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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

. Hay que remarcar. bacterias rojas no S) 3. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. al igual que la fermentación. b. El oxígeno es. sino pérdida de hidrógeno. cianobacterias. Fe2+. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. que el proceso respiratorio. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. CO. simplemente. Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias. inorg. se clasifican según sea: a.6 . Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz. org) En general. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación. es un proceso de oxidación. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas.) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2. bacterias rojas del S) 2. Cuando en los lagares.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. Los tipos nutricionales en este reino. Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. hongos.. el aire no entra en contacto con la levadura. como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) . H2S. 1. S. degradando la glucosa por vía respiratoria. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración. NH3. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol. basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos.) Órgano (comp.

2. H2. Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica). Cianobacterias. de color rojo. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. Son bacterias unicelulares acuáticas . Bacterias rojas y verdes.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. materia orgánica).6 . sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S. . naranja o verde. No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos. La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1.

materia orgánica (según grupos).o.a NO3NH3 -----.-----------> NO3S0. H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica.a. en parte en simbiosis con plantas superiores. Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica. son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2. Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas. S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar.-----> NO2NO2. El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil. La Nitrobacterias (Nitrosomas. a través de la respiración con O2 y sólo escasos m. En parte en formas de vida libre.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m.6 .) . Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono.y éste a su vez de NO2. Nitrobacter). Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo.a.) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha. N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha. pueden utilizar NO3-. Fuente de carbono: CO2. NO2-. N/(Ha. S (según grupos). por lo general.a. N2O como aceptor de electrones (R. S2-.anaerobia). H2.) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg. verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides. de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul.

Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus. hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . metano y otros de olor fétido. II. Láctica. el nidol y el escatol. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. Ácido mixta. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. 1 la enzima -galactosidasa permite a estos m. I. Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos. dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. hidrógeno. como el sulfuro de hidrógeno. Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). vino. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica. Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos. Vía lenta. queso.. la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos. ) b. aparecen ademas del ácido láctico. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y. sidra. cerveza. a. Fermentación heteroláctica. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky. Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. 2.o..butílica (típica de anaerobios) 4. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera.4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1.. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos)..6 . Fermentación propiónica. NO3sulfato. N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4.. 6. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono. dióxido de carbono. se producen también ptomaínas (muy tóxicas). azufre CO2. (Corynebacterium) 3. CO32Fe3+ -------> N2. leche ácida. Butanodiólica 1. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. Fermentación butírica .

para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno. por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre).6 . será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. . CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas). Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato.5. que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas. proteínas y lípidos. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. 1. en sus respectivas unidades de construcción. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino.o. las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. al aplicarlo también. La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético. Los m. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. para poder permanecer en contacto con el aire. tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. 6.

Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH). Proteínas completas: Gelatina..lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------. sobre todo en la superficie del medio. La glucosa es fermentada y acidifica el medio. La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores. Mycoides. Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa).(TDA 4) II. Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N . aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido. La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo. uno de los componentes del tejido conjuntivo. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol. 3 GLU. por la enzima descarboxilasa. Alrededor de las colonias que poseen amilasa. Proteína derivada del colágeno. C. Pseudomonas. B. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas.. a. ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA.Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa. dando color azul intenso. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2). Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. este reacciona con el almidón. ornitina 6 ..(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 . 3.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---.. La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa.Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC .proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2. Aminoácidos lisina 5. PRÓTIDOS. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey.En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso.). Proteus vulgaris.amilasa --------> Maltosa ---------.) en glucosa y galactosa. Aminoácidos.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------.6 . 2 ONPG . La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2. KIA. ARA3). Se pueden degradar de tres formas: I. HIDRATOS DE CARBONO A. Disacáridos.

se descarta el grupo de enterobacterias. De esta forma si da un resultado positivo. Prueba de RM II. . La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono. Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a.---------> N2.-------> NO2. antes de empezar con la galería. El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . Butanodiólica. Ácido mixta. metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S. LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos . Prueba VP 6 ODC .6) 11 OX . La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III. Catalasa12.Detección de la enzima respiratoria citocromo c. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7.H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT.La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína. NH3. reducción de nitratos13) b. N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo).Degradación anaeróbica de aminoácidos. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7.Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3. Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S . Fermentación (amplia variedad de tipos) I. Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia. VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a. Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11. Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . Derivados de aminoácidos: Urea 9 1.6) 2. en un papel de filtro. Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE .La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R.6 .

c. 5. palillo de madera). pipeta de plástico. Fig.4 % de agar). DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. Sembrar en estría escocesa. 2. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar. Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino. Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1. dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. Procedimiento 1. 4. Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). no tiene color o es ligeramente rosado. una vez preparado. Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez. e. en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0. Incubar a 37 ºC durante 48 h.1 %. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre. oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) . PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador. 6. DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. Las bacterias productoras de oxidasa.6 A. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz. El reactivo. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma. 3.6 . torunda algodón impregnada. 6.1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). para obtener colonias aisladas. A causa de la capacidad de autooxidación que tiene. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. d. b.

Entre estas enzimas se encuentra la catalasa. al añadir al medio el reactivo de Kovacks. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli.6 . Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol.1. compuesto que se determina en el ensayo. El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. Lectura de resultados. 6. Para realizar esta prueba. En los ambientes acuosos. como el citoplasma de las células. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. . Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). Añadir a 1 ml. que contienen oxígeno disuelto. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. dejándolo caer por la pared interior del tubo. Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta. 3. aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. Procedimiento 1. Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. PRUEBA DEL INDOL Fundamento.Fig. C.1 Procedimiento 1. a 37 ºC 3.5 % (medio especialmente rico en triptófano). Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. 2. 2. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Incubar 24 h. Fig 6. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. Si la reacción es positiva.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias.

b. acético. Fermentación ácido-mixta. para. en segundo lugar. 6. consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). Fundamento. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica. Fermentación característica de los géneros Enterobacter. Shigella.Fig. produciéndose acetoína como intermediario. PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP). 6.2 y 6.0). la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig.3. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente. Serratia y la mayoría de especies Erwinia.6 . Fermentación butilén-glicólica.1 D-E. láctico y succínico) y etanol. Proteus. Salmonella. . Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico. Yersinia. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4. Fermentación característica de los géneros Escherichia.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig. 6. 6. Fermentación ácido-mixta Fig.2.3 Fermentación butano-diólica .6 .

sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. (facilita la difusión del O2 atmosférico).6 . de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. 2. Procedimiento: 1. 12 y 24 horas. MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM). sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. Observar a las 2. Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. 5. 6. 5. de de caldo RMVP. más. pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác. como consecuencia. Añadir a 1 ml. 3. 4. Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+). Añadir a 1 ml.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos. Incubar 48 h a 37 ºC 3.3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2. 2. Incubar 48-72 h a 37 ºC. de de caldo RMVP. En caso de duda incubar 48 h. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo.5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . Sembrar en 2 tubos con 5 ml. más.

también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. unidos por el enlaces -1. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A.4. En una fermentación ácido-mixta simple. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. y ausente de Shigella.6 . La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. se clasifican como NO fermentadores de lactosa. Salmonella y Proteus. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas. La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. y generalmente. La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. La utilización efectiva de la Lactosa. que fermentan sin producir gas. La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) . entre la glucosa y la galactosa). Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi.

liberando al medio los grupos amino (desaminación). En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina. debido a una destrucción parcial de los hematíes. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A.. 2. H. de verde a azul. utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. Aeromonas hydrophila.6 . Color verde intenso (+). Incubar a 37 ºC 18-24 h. y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3. AGAR CITRATO DE SIMMONS. fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. se denomina betahemólisis. . Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. Erwinia herbicola. G. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. Algunas bacterias. que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. F. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). y cuando no existe. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico). AGAR SANGRE. se habla de hemólisis tipo gamma. Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes. E. Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis). sobre todo los estreptococos. Además es un medio diferencial. Procedimiento: 1. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. Si la hemólisis que se produce es total . Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. -hemólisis: Ausencia de halo claro. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. 4. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo. resultando un compuesto de coloración verde oscura. AGAR FENILALANINA.. Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia. porque contiene lactosa y un indicador de pH. Es un medio general rico en nutrientes. junto con la eliminación del citrato (ácido). al hacerlo. Esperar hasta 5 min. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. carotovara. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. AGAR MC CONKEY. si es parcial alfa-hemólisis. I. Es también un medio diferencial. Resultados: Color inicial del medio (-). Photobacterium phosphoreum B. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia. Contiene citrato como única fuente de carbono.

produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso. citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. el género Pseudomonas. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. Si la bacteria. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). rotura o elevación del agar del fondo del tubo. los azúcares son respirados. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa.1 % y lactosa al 1 %). degradándose completamente hasta CO2. Enzima hidrogenoliasa fórmica. Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). d. provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. b. Como resultado.6 . No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color. Como consecuencia. por ejemplo. tiosulfato sódico. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas. que.1). reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. fermenta la lactosa. f. el medio mantendrá su color rojo en la superficie. La información que podemos obtener es la siguiente: a. la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. como. a su vez. Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. Como consecuencia. En este caso. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. generando ácidos que no serán neutralizados. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. y. al no haber cambio de pH. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. c. AGAR KLIGLER (KIA). Por el contrario. además. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. que se elimina y no modifica el pH. este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico. e. . 6. el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. el medio permanecerá de color rojo. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación.

6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.(2) + + + + - .

+ Enengrecimiento Formación de SH2 . No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado). .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA. sin producción de gas. Formación de ALCALI.Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A. y a veces formando anillo a las 48 h.6 . (2) Sólo en parte superior de la columna.

L. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. fermentador del manitol.6 . En tubos de 5 ml colocar 0. 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. Además. 3. inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma. 4 y 24 h. AGAR MANITOL SAL. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . 5. Lecturas a la 1/2 .5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. diferenciándolas así de las que no lo son. Incubar 4 h a 37 ºC.5 %) le proporciona su carácter selectivo. que transforma el fibrinógeno en fibrina. que no fermenta el manitol. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo. 4. Es una enzima semejante a la protrombina. Procedimiento 1. Fundamento. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus. dando un coágulo visible. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. PRUEBA DE LA COAGULASA. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. Homogeneizar con asa Kolle. Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. La alta concentración de sal (NaCl al 7. Staphylococcus aureus. en su composición el único azúcar presente es el manitol. pero con un crecimiento muy pobre). Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. mientras que Staphylococcus hepidermidis.

mediante la -galactosidasa. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas.C. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. 5. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias. I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE. Preparar un cultivo puro de E.6. 6. PRUEBAS IMVIC. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer. Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. Realizar la batería de pruebas IMVIC.6. coli y E. 6.7. a 37 ºC. DIFERENCIACIÓN ENTRE E.coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada. 2. o lactosa y peptona.H) . Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E. Incubar 48 h. por lo que podrían falsear los resultados. 4.6 . se utiliza la lactosa. . Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas. Preparar dos placas de agar nutritivo. Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC". 3. (ver 6.6. 6.D-E. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas.

Si la prueba es positiva (aparición de burbujas). 6. excepto el agar de Kliger. Incubar a 37 ºC durante 24 h. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo. Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) . Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. A partir de cada tipo de colonia.6 . A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa. Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 . Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa). 7.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo. .del agar sangre y extenderla en el papel de filtro. y en la placa de agar Mc. y 6-2 identificar las bacterias analizadas. 10. Incubar a 37 º C durante 24 h.4. dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA). 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6.Conkey si ha sido fermentada la lactosa. caldo de triptona con NaCl al 0.5 %. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada. Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. sembrar en el medio agar manitol sal . 8. Para ello.Conkey. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. Con la ayuda de la tabla nº 6-1. agar fenilalanina. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram . 3. realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa. 6. Anotar los cambios de color en las distintas pruebas. 4. 5. Las pruebas del citrato. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio.epidermidis). 9.. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. Comprobar el aspecto de las colonias. A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO. Incubar a 37 º C durante 48 h.8.coli) y un coco Gram positivo S. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio. Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E. Procedimiento 1.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig.4 Tabla 6. 6.1 .6 .

produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). API 10 S.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + . Sin embargo. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III).). El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos. actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos. TDA: actividad triptófano-desaminasa. Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea. GLU (glucosa). URE: actividad ureasa. obteniéndose un precipitado negro. . CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono.) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. El indicador virará de amarillo a rojo. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina. liberando ortonitrofenol de color amarillo. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol. H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato. que originan una caída del pH. Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6.. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa. En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro. salvo indicación. vire de amarillo a rojo. etc. LDC: actividad lisina descarboxilasa. Procurar no producir burbujas. Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul. (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa. El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E. SISTEMA API. Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano.. API 10 S.6 . . mezclar líquido de microtubos distintos. produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo. ni llenar los microtubos demasiado. ODC: actividad ornitina descarboxilasa.

Humedecer la tapa con agua. Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7. con aceite de parafina. 5. Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. NO2 . 6.añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo.añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. ODC . H2S . 8. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. OX . IND . TDA . Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias. NO2: nitrato reductasa.6 . 4. 9. Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas.N dimetil-alfa-naftilamina. apareciendo una coloración azul (forma oxidada).8 % (NIT 1) y 2 gotas de N. para evitar evaporación.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa. ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería. Una vez anotados los resultados obtenidos. 3. Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c. Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. Anotar nº de identificación de la muestra 2. Después de inocular. Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0.N dimetil-alfa-naftilamina al 0. D. La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N. Procedimiento: 1.5 % (NIT 2). y se emulsiona en agua estéril. 10. URE . el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A. . Preparar una cubeta de incubación con tapa. Eliminar el exceso de agua. tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC. Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC .añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C.

Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos.N dimetil-alfa-naftilamina al 0.8 % y 2 gotas de N.6 . Esto sucede con organismos TDA positivos.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. la oxidación en la cúpula.5 %. La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs. (5) TDA . (6) IND . un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno. Después de varios minutos. observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo. (8) NO2 .añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %. Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa. (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis). el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo).2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo. . (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %. Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs. Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2. Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa. Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc. Antes de añadir los reactivos.

Positivo: Se anota el valor correspondiente (1. Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 .6 . 2. se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2). Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. 1. 4) B.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S. Con la secuencia de 4 números encontrados.3. como test 11 y 12. Tabla 6. se busca en las tablas a que bacteria corresponde. Negativo: Se anota un 0. Codificación del germen. Los resultados pueden ser: A.

402 3.675 2.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.704 3.234 7.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) .715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob.014 7.406 4.724 2.764 2.315 7.074 2.502 3.6 .614 6.665 2./Salmon.500 1.514 6.007 3.001 7.034 7.124 7.107 7.404 3.105 3.105 7.314 7.205 3.401 7.674 3.714 6.305 7.025 7.005 3.040 7.406 3.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.402 4.707 3.065 2.307 3.205 7.714 2.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1.614 3.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.014 3.204 7.241 2.465 3. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.224 3. Enterobacter Enterobacter agglom.224 7.674 6. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6.234 2.707 2.305 3.704 6.007 7.041 7.707 6. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb.044 7.freund.005 7. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.407 7.035 2.104 2.064 2.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.004 3.524 6. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.204 3.107 3.045 7.000 7.005 2.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.524 3.405 7.055 2.225 3. Enterobacter agglom. pneumon.004 2.024 3.604 6.105 2.221 2.045 2.125 7. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.225 7.400 7.115 7.114 2.674 2. agglomer.075 2.507 3. agglomer.407 3.224 2.214 7.504 2.422 4./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.006 7.254 2.245 2.

045 6.505 7.444 2.400 6.525 7.445 6. pneumon.265 6.305 2.324 2.304 6.205 6.105 6.405 2. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.604 7.415 7.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7.274 6.225 6.714 7.307 2.365 2.261 6.314 2.614 7.214 6.434 7.264 2.445 2.402 2.441 7.425 2. oxytec .464 2.465 2.402 6.065 6./Salmon.615 7.714 7.524 7.314 6. oxytec Enterob.724 7. Klebsiella / Serratia Kleb.426 2. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.6 .114 6. pneumon. Enterobacter agglom agglomer. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.004 6.654 2.224 6.702 7.475 2.725 98 Citrobacter freundii Kleb. pneumon.624 7.425 7.644 2.426 6.422 2.307 6.422 6.274 2.545 2.414 6.404 2.204 6.624 2.305 6.005 6. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob.374 2.605 7.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.634 2. freund.315 2.474 2.265 2.440 7.634 7.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2.507 7. pneumon.000 6.104 6.444 7.475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E.445 7. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb.504 7. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob.406 6.704 7.706 7.

enterocolítica + 0. A modo de ejemplo. neumoniae.. rettgeri y Y.0 Identificación aceptable 90.01 0.94 0.99 % % % + 0. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas).oxytoca. Edward tarda y P.0003948 0.25442495 0. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas.enterocolítica.marcenses = 0.03 0. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada. Salmonella sp.coli.81 % % % 0. 2075.10 = 0.0002940 0. S.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S. 6475.30 0. 15 % P. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas.10.98 0.vulgaris.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99.05 = 0.2535607 0. NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas). La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos..marcenses P. P. En la tabla adjunta.rettgeri Y.0003948 % 0.6 .9 " excelente . etc. E. 2055. 11 % % 100 = 99.rettgeri = % 100 = 0.enterocolítica = 0. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075.marcenses P.0 " muy buena 99. enterocolitica. Shigella sp.rettgeri Y.enterocolítica Pruebas bioq. 72 % Y. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S. Por ejemplo.28 0. K.5 % se trata de la bacteria Y.0 " buena 99.93 % 0. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K.34 = 0. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6.2535607 Suma total = 0. Calculo probabilístico. Ello nos indica un margen de fiabilidad.0002940 % 0. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas. 0475. Edward tarda.2542495 % 100 = 0.

freundii K. alvei S. vulgaris Prov. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6. rettgeri Y.6 .4.Proteus vulgaris 4 . tarda Salmonella sp. oxytoca E. odorífera P. pneumoniae K. ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . coli Shigella sp. butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S .Klebsiella 5 . Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F. mirabilis P. S. liquefac. CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. Edward. C. marcescens S. cloacae H.

anabolismo. En que se distinguen las bacterias según sean: a. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5. aerotolerantes 2. Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2. anaerobias facultativas c. a 37 ºC. Distingue entre los términos: metabolismo. anaerobias obligadas b. 4. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes . Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. Se incuban los tubos 48 h. 3.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1.6 . en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado. catabolismo. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente.

TSA b.Desaminación/descarboxilación 5 .6 . A. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . Levine e.Agar Citrato . Solución Ringer g. Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15.Fermentación de lípidos G .Coenzima Citocromo c 7.Prueba de la ONPG 2 .Respiración anaeróbica J . Manitol sal 13. Describe la función del ATP 8.Fermentación de lactosa C . ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10.Fermentadoras tardías de lactosa H . ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12. Sangre c.Agar Sangre 10 .Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7.Respiración I .Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 . respecto a: a. Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a. A.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 . Tipo de sustrato que ha fermentado b.Hemólisis 1 .Enzima -galactosidasa 6 . El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14.Fermentación butanodiólica F . RMVP i. Citrato f. A.Prueba de la catalasa 9 . ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9. ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6. Mc Conkey d. TSB h. A.Aerobios/Anaerobios facultativos D . Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c. 11.Fermentación de proteínas E .Fermentación ácido-mixta B .

ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 .. 18. 31. Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones. no puede respirar. 19. de las bacterias: E. En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones.Fermentación butanodiólica F .Fermentación heteroláctica 1 .Acetoína 5 . Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta..Fermentación ácido-mixta B . En una fermentación. podemos asegurar que ha habido respiración. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. 30. Si se produce CO2 .coli. 24...Indol 7 . nunca respiración.Fermentación homoláctica G .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16. De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6. 28. La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis. Salmonella sp.Respiración C . Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17. 27. justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . 32. 29. Pueden obtener energía por respiración y por fermentación..Fermentación de proteínas E . En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación. 22.4 ).ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 . Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa.Respiración anaeróbica D .ácido láctico 2 . Proteus vulgaris . Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa. 23. 20. Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar.N02.. Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar. 25. SO32-. Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa. 26.6 . Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . Las enterobacterias son anaerobias facultativas. La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis. 21..

.3 a que bacteria corresponde.4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido. 35. Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a. b. Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. Utilizando la tabla 6. 83. 87-88) con Pseudomona aeruginosa. Consultando la tabla pag. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes". Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33.