Virología Clínica

BACTERIÓFAGOS
INTRODUCCION Los bacteriófagos son ubicuos y pueden ser encontrados en diversas poblaciones de bacterias, tanto en el suelo como en la flora intestinal de los animales. Uno de los ambientes más poblados por bacteriófagos y otros virus es el agua de mar, donde se estima que puede haber en torno a 109 partículas virales por mililitro, pudiendo estar infectadas por bacteriófagos el 70% de las bacterias marinas. Existen muchas similaridades entre los bacteriófagos y los virus de células animales. Así, los bacteriófagos pueden ser visualizados como sistemas modelo de los virus de células animales. Además es necesario el conocimiento previo del ciclo de vida del bacteriófago para entender uno de los mecanismos por los cuale s los genes bacterianos pueden transferirse de una bacteria a otra. Alguna vez se pensó que el uso de los bacteriófagos podría ser una vía efectiva para tratar las infecciones bacterianas, pero pronto se hizo aparente que los bacteriófagos son removidos rápidamente del cuerpo así que resultaron de poco valor clínico. Sin embargo, los bacteriófagos son útiles en el diagnóstico de laboratorio para la identificación de bacterias patógenas (fago-tipificación). Aunque la fago-tipificación no se usa en el laboratorio clínico de rutina, sí se usa en los laboratorios de referencia con propósitos epidemiológicos. Recientemente, se ha desarrollado un nuevo interés en el posible uso de los bacteriófagos para el tratamiento de infecciones bacterianas y en la profilaxis. De manera que la decisión de si los bacteriófagos serán usados en la medicina clínica o no, aún está por ser determinada. Definición: Los bacteriófagos (fagos) son parásitos intracelulares obligados que se multiplican al interior de las bacterias, haciendo uso de algunas o todas sus maquinarias biosintéticas (p. ej., los virus que infectan bacterias). Los bacteriófagos (-del griego (phageton), alimento/ingestión) son virus que infectan exclusivamente a bacterias. Al igual que los virus que infectan células eucariotas (eu - verdadero, carion ² núcleo), los bacteriófagos están constituidos por una cubierta proteica o cápside en cuyo interior está contenido su material genético, que puede ser DNA (Ácido Desoxirribonucleico) o RNA (Ácido Ribonucleico) de simple o doble cadena, circular o lineal (en el 95% de los fagos conocidos es DNA de doble cadena), de 5.000 a 500.000 pares de bases. El tamaño de los bacteriófagos oscila entre 20 y 200 nm aproximadamente.

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El número de proteínas de diferentes clases y la cantidad de cada una de ellas en la partícula del fago variará dependiendo de la clase de fago que se trate. el microbiólogo canadiense Félix d'Herelle anunció el 3 de septiembre de 1917 su descubrimiento de "un invisible antagonista microbiano del bacilo de la disentería". mientras que los ma s ¥ ¤ £ 2 . mientras que los fagos más complejos. Los ácidos nucléicos de los fagos a menudo contienen bases raras o modificadas. Dependiendo del fago. El tama o de los ácidos nucleícos varía dependiendo del fago. Independientemente. al cual llamó bacteriófago. el ácido nucléico puede ser ya DNA o ya RNA pero no ambos y puede existir en varias formas. Los fagos más simples solo tienen suficiente ácido nucleico para codificar un promedio de 3 5 productos génicos.Vir í í i HISTORIA En 1913 el ba teriólogo británico Frederick Twort descubrió un agente bacteriolítico que infectaba y mataba a las bacterias. Estas bases modificadas protegen a los ácidos nucleícos del fago de las endonucleasas que cortan los ácidos nucléicos del huésped durante la infección. ¢ ¡   Frederick Twort Félix d'Herelle COMPOSICIÓN Y ESTR CTURA DEL BACTERIÓFAGO 1) Composición: Aunque diferentes bacteriófagos pueden contener diferentes materiales todos ellos contienen ácido nucléico y proteína. El fago mas simple posee varias copias de solo una o dos diferentes proteínas. pueden codificar para más de 100 productos génicos. pero no fue capa de saber qué era exactamente dicho agente.

¦ 3 ¦ que pueden contener lo ¦ Lo ácido nucleíco ¦ ¦ . La función de las proteínas durante la infección es proteger al ácido nucleico de las nucleasas de su medio ambiente. bacteriófago pero solo contiene uno de ellos.Virología Clínica complejos podrían poseer muchos tipos de proteínas diferentes.

Las características básicas estructurales de los bacteriófagos se ilustran en la Figura 1.Vir í í i § 2) Estructura: Los bacteriófagos vienen en muchas diferentes formas y tama os. Figura 1 Estructura del bacterió ago T4 a. La cabeza o cápside está compuesta de muchas copias de una o más proteínas diferentes. Cabeza o Cápside: Los fagos clásicos poseen una estructura a manera de cabeza y pueden variar de tamaño y forma. © ¨ Cabeza 4 . La mayoría de los fagos están entre un rango de 24-200 nm de longitud. Tamaño: T4 está entre los fagos más grandes. La cabeza actúa como una cubierta protectora para el ácido nucleico. Al interior de la cabeza se encuentra el ácido nucleico. Otros fagos son más pequeños. Algunos son icosaédricos (20 caras) otros son filamentosos. la cual muestra al fago denominado T4. b. tiene aproximadamente 200 nm de largo y 80 100 nm de ancho.

No poseen metabolismo ni organización celular. Al extremo de la cola los fagos más complejos como T4 presentan una placa en la base y una o mas fibras unidas a ella. Representación esquemática de las estructuras de algunos bacteriófagos. Cola: Muchos. En los fagos más complejos como T4. III. No todos los fagos tienen placas de base ni fibras de la cola. INFECCIÓN DE LAS CÉLULAS HUÉSPED La única función que poseen los virus y que comparten con el resto de los seres vivos es la de reproducirse o generar copias de sí mismos.Virología Clínica c. por lo que se les sitúa en el límite entre lo vivo y lo inerte. La cola es un tubo hueco a través del cual el ácido nucleico pasa durante la infección. aunque no todos los fagos muestran una cola unida a la cabeza del fago. necesitando utilizar la materia. la cola se rodea de una cortina contráctil durante la infección de la bacteria. la energía y la maquinaria de la célula huésped. En tales casos existen otras estructuras que se ven asociadas en la unión de partícula del fago a la bacteria. El tamaño de la cola puede variar y algunos fagos ni siquiera la tienen. por lo que se les considera parásitos obligados. Esta placa de base y las fibras de la cola están involucradas en la unión de los fagos a la célula bacteriana. 5 .

Los fagos que carecen placas de la base tienen otras formas de unirse estrechamente a la célula bacteriana. Ciertos enzimas situados en la placa basal debilitan la pared de la bacteria. Adsorción ± El primer paso en el proceso de infección es la adsorción del fago a la célula bacteriana.. ej.Virología Clínica Secuencia de la infección de las células huésped: A. Hay algunas excepciones para esta regla. dependen de encuentros al azar con los receptores adecuados en solución para poder infectar una bacteria. ácidos teicoicos. Contracción de la cortina ± La unión irreversible del fago a la bacteria da como resultado la contracción de la cortina (para aquellos fagos que la presentan) y la fibra hueca que es la cola se ve empujada a través de la envoltura bacteriana. La cola del fago se fija a los receptores específicos de la pared bacteriana (intervienen en esa fijación los filamentos caudales y la placa basal) otros se fijan con los spikes (proteínas que tienen en su envoltura). Las fibras de la cola se unen a receptores específicos en la célula bacteriana y la especificidad del huésped del fago (p. cada fago solo podrá infectar ciertas bacterias según sus receptores. D. en los cuales la mayoría de las partículas virales normalmente se 6 . La unión irreversible del fago con la bacteria está mediada por uno o más componentes de la placa de la base. B. la bacteria que es capaz de infectar) se determina usualmente por el tipo de fibras de la cola que un fago posee. Esto es diferente de los virus animales. Por ello. Los fagos que no tienen cortinas contráctiles usan otros mecanismos para introducir la partícula del fago al interior de la envoltura bacteriana. Estos receptores están en la bacteria para otros propósitos y los fagos han evolucionado de manera que son capaces de usar estos receptores para llevar a cabo la infección. LPS. Los remanentes del fago permanecen en el exterior de la bacteria. Algunos fagos tienen enzimas digestivas que degradan varios componentes de la envoltura bacteriana. Los ejemplos incluyen proteínas sobre la superficie externa de la bacteria. C. Este paso es reversible está mediado por las fibras de la cola o por alguna estructura análoga en aquellos fagos que carecen de las mismas. La naturaleza del receptor bacteriano varía en las diferentes bacterias. Usualmente el único componente del fago que realmente penetra la célula es el ácido nucleico. pili y lipoproteínas. Inyección del Ácido Nucleico ± Cuando el fago ha logrado atravesar la envoltura bacteriana el ácido nucleico que se encuentra en la cabeza pasa a través de la cola hueca y penetra la célula bacteriana. Unión irreversible ± La unión del fago con la bacteria vía las fibras de la cola es de naturaleza débil y es reversible. Puesto que los fagos no son móviles.

replicándose de forma independiente a la replicación bacteriana. IV. Definición: Los fagos líticos o virulentos son fagos que solo pueden multiplicarse en bacterias y matan a la célula debido a la lisis. En este momento. Aparentemente no le pasa nada a la bacteria pero en realidad el virus interrumpe el metabolismo bacteriano. al término del ciclo de vida. 2. de forma que los nuevos virus quedan libres para llevar a cabo una nueva infección. las células hospedadoras del fago son lisadas (destruidas) tras la replicación y encapsulación de las partículas virales. etc. que pueden llegar a ser minutos.Virología Clínica introducen en la célula. Ciclo de replicación viral a. aumento de agentes mutagénicos. En cualquier caso. Fagos Líticos o Virulentos 1. Por el contrario. El fago queda así en estado de latencia hasta que las condiciones del medio se vean deterioradas: disminución de nutrientes. El genoma del fago puede integrase en el ADN cromosómico de la bacteria hospedadora. A. el genoma del fago se transmitirá a toda la progenie de la bacteria originalmente infectada. CICLO DE MULTIPLICACIÓN DEL FAGO Los fagos pueden generar el ciclo lítico o el ciclo lisogénico. en el ciclo lisogénico no se produce la lisis inmediata de la célula. Periodo de eclipse ±Durante la fase de eclipse las partículas de fago no infeccioso se pueden encontrar ya sea en el interior o en el exterior de la célula bacteriana. En un corto espacio de tiempo. los fagos endógenos o profagos se activan y dan lugar al ciclo lítico que termina con la lisis celular. Esta diferencia se debe probablemente a la incapacidad de la bacteria para envolver a la bacteria a fin de endocitar materiales. replicándose a la vez que lo hace la bacteria o bien puede mantenerse estable en forma de plásmido. En el ciclo lítico. el ADN bacteriano es degradado y los genes virales se encargan de 7 . aunque muy pocos son capaces de llevar a cabo ambos.

entonces los mRNAs y las proteínas tardías se fabrican. 8 . Todo el proceso puede durar unos 15 minutos. Lisis y Fase de liberación ± Después de un tiempo la bacteria empieza a sufrir lisis y los fagos intracelulares se liberan al medio. El número de partículas liberadas por bacteria infectada puede ser tan alto como 1000. c.Virología Clínica reconducir el metabolismo utilizando los componentes de la bacteria para realizar copia de los capsómeros y síntesis del ácido nucleico. Los mRNAs tempranos codifican para las proteínas tempranas. El ácido nucleico del fago se apodera de la maquinaria biosintética del huésped y se elaboran los mRNAs y las proteínas fago específicas. las cuales se necesitan para la síntesis del DNA de fagos y para apagar la biosíntesis del DNA. una enzima capaz de romper las moléculas de peptidoglicano de la pared bacteriana. RNA y proteínas del huésped. tal como se observa en las infecciones por virus animales. La proteína que lleva a cabo la lisis es la endolisina. Las proteínas tardías son las proteínas estructurales que conforman al fago. b. las proteínas helper se encargarán de ensamblar las nuevas partículas virales. Posteriormente. Existe una expresión ordenada de la síntesis macromolecular dirigida por el fago. En algunos casos las proteínas tempranas literalmente degradan el cromosoma del huésped. se ensamblan y las partículas infecciosas se acumulan dentro de la célula. Luego de que el DNA del fago se sintetiza. Fase de acumulación intracelular ± En esta fase el ácido nucleico y las proteínas estructurales de que están hechos. también son las proteínas necesarias para causar la lisis de la célula bacteriana.

Hay fagos atemperados o atenuados que se integran en el ADN bacteriano por entrecruzamiento de dos regiones idénticas del fago y de la bacteria. Ensayos para determinar fagos líticos. Estos fagos integrados se denominan profagos. hasta que un estímulo induzca la separación del profago que iniciará un ciclo lítico típico. a. En este estado quiescente la mayoría de los genes del fago no se transcriben. y se replican pasivamente con el ADN de la bacteria. Otros virus que no son bacteriófagos pueden también tener ciclos lisogénicos. (Cada placa se origina de un solo fago infeccioso). Una placa se define como el área clara que resulta de la lisis de bacterias. A la partícula infecciosa que da origen a la placa se le llama una unidad formadora de placa (ufp o en inglés pfu). El ADN del profago puede permanecer en forma latente durante varias generaciones de la bacteria. el genoma del fago existe en un estado reprimido.Virología Clínica 3. Fago lisogénico o Temperado No siempre se produce la lisis inmediata de la célula. Las bacterias capaces de establecer esa relación con los fagos atenuados se denominan lisogénicas. Definición ± Los fagos lisogénicos o temperados son aquellos que bien pueden multiplicarse via el ciclo lítico o entran en un estado quiescente en la célula. del mismo modo a como ocurre en los plásmidos. 1. B. Ensayo en placa ± Los fagos líticos se cuentan mediante ensayos de formación de placas. Al DNA del fago en este estado reprimido se le conoce como profago porque no es un fago pero posee el potencial para producir fagos. En la mayoría de los casos el DNA de fago realmente se integra en el cromosoma del huésped y se replica junto con el 9 . Mientras la célula posea el ADN profago será inmune frente a infecciones de este mismo virus.

2. El resultado es un genoma del fago pero reprimido estable el cual está integrado dentro del cromosoma de la célula huésped. exposición al la luz UV o radiación ionizante. Esto a su vez conduce a la expresión de los genes del fago. así que la represión es muy específica (inmunidad a la superinfección con el mismo fago). b. Las condiciones adversas que conducen a la producción de proteasas (proteína recA) la cual destruye a la proteína llamada represor. la llamaremos el represor es una proteína que presenta afinidad y se une con un sitio particular en el DNA del fago que llamaremos el operador y apaga la transcripción de la mayoría de los genes del fago. exposición a químicos mutagénicos. Recombinación Sitio-específico ± Un evento de recombinación catalizado por una enzima codificada por el fago. Este proceso se le llama inducción.Virología Clínica cromosoma del huésped y se transmite a las células hijas. llamado escisión y al proceso de multiplicación lítica. Eventos que conducen a la terminación de la Lisogenia En cualquier momento en que la bacteria lisogénica quede expuesta a condiciones adversas. el estado lisogénico puede ser terminado. c. Eventos que conducen a la lisogenia ± El fago prototipo: Lambda a. Circularización del cromosoma del fago. ocurre entre un sitio particular en el DNA del fago circularizado y un sitio particular en el cromosoma del huésped. Las condiciones que favorecen la terminación del estado lisogénico incluyen: desecación. 3. al proceso inverso al proceso de integración. La célula que alberga un profago no se ve negativamente afectada por la presencia del profago y el estado lisogénico puede persistir indefinidamente. El resultado es la integración del DNA del fago en el cromosoma del huésped. 10 . A la célula que alberga un profago se le conoce como lisógena. los extremos libres del círculo se pueden ligar para formar un círculo covalentemente cerrado. Cada fago temperado so lamente reprimirá la expresión de su propio DNA y no la de otro fago. Estas cadenas sencillas de los extremos son complementarias (extemos cohesivos) de manera que pueden aparearse y producir una molécula circular.El DNA de Lambda una molécula lineal de doble cadena con pequeñas regiones de cadena sencilla en los extremos 5¶. Represión del genoma del fago ± Una proteína codificada por el fago. En la célula. etc. EXCEPTO la del gene que da lugar al represor.

Se ha demostrado que los fagos lisogénicos llevan genes que pueden modificar al antígeno O de Salmonella. Estos genes pueden cambiar las propiedades de la célula bacteriana. ya que eliminar bacterias es lo que los fagos hacen mejor. como de otra proteína del fago llamada cro. Ci l Lí i   i    La deci i de lambda de ent ar en el cicl lítico o en el ciclo li ogénico cuando este penetra en la célula inicialmente est determinada por la concentraci n dentro de la célula.   5. el cual es uno de los antígenos principales ante los cuales está dirigida la respuesta inmune. Importancia de la Li ogenia a. apaga la síntesis del represor y por lo tanto previene el establecimiento de la lisogenia. b. La proteína cro del fago. Las condiciones ambientales que favorecen la producci n de cro conducirán al ciclo lítico mientras que aquellas que favorecen la producci n del represor favorecerán la lisogenia. Esto puede tener importancia clínica. en la República de Georgia. Solo aquellas cepas que se han convertido por lisogenia son pat genos.Vir í í i Ci l Li   4. Hay una biblioteca de búsqueda de fagos específicos y sus usos terapéuticos en el Instituto Tbilisi. El desarrollo de cepas bacterianas resistentes a múltiples drogas ha conducido a       11 . tanto del represor. Este proceso se le llama conversi n lisogénica o conversi n por fago. Terapia fágica Los fagos cumplen un papel de gran importancia en la biología molecular al ser utilizados como vectores de clonaci n para insertar ADN dentro de las bacterias y obtener como resultado bibliotecas genómicas. por ej. Conversi n Lisogénica ± Cuando la célula está lisogeni ada ocasionalmente hay genes extra que el fago lleva y que se empiezan a expresar en la célula. La terapia fágica ha sido utilizada desde la década de 1940 en la ex Unión Soviética como una alternativa a los antibióticos para tratar infecciones bacterianas. La producci n de toxina por Corynebacterium diphtheriae está mediada por un gen que es acarreado por un fago. Modelo de la transformaci n por virus animales ± La lisogenia es un sistema modelo para la transformaci n que llevan a cabo los virus de células animales.

Lisógeno Fago T4 (169 a 170 kpb.Fagémido Fago MS2 (23-25 nm de tamaño) Fago G4 Fago P1 Fago P2 Fago N4 Fago 6 Fago P22 Fago 29 12 # %# # & $ " ! . de bacteriófagos en ciertas carnes con el fin de acabar con la bacteria Listeri Bacteriófagos modelo A continuación se presenta una lista de los bacteriófagos más ampliamente estudiados: y y y y y y y y y y y y y Fago . la FDA (Food and Drug Administration) de Estados Unidos aprobó el uso t genes. 200 nm de tamaño) Fago T7 Fago R17 Fago M13 . Otros usos En agosto de 2006.Virología Clínica investigadores en medicina a reconsiderar a los fagos como una alternativa al uso de antibióticos.

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