Virología Clínica

BACTERIÓFAGOS
INTRODUCCION Los bacteriófagos son ubicuos y pueden ser encontrados en diversas poblaciones de bacterias, tanto en el suelo como en la flora intestinal de los animales. Uno de los ambientes más poblados por bacteriófagos y otros virus es el agua de mar, donde se estima que puede haber en torno a 109 partículas virales por mililitro, pudiendo estar infectadas por bacteriófagos el 70% de las bacterias marinas. Existen muchas similaridades entre los bacteriófagos y los virus de células animales. Así, los bacteriófagos pueden ser visualizados como sistemas modelo de los virus de células animales. Además es necesario el conocimiento previo del ciclo de vida del bacteriófago para entender uno de los mecanismos por los cuale s los genes bacterianos pueden transferirse de una bacteria a otra. Alguna vez se pensó que el uso de los bacteriófagos podría ser una vía efectiva para tratar las infecciones bacterianas, pero pronto se hizo aparente que los bacteriófagos son removidos rápidamente del cuerpo así que resultaron de poco valor clínico. Sin embargo, los bacteriófagos son útiles en el diagnóstico de laboratorio para la identificación de bacterias patógenas (fago-tipificación). Aunque la fago-tipificación no se usa en el laboratorio clínico de rutina, sí se usa en los laboratorios de referencia con propósitos epidemiológicos. Recientemente, se ha desarrollado un nuevo interés en el posible uso de los bacteriófagos para el tratamiento de infecciones bacterianas y en la profilaxis. De manera que la decisión de si los bacteriófagos serán usados en la medicina clínica o no, aún está por ser determinada. Definición: Los bacteriófagos (fagos) son parásitos intracelulares obligados que se multiplican al interior de las bacterias, haciendo uso de algunas o todas sus maquinarias biosintéticas (p. ej., los virus que infectan bacterias). Los bacteriófagos (-del griego (phageton), alimento/ingestión) son virus que infectan exclusivamente a bacterias. Al igual que los virus que infectan células eucariotas (eu - verdadero, carion ² núcleo), los bacteriófagos están constituidos por una cubierta proteica o cápside en cuyo interior está contenido su material genético, que puede ser DNA (Ácido Desoxirribonucleico) o RNA (Ácido Ribonucleico) de simple o doble cadena, circular o lineal (en el 95% de los fagos conocidos es DNA de doble cadena), de 5.000 a 500.000 pares de bases. El tamaño de los bacteriófagos oscila entre 20 y 200 nm aproximadamente.

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mientras que los fagos más complejos. mientras que los ma s ¥ ¤ £ 2 . el ácido nucléico puede ser ya DNA o ya RNA pero no ambos y puede existir en varias formas. Los fagos más simples solo tienen suficiente ácido nucleico para codificar un promedio de 3 5 productos génicos. al cual llamó bacteriófago. El número de proteínas de diferentes clases y la cantidad de cada una de ellas en la partícula del fago variará dependiendo de la clase de fago que se trate. El fago mas simple posee varias copias de solo una o dos diferentes proteínas. el microbiólogo canadiense Félix d'Herelle anunció el 3 de septiembre de 1917 su descubrimiento de "un invisible antagonista microbiano del bacilo de la disentería". Independientemente. Dependiendo del fago. Los ácidos nucléicos de los fagos a menudo contienen bases raras o modificadas. El tama o de los ácidos nucleícos varía dependiendo del fago. pueden codificar para más de 100 productos génicos. ¢ ¡   Frederick Twort Félix d'Herelle COMPOSICIÓN Y ESTR CTURA DEL BACTERIÓFAGO 1) Composición: Aunque diferentes bacteriófagos pueden contener diferentes materiales todos ellos contienen ácido nucléico y proteína. pero no fue capa de saber qué era exactamente dicho agente. Estas bases modificadas protegen a los ácidos nucleícos del fago de las endonucleasas que cortan los ácidos nucléicos del huésped durante la infección.Vir í í i HISTORIA En 1913 el ba teriólogo británico Frederick Twort descubrió un agente bacteriolítico que infectaba y mataba a las bacterias.

bacteriófago pero solo contiene uno de ellos.Virología Clínica complejos podrían poseer muchos tipos de proteínas diferentes. ¦ 3 ¦ que pueden contener lo ¦ Lo ácido nucleíco ¦ ¦ . La función de las proteínas durante la infección es proteger al ácido nucleico de las nucleasas de su medio ambiente.

La cabeza actúa como una cubierta protectora para el ácido nucleico. © ¨ Cabeza 4 . tiene aproximadamente 200 nm de largo y 80 100 nm de ancho. Al interior de la cabeza se encuentra el ácido nucleico. Las características básicas estructurales de los bacteriófagos se ilustran en la Figura 1. La cabeza o cápside está compuesta de muchas copias de una o más proteínas diferentes. Cabeza o Cápside: Los fagos clásicos poseen una estructura a manera de cabeza y pueden variar de tamaño y forma.Vir í í i § 2) Estructura: Los bacteriófagos vienen en muchas diferentes formas y tama os. Tamaño: T4 está entre los fagos más grandes. Figura 1 Estructura del bacterió ago T4 a. la cual muestra al fago denominado T4. Otros fagos son más pequeños. Algunos son icosaédricos (20 caras) otros son filamentosos. La mayoría de los fagos están entre un rango de 24-200 nm de longitud. b.

necesitando utilizar la materia. Al extremo de la cola los fagos más complejos como T4 presentan una placa en la base y una o mas fibras unidas a ella. III. 5 . Esta placa de base y las fibras de la cola están involucradas en la unión de los fagos a la célula bacteriana. El tamaño de la cola puede variar y algunos fagos ni siquiera la tienen. La cola es un tubo hueco a través del cual el ácido nucleico pasa durante la infección. por lo que se les considera parásitos obligados. Representación esquemática de las estructuras de algunos bacteriófagos. En los fagos más complejos como T4.Virología Clínica c. No poseen metabolismo ni organización celular. Cola: Muchos. la energía y la maquinaria de la célula huésped. En tales casos existen otras estructuras que se ven asociadas en la unión de partícula del fago a la bacteria. la cola se rodea de una cortina contráctil durante la infección de la bacteria. INFECCIÓN DE LAS CÉLULAS HUÉSPED La única función que poseen los virus y que comparten con el resto de los seres vivos es la de reproducirse o generar copias de sí mismos. aunque no todos los fagos muestran una cola unida a la cabeza del fago. No todos los fagos tienen placas de base ni fibras de la cola. por lo que se les sitúa en el límite entre lo vivo y lo inerte.

Inyección del Ácido Nucleico ± Cuando el fago ha logrado atravesar la envoltura bacteriana el ácido nucleico que se encuentra en la cabeza pasa a través de la cola hueca y penetra la célula bacteriana. Los remanentes del fago permanecen en el exterior de la bacteria. Usualmente el único componente del fago que realmente penetra la célula es el ácido nucleico. Ciertos enzimas situados en la placa basal debilitan la pared de la bacteria. D. en los cuales la mayoría de las partículas virales normalmente se 6 . Puesto que los fagos no son móviles. La naturaleza del receptor bacteriano varía en las diferentes bacterias. Los fagos que carecen placas de la base tienen otras formas de unirse estrechamente a la célula bacteriana. Los ejemplos incluyen proteínas sobre la superficie externa de la bacteria. Esto es diferente de los virus animales. la bacteria que es capaz de infectar) se determina usualmente por el tipo de fibras de la cola que un fago posee. B. La cola del fago se fija a los receptores específicos de la pared bacteriana (intervienen en esa fijación los filamentos caudales y la placa basal) otros se fijan con los spikes (proteínas que tienen en su envoltura). Este paso es reversible está mediado por las fibras de la cola o por alguna estructura análoga en aquellos fagos que carecen de las mismas. Unión irreversible ± La unión del fago con la bacteria vía las fibras de la cola es de naturaleza débil y es reversible. Por ello. Estos receptores están en la bacteria para otros propósitos y los fagos han evolucionado de manera que son capaces de usar estos receptores para llevar a cabo la infección. Las fibras de la cola se unen a receptores específicos en la célula bacteriana y la especificidad del huésped del fago (p. cada fago solo podrá infectar ciertas bacterias según sus receptores.Virología Clínica Secuencia de la infección de las células huésped: A. Los fagos que no tienen cortinas contráctiles usan otros mecanismos para introducir la partícula del fago al interior de la envoltura bacteriana. pili y lipoproteínas. Algunos fagos tienen enzimas digestivas que degradan varios componentes de la envoltura bacteriana. LPS. Hay algunas excepciones para esta regla. C. ej.. La unión irreversible del fago con la bacteria está mediada por uno o más componentes de la placa de la base. dependen de encuentros al azar con los receptores adecuados en solución para poder infectar una bacteria. Adsorción ± El primer paso en el proceso de infección es la adsorción del fago a la célula bacteriana. Contracción de la cortina ± La unión irreversible del fago a la bacteria da como resultado la contracción de la cortina (para aquellos fagos que la presentan) y la fibra hueca que es la cola se ve empujada a través de la envoltura bacteriana. ácidos teicoicos.

El genoma del fago puede integrase en el ADN cromosómico de la bacteria hospedadora. replicándose a la vez que lo hace la bacteria o bien puede mantenerse estable en forma de plásmido. Fagos Líticos o Virulentos 1. A. 2. etc. el genoma del fago se transmitirá a toda la progenie de la bacteria originalmente infectada. las células hospedadoras del fago son lisadas (destruidas) tras la replicación y encapsulación de las partículas virales. aunque muy pocos son capaces de llevar a cabo ambos. Ciclo de replicación viral a. Por el contrario. En este momento. CICLO DE MULTIPLICACIÓN DEL FAGO Los fagos pueden generar el ciclo lítico o el ciclo lisogénico. En el ciclo lítico. El fago queda así en estado de latencia hasta que las condiciones del medio se vean deterioradas: disminución de nutrientes. IV. aumento de agentes mutagénicos. los fagos endógenos o profagos se activan y dan lugar al ciclo lítico que termina con la lisis celular. En un corto espacio de tiempo. replicándose de forma independiente a la replicación bacteriana. Definición: Los fagos líticos o virulentos son fagos que solo pueden multiplicarse en bacterias y matan a la célula debido a la lisis. Esta diferencia se debe probablemente a la incapacidad de la bacteria para envolver a la bacteria a fin de endocitar materiales. que pueden llegar a ser minutos. el ADN bacteriano es degradado y los genes virales se encargan de 7 . al término del ciclo de vida.Virología Clínica introducen en la célula. de forma que los nuevos virus quedan libres para llevar a cabo una nueva infección. En cualquier caso. en el ciclo lisogénico no se produce la lisis inmediata de la célula. Periodo de eclipse ±Durante la fase de eclipse las partículas de fago no infeccioso se pueden encontrar ya sea en el interior o en el exterior de la célula bacteriana. Aparentemente no le pasa nada a la bacteria pero en realidad el virus interrumpe el metabolismo bacteriano.

La proteína que lleva a cabo la lisis es la endolisina. Fase de acumulación intracelular ± En esta fase el ácido nucleico y las proteínas estructurales de que están hechos. las cuales se necesitan para la síntesis del DNA de fagos y para apagar la biosíntesis del DNA. Las proteínas tardías son las proteínas estructurales que conforman al fago. En algunos casos las proteínas tempranas literalmente degradan el cromosoma del huésped. Existe una expresión ordenada de la síntesis macromolecular dirigida por el fago. El ácido nucleico del fago se apodera de la maquinaria biosintética del huésped y se elaboran los mRNAs y las proteínas fago específicas. b. tal como se observa en las infecciones por virus animales. Los mRNAs tempranos codifican para las proteínas tempranas. Luego de que el DNA del fago se sintetiza. también son las proteínas necesarias para causar la lisis de la célula bacteriana. las proteínas helper se encargarán de ensamblar las nuevas partículas virales. entonces los mRNAs y las proteínas tardías se fabrican. c. El número de partículas liberadas por bacteria infectada puede ser tan alto como 1000. una enzima capaz de romper las moléculas de peptidoglicano de la pared bacteriana. Todo el proceso puede durar unos 15 minutos. 8 .Virología Clínica reconducir el metabolismo utilizando los componentes de la bacteria para realizar copia de los capsómeros y síntesis del ácido nucleico. Lisis y Fase de liberación ± Después de un tiempo la bacteria empieza a sufrir lisis y los fagos intracelulares se liberan al medio. se ensamblan y las partículas infecciosas se acumulan dentro de la célula. Posteriormente. RNA y proteínas del huésped.

El ADN del profago puede permanecer en forma latente durante varias generaciones de la bacteria. hasta que un estímulo induzca la separación del profago que iniciará un ciclo lítico típico. a. Al DNA del fago en este estado reprimido se le conoce como profago porque no es un fago pero posee el potencial para producir fagos. Ensayo en placa ± Los fagos líticos se cuentan mediante ensayos de formación de placas. A la partícula infecciosa que da origen a la placa se le llama una unidad formadora de placa (ufp o en inglés pfu). En este estado quiescente la mayoría de los genes del fago no se transcriben. B. Definición ± Los fagos lisogénicos o temperados son aquellos que bien pueden multiplicarse via el ciclo lítico o entran en un estado quiescente en la célula. Una placa se define como el área clara que resulta de la lisis de bacterias. (Cada placa se origina de un solo fago infeccioso). Hay fagos atemperados o atenuados que se integran en el ADN bacteriano por entrecruzamiento de dos regiones idénticas del fago y de la bacteria. el genoma del fago existe en un estado reprimido. y se replican pasivamente con el ADN de la bacteria. Estos fagos integrados se denominan profagos. del mismo modo a como ocurre en los plásmidos. Mientras la célula posea el ADN profago será inmune frente a infecciones de este mismo virus. Las bacterias capaces de establecer esa relación con los fagos atenuados se denominan lisogénicas.Virología Clínica 3. En la mayoría de los casos el DNA de fago realmente se integra en el cromosoma del huésped y se replica junto con el 9 . Otros virus que no son bacteriófagos pueden también tener ciclos lisogénicos. Ensayos para determinar fagos líticos. Fago lisogénico o Temperado No siempre se produce la lisis inmediata de la célula. 1.

Este proceso se le llama inducción. La célula que alberga un profago no se ve negativamente afectada por la presencia del profago y el estado lisogénico puede persistir indefinidamente. Eventos que conducen a la terminación de la Lisogenia En cualquier momento en que la bacteria lisogénica quede expuesta a condiciones adversas. llamado escisión y al proceso de multiplicación lítica. Las condiciones que favorecen la terminación del estado lisogénico incluyen: desecación. b. Estas cadenas sencillas de los extremos son complementarias (extemos cohesivos) de manera que pueden aparearse y producir una molécula circular. al proceso inverso al proceso de integración. Eventos que conducen a la lisogenia ± El fago prototipo: Lambda a. 3. El resultado es la integración del DNA del fago en el cromosoma del huésped. Recombinación Sitio-específico ± Un evento de recombinación catalizado por una enzima codificada por el fago. En la célula. exposición a químicos mutagénicos. A la célula que alberga un profago se le conoce como lisógena. 2. exposición al la luz UV o radiación ionizante. la llamaremos el represor es una proteína que presenta afinidad y se une con un sitio particular en el DNA del fago que llamaremos el operador y apaga la transcripción de la mayoría de los genes del fago. etc. Circularización del cromosoma del fago. los extremos libres del círculo se pueden ligar para formar un círculo covalentemente cerrado. Represión del genoma del fago ± Una proteína codificada por el fago. 10 . así que la represión es muy específica (inmunidad a la superinfección con el mismo fago). Esto a su vez conduce a la expresión de los genes del fago.El DNA de Lambda una molécula lineal de doble cadena con pequeñas regiones de cadena sencilla en los extremos 5¶. Cada fago temperado so lamente reprimirá la expresión de su propio DNA y no la de otro fago.Virología Clínica cromosoma del huésped y se transmite a las células hijas. ocurre entre un sitio particular en el DNA del fago circularizado y un sitio particular en el cromosoma del huésped. c. Las condiciones adversas que conducen a la producción de proteasas (proteína recA) la cual destruye a la proteína llamada represor. EXCEPTO la del gene que da lugar al represor. El resultado es un genoma del fago pero reprimido estable el cual está integrado dentro del cromosoma de la célula huésped. el estado lisogénico puede ser terminado.

Estos genes pueden cambiar las propiedades de la célula bacteriana. tanto del represor. por ej. Modelo de la transformaci n por virus animales ± La lisogenia es un sistema modelo para la transformaci n que llevan a cabo los virus de células animales. el cual es uno de los antígenos principales ante los cuales está dirigida la respuesta inmune. Solo aquellas cepas que se han convertido por lisogenia son pat genos. La proteína cro del fago. Ci l Lí i   i    La deci i de lambda de ent ar en el cicl lítico o en el ciclo li ogénico cuando este penetra en la célula inicialmente est determinada por la concentraci n dentro de la célula. b. La producci n de toxina por Corynebacterium diphtheriae está mediada por un gen que es acarreado por un fago. Esto puede tener importancia clínica.Vir í í i Ci l Li   4. como de otra proteína del fago llamada cro. apaga la síntesis del represor y por lo tanto previene el establecimiento de la lisogenia.   5. en la República de Georgia. Conversi n Lisogénica ± Cuando la célula está lisogeni ada ocasionalmente hay genes extra que el fago lleva y que se empiezan a expresar en la célula. La terapia fágica ha sido utilizada desde la década de 1940 en la ex Unión Soviética como una alternativa a los antibióticos para tratar infecciones bacterianas. Las condiciones ambientales que favorecen la producci n de cro conducirán al ciclo lítico mientras que aquellas que favorecen la producci n del represor favorecerán la lisogenia. Hay una biblioteca de búsqueda de fagos específicos y sus usos terapéuticos en el Instituto Tbilisi. Importancia de la Li ogenia a. Se ha demostrado que los fagos lisogénicos llevan genes que pueden modificar al antígeno O de Salmonella. El desarrollo de cepas bacterianas resistentes a múltiples drogas ha conducido a       11 . Terapia fágica Los fagos cumplen un papel de gran importancia en la biología molecular al ser utilizados como vectores de clonaci n para insertar ADN dentro de las bacterias y obtener como resultado bibliotecas genómicas. Este proceso se le llama conversi n lisogénica o conversi n por fago. ya que eliminar bacterias es lo que los fagos hacen mejor.

200 nm de tamaño) Fago T7 Fago R17 Fago M13 . Otros usos En agosto de 2006. la FDA (Food and Drug Administration) de Estados Unidos aprobó el uso t genes.Lisógeno Fago T4 (169 a 170 kpb. de bacteriófagos en ciertas carnes con el fin de acabar con la bacteria Listeri Bacteriófagos modelo A continuación se presenta una lista de los bacteriófagos más ampliamente estudiados: y y y y y y y y y y y y y Fago .Fagémido Fago MS2 (23-25 nm de tamaño) Fago G4 Fago P1 Fago P2 Fago N4 Fago 6 Fago P22 Fago 29 12 # %# # & $ " ! .Virología Clínica investigadores en medicina a reconsiderar a los fagos como una alternativa al uso de antibióticos.