Virología Clínica

BACTERIÓFAGOS
INTRODUCCION Los bacteriófagos son ubicuos y pueden ser encontrados en diversas poblaciones de bacterias, tanto en el suelo como en la flora intestinal de los animales. Uno de los ambientes más poblados por bacteriófagos y otros virus es el agua de mar, donde se estima que puede haber en torno a 109 partículas virales por mililitro, pudiendo estar infectadas por bacteriófagos el 70% de las bacterias marinas. Existen muchas similaridades entre los bacteriófagos y los virus de células animales. Así, los bacteriófagos pueden ser visualizados como sistemas modelo de los virus de células animales. Además es necesario el conocimiento previo del ciclo de vida del bacteriófago para entender uno de los mecanismos por los cuale s los genes bacterianos pueden transferirse de una bacteria a otra. Alguna vez se pensó que el uso de los bacteriófagos podría ser una vía efectiva para tratar las infecciones bacterianas, pero pronto se hizo aparente que los bacteriófagos son removidos rápidamente del cuerpo así que resultaron de poco valor clínico. Sin embargo, los bacteriófagos son útiles en el diagnóstico de laboratorio para la identificación de bacterias patógenas (fago-tipificación). Aunque la fago-tipificación no se usa en el laboratorio clínico de rutina, sí se usa en los laboratorios de referencia con propósitos epidemiológicos. Recientemente, se ha desarrollado un nuevo interés en el posible uso de los bacteriófagos para el tratamiento de infecciones bacterianas y en la profilaxis. De manera que la decisión de si los bacteriófagos serán usados en la medicina clínica o no, aún está por ser determinada. Definición: Los bacteriófagos (fagos) son parásitos intracelulares obligados que se multiplican al interior de las bacterias, haciendo uso de algunas o todas sus maquinarias biosintéticas (p. ej., los virus que infectan bacterias). Los bacteriófagos (-del griego (phageton), alimento/ingestión) son virus que infectan exclusivamente a bacterias. Al igual que los virus que infectan células eucariotas (eu - verdadero, carion ² núcleo), los bacteriófagos están constituidos por una cubierta proteica o cápside en cuyo interior está contenido su material genético, que puede ser DNA (Ácido Desoxirribonucleico) o RNA (Ácido Ribonucleico) de simple o doble cadena, circular o lineal (en el 95% de los fagos conocidos es DNA de doble cadena), de 5.000 a 500.000 pares de bases. El tamaño de los bacteriófagos oscila entre 20 y 200 nm aproximadamente.

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Dependiendo del fago. el microbiólogo canadiense Félix d'Herelle anunció el 3 de septiembre de 1917 su descubrimiento de "un invisible antagonista microbiano del bacilo de la disentería". al cual llamó bacteriófago. mientras que los fagos más complejos. Los fagos más simples solo tienen suficiente ácido nucleico para codificar un promedio de 3 5 productos génicos. ¢ ¡   Frederick Twort Félix d'Herelle COMPOSICIÓN Y ESTR CTURA DEL BACTERIÓFAGO 1) Composición: Aunque diferentes bacteriófagos pueden contener diferentes materiales todos ellos contienen ácido nucléico y proteína. mientras que los ma s ¥ ¤ £ 2 . Los ácidos nucléicos de los fagos a menudo contienen bases raras o modificadas.Vir í í i HISTORIA En 1913 el ba teriólogo británico Frederick Twort descubrió un agente bacteriolítico que infectaba y mataba a las bacterias. El fago mas simple posee varias copias de solo una o dos diferentes proteínas. pero no fue capa de saber qué era exactamente dicho agente. Estas bases modificadas protegen a los ácidos nucleícos del fago de las endonucleasas que cortan los ácidos nucléicos del huésped durante la infección. el ácido nucléico puede ser ya DNA o ya RNA pero no ambos y puede existir en varias formas. El número de proteínas de diferentes clases y la cantidad de cada una de ellas en la partícula del fago variará dependiendo de la clase de fago que se trate. Independientemente. pueden codificar para más de 100 productos génicos. El tama o de los ácidos nucleícos varía dependiendo del fago.

La función de las proteínas durante la infección es proteger al ácido nucleico de las nucleasas de su medio ambiente. bacteriófago pero solo contiene uno de ellos.Virología Clínica complejos podrían poseer muchos tipos de proteínas diferentes. ¦ 3 ¦ que pueden contener lo ¦ Lo ácido nucleíco ¦ ¦ .

© ¨ Cabeza 4 . La cabeza o cápside está compuesta de muchas copias de una o más proteínas diferentes. b. Algunos son icosaédricos (20 caras) otros son filamentosos. la cual muestra al fago denominado T4. Las características básicas estructurales de los bacteriófagos se ilustran en la Figura 1. La cabeza actúa como una cubierta protectora para el ácido nucleico. Al interior de la cabeza se encuentra el ácido nucleico. La mayoría de los fagos están entre un rango de 24-200 nm de longitud. Figura 1 Estructura del bacterió ago T4 a.Vir í í i § 2) Estructura: Los bacteriófagos vienen en muchas diferentes formas y tama os. Tamaño: T4 está entre los fagos más grandes. Otros fagos son más pequeños. tiene aproximadamente 200 nm de largo y 80 100 nm de ancho. Cabeza o Cápside: Los fagos clásicos poseen una estructura a manera de cabeza y pueden variar de tamaño y forma.

INFECCIÓN DE LAS CÉLULAS HUÉSPED La única función que poseen los virus y que comparten con el resto de los seres vivos es la de reproducirse o generar copias de sí mismos. Representación esquemática de las estructuras de algunos bacteriófagos. No poseen metabolismo ni organización celular. En tales casos existen otras estructuras que se ven asociadas en la unión de partícula del fago a la bacteria. Al extremo de la cola los fagos más complejos como T4 presentan una placa en la base y una o mas fibras unidas a ella. 5 . por lo que se les sitúa en el límite entre lo vivo y lo inerte. la cola se rodea de una cortina contráctil durante la infección de la bacteria. No todos los fagos tienen placas de base ni fibras de la cola. Cola: Muchos. En los fagos más complejos como T4. La cola es un tubo hueco a través del cual el ácido nucleico pasa durante la infección. III. por lo que se les considera parásitos obligados.Virología Clínica c. necesitando utilizar la materia. aunque no todos los fagos muestran una cola unida a la cabeza del fago. El tamaño de la cola puede variar y algunos fagos ni siquiera la tienen. Esta placa de base y las fibras de la cola están involucradas en la unión de los fagos a la célula bacteriana. la energía y la maquinaria de la célula huésped.

Este paso es reversible está mediado por las fibras de la cola o por alguna estructura análoga en aquellos fagos que carecen de las mismas. Usualmente el único componente del fago que realmente penetra la célula es el ácido nucleico. Algunos fagos tienen enzimas digestivas que degradan varios componentes de la envoltura bacteriana. Ciertos enzimas situados en la placa basal debilitan la pared de la bacteria.. ácidos teicoicos. Inyección del Ácido Nucleico ± Cuando el fago ha logrado atravesar la envoltura bacteriana el ácido nucleico que se encuentra en la cabeza pasa a través de la cola hueca y penetra la célula bacteriana. ej. Por ello. dependen de encuentros al azar con los receptores adecuados en solución para poder infectar una bacteria. La naturaleza del receptor bacteriano varía en las diferentes bacterias. La cola del fago se fija a los receptores específicos de la pared bacteriana (intervienen en esa fijación los filamentos caudales y la placa basal) otros se fijan con los spikes (proteínas que tienen en su envoltura). Los fagos que no tienen cortinas contráctiles usan otros mecanismos para introducir la partícula del fago al interior de la envoltura bacteriana. Adsorción ± El primer paso en el proceso de infección es la adsorción del fago a la célula bacteriana.Virología Clínica Secuencia de la infección de las células huésped: A. Los remanentes del fago permanecen en el exterior de la bacteria. Los ejemplos incluyen proteínas sobre la superficie externa de la bacteria. Estos receptores están en la bacteria para otros propósitos y los fagos han evolucionado de manera que son capaces de usar estos receptores para llevar a cabo la infección. pili y lipoproteínas. LPS. Hay algunas excepciones para esta regla. C. B. Esto es diferente de los virus animales. Unión irreversible ± La unión del fago con la bacteria vía las fibras de la cola es de naturaleza débil y es reversible. Contracción de la cortina ± La unión irreversible del fago a la bacteria da como resultado la contracción de la cortina (para aquellos fagos que la presentan) y la fibra hueca que es la cola se ve empujada a través de la envoltura bacteriana. Puesto que los fagos no son móviles. La unión irreversible del fago con la bacteria está mediada por uno o más componentes de la placa de la base. cada fago solo podrá infectar ciertas bacterias según sus receptores. en los cuales la mayoría de las partículas virales normalmente se 6 . Los fagos que carecen placas de la base tienen otras formas de unirse estrechamente a la célula bacteriana. la bacteria que es capaz de infectar) se determina usualmente por el tipo de fibras de la cola que un fago posee. D. Las fibras de la cola se unen a receptores específicos en la célula bacteriana y la especificidad del huésped del fago (p.

A. los fagos endógenos o profagos se activan y dan lugar al ciclo lítico que termina con la lisis celular. En este momento. Ciclo de replicación viral a. Periodo de eclipse ±Durante la fase de eclipse las partículas de fago no infeccioso se pueden encontrar ya sea en el interior o en el exterior de la célula bacteriana. al término del ciclo de vida. las células hospedadoras del fago son lisadas (destruidas) tras la replicación y encapsulación de las partículas virales.Virología Clínica introducen en la célula. Definición: Los fagos líticos o virulentos son fagos que solo pueden multiplicarse en bacterias y matan a la célula debido a la lisis. Esta diferencia se debe probablemente a la incapacidad de la bacteria para envolver a la bacteria a fin de endocitar materiales. etc. Aparentemente no le pasa nada a la bacteria pero en realidad el virus interrumpe el metabolismo bacteriano. El fago queda así en estado de latencia hasta que las condiciones del medio se vean deterioradas: disminución de nutrientes. replicándose de forma independiente a la replicación bacteriana. En un corto espacio de tiempo. de forma que los nuevos virus quedan libres para llevar a cabo una nueva infección. CICLO DE MULTIPLICACIÓN DEL FAGO Los fagos pueden generar el ciclo lítico o el ciclo lisogénico. En el ciclo lítico. 2. El genoma del fago puede integrase en el ADN cromosómico de la bacteria hospedadora. el genoma del fago se transmitirá a toda la progenie de la bacteria originalmente infectada. Por el contrario. en el ciclo lisogénico no se produce la lisis inmediata de la célula. En cualquier caso. replicándose a la vez que lo hace la bacteria o bien puede mantenerse estable en forma de plásmido. aunque muy pocos son capaces de llevar a cabo ambos. que pueden llegar a ser minutos. aumento de agentes mutagénicos. el ADN bacteriano es degradado y los genes virales se encargan de 7 . IV. Fagos Líticos o Virulentos 1.

Existe una expresión ordenada de la síntesis macromolecular dirigida por el fago. las cuales se necesitan para la síntesis del DNA de fagos y para apagar la biosíntesis del DNA. se ensamblan y las partículas infecciosas se acumulan dentro de la célula. también son las proteínas necesarias para causar la lisis de la célula bacteriana. las proteínas helper se encargarán de ensamblar las nuevas partículas virales. La proteína que lleva a cabo la lisis es la endolisina. En algunos casos las proteínas tempranas literalmente degradan el cromosoma del huésped. RNA y proteínas del huésped. entonces los mRNAs y las proteínas tardías se fabrican. b. una enzima capaz de romper las moléculas de peptidoglicano de la pared bacteriana. 8 . Fase de acumulación intracelular ± En esta fase el ácido nucleico y las proteínas estructurales de que están hechos. El ácido nucleico del fago se apodera de la maquinaria biosintética del huésped y se elaboran los mRNAs y las proteínas fago específicas. Todo el proceso puede durar unos 15 minutos. tal como se observa en las infecciones por virus animales. Posteriormente. Luego de que el DNA del fago se sintetiza. Los mRNAs tempranos codifican para las proteínas tempranas.Virología Clínica reconducir el metabolismo utilizando los componentes de la bacteria para realizar copia de los capsómeros y síntesis del ácido nucleico. Lisis y Fase de liberación ± Después de un tiempo la bacteria empieza a sufrir lisis y los fagos intracelulares se liberan al medio. El número de partículas liberadas por bacteria infectada puede ser tan alto como 1000. Las proteínas tardías son las proteínas estructurales que conforman al fago. c.

Otros virus que no son bacteriófagos pueden también tener ciclos lisogénicos. Mientras la célula posea el ADN profago será inmune frente a infecciones de este mismo virus. B. Ensayo en placa ± Los fagos líticos se cuentan mediante ensayos de formación de placas. Las bacterias capaces de establecer esa relación con los fagos atenuados se denominan lisogénicas.Virología Clínica 3. el genoma del fago existe en un estado reprimido. a. Fago lisogénico o Temperado No siempre se produce la lisis inmediata de la célula. Estos fagos integrados se denominan profagos. del mismo modo a como ocurre en los plásmidos. Una placa se define como el área clara que resulta de la lisis de bacterias. Hay fagos atemperados o atenuados que se integran en el ADN bacteriano por entrecruzamiento de dos regiones idénticas del fago y de la bacteria. Al DNA del fago en este estado reprimido se le conoce como profago porque no es un fago pero posee el potencial para producir fagos. 1. hasta que un estímulo induzca la separación del profago que iniciará un ciclo lítico típico. Ensayos para determinar fagos líticos. En la mayoría de los casos el DNA de fago realmente se integra en el cromosoma del huésped y se replica junto con el 9 . (Cada placa se origina de un solo fago infeccioso). A la partícula infecciosa que da origen a la placa se le llama una unidad formadora de placa (ufp o en inglés pfu). El ADN del profago puede permanecer en forma latente durante varias generaciones de la bacteria. En este estado quiescente la mayoría de los genes del fago no se transcriben. y se replican pasivamente con el ADN de la bacteria. Definición ± Los fagos lisogénicos o temperados son aquellos que bien pueden multiplicarse via el ciclo lítico o entran en un estado quiescente en la célula.

ocurre entre un sitio particular en el DNA del fago circularizado y un sitio particular en el cromosoma del huésped. los extremos libres del círculo se pueden ligar para formar un círculo covalentemente cerrado. etc. A la célula que alberga un profago se le conoce como lisógena. La célula que alberga un profago no se ve negativamente afectada por la presencia del profago y el estado lisogénico puede persistir indefinidamente. Eventos que conducen a la lisogenia ± El fago prototipo: Lambda a. 3. Cada fago temperado so lamente reprimirá la expresión de su propio DNA y no la de otro fago. Las condiciones adversas que conducen a la producción de proteasas (proteína recA) la cual destruye a la proteína llamada represor. El resultado es un genoma del fago pero reprimido estable el cual está integrado dentro del cromosoma de la célula huésped. Circularización del cromosoma del fago.Virología Clínica cromosoma del huésped y se transmite a las células hijas. 10 . Estas cadenas sencillas de los extremos son complementarias (extemos cohesivos) de manera que pueden aparearse y producir una molécula circular. c. la llamaremos el represor es una proteína que presenta afinidad y se une con un sitio particular en el DNA del fago que llamaremos el operador y apaga la transcripción de la mayoría de los genes del fago. exposición al la luz UV o radiación ionizante. Este proceso se le llama inducción. exposición a químicos mutagénicos. así que la represión es muy específica (inmunidad a la superinfección con el mismo fago). EXCEPTO la del gene que da lugar al represor. El resultado es la integración del DNA del fago en el cromosoma del huésped. Recombinación Sitio-específico ± Un evento de recombinación catalizado por una enzima codificada por el fago. Las condiciones que favorecen la terminación del estado lisogénico incluyen: desecación. Esto a su vez conduce a la expresión de los genes del fago.El DNA de Lambda una molécula lineal de doble cadena con pequeñas regiones de cadena sencilla en los extremos 5¶. b. Represión del genoma del fago ± Una proteína codificada por el fago. el estado lisogénico puede ser terminado. Eventos que conducen a la terminación de la Lisogenia En cualquier momento en que la bacteria lisogénica quede expuesta a condiciones adversas. 2. al proceso inverso al proceso de integración. llamado escisión y al proceso de multiplicación lítica. En la célula.

ya que eliminar bacterias es lo que los fagos hacen mejor. Conversi n Lisogénica ± Cuando la célula está lisogeni ada ocasionalmente hay genes extra que el fago lleva y que se empiezan a expresar en la célula. apaga la síntesis del represor y por lo tanto previene el establecimiento de la lisogenia. Ci l Lí i   i    La deci i de lambda de ent ar en el cicl lítico o en el ciclo li ogénico cuando este penetra en la célula inicialmente est determinada por la concentraci n dentro de la célula. por ej. b. Importancia de la Li ogenia a. el cual es uno de los antígenos principales ante los cuales está dirigida la respuesta inmune. Esto puede tener importancia clínica. Las condiciones ambientales que favorecen la producci n de cro conducirán al ciclo lítico mientras que aquellas que favorecen la producci n del represor favorecerán la lisogenia. como de otra proteína del fago llamada cro. Este proceso se le llama conversi n lisogénica o conversi n por fago. Terapia fágica Los fagos cumplen un papel de gran importancia en la biología molecular al ser utilizados como vectores de clonaci n para insertar ADN dentro de las bacterias y obtener como resultado bibliotecas genómicas. tanto del represor. Hay una biblioteca de búsqueda de fagos específicos y sus usos terapéuticos en el Instituto Tbilisi. La proteína cro del fago. Solo aquellas cepas que se han convertido por lisogenia son pat genos.   5. Modelo de la transformaci n por virus animales ± La lisogenia es un sistema modelo para la transformaci n que llevan a cabo los virus de células animales. Se ha demostrado que los fagos lisogénicos llevan genes que pueden modificar al antígeno O de Salmonella. La terapia fágica ha sido utilizada desde la década de 1940 en la ex Unión Soviética como una alternativa a los antibióticos para tratar infecciones bacterianas. Estos genes pueden cambiar las propiedades de la célula bacteriana.Vir í í i Ci l Li   4. en la República de Georgia. El desarrollo de cepas bacterianas resistentes a múltiples drogas ha conducido a       11 . La producci n de toxina por Corynebacterium diphtheriae está mediada por un gen que es acarreado por un fago.

Virología Clínica investigadores en medicina a reconsiderar a los fagos como una alternativa al uso de antibióticos. Otros usos En agosto de 2006.Lisógeno Fago T4 (169 a 170 kpb. 200 nm de tamaño) Fago T7 Fago R17 Fago M13 . de bacteriófagos en ciertas carnes con el fin de acabar con la bacteria Listeri Bacteriófagos modelo A continuación se presenta una lista de los bacteriófagos más ampliamente estudiados: y y y y y y y y y y y y y Fago . la FDA (Food and Drug Administration) de Estados Unidos aprobó el uso t genes.Fagémido Fago MS2 (23-25 nm de tamaño) Fago G4 Fago P1 Fago P2 Fago N4 Fago 6 Fago P22 Fago 29 12 # %# # & $ " ! .

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