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6. Identificación bioquímica

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6 - PRUEBAS BIOQUÍMICAS

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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

simplemente.) Órgano (comp. se clasifican según sea: a. H2S. Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz. S. el aire no entra en contacto con la levadura. b. bacterias rojas no S) 3. cianobacterias. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos. Los tipos nutricionales en este reino. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. org) En general. al igual que la fermentación.) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. Cuando en los lagares. CO. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. que el proceso respiratorio. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) .6 . bacterias rojas del S) 2. Hay que remarcar. inorg. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. El oxígeno es.. NH3. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración. sino pérdida de hidrógeno.. degradando la glucosa por vía respiratoria. Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. 1. como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación. es un proceso de oxidación. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno. Fe2+. hongos. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación. Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias.

sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S. en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. Bacterias rojas y verdes.6 . No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos. naranja o verde.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. de color rojo. . 2. Cianobacterias. Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1. materia orgánica). H2. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). Son bacterias unicelulares acuáticas . Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica).

verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides.) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg. La Nitrobacterias (Nitrosomas. en parte en simbiosis con plantas superiores.a NO3NH3 -----.anaerobia). N/(Ha.a. por lo general. S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar. materia orgánica (según grupos). de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul. a través de la respiración con O2 y sólo escasos m.a. S2-. NO2-.a. pueden utilizar NO3-. Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S. Fuente de carbono: CO2. Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil. S (según grupos). H2. N2O como aceptor de electrones (R. Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas.y éste a su vez de NO2. En parte en formas de vida libre. Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono.6 .) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha.-----------> NO3S0.-----> NO2NO2.) . son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo. Nitrobacter).o. H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica. pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica. N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m.

dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. hidrógeno. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica. como el sulfuro de hidrógeno. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono. vino. la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos.4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. se producen también ptomaínas (muy tóxicas).. Ácido mixta.6 . N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4. Vía lenta. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. aparecen ademas del ácido láctico. Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. 6. Fermentación heteroláctica. queso.o. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y. se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky. ) b. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos). Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera. CO32Fe3+ -------> N2. Fermentación propiónica. sidra. Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos. azufre CO2. NO3sulfato. cerveza. el nidol y el escatol. 2.. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus.. Láctica. leche ácida. o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). a. Butanodiólica 1. El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. dióxido de carbono. Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). Fermentación butírica .. metano y otros de olor fétido.butílica (típica de anaerobios) 4. I. II.. (Corynebacterium) 3. hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . 1 la enzima -galactosidasa permite a estos m.

para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno. será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre). 6. al aplicarlo también. 1. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato. aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas). Los m.5. para poder permanecer en contacto con el aire. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas.6 . en sus respectivas unidades de construcción. las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. proteínas y lípidos. CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular. . La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino.o.

Aminoácidos lisina 5. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol.(TDA 4) II. KIA.. Pseudomonas. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b.Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC . a. 2 ONPG . Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón. Mycoides.. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2).). Proteína derivada del colágeno. C. ornitina 6 . La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------. Disacáridos. Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH).Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey. Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa). Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N ..proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2. Alrededor de las colonias que poseen amilasa. por la enzima descarboxilasa. 3. ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---.) en glucosa y galactosa. Proteus vulgaris. Proteínas completas: Gelatina. Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). Se pueden degradar de tres formas: I. Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso. 3 GLU.amilasa --------> Maltosa ---------.En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2. este reacciona con el almidón. La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa.lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------. PRÓTIDOS.. uno de los componentes del tejido conjuntivo. sobre todo en la superficie del medio. HIDRATOS DE CARBONO A. Aminoácidos. dando color azul intenso. B.(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 . La glucosa es fermentada y acidifica el medio. La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. ARA3).6 . La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo.

Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . Butanodiólica. LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos .La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III.---------> N2. Prueba de RM II.Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3. reducción de nitratos13) b. De esta forma si da un resultado positivo. Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11.6 . Fermentación (amplia variedad de tipos) I.Degradación anaeróbica de aminoácidos. en un papel de filtro. antes de empezar con la galería. NH3. VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a. se descarta el grupo de enterobacterias. metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S. Prueba VP 6 ODC . . Derivados de aminoácidos: Urea 9 1. Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a.6) 11 OX . La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono. Ácido mixta. Catalasa12. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7.6) 2.-------> NO2. Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S . Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia. Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE . N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo).H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT.Detección de la enzima respiratoria citocromo c. La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND .La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R.

Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1. para obtener colonias aisladas. DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre. c. palillo de madera). El reactivo. Fig. pipeta de plástico. Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino. Sembrar en estría escocesa. oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) .1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). 2. Incubar a 37 ºC durante 48 h. Procedimiento 1. Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos. A causa de la capacidad de autooxidación que tiene. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma.6 . 6. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador. en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0. DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. 6. 3. Las bacterias productoras de oxidasa. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz.4 % de agar).6 A. una vez preparado. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). no tiene color o es ligeramente rosado. 4. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. b. 5. torunda algodón impregnada. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar. d. e.1 %. dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez.

6. 2. a 37 ºC 3. dejándolo caer por la pared interior del tubo. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Lectura de resultados. El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. compuesto que se determina en el ensayo.1 Procedimiento 1. Incubar 24 h. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. Si la reacción es positiva. Fig 6. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. PRUEBA DEL INDOL Fundamento. En los ambientes acuosos.Fig. aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Procedimiento 1. Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. 3. Añadir a 1 ml. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva.5 % (medio especialmente rico en triptófano). PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa. al añadir al medio el reactivo de Kovacks.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. Para realizar esta prueba. que contienen oxígeno disuelto.6 . Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias. 2.1. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli. . como el citoplasma de las células. C.

Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente.1 D-E. Fermentación característica de los géneros Enterobacter. para. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a. Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. b. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica. Fundamento.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4. en segundo lugar. continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). 6. Shigella. Fermentación butilén-glicólica.0). produciéndose acetoína como intermediario. Fermentación característica de los géneros Escherichia. acético.2 y 6. Serratia y la mayoría de especies Erwinia. PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP).Fig. . láctico y succínico) y etanol. Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico. Proteus.3. Salmonella. consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico. Yersinia. Fermentación ácido-mixta. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. 6.6 .

2. Fermentación ácido-mixta Fig. 6.3 Fermentación butano-diólica .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig. 6.6 .

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM). MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2. de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo. Añadir a 1 ml. Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos. más. de de caldo RMVP.6 . como consecuencia. En caso de duda incubar 48 h. 2. más.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1.5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . 5. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác. 6. Incubar 48 h a 37 ºC 3. 2. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. Añadir a 1 ml. de de caldo RMVP. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. 5. Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Procedimiento: 1. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+). de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. Incubar 48-72 h a 37 ºC. Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h. 4. Observar a las 2. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). (facilita la difusión del O2 atmosférico). 12 y 24 horas. 3.3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2.

4. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. y generalmente. La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. En una fermentación ácido-mixta simple.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas. La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. que fermentan sin producir gas. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) . La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica.6 . se clasifican como NO fermentadores de lactosa. La utilización efectiva de la Lactosa. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico. Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica. Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. unidos por el enlaces -1. Salmonella y Proteus. entre la glucosa y la galactosa). y ausente de Shigella. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi.

y cuando no existe. Algunas bacterias. Incubar a 37 ºC 18-24 h. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. junto con la eliminación del citrato (ácido). Es también un medio diferencial. Aeromonas hydrophila.. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. 2. Es un medio general rico en nutrientes. Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. Esperar hasta 5 min. Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo. Color verde intenso (+). . que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). AGAR FENILALANINA. En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina. Contiene citrato como única fuente de carbono. sobre todo los estreptococos. al hacerlo. Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. resultando un compuesto de coloración verde oscura. carotovara. Además es un medio diferencial. se habla de hemólisis tipo gamma. debido a una destrucción parcial de los hematíes. se denomina betahemólisis. Procedimiento: 1. Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. porque contiene lactosa y un indicador de pH.. I. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3. Erwinia herbicola. 4.6 . Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. F. de verde a azul. E. si es parcial alfa-hemólisis. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes. fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. Si la hemólisis que se produce es total . Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. AGAR SANGRE. H. AGAR CITRATO DE SIMMONS. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias. -hemólisis: Ausencia de halo claro. pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis). G. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia. liberando al medio los grupos amino (desaminación). Photobacterium phosphoreum B. Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. Resultados: Color inicial del medio (-). AGAR MC CONKEY. Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias.

generando ácidos que no serán neutralizados. Enzima hidrogenoliasa fórmica. por ejemplo. . la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). Como consecuencia. ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. e. que. además. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. En este caso. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. Por el contrario. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. La información que podemos obtener es la siguiente: a. el género Pseudomonas. No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color. fermenta la lactosa. Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. al no haber cambio de pH.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación. degradándose completamente hasta CO2. Como resultado. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis. rotura o elevación del agar del fondo del tubo. y. como. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. que se elimina y no modifica el pH. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa. reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. a su vez.6 . este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico. d. f. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas. tiosulfato sódico. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). b. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. c.1 % y lactosa al 1 %). AGAR KLIGLER (KIA). Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. Como consecuencia. el medio permanecerá de color rojo. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. los azúcares son respirados.1). Si la bacteria. provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo. 6. el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. el medio mantendrá su color rojo en la superficie.

(2) + + + + - .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.6 .

Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA. (2) Sólo en parte superior de la columna. y a veces formando anillo a las 48 h. + Enengrecimiento Formación de SH2 . Formación de ALCALI. sin producción de gas. No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado).6 . .

pero con un crecimiento muy pobre). En tubos de 5 ml colocar 0. Procedimiento 1. en su composición el único azúcar presente es el manitol. 5. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma. Homogeneizar con asa Kolle. AGAR MANITOL SAL.5 %) le proporciona su carácter selectivo. que transforma el fibrinógeno en fibrina. L. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. Staphylococcus aureus. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. Lecturas a la 1/2 .5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. 4 y 24 h. Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . dando un coágulo visible. Es una enzima semejante a la protrombina.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. 4. PRUEBA DE LA COAGULASA. Incubar 4 h a 37 ºC. Además. 3. mientras que Staphylococcus hepidermidis. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo. Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. que no fermenta el manitol. 2. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus.6 . La alta concentración de sal (NaCl al 7. diferenciándolas así de las que no lo son. fermentador del manitol. Fundamento.

6.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6.6. 3. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo. 4. Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. . Preparar dos placas de agar nutritivo. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas. Realizar la batería de pruebas IMVIC. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.6. 6. DIFERENCIACIÓN ENTRE E. 6. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer.7. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas. mediante la -galactosidasa. Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC". se utiliza la lactosa. Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa.6.H) .C. PRUEBAS IMVIC.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE.6 . o lactosa y peptona. (ver 6. Preparar un cultivo puro de E. 2. coli y E. 5. Incubar 48 h.coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas. Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias.D-E. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación. por lo que podrían falsear los resultados. I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1. a 37 ºC.

Conkey. Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa). Las pruebas del citrato. 6. Incubar a 37 ºC durante 24 h. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. sembrar en el medio agar manitol sal . Comprobar el aspecto de las colonias.Conkey si ha sido fermentada la lactosa. Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio. 8. 10. 5. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E. A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6. 4. 6. 3. A partir de cada tipo de colonia.6 . Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h. Incubar a 37 º C durante 24 h. agar fenilalanina. Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) . dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA). 7. y 6-2 identificar las bacterias analizadas.coli) y un coco Gram positivo S. Incubar a 37 º C durante 48 h. Si la prueba es positiva (aparición de burbujas). A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada. realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 .epidermidis). .del agar sangre y extenderla en el papel de filtro.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo. A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. Anotar los cambios de color en las distintas pruebas. 9. Procedimiento 1.4.5 %. excepto el agar de Kliger. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram . AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO.8. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo. caldo de triptona con NaCl al 0. y en la placa de agar Mc. 2. Con la ayuda de la tabla nº 6-1.. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. Para ello.

6.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig.1 .4 Tabla 6.6 .

API 10 S. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + . que originan una caída del pH. TDA: actividad triptófano-desaminasa. obteniéndose un precipitado negro. Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. Sin embargo. LDC: actividad lisina descarboxilasa.6 .. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III). actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos. Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano. (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa. El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono. El indicador virará de amarillo a rojo. produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). vire de amarillo a rojo. URE: actividad ureasa. salvo indicación. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos. mezclar líquido de microtubos distintos. . Procurar no producir burbujas. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. SISTEMA API. etc. ni llenar los microtubos demasiado. Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH. H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato. Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea..) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6. . liberando ortonitrofenol de color amarillo. ODC: actividad ornitina descarboxilasa. En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis.). API 10 S. GLU (glucosa). La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro. produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo. imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E. Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina.

tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC.8 % (NIT 1) y 2 gotas de N. Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h. Anotar nº de identificación de la muestra 2. 10. H2S .añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C. Humedecer la tapa con agua.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería. Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A. con aceite de parafina. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). y se emulsiona en agua estéril. 8. Una vez anotados los resultados obtenidos. IND . 9.añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. . URE . Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas. 6.6 . La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c. Preparar una cubeta de incubación con tapa. Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. OX . Eliminar el exceso de agua. llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC .añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa. Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. NO2 . D. La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N.5 % (NIT 2). Después de inocular. Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula. Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. para evitar evaporación. 4.N dimetil-alfa-naftilamina. TDA .N dimetil-alfa-naftilamina al 0. 5. 3. ODC . Procedimiento: 1. Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7. NO2: nitrato reductasa.

observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas.8 % y 2 gotas de N.añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %. el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo). un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6. (8) NO2 . (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %. (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos. Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo.6 . (6) IND . Después de varios minutos. .5 %. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis). Esto sucede con organismos TDA positivos. Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2.2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo. La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs. (5) TDA . Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa. Antes de añadir los reactivos. Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa. Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa. Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc. la oxidación en la cúpula.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs.N dimetil-alfa-naftilamina al 0.

6 . se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2). Los resultados pueden ser: A. como test 11 y 12. 2. Tabla 6. Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. Con la secuencia de 4 números encontrados. Codificación del germen. 4) B.3. 1. Positivo: Se anota el valor correspondiente (1. Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S. Negativo: Se anota un 0. se busca en las tablas a que bacteria corresponde.

674 2.524 3.402 4. agglomer.406 4.114 2.514 6.205 3.045 7.614 3.024 3.704 3.004 2.007 7.315 7.105 2.764 2.074 2.714 6./Salmon.000 7.104 2.245 2.125 7.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.214 7.234 2.107 3. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer. Enterobacter agglom.204 3.014 7.040 7.307 3.001 7.404 3.500 1. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.107 7.064 2.707 3.075 2.674 6.044 7.724 2.305 7.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer.035 2.254 2.045 2.055 2.507 3.004 3.504 2.005 7.665 2.401 7.115 7.405 7.422 4.406 3.204 7./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6.025 7.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1.105 7.224 2.224 3.614 6.707 6.6 .314 7.241 2.675 2.014 3.124 7.400 7.205 7.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) . Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.714 2.041 7.407 7.006 7.604 6. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb.005 3.407 3. pneumon.224 7.704 6. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.707 2. Enterobacter Enterobacter agglom.234 7.065 2. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.402 3.221 2.465 3. agglomer.freund.105 3.715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob.305 3.007 3.524 6.034 7.005 2.225 7.502 3.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.674 3.225 3.

426 2.045 6.434 7.406 6.644 2.405 2.307 2.314 2. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb.305 6. freund.205 6. pneumon.425 2.475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob. pneumon.624 7.615 7.400 6.304 6.000 6.265 2.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7. Klebsiella / Serratia Kleb.714 7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2.204 6.426 6.307 6.315 2.214 6. Enterobacter agglom agglomer.6 .605 7. pneumon.224 6.464 2.465 2.441 7.475 2.444 2.504 7.725 98 Citrobacter freundii Kleb.422 6.264 2.425 7.274 2. pneumon.414 6.005 6.706 7.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.654 2.704 7.305 2. oxytec Enterob.065 6.724 7.505 7.545 2.702 7.402 2.524 7. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer.714 7.104 6.474 2. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.225 6.265 6.374 2.415 7. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob.507 7.105 6.314 6./Salmon.440 7.004 6.624 2.445 6.444 7. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.404 2.445 2.634 7.604 7.525 7.274 6. oxytec .114 6. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.324 2. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.445 7.261 6.402 6.365 2.634 2.422 2.614 7.

rettgeri y Y.0003948 0. K.2535607 Suma total = 0.enterocolítica = 0. E.93 % 0.05 = 0.marcenses P.81 % % % 0.94 0. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99.enterocolítica + 0. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S.10 = 0. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada. Calculo probabilístico.28 0.0003948 % 0. La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos. P.enterocolítica Pruebas bioq.. Por ejemplo. Salmonella sp. En la tabla adjunta.0002940 % 0. A modo de ejemplo.0002940 0.2535607 0. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas.rettgeri = % 100 = 0.marcenses = 0. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas).30 0.0 Identificación aceptable 90. Edward tarda y P. S. etc.rettgeri Y.01 0.2542495 % 100 = 0.marcenses P.5 % se trata de la bacteria Y. 2075.6 . enterocolitica. 2055.34 = 0. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80.10.coli. 11 % % 100 = 99.03 0. neumoniae. Edward tarda. 0475.enterocolítica.oxytoca.99 % % % + 0. Shigella sp.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6. 72 % Y..9 " excelente . NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas).0 " buena 99.vulgaris.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S.0 " muy buena 99. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K.25442495 0. 6475.98 0. Ello nos indica un margen de fiabilidad. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas. 15 % P.rettgeri Y. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas.

mirabilis P. butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F. pneumoniae K.Proteus vulgaris 4 . CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. S. odorífera P.4. oxytoca E. alvei S. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A. C.6 . ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . coli Shigella sp. marcescens S. freundii K.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6. rettgeri Y. Edward.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S . vulgaris Prov. Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F. tarda Salmonella sp. liquefac.Klebsiella 5 . cloacae H.

a 37 ºC. en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1. Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes . anaerobias facultativas c. anaerobias obligadas b. anabolismo. Distingue entre los términos: metabolismo. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo. En que se distinguen las bacterias según sean: a. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5. catabolismo. aerotolerantes 2. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente. 3. 4. Se incuban los tubos 48 h. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado.

respecto a: a. Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a. ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12. Sangre c.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 . ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7.Fermentación de lípidos G . 11.Fermentación ácido-mixta B . ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA.Fermentación de proteínas E .Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 .Hemólisis 1 .Respiración anaeróbica J . Manitol sal 13. Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c. A.Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . Describe la función del ATP 8.Agar Sangre 10 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6. Levine e.Respiración I .Coenzima Citocromo c 7.Prueba de la catalasa 9 . Tipo de sustrato que ha fermentado b. Solución Ringer g.Fermentación de lactosa C . Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A .Desaminación/descarboxilación 5 . ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9.Enzima -galactosidasa 6 . Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15.Fermentación butanodiólica F . A. A. ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10.Agar Citrato .Fermentadoras tardías de lactosa H . Mc Conkey d. Citrato f. TSA b.Prueba de la ONPG 2 .Aerobios/Anaerobios facultativos D . RMVP i. El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14.6 . A. TSB h.

Respiración anaeróbica D .Fermentación butanodiólica F . justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17.Respiración C . Proteus vulgaris .coli. 18. 24.N02.ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 . La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis. Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa. Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar.6 . La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis. podemos asegurar que ha habido respiración. De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6.. Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar.Fermentación de proteínas E . En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones.4 ).. 25. En una fermentación. no puede respirar. SO32-. Pueden obtener energía por respiración y por fermentación.Indol 7 .Fermentación ácido-mixta B . Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado.. 23. 31.Fermentación homoláctica G . 26. 22. nunca respiración. 29.Fermentación heteroláctica 1 . Las enterobacterias son anaerobias facultativas. 27.. Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta.. de las bacterias: E.. 32. 21. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16.. 19. Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa. Si se produce CO2 . En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación.Acetoína 5 . Salmonella sp.ácido láctico 2 . Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones.ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 . 20. 28. 30.

35. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes".4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido. Consultando la tabla pag.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33. Utilizando la tabla 6.3 a que bacteria corresponde. Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a. Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag. Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. 83. b. Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. . 87-88) con Pseudomona aeruginosa.6 .

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