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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación. Hay que remarcar. bacterias rojas no S) 3. El oxígeno es. cianobacterias. S. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas..) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2.. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. inorg. Fe2+.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. Cuando en los lagares. simplemente. al igual que la fermentación. se clasifican según sea: a. 1. H2S. es un proceso de oxidación. Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración. degradando la glucosa por vía respiratoria. basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos. el aire no entra en contacto con la levadura. bacterias rojas del S) 2. Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno.) Órgano (comp. que el proceso respiratorio. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) . Los tipos nutricionales en este reino. NH3. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol. CO. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación.6 . Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias. hongos. sino pérdida de hidrógeno. org) En general. b.

No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos. H2. sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S. Son bacterias unicelulares acuáticas . naranja o verde. La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1. Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. de color rojo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. Bacterias rojas y verdes. materia orgánica).6 . Cianobacterias. . en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). 2. Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica).

-----------> NO3S0.a. pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica. H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica. materia orgánica (según grupos).) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg. Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono. de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul. S (según grupos). N2O como aceptor de electrones (R.a NO3NH3 -----. S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar.anaerobia). Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m.a. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo. Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha. a través de la respiración con O2 y sólo escasos m.a. S2-.6 . verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides. La Nitrobacterias (Nitrosomas. NO2-. pueden utilizar NO3-. El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil.) . En parte en formas de vida libre.y éste a su vez de NO2. son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2. Nitrobacter).-----> NO2NO2.o. en parte en simbiosis con plantas superiores. H2. N/(Ha. Fuente de carbono: CO2. por lo general. Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas.) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha.

1 la enzima -galactosidasa permite a estos m. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. Láctica. (Corynebacterium) 3. se producen también ptomaínas (muy tóxicas). leche ácida. Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus. queso. CO32Fe3+ -------> N2. a. II. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono. 2. N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4. 6.butílica (típica de anaerobios) 4.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. sidra. aparecen ademas del ácido láctico. el nidol y el escatol. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica. como el sulfuro de hidrógeno.6 . o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). metano y otros de olor fétido. Fermentación propiónica. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos). El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera. Vía lenta. Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos. NO3sulfato... vino. Fermentación heteroláctica. I. hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky. Ácido mixta..4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. Fermentación butírica ... hidrógeno. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico. la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos.o. azufre CO2. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos. Butanodiólica 1. ) b. dióxido de carbono. cerveza.

las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico.o. será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno. .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas). proteínas y lípidos.6 . para poder permanecer en contacto con el aire. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino. en sus respectivas unidades de construcción. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. 1. CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre). Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular.5. 6. que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas. La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético. Los m. al aplicarlo también.

Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa. Pseudomonas.(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 . Proteus vulgaris. La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa. La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores. 3. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2.6 .). KIA. La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. por la enzima descarboxilasa. Se pueden degradar de tres formas: I.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------.lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------. PRÓTIDOS.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---. uno de los componentes del tejido conjuntivo. este reacciona con el almidón. Alrededor de las colonias que poseen amilasa. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas. Aminoácidos. Disacáridos. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b.amilasa --------> Maltosa ---------.) en glucosa y galactosa.(TDA 4) II. B.. La glucosa es fermentada y acidifica el medio.proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2. Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N . sobre todo en la superficie del medio. 3 GLU. Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso. ornitina 6 .. Proteína derivada del colágeno. HIDRATOS DE CARBONO A. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón. Aminoácidos lisina 5. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol. a. La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo. 2 ONPG . dando color azul intenso... Mycoides. Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa). ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA. ARA3).En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. Proteínas completas: Gelatina.Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC . Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH). aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido. C. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2).

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III. .La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína. Derivados de aminoácidos: Urea 9 1. La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono. NH3. Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE .6) 11 OX . El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . Butanodiólica. VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a.6 . Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia. N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo). Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S . La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. antes de empezar con la galería. La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND .H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT. Prueba VP 6 ODC .Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3. Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11.La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R. Prueba de RM II.6) 2. metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S. se descarta el grupo de enterobacterias. Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos .---------> N2. Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a. reducción de nitratos13) b. en un papel de filtro. Fermentación (amplia variedad de tipos) I.-------> NO2. De esta forma si da un resultado positivo. Catalasa12.Degradación anaeróbica de aminoácidos.Detección de la enzima respiratoria citocromo c. Ácido mixta.

torunda algodón impregnada. 3. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) . DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1.4 % de agar). Incubar a 37 ºC durante 48 h. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. Sembrar en estría escocesa. 6.1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. d. una vez preparado. b. 4. al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma. 2. en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0.6 A. A causa de la capacidad de autooxidación que tiene. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz. Procedimiento 1.1 %.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. e. El reactivo. 5. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). pipeta de plástico. Fig. c. Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez. palillo de madera). Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino. para obtener colonias aisladas.6 . Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. Las bacterias productoras de oxidasa. dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre. no tiene color o es ligeramente rosado. 6. PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador.

2. 6. El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. que contienen oxígeno disuelto. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa.Fig. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. compuesto que se determina en el ensayo. Incubar 24 h. Añadir a 1 ml. Lectura de resultados. a 37 ºC 3. dejándolo caer por la pared interior del tubo. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. como el citoplasma de las células. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli. Procedimiento 1. 2. Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. 3. Si la reacción es positiva. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. En los ambientes acuosos. PRUEBA DEL INDOL Fundamento.1. Fig 6.5 % (medio especialmente rico en triptófano). PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. Para realizar esta prueba. C. Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). al añadir al medio el reactivo de Kovacks. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0.6 . . Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta. Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias.1 Procedimiento 1.

la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico. 6. Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente.Fig. Fermentación ácido-mixta. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a. Fermentación característica de los géneros Escherichia. produciéndose acetoína como intermediario.2 y 6. b. en segundo lugar. 6.6 . continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). Fermentación característica de los géneros Enterobacter. para.1 D-E. PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP).0). Proteus. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica. . Salmonella. Fundamento. Serratia y la mayoría de especies Erwinia. consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig. Yersinia. Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico. acético.3. láctico y succínico) y etanol. Shigella. Fermentación butilén-glicólica.

6 .2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig. 6. Fermentación ácido-mixta Fig.3 Fermentación butano-diólica . 6.

Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. de de caldo RMVP. pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1. como consecuencia. Procedimiento: 1.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM).5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . Añadir a 1 ml. 4. MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Añadir a 1 ml. Observar a las 2. más. 5. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h. 2. de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. 2. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. Incubar 48 h a 37 ºC 3. de de caldo RMVP. Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. 5. En caso de duda incubar 48 h.6 . 12 y 24 horas. más.3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2. Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. 3. 6. (facilita la difusión del O2 atmosférico). Incubar 48-72 h a 37 ºC. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+).

Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. La utilización efectiva de la Lactosa.6 . La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas. Salmonella y Proteus. se clasifican como NO fermentadores de lactosa. que fermentan sin producir gas. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. entre la glucosa y la galactosa). La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) . ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi.4. Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. unidos por el enlaces -1. La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas. y ausente de Shigella. también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. y generalmente. En una fermentación ácido-mixta simple.

Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias. Es un medio general rico en nutrientes. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. Color verde intenso (+). Además es un medio diferencial. 2. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo. Contiene citrato como única fuente de carbono. Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. AGAR CITRATO DE SIMMONS. liberando al medio los grupos amino (desaminación).6 . junto con la eliminación del citrato (ácido). que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). y cuando no existe. AGAR MC CONKEY. 4. Es también un medio diferencial. Algunas bacterias. En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina. E. Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. Resultados: Color inicial del medio (-). Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia.. Erwinia herbicola. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias. Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. si es parcial alfa-hemólisis. G. de verde a azul. porque contiene lactosa y un indicador de pH. utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3. AGAR SANGRE. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. se habla de hemólisis tipo gamma. Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. carotovara. H. sobre todo los estreptococos. debido a una destrucción parcial de los hematíes. Photobacterium phosphoreum B. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico). I. resultando un compuesto de coloración verde oscura. fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. al hacerlo. AGAR FENILALANINA. Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. Esperar hasta 5 min. Si la hemólisis que se produce es total . Aeromonas hydrophila. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes.. Incubar a 37 ºC 18-24 h. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. F. Procedimiento: 1. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. -hemólisis: Ausencia de halo claro. . Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia. se denomina betahemólisis.

b. fermenta la lactosa. Por el contrario. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo. este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico. Como consecuencia. citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. el medio permanecerá de color rojo. c. Como consecuencia. las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). e. Como resultado. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis.6 . Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. . generando ácidos que no serán neutralizados. al no haber cambio de pH.1 % y lactosa al 1 %). el género Pseudomonas. que. 6. produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas. como. AGAR KLIGLER (KIA). en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. a su vez. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. La información que podemos obtener es la siguiente: a. por ejemplo. La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. que se elimina y no modifica el pH. En este caso. tiosulfato sódico. además. los azúcares son respirados. degradándose completamente hasta CO2. d. Enzima hidrogenoliasa fórmica. f. el medio mantendrá su color rojo en la superficie. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). y. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. rotura o elevación del agar del fondo del tubo. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color.1).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. Si la bacteria.

(2) + + + + - .6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.

+ Enengrecimiento Formación de SH2 . No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA. sin producción de gas.6 .Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A. (2) Sólo en parte superior de la columna. . Formación de ALCALI. y a veces formando anillo a las 48 h.

4 y 24 h.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. dando un coágulo visible. Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. 3. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus. en su composición el único azúcar presente es el manitol. AGAR MANITOL SAL. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. PRUEBA DE LA COAGULASA. que transforma el fibrinógeno en fibrina. Procedimiento 1. Homogeneizar con asa Kolle. Fundamento. Staphylococcus aureus. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. En tubos de 5 ml colocar 0. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. 5. pero con un crecimiento muy pobre). Es una enzima semejante a la protrombina. L. 2. Además. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. Lecturas a la 1/2 . que no fermenta el manitol. 4. diferenciándolas así de las que no lo son.6 . Incubar 4 h a 37 ºC. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo.5 %) le proporciona su carácter selectivo. mientras que Staphylococcus hepidermidis. inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma. fermentador del manitol.5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. La alta concentración de sal (NaCl al 7.

Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E. 6. PRUEBAS IMVIC. Preparar un cultivo puro de E. Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer. Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC".6. a 37 ºC. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación.6 . (ver 6. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias.H) . 2. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas. mediante la -galactosidasa. coli y E.6.6. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas. 5.coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE. DIFERENCIACIÓN ENTRE E.7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6. 6. Realizar la batería de pruebas IMVIC. se utiliza la lactosa.D-E. I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1. 3. Incubar 48 h. 6. . Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. por lo que podrían falsear los resultados. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo. o lactosa y peptona. 4. Preparar dos placas de agar nutritivo.C. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas.

. A partir de cada tipo de colonia. 6. 7.8. Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) . Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 .Conkey si ha sido fermentada la lactosa. A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. Incubar a 37 ºC durante 24 h.del agar sangre y extenderla en el papel de filtro. Procedimiento 1. agar fenilalanina. Si la prueba es positiva (aparición de burbujas). AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO. 9. Incubar a 37 º C durante 48 h. sembrar en el medio agar manitol sal .coli) y un coco Gram positivo S. 2. 6. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. y en la placa de agar Mc. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons. Con la ayuda de la tabla nº 6-1. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram . Anotar los cambios de color en las distintas pruebas. Incubar a 37 º C durante 24 h.5 %. realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio.Conkey. 8. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo. Comprobar el aspecto de las colonias. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio. y 6-2 identificar las bacterias analizadas. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E. Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa). A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa. Las pruebas del citrato. Para ello. excepto el agar de Kliger. Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h. 5. 10. 4. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA).epidermidis).6 . Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. 3.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo.4.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6. caldo de triptona con NaCl al 0. Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul.. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada.

6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig.4 Tabla 6.1 . 6.

API 10 S.) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo. Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano. imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa. actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos. mezclar líquido de microtubos distintos. vire de amarillo a rojo. Procurar no producir burbujas. En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). salvo indicación. H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato. . CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano. El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + .. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III). El indicador virará de amarillo a rojo. que originan una caída del pH. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos. LDC: actividad lisina descarboxilasa. La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro.. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol.). Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH. El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea. Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina. SISTEMA API. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul. URE: actividad ureasa. . ODC: actividad ornitina descarboxilasa. TDA: actividad triptófano-desaminasa. Sin embargo. API 10 S. etc. obteniéndose un precipitado negro. produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. liberando ortonitrofenol de color amarillo. GLU (glucosa).6 . ni llenar los microtubos demasiado.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6.

URE .añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C. Una vez anotados los resultados obtenidos. Procedimiento: 1.8 % (NIT 1) y 2 gotas de N.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. 8. 6. D.6 . 4. 9. llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC . Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h.5 % (NIT 2). Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. NO2: nitrato reductasa.añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo. 5. 10. con aceite de parafina. H2S . Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c. TDA . Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7. Preparar una cubeta de incubación con tapa. Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. Después de inocular. IND . Anotar nº de identificación de la muestra 2. Humedecer la tapa con agua. ODC . para evitar evaporación. Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas. Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias.añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. . 3. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. OX . ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería.N dimetil-alfa-naftilamina. Eliminar el exceso de agua. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N. NO2 . y se emulsiona en agua estéril. el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa.

la oxidación en la cúpula. el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo). Esto sucede con organismos TDA positivos. (8) NO2 . Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa. un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno. (5) TDA . (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos.añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6. Antes de añadir los reactivos. (6) IND . Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos. Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2.5 %. (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %. observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc. Después de varios minutos.8 % y 2 gotas de N. Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis).2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo. .6 . La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs. Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0.

se busca en las tablas a que bacteria corresponde. Negativo: Se anota un 0. 4) B. Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. 1.3.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S.6 . 2. Con la secuencia de 4 números encontrados. Positivo: Se anota el valor correspondiente (1. Los resultados pueden ser: A. como test 11 y 12. se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2). Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 . Tabla 6. Codificación del germen.

224 3.205 7.305 3.064 2.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.764 2.406 4.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1.034 7.005 7.107 3.407 3.465 3.400 7.045 2.105 2.006 7.402 4.024 3.107 7.075 2./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.241 2.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) .314 7.614 6.665 2.714 2. agglomer.254 2. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.035 2.005 3.674 2.524 6.041 7.freund.115 7. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.307 3.125 7.406 3./Salmon.004 2.000 7.524 3.714 6.045 7. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.315 7.707 3.005 2.044 7.224 2. Enterobacter Enterobacter agglom.204 3.007 7.124 7. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.674 3.105 3.065 2.6 .502 3. Enterobacter agglom.500 1.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.402 3.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.040 7.514 6.715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob.675 2.001 7.221 2.405 7.422 4.707 2.114 2.407 7.055 2.401 7.305 7.507 3.674 6.604 6. agglomer.204 7.074 2. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.214 7.614 3.014 3.224 7. pneumon.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.707 6.245 2.104 2.724 2.704 6.704 3.225 7.105 7. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer.004 3.504 2.014 7.025 7.234 2.404 3.225 3.205 3.234 7. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb.007 3.

pneumon.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2.614 7.004 6.307 6.465 2.204 6.444 7.374 2.505 7.654 2.524 7.634 7.274 6.714 7. pneumon.725 98 Citrobacter freundii Kleb.402 2.624 2.402 6.105 6. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.365 2.214 6.305 2.445 2.405 2.545 2.634 2. Klebsiella / Serratia Kleb.475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E.426 6.507 7.441 7. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer.324 2.315 2.605 7. oxytec .205 6. freund.425 7.425 2.475 2. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.444 2.644 2.604 7.704 7.224 6.304 6.307 2.114 6.440 7.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.615 7.264 2.434 7.445 7.6 .225 6.261 6.065 6.445 6. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb. oxytec Enterob.422 6. Enterobacter agglom agglomer.265 2.104 6.305 6.406 6.624 7.314 2.422 2. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob. pneumon.464 2.415 7.414 6. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.005 6./Salmon.702 7.400 6. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob.404 2.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7.474 2.724 7.265 6.706 7.525 7.714 7.426 2.000 6.504 7.314 6.274 2.045 6. pneumon. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.

S.0002940 % 0.2535607 0. A modo de ejemplo. Edward tarda.0003948 0.03 0.enterocolítica = 0. Calculo probabilístico.oxytoca. 15 % P. neumoniae. 11 % % 100 = 99.28 0. K.rettgeri Y.0003948 % 0.enterocolítica Pruebas bioq.98 0.34 = 0. 0475. 6475.0 " muy buena 99. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas. E.81 % % % 0. NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas). 2075.rettgeri Y.10.93 % 0. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S.enterocolítica. rettgeri y Y.enterocolítica + 0. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas.9 " excelente .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6.0 Identificación aceptable 90. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas). 2055.05 = 0. En la tabla adjunta. P.94 0..rettgeri = % 100 = 0.6 .2542495 % 100 = 0.marcenses P.30 0..01 0.5 % se trata de la bacteria Y.2535607 Suma total = 0.vulgaris.25442495 0. Salmonella sp. Shigella sp. La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada. enterocolitica. 72 % Y.marcenses P.99 % % % + 0. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075. etc.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K. Ello nos indica un margen de fiabilidad. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico. Edward tarda y P.0 " buena 99.0002940 0.marcenses = 0.coli.10 = 0. Por ejemplo.

cloacae H. tarda Salmonella sp.6 . ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . freundii K. oxytoca E. marcescens S.4. mirabilis P. CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. Edward.Proteus vulgaris 4 . odorífera P. rettgeri Y. Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S .Klebsiella 5 . S. pneumoniae K. C. butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6. vulgaris Prov. coli Shigella sp. alvei S. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A. liquefac.

3. anabolismo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1. 4. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo. anaerobias obligadas b. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5. a 37 ºC. Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. aerotolerantes 2. Distingue entre los términos: metabolismo. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado. Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2. en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. anaerobias facultativas c. En que se distinguen las bacterias según sean: a. catabolismo. Se incuban los tubos 48 h. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes .6 .

A. ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10. Manitol sal 13.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 . Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15.Agar Citrato .Hemólisis 1 .Fermentación de proteínas E .Aerobios/Anaerobios facultativos D .Respiración I . ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12.Fermentación de lípidos G . A.Fermentación de lactosa C . Describe la función del ATP 8. A. El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14.Prueba de la ONPG 2 . ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA. 11.6 . Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c.Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . Solución Ringer g. A.Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 . ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7. Levine e.Desaminación/descarboxilación 5 .Fermentadoras tardías de lactosa H . ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9.Fermentación ácido-mixta B . Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a. TSA b.Coenzima Citocromo c 7. RMVP i.Fermentación butanodiólica F .Agar Sangre 10 . respecto a: a. Mc Conkey d.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . TSB h. Citrato f. Tipo de sustrato que ha fermentado b.Prueba de la catalasa 9 .Respiración anaeróbica J . Sangre c.Enzima -galactosidasa 6 .

Proteus vulgaris . 31.Fermentación butanodiólica F . 29. justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . 21. SO32-. no puede respirar. 28. nunca respiración.Fermentación homoláctica G . Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17.Fermentación de proteínas E .ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 . Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar. Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado.Acetoína 5 . 19. De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6.. Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar. La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis. 25. de las bacterias: E. 18. Salmonella sp. podemos asegurar que ha habido respiración..Fermentación heteroláctica 1 .ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 . Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa.. Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa. 22.N02. 23. En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones. La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis.4 ). 30.Respiración anaeróbica D .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16. Si se produce CO2 .ácido láctico 2 .6 . Pueden obtener energía por respiración y por fermentación. Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa.coli.. Las enterobacterias son anaerobias facultativas. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. 20. 24. 27. Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta.Respiración C .Indol 7 .. En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones. 32.Fermentación ácido-mixta B . 26. En una fermentación. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A ...

6 . Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag. Consultando la tabla pag. . 83.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33.4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido. 35. Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes". 87-88) con Pseudomona aeruginosa. b. Utilizando la tabla 6.3 a que bacteria corresponde. Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a.

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