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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

Fe2+. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) . 1. Los tipos nutricionales en este reino. org) En general. es un proceso de oxidación. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. inorg. H2S. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. bacterias rojas no S) 3. basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos. NH3. Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. que el proceso respiratorio. b.6 . degradando la glucosa por vía respiratoria. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. cianobacterias. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. CO. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. se clasifican según sea: a. Hay que remarcar. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. bacterias rojas del S) 2.) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2.. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias. El oxígeno es.. Cuando en los lagares. simplemente.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. al igual que la fermentación. hongos. S. sino pérdida de hidrógeno. como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos. el aire no entra en contacto con la levadura.) Órgano (comp. Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz.

Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. materia orgánica). Cianobacterias. 2. . sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. Son bacterias unicelulares acuáticas . La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1.6 . Bacterias rojas y verdes. Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica). naranja o verde. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). de color rojo. H2. en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos.

a. La Nitrobacterias (Nitrosomas. H2. materia orgánica (según grupos).-----> NO2NO2.a.a NO3NH3 -----. N2O como aceptor de electrones (R. pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica.anaerobia). Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S.y éste a su vez de NO2. Nitrobacter). verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides. Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). En parte en formas de vida libre. NO2-.) .6 .a. S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar. S2-.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m. N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha. a través de la respiración con O2 y sólo escasos m. S (según grupos). pueden utilizar NO3-. en parte en simbiosis con plantas superiores. Fuente de carbono: CO2.) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg. H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica. N/(Ha. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo. Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas. Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono.-----------> NO3S0. El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil. de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul.o. son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2. por lo general.) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha.

vino. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos). (Corynebacterium) 3. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico. 6. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). 2. Láctica. queso. Fermentación butírica . la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos. I. como el sulfuro de hidrógeno.butílica (típica de anaerobios) 4.. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica. el nidol y el escatol. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. sidra. dióxido de carbono. N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4. a.. NO3sulfato.6 . Fermentación propiónica. hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . Vía lenta. Butanodiólica 1. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y.4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1. dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky. cerveza. El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. CO32Fe3+ -------> N2. hidrógeno. se producen también ptomaínas (muy tóxicas). Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos. Fermentación heteroláctica.. Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). leche ácida. Ácido mixta. metano y otros de olor fétido. II.. ) b. Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos. azufre CO2.o. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. aparecen ademas del ácido láctico. 1 la enzima -galactosidasa permite a estos m. Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus..

Los m. al aplicarlo también. será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre). 1. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino. CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno.6 . 6. en sus respectivas unidades de construcción. . tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular.5. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. proteínas y lípidos. La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético. las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico.o. para poder permanecer en contacto con el aire. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas. Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato.

Pseudomonas. Mycoides. dando color azul intenso. ornitina 6 . sobre todo en la superficie del medio.amilasa --------> Maltosa ---------. La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo.6 . este reacciona con el almidón. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol. Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N . Proteus vulgaris.) en glucosa y galactosa. Proteínas completas: Gelatina. B. KIA.). ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA. Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). ARA3).. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas. 3..proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2. Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso. Disacáridos. por la enzima descarboxilasa. La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa.(TDA 4) II. Se pueden degradar de tres formas: I. Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. HIDRATOS DE CARBONO A. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2). aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------.. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2. uno de los componentes del tejido conjuntivo. PRÓTIDOS.Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón. Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH). Alrededor de las colonias que poseen amilasa. 3 GLU. Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa).Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC .. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b. La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores. Aminoácidos lisina 5. 2 ONPG .En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. Aminoácidos.(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 .lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------. a. Proteína derivada del colágeno.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---. La glucosa es fermentada y acidifica el medio. C.

H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT. Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia. Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III. Catalasa12.Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3.Detección de la enzima respiratoria citocromo c.La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R. Ácido mixta. Butanodiólica. reducción de nitratos13) b.6) 2. La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND . La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. NH3. Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . se descarta el grupo de enterobacterias. Fermentación (amplia variedad de tipos) I.6) 11 OX . . Prueba VP 6 ODC . Derivados de aminoácidos: Urea 9 1. VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a. metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S. La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono. antes de empezar con la galería. en un papel de filtro. Prueba de RM II. De esta forma si da un resultado positivo. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S . Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE .6 .La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína.---------> N2. El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo). Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11.-------> NO2.Degradación anaeróbica de aminoácidos. LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos .

6 A. 3. oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) . Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino. una vez preparado. El reactivo. 4. 6. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). A causa de la capacidad de autooxidación que tiene. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar. no tiene color o es ligeramente rosado. para obtener colonias aisladas. Sembrar en estría escocesa. Las bacterias productoras de oxidasa. d. pipeta de plástico. palillo de madera). Procedimiento 1. Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez.4 % de agar). Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos. Incubar a 37 ºC durante 48 h. DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma.6 . c.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. Fig. Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre. 5. DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. 6. en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0. torunda algodón impregnada. e.1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. b. 2. PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador.1 %.

aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. C. Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa. PRUEBA DEL INDOL Fundamento. 2. que contienen oxígeno disuelto.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. Fig 6. Procedimiento 1.5 % (medio especialmente rico en triptófano). 6. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. Si la reacción es positiva.1. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. Incubar 24 h. .Fig. PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Lectura de resultados. En los ambientes acuosos. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Para realizar esta prueba. al añadir al medio el reactivo de Kovacks.6 . como el citoplasma de las células. 3. El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). Añadir a 1 ml. a 37 ºC 3. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. compuesto que se determina en el ensayo.1 Procedimiento 1. Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. dejándolo caer por la pared interior del tubo. 2. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0. Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta.

continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). Salmonella.6 . consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica.3. Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico. la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico.2 y 6. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente. Yersinia. 6. acético.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig. 6. en segundo lugar. Fermentación butilén-glicólica. b. para. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a. Shigella. Fundamento. láctico y succínico) y etanol. Proteus. PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP).Fig. . Fermentación característica de los géneros Escherichia. Fermentación ácido-mixta.1 D-E. Fermentación característica de los géneros Enterobacter. Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. produciéndose acetoína como intermediario.0). Serratia y la mayoría de especies Erwinia.

2. 6.6 . 6.3 Fermentación butano-diólica .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig. Fermentación ácido-mixta Fig.

En caso de duda incubar 48 h. Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. 3. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). 5.6 . Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos. de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. 2.3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM). más. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. 6. más. Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h. 2. (facilita la difusión del O2 atmosférico). pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1. Observar a las 2. como consecuencia. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Incubar 48 h a 37 ºC 3. 4. Sembrar en 2 tubos con 5 ml.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. 12 y 24 horas. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. Añadir a 1 ml. 5. Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. de de caldo RMVP. MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2. Procedimiento: 1. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+). Añadir a 1 ml. de de caldo RMVP.5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . Incubar 48-72 h a 37 ºC. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác.

4. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas. La utilización efectiva de la Lactosa. entre la glucosa y la galactosa). ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi.6 . La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. y ausente de Shigella. que fermentan sin producir gas. unidos por el enlaces -1. En una fermentación ácido-mixta simple. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. Salmonella y Proteus. Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico. se clasifican como NO fermentadores de lactosa. y generalmente. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica.

H. si es parcial alfa-hemólisis. Photobacterium phosphoreum B. que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. G. Color verde intenso (+). Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). AGAR MC CONKEY. 2.. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. porque contiene lactosa y un indicador de pH. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia.. pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis). Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia. Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. Aeromonas hydrophila. utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. I. carotovara. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico). . Es un medio general rico en nutrientes. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. AGAR CITRATO DE SIMMONS. Algunas bacterias. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes. Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. Contiene citrato como única fuente de carbono. liberando al medio los grupos amino (desaminación). debido a una destrucción parcial de los hematíes. sobre todo los estreptococos. Si la hemólisis que se produce es total . de verde a azul. En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina. Erwinia herbicola. al hacerlo. AGAR FENILALANINA. Además es un medio diferencial. -hemólisis: Ausencia de halo claro. AGAR SANGRE. Esperar hasta 5 min. resultando un compuesto de coloración verde oscura. Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias. Es también un medio diferencial.6 . Incubar a 37 ºC 18-24 h. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. junto con la eliminación del citrato (ácido). E. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. se denomina betahemólisis. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. Procedimiento: 1. se habla de hemólisis tipo gamma. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo. y cuando no existe. F. 4. Resultados: Color inicial del medio (-).

las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis. fermenta la lactosa. y. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. el medio permanecerá de color rojo. Como consecuencia.6 . Por el contrario. d. generando ácidos que no serán neutralizados. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. los azúcares son respirados. citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. 6. Si la bacteria. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo. La información que podemos obtener es la siguiente: a. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. que se elimina y no modifica el pH. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). al no haber cambio de pH. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). por ejemplo. reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. a su vez. c. Como consecuencia. Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. Como resultado.1). Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color. rotura o elevación del agar del fondo del tubo. el medio mantendrá su color rojo en la superficie.1 % y lactosa al 1 %). produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso. f. AGAR KLIGLER (KIA). degradándose completamente hasta CO2. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). además. este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico. el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. como. en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. Enzima hidrogenoliasa fórmica. b. . ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. el género Pseudomonas. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. En este caso. tiosulfato sódico. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación. La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. e. Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. que.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.(2) + + + + - .6 .

6 . sin producción de gas.Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A. + Enengrecimiento Formación de SH2 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA. . (2) Sólo en parte superior de la columna. y a veces formando anillo a las 48 h. Formación de ALCALI. No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado).

Incubar 4 h a 37 ºC.5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. dando un coágulo visible. Homogeneizar con asa Kolle. 4. La alta concentración de sal (NaCl al 7. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus.6 . L. AGAR MANITOL SAL. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. 2. Fundamento. 5. diferenciándolas así de las que no lo son. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. en su composición el único azúcar presente es el manitol. Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. fermentador del manitol. Es una enzima semejante a la protrombina.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma. Procedimiento 1. En tubos de 5 ml colocar 0. que no fermenta el manitol. mientras que Staphylococcus hepidermidis. 4 y 24 h. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. PRUEBA DE LA COAGULASA. que transforma el fibrinógeno en fibrina. 3. Staphylococcus aureus. Lecturas a la 1/2 . Además.5 %) le proporciona su carácter selectivo. pero con un crecimiento muy pobre).

a 37 ºC.coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer.7. 2. por lo que podrían falsear los resultados.6 . Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. Realizar la batería de pruebas IMVIC. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación. mediante la -galactosidasa.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE. Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC". Incubar 48 h. Preparar un cultivo puro de E. PRUEBAS IMVIC. 6. 6. 3. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas. 4. .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6.6. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo.C. se utiliza la lactosa. coli y E. 5.6. Preparar dos placas de agar nutritivo. DIFERENCIACIÓN ENTRE E. I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1. (ver 6. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias.6. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas. o lactosa y peptona.D-E. Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.H) . 6. Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas.

2. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo. agar fenilalanina.del agar sangre y extenderla en el papel de filtro. Anotar los cambios de color en las distintas pruebas. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio.6 . 8. Las pruebas del citrato. 4. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E.5 %. Para ello.4.8. A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa. . 6. Incubar a 37 º C durante 24 h. excepto el agar de Kliger. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram . sembrar en el medio agar manitol sal . Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) ..epidermidis). Con la ayuda de la tabla nº 6-1. Incubar a 37 ºC durante 24 h. Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. Comprobar el aspecto de las colonias. 5. 9. 6.coli) y un coco Gram positivo S. 10.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6. Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 . Incubar a 37 º C durante 48 h. y en la placa de agar Mc. A partir de cada tipo de colonia. Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa).Conkey si ha sido fermentada la lactosa.Conkey. Procedimiento 1. Si la prueba es positiva (aparición de burbujas). realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. 3. dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA). Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul. caldo de triptona con NaCl al 0. A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada. y 6-2 identificar las bacterias analizadas. Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo. 7. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig.1 .4 Tabla 6. 6.6 .

. ni llenar los microtubos demasiado. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos. etc. liberando ortonitrofenol de color amarillo. La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro. El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea. produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. API 10 S. imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa. Procurar no producir burbujas. SISTEMA API. Sin embargo. mezclar líquido de microtubos distintos.). En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol. El indicador virará de amarillo a rojo. TDA: actividad triptófano-desaminasa. Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis. vire de amarillo a rojo. LDC: actividad lisina descarboxilasa. H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato. API 10 S. produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo.. actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6. obteniéndose un precipitado negro. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III). (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + . salvo indicación.) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. ODC: actividad ornitina descarboxilasa. Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH.. . GLU (glucosa). Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul. que originan una caída del pH. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano. URE: actividad ureasa. El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E.

Procedimiento: 1. Una vez anotados los resultados obtenidos. Preparar una cubeta de incubación con tapa. 5. 9. . Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A. TDA . IND . D. Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula. Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. NO2 . Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC . Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h. Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7.5 % (NIT 2). 4. Eliminar el exceso de agua. con aceite de parafina. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). OX . y se emulsiona en agua estéril.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. Humedecer la tapa con agua. NO2: nitrato reductasa. H2S .añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo. tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC. Anotar nº de identificación de la muestra 2.8 % (NIT 1) y 2 gotas de N. 10.añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería. Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias. 8.N dimetil-alfa-naftilamina.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa. URE .6 . La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c. para evitar evaporación. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. Después de inocular. ODC . 6.añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C. La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N. 3.

añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas. (8) NO2 .añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %. Esto sucede con organismos TDA positivos. (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos. Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa. Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos. Después de varios minutos. Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa. Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6.8 % y 2 gotas de N.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo. el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo).6 . Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc.2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo. Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2. (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %.5 %. un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno. (6) IND . Antes de añadir los reactivos.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. la oxidación en la cúpula. La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs. (5) TDA . .

se busca en las tablas a que bacteria corresponde. 4) B.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S. Tabla 6. Con la secuencia de 4 números encontrados. Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 . Positivo: Se anota el valor correspondiente (1.6 . Los resultados pueden ser: A. Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2). 2. 1.3. Negativo: Se anota un 0. como test 11 y 12. Codificación del germen.

241 2.714 2.6 .245 2.254 2.221 2.407 7.314 7. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.764 2.034 7.674 3.407 3.315 7.107 3.406 4.105 2.500 1.107 7.114 2.224 3.000 7.524 3.124 7.715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.041 7. agglomer.freund.724 2. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.105 7.524 6.014 7. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer./Salmon.404 3.074 2.007 7.707 3.614 3.105 3. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.405 7.714 6.001 7.007 3.707 6.305 7. pneumon.307 3.704 3.065 2.224 2.665 2.014 3.075 2.125 7.674 6.224 7.674 2.401 7.205 3.704 6.004 2.055 2. Enterobacter Enterobacter agglom.502 3.040 7.045 2.115 7.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.465 3.006 7.214 7.707 2.064 2.225 7.004 3.675 2.025 7.225 3.005 2.005 3.514 6.604 6.504 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.035 2.234 2.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) .507 3. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer.422 4.406 3.402 3.104 2.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.614 6.024 3.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.204 3.205 7. agglomer.305 3.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.400 7.204 7.044 7. Enterobacter agglom.402 4.005 7.045 7.234 7.

507 7. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb.114 6. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer. pneumon. Klebsiella / Serratia Kleb.307 6.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2./Salmon.314 2.545 2.475 2.604 7.261 6.725 98 Citrobacter freundii Kleb.104 6.004 6.505 7.315 2.405 2.425 2.702 7.205 6.274 6.445 6. pneumon. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob. pneumon.304 6.307 2.615 7.365 2.605 7.654 2. Enterobacter agglom agglomer.005 6.314 6. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.724 7.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7.624 2.305 2.402 6. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob.445 2.445 7. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.374 2.422 2. pneumon.704 7.265 6. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer.224 6.425 7.465 2.444 2. oxytec .644 2.525 7.440 7.204 6.504 7.402 2.065 6.706 7.274 2.265 2.441 7.464 2.614 7. oxytec Enterob.714 7.404 2.6 .225 6. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.414 6.474 2.415 7.524 7.400 6.624 7.105 6.305 6.406 6.475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E. freund.714 7.000 6.444 7.426 6.214 6.422 6.324 2.045 6.634 7.434 7.426 2.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.634 2.264 2.

81 % % % 0.93 % 0. Por ejemplo.0002940 0. Ello nos indica un margen de fiabilidad. Edward tarda. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas).enterocolítica. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas.0 Identificación aceptable 90.05 = 0.0002940 % 0. 6475.99 % % % + 0.34 = 0. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80.. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075. Calculo probabilístico. Shigella sp. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S. Edward tarda y P.0003948 % 0..coli.vulgaris.0 " buena 99.marcenses P.enterocolítica Pruebas bioq.30 0.6 . 2055.10.98 0.0003948 0.enterocolítica = 0.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S.03 0.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99. E. 15 % P.5 % se trata de la bacteria Y. S. 0475.rettgeri = % 100 = 0.28 0.94 0. Salmonella sp. A modo de ejemplo. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada.10 = 0. 72 % Y. enterocolitica.marcenses P.9 " excelente . NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas). En la tabla adjunta.enterocolítica + 0. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas.rettgeri Y.rettgeri Y.oxytoca. La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos.marcenses = 0. P. etc. 11 % % 100 = 99.2535607 0. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K.2535607 Suma total = 0. neumoniae.25442495 0. 2075.2542495 % 100 = 0. rettgeri y Y. K. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico.0 " muy buena 99.01 0.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6.

liquefac. tarda Salmonella sp.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S . odorífera P.6 . mirabilis P.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6.4. CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. freundii K. cloacae H. marcescens S. coli Shigella sp. ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . oxytoca E. S. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A. rettgeri Y. butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F.Proteus vulgaris 4 . Edward. alvei S. pneumoniae K.Klebsiella 5 . Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F. C. vulgaris Prov.

Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. Se incuban los tubos 48 h. a 37 ºC. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5. 4. Distingue entre los términos: metabolismo. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes . catabolismo. aerotolerantes 2.6 . anaerobias facultativas c. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1. anaerobias obligadas b. En que se distinguen las bacterias según sean: a. Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2. en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado. anabolismo. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente. 3.

Hemólisis 1 . A. Citrato f.Coenzima Citocromo c 7. ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA.Aerobios/Anaerobios facultativos D . TSA b. Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15. respecto a: a. TSB h.Fermentación de lípidos G .Prueba de la ONPG 2 . ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7.Fermentación ácido-mixta B . Describe la función del ATP 8.Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . Levine e.Prueba de la catalasa 9 .Fermentación de proteínas E . Sangre c.Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 .Enzima -galactosidasa 6 . ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12. A.Agar Sangre 10 .Desaminación/descarboxilación 5 . ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 . Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a. Manitol sal 13. Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c. A. ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10. Mc Conkey d.Respiración I .Fermentación de lactosa C . 11.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6.Respiración anaeróbica J . El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14. A.Fermentación butanodiólica F . Tipo de sustrato que ha fermentado b. Solución Ringer g. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A .Fermentadoras tardías de lactosa H . RMVP i.Agar Citrato .

Respiración anaeróbica D . De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6..ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 .. 23. 22. 18. 24. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. 31.Fermentación butanodiólica F . Proteus vulgaris . Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A .. no puede respirar. Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16. 26.Fermentación heteroláctica 1 . En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación. En una fermentación. Pueden obtener energía por respiración y por fermentación. SO32-.Fermentación ácido-mixta B . Salmonella sp.Fermentación homoláctica G .4 ). Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta. La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis.N02. nunca respiración.. de las bacterias: E.ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 . La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones. 32. Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa. Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar.Acetoína 5 . 21. 20. Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar.Fermentación de proteínas E . 19.ácido láctico 2 . Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado.. Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa. 30. Las enterobacterias son anaerobias facultativas.. 25. 28. Si se produce CO2 .Respiración C . justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones. podemos asegurar que ha habido respiración. 27. 29.Indol 7 .. Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17.coli.6 .

Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. 83. 87-88) con Pseudomona aeruginosa.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33. . Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes". Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a. Consultando la tabla pag.3 a que bacteria corresponde.4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido. Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. b.6 . Utilizando la tabla 6. 35.

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