WESTERN BLOT

(inmunoelectrotransferencia)
Virología Diagnóstica
Jiménez Mendoza Víctor Hugo
Sistema de identificación, separación y
semicuantifiacación de moléculas basado en la
aplicación de tres fundamentos.
– 1. Separación de moléculas por electroforesis
– 2. Transferencia de las moléculas separadas hacia
un papel absorbente
– 3. Revelado mediante un ensayo inmunoenzimático
(dot-ELISA)
Detección altamente específica.
Edwin Southern desarrolló la técnica de identificación
de ADN (Southern blot).
Después se de desarrolló una técnica para la detección
de ARN (Northern blotting).
W. Neal Burnette bautizó la técnica para proteínas
(Western blot). Fue descrita desde 1979 por J.
Gordon.
1° ELECTROFORESIS
Transferencia
Para que las proteínas estén accesibles a la
detección del anticuerpo
Se transfieren a membranas de nitrocelulosa o de
PVDF (polivinildienofloruro)
Se somete a un campo eléctrico para transferir.
Las proteínas quedan sobre la superficie de las
membranas.
Pude ser transferencia húmeda o semiseca
3. Detección (Blotting)

Se identifica específicamente la proteína que se

busca.
Se utiliza un anticuerpo monoclonal u otra
molécula a fin conjugada con enzima
Se observa la formación de manchas o bandas
Se pude semicuantificar por análisis de bandas
3. Detección (blotting)

1) Se bloquea la superficie de la tira

– BSA 1%
– Tween 20
– Leche descremada 5%
2) Se agrega el conjugado o el primer anticuerpo.
3) Se adiciona el sustrato de la enzima
– 4,2-Cloronaftol (para HRP)
3. Detección (blotting)

Otras formas de revelado

– Detección radiactiva
– Por fluorescencia
– Por quimioluminiscencia
Bibliografía

• Colls M. Julio. “Técnicas de Dx en Virología. Ed. 4ta

Editorial Díaz de Santos. Madrid España, pp. 278-293
• ENZYME-ASSISTED IMMUNOELECTROBLOTTING
(IEB OR WESTERN BLOTTING) E.P. Rybicki and Maud
Purves. Department of Microbiology University of Cape
Town, 1996