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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas. Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz. como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración.6 . Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias. cianobacterias. al igual que la fermentación. es un proceso de oxidación. b. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. sino pérdida de hidrógeno. Cuando en los lagares. Hay que remarcar. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol. basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos.) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos. se clasifican según sea: a. Fe2+. el aire no entra en contacto con la levadura. El oxígeno es. simplemente. CO. H2S. que el proceso respiratorio. bacterias rojas no S) 3. bacterias rojas del S) 2. org) En general. S... NH3. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. 1. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. Los tipos nutricionales en este reino. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. inorg.) Órgano (comp. degradando la glucosa por vía respiratoria. hongos.

Cianobacterias. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica). . 2. naranja o verde. de color rojo. materia orgánica). Bacterias rojas y verdes. sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S.6 . H2. La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos. Son bacterias unicelulares acuáticas .

Nitrobacter).o. materia orgánica (según grupos). S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar. pueden utilizar NO3-. Fuente de carbono: CO2.) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg.anaerobia). son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m. H2.a. N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha. El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil.) . a través de la respiración con O2 y sólo escasos m. La Nitrobacterias (Nitrosomas. N2O como aceptor de electrones (R. S (según grupos).a. Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas. N/(Ha.y éste a su vez de NO2.-----------> NO3S0. NO2-. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo.) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha. verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides. En parte en formas de vida libre.a.6 . H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica. Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S. en parte en simbiosis con plantas superiores. Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica. por lo general. S2-.a NO3NH3 -----. Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono.-----> NO2NO2. de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul.

aparecen ademas del ácido láctico. cerveza. Butanodiólica 1. Láctica. Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos. CO32Fe3+ -------> N2. Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos. I. Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). azufre CO2. ) b. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera. Ácido mixta. sidra. queso. metano y otros de olor fétido. 2. NO3sulfato.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. hidrógeno. se producen también ptomaínas (muy tóxicas).... como el sulfuro de hidrógeno. o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos. dióxido de carbono. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono. Fermentación propiónica. dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus. 6. N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico. leche ácida. II. 1 la enzima -galactosidasa permite a estos m. Vía lenta. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica. a. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y.butílica (típica de anaerobios) 4. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky.o. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos). vino. el nidol y el escatol... Fermentación heteroláctica.4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. Fermentación butírica . hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . (Corynebacterium) 3.6 .

5. aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas).o. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. 1. será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno. tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular. en sus respectivas unidades de construcción. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. 6. al aplicarlo también.6 . por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre). que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas. para poder permanecer en contacto con el aire. .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético. las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico. proteínas y lípidos. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino. Los m.

a. Proteína derivada del colágeno. Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N .(TDA 4) II. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2. Mycoides. La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores.. Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH).lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------.Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa. La glucosa es fermentada y acidifica el medio. 2 ONPG .) en glucosa y galactosa. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey.En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. KIA. dando color azul intenso. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas. Se pueden degradar de tres formas: I. uno de los componentes del tejido conjuntivo.(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 . Proteínas completas: Gelatina. sobre todo en la superficie del medio. Aminoácidos lisina 5. Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa). La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. Aminoácidos. este reacciona con el almidón. Pseudomonas. Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol.. HIDRATOS DE CARBONO A. ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA. B. Alrededor de las colonias que poseen amilasa. aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido. por la enzima descarboxilasa..). ornitina 6 . La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa.6 .. C. La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo.proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón.amilasa --------> Maltosa ---------.Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC . ARA3). Proteus vulgaris. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------. 3 GLU. Disacáridos. 3. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b. Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. PRÓTIDOS.

Catalasa12. antes de empezar con la galería.-------> NO2. reducción de nitratos13) b. Ácido mixta. Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S .6) 11 OX . se descarta el grupo de enterobacterias.Detección de la enzima respiratoria citocromo c. Fermentación (amplia variedad de tipos) I.La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia.6 . Prueba VP 6 ODC . La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. .Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3.La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína. LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos . Derivados de aminoácidos: Urea 9 1. El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . en un papel de filtro. N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo). metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S. Prueba de RM II. Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE . Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a. NH3.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III. Butanodiólica.6) 2. La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND . VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a.---------> N2. Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11.H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT. De esta forma si da un resultado positivo. La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono.Degradación anaeróbica de aminoácidos.

Procedimiento 1. b. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. 3. no tiene color o es ligeramente rosado. para obtener colonias aisladas. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. 4. Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1.1 %.1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar.4 % de agar). Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez. d. 6.6 A. DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. e. palillo de madera). Fig. Sembrar en estría escocesa. dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) . en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0. PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador. 6. Incubar a 37 ºC durante 48 h. c. El reactivo. DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. 2. torunda algodón impregnada. 5. Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos. A causa de la capacidad de autooxidación que tiene.6 . pipeta de plástico. Las bacterias productoras de oxidasa. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz. una vez preparado. apareciendo una coloración azul (forma oxidada).

5 % (medio especialmente rico en triptófano). compuesto que se determina en el ensayo.1 Procedimiento 1. El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. Añadir a 1 ml. 2. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. 6. PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. Si la reacción es positiva. Fig 6. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. Procedimiento 1. C. a 37 ºC 3. dejándolo caer por la pared interior del tubo. Lectura de resultados.1. Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). al añadir al medio el reactivo de Kovacks. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. 3. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. Sembrar en 2 tubos con 5 ml.Fig.6 . aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli. Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. Para realizar esta prueba. Incubar 24 h. . 2. como el citoplasma de las células. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa. PRUEBA DEL INDOL Fundamento. Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta. En los ambientes acuosos. que contienen oxígeno disuelto.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias.

Fermentación butilén-glicólica.6 .2 y 6. acético. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente.1 D-E. Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. Fermentación ácido-mixta. en segundo lugar. Fundamento. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica. Fermentación característica de los géneros Escherichia. Fermentación característica de los géneros Enterobacter. Serratia y la mayoría de especies Erwinia. la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig. Salmonella. Yersinia. consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. b. Shigella. para. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a. . PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP). Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico.Fig. produciéndose acetoína como intermediario.0). continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. 6. láctico y succínico) y etanol. Proteus. 6.3.

6.3 Fermentación butano-diólica . Fermentación ácido-mixta Fig. 6.2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig.6 .

Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. Incubar 48 h a 37 ºC 3. 4. 12 y 24 horas. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác. Procedimiento: 1. 5. 3.6 . Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h.5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo. 6. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+). Sembrar en 2 tubos con 5 ml. de de caldo RMVP.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. más. Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. En caso de duda incubar 48 h.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM). Observar a las 2. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. Añadir a 1 ml. pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1. 2. como consecuencia. MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2. Incubar 48-72 h a 37 ºC. más. de de caldo RMVP. Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. 5. 2. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). (facilita la difusión del O2 atmosférico).3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2. Añadir a 1 ml. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli.

también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. unidos por el enlaces -1. Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi. La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. y generalmente. entre la glucosa y la galactosa).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. En una fermentación ácido-mixta simple. que fermentan sin producir gas. y ausente de Shigella. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico. La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas. La utilización efectiva de la Lactosa. Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. Salmonella y Proteus. se clasifican como NO fermentadores de lactosa.4.6 . Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) . La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas.

Resultados: Color inicial del medio (-). Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia. G. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3. Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. al hacerlo. se habla de hemólisis tipo gamma. Contiene citrato como única fuente de carbono. Esperar hasta 5 min. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. AGAR FENILALANINA. Procedimiento: 1. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. Si la hemólisis que se produce es total . Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. sobre todo los estreptococos. liberando al medio los grupos amino (desaminación). Aeromonas hydrophila.6 . de verde a azul. debido a una destrucción parcial de los hematíes. se denomina betahemólisis. Incubar a 37 ºC 18-24 h. junto con la eliminación del citrato (ácido). Es un medio general rico en nutrientes. Color verde intenso (+). carotovara. En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina.. I. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis). fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. AGAR MC CONKEY. AGAR SANGRE. si es parcial alfa-hemólisis. . -hemólisis: Ausencia de halo claro. Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias. Algunas bacterias. Además es un medio diferencial. AGAR CITRATO DE SIMMONS. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia. F. E. 2. resultando un compuesto de coloración verde oscura. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. H. porque contiene lactosa y un indicador de pH. que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). 4.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. Es también un medio diferencial. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo. Photobacterium phosphoreum B. Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes.. Erwinia herbicola. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico). y cuando no existe. Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias.

al no haber cambio de pH. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. e. degradándose completamente hasta CO2. Enzima hidrogenoliasa fórmica. en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. c. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. Como consecuencia. rotura o elevación del agar del fondo del tubo. este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas. tiosulfato sódico. b. 6. el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. por ejemplo. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. Por el contrario. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. el medio permanecerá de color rojo. . Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. Si la bacteria. y.6 . fermenta la lactosa. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). como. reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. Como consecuencia. el género Pseudomonas. que se elimina y no modifica el pH. En este caso.1). No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color. Como resultado. además. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). generando ácidos que no serán neutralizados. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación.1 % y lactosa al 1 %). provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo. el medio mantendrá su color rojo en la superficie. AGAR KLIGLER (KIA).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. que. los azúcares son respirados. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. a su vez. f. La información que podemos obtener es la siguiente: a. d. produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.6 .(2) + + + + - .

sin producción de gas. .Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A. Formación de ALCALI.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA. (2) Sólo en parte superior de la columna.6 . + Enengrecimiento Formación de SH2 . No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado). y a veces formando anillo a las 48 h.

La alta concentración de sal (NaCl al 7. Es una enzima semejante a la protrombina. Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. Además. Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. dando un coágulo visible. Staphylococcus aureus. AGAR MANITOL SAL. diferenciándolas así de las que no lo son. L. En tubos de 5 ml colocar 0. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus.5 %) le proporciona su carácter selectivo. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo. Homogeneizar con asa Kolle. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . en su composición el único azúcar presente es el manitol. PRUEBA DE LA COAGULASA.5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. pero con un crecimiento muy pobre). 2. Procedimiento 1. que transforma el fibrinógeno en fibrina. mientras que Staphylococcus hepidermidis.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. 4. Incubar 4 h a 37 ºC. Lecturas a la 1/2 . inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. 5. que no fermenta el manitol. Fundamento. 4 y 24 h. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. 3. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. fermentador del manitol.

6. I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1.D-E. Incubar 48 h.6.6. Preparar dos placas de agar nutritivo. Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E.H) .6 . por lo que podrían falsear los resultados. Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa. DIFERENCIACIÓN ENTRE E. 4. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.C. 6.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6. coli y E. Preparar un cultivo puro de E.7. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación. Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC". Realizar la batería de pruebas IMVIC. 2. se utiliza la lactosa. a 37 ºC. mediante la -galactosidasa.6. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo. Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas. o lactosa y peptona. PRUEBAS IMVIC. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer. 5. .coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada. (ver 6. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias. 3. 6.

Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E. dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA). 5. Incubar a 37 º C durante 24 h. A partir de cada tipo de colonia. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO.5 %. 7. 8.Conkey si ha sido fermentada la lactosa. A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa.coli) y un coco Gram positivo S. Incubar a 37 º C durante 48 h.epidermidis). Anotar los cambios de color en las distintas pruebas. y en la placa de agar Mc. Para ello.6 . 10. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo. Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) . Con la ayuda de la tabla nº 6-1. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio. Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6. Las pruebas del citrato. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram . sembrar en el medio agar manitol sal . Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 . Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. y 6-2 identificar las bacterias analizadas. 2.8. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. Comprobar el aspecto de las colonias. Incubar a 37 ºC durante 24 h. 4.Conkey.del agar sangre y extenderla en el papel de filtro.. 6. realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. Si la prueba es positiva (aparición de burbujas). Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h. caldo de triptona con NaCl al 0. excepto el agar de Kliger. 6. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio. 3. . A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons. 9. Procedimiento 1. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada.4. agar fenilalanina.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig.1 . 6.4 Tabla 6.6 .

ODC: actividad ornitina descarboxilasa. CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono.. Sin embargo. . El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E. mezclar líquido de microtubos distintos. LDC: actividad lisina descarboxilasa. produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo. Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano. . Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH. GLU (glucosa). SISTEMA API. imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos. que originan una caída del pH. TDA: actividad triptófano-desaminasa. salvo indicación. produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). URE: actividad ureasa. Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. ni llenar los microtubos demasiado. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol. obteniéndose un precipitado negro. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III). Procurar no producir burbujas. Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + . etc. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina. Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis. La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro. (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa. API 10 S. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos. API 10 S.. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa.) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea.). H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6. liberando ortonitrofenol de color amarillo. El indicador virará de amarillo a rojo. vire de amarillo a rojo.6 .

añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C.5 % (NIT 2). ODC . Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa.6 . H2S . Humedecer la tapa con agua. Una vez anotados los resultados obtenidos. y se emulsiona en agua estéril. . Anotar nº de identificación de la muestra 2. NO2: nitrato reductasa.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0.N dimetil-alfa-naftilamina. 3. Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC . 8. Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7. Eliminar el exceso de agua.añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. Preparar una cubeta de incubación con tapa. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. IND . 9. D. ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería.añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. NO2 . 6. Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC.8 % (NIT 1) y 2 gotas de N. Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias. 10. La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N. URE . Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. TDA . para evitar evaporación. Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas. 4. Procedimiento: 1. el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A. Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. OX . con aceite de parafina. Después de inocular. 5.

Esto sucede con organismos TDA positivos. el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo). (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos. (5) TDA . La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs.8 % y 2 gotas de N. (8) NO2 .6 . Después de varios minutos.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6. Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos.2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo. Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo. Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro. Antes de añadir los reactivos. Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa. . (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %.N dimetil-alfa-naftilamina al 0.añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %. un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno. Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc. observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas.5 %. la oxidación en la cúpula. (6) IND . Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis).

4) B. Los resultados pueden ser: A.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S. Tabla 6.6 .3. Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 . Negativo: Se anota un 0. Con la secuencia de 4 números encontrados. como test 11 y 12. se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2). se busca en las tablas a que bacteria corresponde. Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. Positivo: Se anota el valor correspondiente (1. 2. 1. Codificación del germen.

Enterobacter agglom.524 6.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.107 7.604 6. Enterobacter Enterobacter agglom.245 2.402 4./Salmon.614 6.674 6.115 7. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.005 7.307 3.401 7.724 2.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.055 2.014 3.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) .225 3.114 2.715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob.500 1. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1.704 6.124 7.105 3.001 7.305 7.041 7.034 7.674 2.035 2.007 3. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.665 2.004 2.125 7.040 7.224 2.204 7. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.707 2.524 3.205 7.075 2.402 3. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer.044 7.074 2.406 3.214 7. agglomer.407 3.400 7.045 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6.005 2.205 3.014 7.315 7.204 3.707 6.704 3.674 3.614 3.675 2.005 3. agglomer.065 2.104 2.305 3.707 3.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.502 3.764 2.465 3.241 2.004 3.freund.234 7. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.105 2.405 7.406 4.404 3.407 7.514 6.006 7.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.224 3.234 2.422 4.024 3.254 2.221 2.507 3.025 7.007 7.504 2.714 6.6 ./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.107 3.224 7.045 7. pneumon.314 7.064 2.225 7.714 2.000 7.105 7.

465 2. pneumon.425 7.440 7.474 2.324 2.6 .614 7.702 7.065 6.505 7.414 6.405 2.224 6.604 7.422 2. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.525 7.304 6.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.205 6.422 6.426 2.445 7. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob. oxytec ./Salmon.724 7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2.225 6.274 2. pneumon.265 2.305 6.000 6.654 2.402 6.504 7. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer. Enterobacter agglom agglomer. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.444 2.114 6.415 7. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb.204 6. freund.524 7.545 2.464 2.507 7.644 2. Klebsiella / Serratia Kleb.307 2. pneumon.406 6.307 6.615 7.261 6.104 6.425 2.404 2.441 7.426 6.374 2.265 6.704 7.402 2.005 6.314 2.214 6.445 6.434 7.045 6.725 98 Citrobacter freundii Kleb.105 6.475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E.714 7.274 6.365 2.714 7.624 7.315 2.314 6.445 2.475 2.706 7.444 7.605 7.634 2. pneumon. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.004 6.400 6.264 2.624 2.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7.305 2.634 7. oxytec Enterob.

10.0003948 0. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas. Edward tarda. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas.6 .0003948 % 0.01 0. En la tabla adjunta.05 = 0.98 0. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada.2542495 % 100 = 0. neumoniae.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S. Calculo probabilístico.vulgaris.0002940 % 0.rettgeri Y. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80.30 0.0 Identificación aceptable 90.81 % % % 0. Salmonella sp.rettgeri Y.93 % 0.10 = 0.34 = 0.enterocolítica = 0.marcenses P. Edward tarda y P. enterocolitica.9 " excelente .2535607 Suma total = 0.0002940 0. K.99 % % % + 0.5 % se trata de la bacteria Y. 6475.0 " buena 99.03 0. La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos. 2075. etc. A modo de ejemplo.enterocolítica. S.marcenses P.0 " muy buena 99. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico. Shigella sp..28 0. rettgeri y Y.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6.25442495 0. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K.94 0. 2055. 0475.enterocolítica Pruebas bioq.enterocolítica + 0. 15 % P. P. 72 % Y. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas).oxytoca.2535607 0. E.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99..coli.marcenses = 0. NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas). Por ejemplo. 11 % % 100 = 99. Ello nos indica un margen de fiabilidad.rettgeri = % 100 = 0.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6. CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. mirabilis P.Proteus vulgaris 4 . freundii K. S. butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F.Klebsiella 5 . odorífera P.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S . C. ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . pneumoniae K. rettgeri Y. Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A. oxytoca E.4. marcescens S. liquefac. cloacae H. coli Shigella sp. Edward. vulgaris Prov. tarda Salmonella sp.6 . alvei S.

Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2. Distingue entre los términos: metabolismo. aerotolerantes 2. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente. Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5. 3. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1. En que se distinguen las bacterias según sean: a. anaerobias facultativas c. anaerobias obligadas b. 4. en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. Se incuban los tubos 48 h. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes . anabolismo. a 37 ºC.6 . catabolismo.

Prueba de la catalasa 9 . Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c.Desaminación/descarboxilación 5 .Respiración anaeróbica J . A. Levine e.Prueba de la ONPG 2 . ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12. Mc Conkey d.Enzima -galactosidasa 6 . A. 11.Agar Citrato . ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 .Hemólisis 1 .Fermentación butanodiólica F .Coenzima Citocromo c 7. Citrato f. ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7.Fermentación de lípidos G .Agar Sangre 10 . Tipo de sustrato que ha fermentado b.Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9. El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14. A.Fermentación ácido-mixta B . respecto a: a.Respiración I . Solución Ringer g. Manitol sal 13.Fermentación de proteínas E . ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA. Describe la función del ATP 8. TSA b.Fermentación de lactosa C . TSB h. A. RMVP i.Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 .6 .Fermentadoras tardías de lactosa H . Sangre c. Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a.Aerobios/Anaerobios facultativos D . Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6.

23.Fermentación ácido-mixta B . de las bacterias: E. Las enterobacterias son anaerobias facultativas. En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones. Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17. Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa.Fermentación heteroláctica 1 . Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa. 26. podemos asegurar que ha habido respiración.Fermentación butanodiólica F . 29. Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar. 32. 28. En una fermentación.Fermentación homoláctica G . 27..ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 .Fermentación de proteínas E .6 . La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis. Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta.N02.4 ). Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar. 31. no puede respirar. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis. 22. 24.. justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . Pueden obtener energía por respiración y por fermentación.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16. Proteus vulgaris . Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A .Respiración anaeróbica D ...ácido láctico 2 .Acetoína 5 .coli. Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa.. 25. nunca respiración. 20.. Salmonella sp. 30. 18.ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 .Indol 7 . Si se produce CO2 . En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación..Respiración C . 19. 21. De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6. Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado. SO32-. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones.

Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. 35.3 a que bacteria corresponde. Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes". 87-88) con Pseudomona aeruginosa. Consultando la tabla pag. Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a.4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido.6 . b.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33. 83. Utilizando la tabla 6. .

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