color, por lo que la prueba es negativa.

Pruebas bioquímicas: Fermentación de lactosa y producción de gas en medio líquido
Medios y reactivos: Tubo de caldo lactosado con campana de Durham con rojo de fenol como aditivo. Objetivo: Determinar si la cepa es capaz de fermentar la lactosa y además, produce gas al hacerlo. Método: Tomar una muestra de la cepa con asa curva y depositarla en el tubo, después incubar a 37º C durante 24h. Incidencias: Hubo un error en la elección del aditivo, utilizando rojo de metilo en lugar de rojo de fenol, por lo que no se aprecia si la bacteria utiliza la lactosa o no. Resultados e interpretación: Por el error mencionado el tubo mantiene el color rojo del aditivo, además, no se observan burbujas en la campana de Dirham, por lo el resultado es negativo en producción de gas

Prueba de movilidad en la cepa de K. pneumoniae por la técnica de la gota suspendida
Objetivo: Determinar si la cepa posee movilidad y si es de tipo browniano o vital (o ambas) Método: Se toma un cubreobjetos al que se le untan los bordes de un lado con una pequeña cantidad de vaselina y se coloca con el lado untado hacia arriba sobre la mesa del laboratorio. Después se deposita una muestra de la cepa con un asa curva en el centro del cubreobjetos y se le añade una pequeña gota de 2%d de carboxil-metilcelulosa disuelta en sacarosa 0,2 molar que se extiende con ayuda del asa. Después se coloca con cuidado un portaobjetos con uno de los lados excavado sobre el cubreobjetos (lógicamente el lado excavado hacia abajo) con cuidado de que la gota no se adhiera al

portaobjetos y se voltea. Después se observa al microscopio empezando por el objetivo de 4x. Resultados e interpretación: Fundamentalmente se detecto un movimiento vibratorio (browniano) en la cepa, pero después de un rato de observación, una bacteria cruzo la pantalla del objetivo, demostrando así movimiento vital.

Análisis de aguas
Análisis de aguas: Recuento de esporas de clostridios sulfitoreductores. (Muestra A)
Medios y reactivos: Agas SPS en tubos de 50 ml Objetivo: Hacer un recuento de esporas de clostridios sulfito-reductores en la muestra de agua proporcionada. Método: 20 ml del medio se depositan en un tubo de 50 ml. En el momento de realizar el ensayo el medio se debe fundir en baño maría. Para destruir las formas vegetativas, la muestra de agua se debe calentar hasta 80º C durante 5 minutos, bajando la temperatura aproximadamente a 60º C después. Posteriormente sembrar el tubo con 20 ml del agua a 60º C y homogeneizar, para después enfriar rápidamente bajo el grifo. Cuando el medio consolide, incubar a 37º C durante 48 horas, haciendo un recuento preliminar a las 24h. Resultados e interpretación: Las colonias de clostridios aparecen de color negro por la formación de sulfuro de hierro. La lectura preliminar a las 24h no dio resultados, ya que había completa ausencia de colonias con coloración negra. La lectura a las 48h dio un resultado positivo, pero incontable debido a la abrumadora cantidad de colonias negras presente.

Análisis de aguas: Investigación de la presencia de bacterias del género Salmonella. (Muestra A)
Medios y reactivos: Caldo EE en tubo. Objetivo: Determinar si existe presencia de bacterias del género Salmonella en la muestra proporcionada. Método: Tomar con una micropipeta un mililitro del agua de muestra y vaciar en el tubo con el medio. Dejar incubar durante 24h a temperatura ambiente. Resultados e interpretación: Las bacterias del género Salmonella pertenecen a las Enterobacteriaceas, por lo que el caldo EE es un medio adecuado para su desarrollo. La presencia de turbidez en el medio, delata su presencia. Incidencias: Inicialmente se iba a utilizar agar verde brillante como medio para este ensayo, pero al no disponer de él, se dispuso utilizar caldo EE como una alternativa viable.

Parámetros a aplicar: Resultado Esporas de clostridios Sulfito-reductores: Salmonella: Límites legales

Incontables Positivo

0 UFC/100 ml Negativo

Los valores paramétricos han sido tomados del Anexo I del Real Decreto 140/2003 sobre los criterios sanitarios de calidad de aguas de consumo humano, de los que se saca que el agua sometida al análisis no es potable.

Análisis de aguas: Recuento de coniformes fecales en una muestra de agua embotellada. (Muestra B)
Medios y reactivos: Placa de FC agar con ácido rosólico al 1%. Objetivo: Determinar la presencia de coniformes fecales en una muestra de agua embotellada y, de existir, hacer un recuento de las colonias desarrolladas. Método: Se utilizó el llamado método de filtración de membrana. Consiste en utilizar un equipo de filtración al vacío y, en lugar de utilizar un filtro convencional, utilizar un filtro de nitrato de celulosa. Para ello, primero se debe montar el equipo, en este caso se disponía de una rampa de filtración. Se coloca la parte inferior del equipo en una de las trompas, luego se deposita con sumo cuidado el filtro y, sobre el, la parte superior del equipo, afianzándolo con una pinza, posteriormente se pone en marcha la rampa y se deposita una cantidad no inferior a 30 ml del agua de muestra, Después, se desmonta el equipo retirando el filtro de nuevo con sumo cuidado sobre la placa con el medio procurando que se adhiera bien. Luego se deja incubar a 44ºC durante 24h. Resultados e interpretación: Las colonias de coniformes fecales tornan a un color azul claro al desarrollarse en este medio debido al cambio de pH. En este caso hubo una total ausencia de coliformes fecales. Parámetros a aplicar: Resultado Coniformes fecales: 0 UFC/100ml Límites legales 0 UFC/100ml

Los valores paramétricos han sido tomados del Anexo I del Real Decreto 140/2003 sobre los criterios sanitarios de calidad de aguas de consumo humano, de los que se saca que, para este parámetro, el agua sometida al análisis es apta para el consumo humano.

Análisis de superficies: Determinar la presencia de mohos y levaduras en una muestra tomada en el suelo del aula.
Medios y reactivos: CGA en placa y solución de Ringer. Objetivo: Observar si existe presencia de colonias de mohos o levaduras en una muestra tomada con un hisopo en una superficie de 10x10 cm. Método: Con una plantilla metálica cuadrada con un área interior de 10x10 cm, se delimita la zona de muestraje, que se toma con un hisopo humedecido en Ringer, cubriendo la zona entera pasando el hisopo por el suelo una vez en cada dirección (4 en total). Después depositar el hisopo en el tubo con la solución Ringer durante 10-15 minutos. Mientras tanto, el CGA, que estaba en tubo, se fundió en baño maría y se pasó a placa de 90mm. Una vez solidificó el CGA y pasó el tiempo necesario el hisopo dentro del Ringer, se hizo una siembra en césped sobre el CGA con un asa de Digralsky, para luego dejar incubando durante 72h a temperatura ambiente. Resultados e interpretación: No hubo crecimiento de ningún microorganismo en el medio CGA, por lo que no hay presencia de hongos y levaduras. Incidencias: El medio se proporcionó en tubo, por lo que se fundió en baño maría y luego se pasó a placa de 90 mm.

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