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6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA 6.1. INTRODUCCIÓN La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características tintoriales, morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se basa en la habilidad de las bacterias de producir enzimas fácilmente detectables, en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, etc. Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivo diseñados no sólo para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir los de otros (medios selectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios diferenciales). Como la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su multiplicación y liberando al medio productos de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características. Esta especificidad depende del genotipo de la bacteria y se expresa en un determinado equipo enzimático. La caracterización de dichas enzimas es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana. 6.2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Un ser vivo se define principalmente por desarrollar una serie de actividades biológicas, durante su ciclo vital. Ésta actividad biológica consiste en un variedad de reacciones físicoquímicas que transcurren en el marco de las células y denominamos como bioquímica. El conjunto de reacciones que puede realizar un ser vivo se llama metabolismo y engloba tanto las reacciones de degradación (catabolismo) como de síntesis (anabolismo). Las reacciones parten de una base denominada nutriente o sustrato, a partir de la cual se obtiene la energía y las moléculas necesarias para formar sus propios compuestos. Las bacterias forman un grupo muy heterogéneo, ya que la diversidad de especies existentes, pueden realizar todo tipo de metabolismo. Algunas especies poseen dos tipos de metabolismo diferente que utilizan facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Requerimientos químicos Carbono. Los microorganismos son extraordinariamente diversos tanto respecto a la clase como al número de compuestos orgánicos que pueden usar como fuente principal de carbono y energía. Esta diversidad, se manifiesta en el hecho de que no hay ningún compuesto orgánico que exista en la naturaleza que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energía por algún organismo. Los organismos que realizan la fotosíntesis y las bacterias que obtienen la energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (quimiolitótrofas) usan típicamente la forma mas oxidada del Carbono, el C02, como única o principal fuente de Carbono celular.

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Todos los demás organismos obtienen el carbono principalmente a partir de nutriente orgánicos. Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc., e incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón. Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía. Por último, existen especies, como por ejemplo Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes. En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica. Nitrógeno, azufre, fósforo El nitrógeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgánicos de la célula principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. La mayoría de los organismos fotosintéticos, así como muchas bacterias no fotosintéticas y hongos, asimilan estos dos elementos en estado orgánico oxidado, como nitratos y sulfatos, su utilización implica, pues, una reducción preliminar. Los requerimientos de nitrógeno y azufre pueden satisfacerse también con frecuencia, con nutrientes orgánicos que contengan estos dos elementos en combinación orgánica reducida (aminoácidos o productos más complejos de la degradación de las proteínas, como las peptonas). Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo. Fósforo, la fuente habitual de este elemento lo constituyen los fosfatos. Iones metálicos (K, Mg, Fe, Zn, Mn, Co, etc.)
RESPIRACIÓN. El oxígeno se encuentra a disposición de las células en forma de agua. Está

contenido además en el anhídrido carbónico y en muchos compuestos orgánicos. Muchos microorganismos necesitan además oxígeno molecular (O2). En función del requerimiento de oxígeno para la respiración celular: a. aerobios obligados o estrictos, sólo pueden obtener energía mediante la respiración y necesitan O2. Entre los microorganismos que son aerobios estrictos, algunos crecen mejor a presiones parciales de oxígeno considerablemente mas bajas que las presentes en el aire. Se denominan mícroaerófilos. b. anaerobios obligados, sólo crecen en un medio exento de O2, el O2 es tóxico para ellos.

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c. anaerobios facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: aerotolerantes, bacterias del ácido láctico, aunque pueden crecer en presencia de O2, no pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación. anaerobias facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energía tanto por respiración (en presencia de O2), como por fermentación (en ausencia de O2). 6.3 RESPIRACIÓN Y FERMENTACIÓN Una vez que la glucosa se ha degradado a ácido pirúvico, este ácido puede seguir oxidándose por la vía de la respiración o la fermentación. La RESPIRACIÓN (fosforilación oxidativa) es un proceso, en el que funciona una cadena transportadora de electrones mediante coenzimas que se reducen, hasta llegar a una molécula inorgánica, que actúa como aceptor final de electrones (generalmente el O2). La oxidación produce energía en forma de ATP. Respiración aeróbica se llama así cuando el aceptor final de hidrógeno (electrones) es el oxígeno molecular O2. Respiración anaeróbica es aquella en la que el aceptor final de hidrógeno (electrones) es una molécula inorgánica distinta del oxígeno molecular, como iones nitrato, sulfato o carbonato. FERMENTACIÓN Este proceso se inicia a partir del ácido pirúvico, tiene como características fundamentales: 1. No requiere oxígeno (aunque a veces puede ocurrir en su presencia) 2. No necesita cadenas transportadoras de electrones (ciclo de Krebs) 3. Utiliza moléculas orgánicas como aceptor final de electrones 4. Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas orgánicas como aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. 5. Tiene un rendimiento menor que la respiración En la respiración toda la energía de la glucosa se aprovecha, ya que los productos finales CO2 y H2O están exentos de energía. En cambio, en la fermentación; al dar como productos finales CO2 y un compuesto orgánico (etanol, ácido láctico) todavía dotado de energía, significa un aprovechamiento incompleto de las posibilidades energéticas de la glucosa. La fermentación es un sistema utilizado frecuentemente por algunos m.o. como, levaduras y determinadas bacterias). También en algunas células animales y plantas en condiciones especiales. Algunas células (anaerobias estrictas) realizan la fermentación porque carecen de la dotación enzimática precisa para la respiración; pero es frecuente que esta se produzca cuando las células no tienen a su disposición el oxígeno (anaerobia facultativas). Esta circunstancia se da en las levaduras.

bacterias rojas del S) 2.. S.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 72 Las levaduras actúan sobre el mosto. Cuando en los lagares. cianobacterias. que el proceso respiratorio. es un proceso de oxidación. inorg. Dadores de hidrógeno y fuentes de carbono Organotrofos Utilizan sustancias orgánicas como dadores de hidrógeno Litotrofos Utilizan dadores de hidrógeno inorgánicos (H2. Metabolismo: Los conceptos “heterotrofo” y “autotrofo” pensados para denominar los tipos de nutrición de animales y plantas. Foto lito trofoh Fotoautolitotrofo (plantas. simplemente. el aceptor final de hidrógeno en la respiración. Fe2+. hongos. se inicia entonces la fermentación de la glucosa con la correspondiente formación de alcohol.6 . basta con indicar el proceso de obtención de energía y el dador de hidrógenos. respecto al papel que desempeña el oxígeno en la respiración.) Estos términos “organotrofos” y “litotrofos” sustituyen a los tradicionales: Autotrofo obtienen la mayoría del carbono por fijación del CO2. CO. H2S. el aire no entra en contacto con la levadura. Quimiotrofas (Quimio) obtienen la energía por reacciones red-ox degradando sustancias independientemente de que realizen respiración o fermentación. Fuente de energía Fototrofas (Foto) obtienen la energía directamente de la luz. Quimio lito trofo h Quimioautolitotrofo (bacterias nitrificantes) 4. por efecto de la acumulación del CO2 encima del mosto. bacterias rojas no S) 3. El oxígeno es. Foto órgano trofo h Fotoheteroórganotrofo (Piloodobacterias. 1. al igual que la fermentación. pero en el que esta oxidación sucede no por ganancia de oxígeno. como lo son otros compuestos orgánicos en la fermentación.) Órgano (comp.. Quimio órgano trofo h Quimioheteroórganotrofo (animales. NH3. sino pérdida de hidrógeno. org) En general. bacterias) (1 y 4 ------------> Eucariotas) . Hay que remarcar. Energía Foto (luz) Quimio Fuente de C auto (CO2) Hetero dador de electrones Lito (comp. se clasifican según sea: a. Heterotrofo extraen el carbono celular de sustancias orgánicas. no son suficiente para caracterizar la variedad de tipos nutricionales que se dan en los microorganismos. b. Los tipos nutricionales en este reino. degradando la glucosa por vía respiratoria.

de color rojo. materia orgánica). naranja o verde. Se las considera como reliquias de los primeros tiempos de la fotosíntesis. Bacterias rojas y verdes. Utilizan agua como dador de hidrógenos y liberan oxígeno en presencia de la luz solar (fotosíntesis oxigénica).6 . No pueden utilizar el H2O como dador de hidrógenos. H2. Como consecuencia estas bacterias no liberan oxígeno durante la fotosíntesis (fotosíntesis anoxigénica). en función del contenido que posean de pigmentos fotosintéticos: bacterioclorofilas y carotenoides. . sino que necesitan un dador de [H] fuertemente reducido (H2S. Son bacterias unicelulares acuáticas . La capacidad de utilizar la luz como fuente de energía para el crecimiento es propia de dos grupos de bacterias: 1. 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 73 Bacterias fototróficas. Cianobacterias.

Bacterias aeróbicas quimiolitotrofas. verde-azul (450-500 nm) que corresponde a la zona de absorción de los carotenoides. pueden pasar al N2 inerte a una combinación orgánica. de profundidad) se da un crecimiento estacional de las bacterias rojas del azufre por darse condiciones para su crecimiento: Radiación solar en la zona del espectro azul. S2O32--------------> SO42Fe2+ --------------> Fe3+ Nitrosomas Nitrobacter Thiobacillus thiooxidans Thiobacillus ferrooxidans La obtención de energía tiene lugar.a.y éste a su vez de NO2. S2-.) . son bacterias nitrificantes que oxidan el NH4+ (liberado en el proceso de descomposición microbiana de la materia orgánica) a NO2.) Los microorganismos de vida libre fijadores de N2 aportan al suelo entre 1-3 Kg.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 74 En las zonas anaeróbicas de los lagos (10-30 m. Fuente de carbono: CO2.a.6 . H2. La Nitrobacterias (Nitrosomas. en parte en simbiosis con plantas superiores.-----> NO2NO2.a. H2S (descomposición sulfatos y proteínas) CO2 y materia orgánica. por lo general. N/(Ha. incorporándolo directamente (Rhizobium) o a través de las sustancias celulares a la proteína del suelo.anaerobia). NO2-. Hay grupos con capacidades de desarrollo diversas: anaeróbicamente con luz y aeróbicamente en la oscuridad anaeróbicos estrictos y fototrofos obligados Dador de hidrógenos: H2S. materia orgánica (según grupos). Bacterias de suelos y aguas con capacidad de utilizar compuestos o iones inorgánicos como dadores de hidrógenos y CO2 como fuente de carbono.-----------> NO3S0. En parte en formas de vida libre. N2O como aceptor de electrones (R.) Las lluvias pueden aportar al suelo entre 3-30 Kg N/(Ha. S (según grupos). Fijación del nitrógeno molecular: Solo algunos procariotas son capaces de captar y fijar el nitrógeno atmosférico (N2). N2 + 8 [H] -------> 2 NH3 + H2 La fijación simbiótica del N2 por leguminosas (Rhizobium) produce 100-300 Kg N/(Ha.o. Nitrobacter). pueden utilizar NO3-. El metabolismo de las bacterias fototróficas representa el grupo de organismos metabólicamente más versátil.a NO3NH3 -----. a través de la respiración con O2 y sólo escasos m.

Fermentación heteroláctica. leche ácida.. como el sulfuro de hidrógeno. dependiendo de la cepa de levadura y del proceso de fabricación. Respiración anaeróbica como forma predominante en las primeras etapas de formación de la biosfera en la Tierra (almacenamiento de carbono orgánico en los sedimentos arcaicos). Fermentación alcohólica el ácido pirúvico se transforma en etanol y dióxido de carbono (típica en levaduras muy rara en bacterias). hidrolizar la lactosa en glucosa-galactosa . Homoláctica se produce únicamente ácido (Lactobacillus. Fermentación pútrida o PUTREFACCIÓN Consiste en la desintegración de las grandes moléculas proteicas de los residuos vegetales y cadáveres animales llegando a formarse aminoácidos.6 . Streptococcus en la producción de derivados de la leche1 : yogur. otros compuestos como etanol o dióxido de carbono.o. Fermentación butírica . Fermentación propiónica.. (Corynebacterium) 3. hidrógeno. Tipos de fermentaciones anaeróbicas puesto que la vida surgió en una atmósfera carente de oxígeno. metano y otros de olor fétido. o que estas no han utilizado (final cadena alimentaria). 6.. II. vino. ) b.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 75 Respiración anaerobia: En sedimentos. La fermentación de los polisacáridos de la harina en el proceso de fabricación del pan es también un ejemplo de fermentación alcohólica.. queso. Cuando los campos no están bien aireados se produce un proceso de desnitrificación por la respiración de los nitratos.. NO3sulfato. dióxido de carbono. Ácido mixta. Butanodiólica 1. se originan gran variedad de bebidas alcohólicas: wisky. Esta fermentación la realizan levaduras del tipo Saccharomyces y. la fermentación anaeróbica constituye el mecanismo biológico mas primitivo destinado a obtener energía de los alimentos. 2. a. se producen también ptomaínas (muy tóxicas). Láctica.4 VÍAS FERMENTATIVAS DEL ÁCIDO PIRÚVICO: 1. CH3COOH --------> Fe2+ Los respiradores anaeróbicos tienen gran importancia por: Ciclos de los elementos y mantenimiento de los equilibrios en la biosfera. Vía lenta. 1 la enzima -galactosidasa permite a estos m. azufre CO2.butílica (típica de anaerobios) 4. lagunas y suelos permanentemente inundados (condiciones anóxica) se desarrollan bacteria que utilizan como fuente de carbono y dadores de hidrógeno los compuestos producidos por las bacterias fermentadoras. cerveza. sidra. Se produce ácido láctico en la fermentación del pirúvico. El dióxido de carbono es el responsable del ahuecamiento de la masa y tanto el como el alcohol desaparecen en el proceso de cocción. el nidol y el escatol. N2O (óxido nitroso) -----> H2S -------> CH4. CO32Fe3+ -------> N2. En este proceso se liberan gases como el amoníaco. I. aparecen ademas del ácido láctico.

al aplicarlo también.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 76 Fermentación acética El término fermentación se suele utilizar en un sentido más amplio. las reacciones bioquímicas son un carácter taxonómico. 6. .6 . aunque el producto final es un compuesto orgánico y por tanto no hay degradación completa de la materia orgánica (fermentaciones oxidativas). será preciso que disponga del equipo enzimático adecuado. ENZIMAS EXTRACELULARES: Las biomoléculas de estructura polimerizada como almidón. en sus respectivas unidades de construcción. por un proceso de oxidación en presencia de oxígeno (vino en vinagre). La fermentación acética la realizan bacterias del género Acetobacter transformando el etanol en ácido acético. CARÁCTERES BIOQUÍMICOS. proteínas y lípidos. para referirse a una serie de procesos en los que sí interviene oxígeno. Estas moléculas de bajo peso molecular podrán ser entonces transportadas al interior de las células y utilizadas en el metabolismo celular. Estas moléculas deben ser primero hidrolizadas por enzimas extracelulares específicas. que permite la clasificación de las bacterias por su posesión de enzimas.o. Para que la célula pueda utilizar dichas sustancias como sustrato. aeróbicos que producen el vinagre forman una telilla sobre la superficie del vino. para poder permanecer en contacto con el aire. Los m. tienen un peso molecular excesivo para atravesar la membrana celular.5. Basadas en el estudio del metabolismo de diferentes tipos de sustrato. 1.

lipasas --------> ácidos grasos + glicerol Proteínas -------. Alrededor de las colonias que poseen amilasa. Disacáridos.maltasa ----------> Glucosa Triglicéridos ---.amilasa --------> Maltosa ---------. La glucosa es fermentada y acidifica el medio. Polisacáridos: Almidón: La amilasa hidroliza el almidón. PRÓTIDOS. si añadimos al medio una pequeña cantidad de Lugol. a. KIA. Aminoácidos lisina 5. La prueba se realiza a 22 ºC (la gelatina funde a 30 ºC y daría falsos "+") b.(CH2)4-CHNH2-COOH ------->H2N-(CH2)4-CH2-NH2 (cadaverina) + CO2 . Aminoácidos. La ONPG (ortonitrofenolgalactosido) atraviesa fácilmente la pared bacteriana y es desdoblada por la -galactosidasa en galactosa más un radical de color amarillo. uno de los componentes del tejido conjuntivo. Monosacáridos Capacidad de metabolizar (GLU. 3 GLU.En la degradación proteica intervienen numerosos hongos y bacterias (Bacillus cereus. Las bacterias que carecen de la enzima galactosidopermesasa dan fermentación tardía de la lactosa (prueba ONPG2). Añadiendo FeCl3 forma un complejo verde intenso. Desaminación: Eliminación del grupo amino (-NH2). aparece una zona clara que indica que el almidón ha sido consumido. La disminución del pH del medio se evidencia por el uso de indicadores. C. B. por la enzima descarboxilasa. Mycoides.proteasas (proteólisis) --------> Peptonas ----------> Aminoácidos 2. HIDRATOS DE CARBONO A.) en glucosa y galactosa.Se detecta la presencia de la enzima TDA (triptofano desaminasa) La enzima produce la desaminación del sustrato (triptófano) Identificación: la adición de FeCl3 da verde obscuro si esta presente TDA 5 LDC . este reacciona con el almidón. 2 ONPG . Proteus vulgaris.(TDA 4) II. La enzima gelatinasa hidroliza la gelatina y la licúa. ARA3). Se utiliza esta prueba bioquímica para la identificación de las bacterias fermentadoras tardías de la lactosa (entre 2-15 días en fermentar la lactosa). Descarboxilación: Ruptura del grupo carboxilo (-COOH).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Almidón ------. Proteína derivada del colágeno.Las bacterias que poseen -galactosidasa pero no galactosidopermeasa dan (-) en la prueba de la lactosa.). dando color azul intenso. La prueba de la fenilalanina consiste en desaminar este aminoácido (fenilalanina desaminasa) dando ácido fenilpirúvico. Son importantes las descarboxilaciones anaeróbicas. Proteínas completas: Gelatina.. sobre todo en la superficie del medio. ornitina 6 ..6 . ARA capacidad de metabolizar los monosacáridos glucosa y arabinosa 4 TDA.. Pseudomonas. Se pueden degradar de tres formas: I. produciéndose la alcalinización del medio y formación de CO2. 3. Las bacterias que poseen la enzima lisina descarboxilasa pueden catabolizar anaeróbicamente aminoácidos (lisina) según la siguiente reacción de descarboxilación: Lisina H2N .. Lactosa: La bacterias que poseen la encima -galactosidasa son capaces de desdoblar la lactosa (medios Mc Conkey.

metionina (generalmente se añade al medio de cultivo una fuente adicional de azufre en forma de tiosulfato de sodio) puede dar H2S.Detecta la presencia de la enzima nitratoreductasa que permite a las bacterias reducir los nitratos a nitritos (aceptor final de electrones) NO3. Respiración (enzimas respiratorios: Oxidasa11.Degradación anaeróbica de aminoácidos. Ácido mixta.---------> N2. antes de empezar con la galería. El test API 10S está pensado para identificar enterobacterias y otros bacilos Gram (-) 12 13 8 Catalasa Capacidad de eliminar el peróxido de hidrógeno 2 H2O2 --------> H2O + O2 NO2 . La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. De esta forma si da un resultado positivo. Kovaks) ----------------> anillo color rojo H2S .6 .La degradación total del aminoácido triptófano por la enzima triptofanasa Triptofano-------descarboxilación + desaminación-------> indol+ piruvato+amoníaco Indol + p-dimetilaminobenzaldehído (R. Degradación total del aminoácido (descarboxilación + desaminación) Indol 7 H2S 8 a.La fermentación de aminoácidos sulfurados: cisteína.6) 2. La enzima ornitina descarboxilasa permite degradar: Ornitina ------(descarboxilación)---------->H2N-(CH2)4-NH2 (putrescina) + CO2 7 IND . . reducción de nitratos13) b. Realizar la prueba de la Oxidasa con una colonia.Detección de la enzima respiratoria citocromo c. Catalasa12. N2O3 Se visualiza mediante el reactivo de Griess (-naftilamina y ácido sulfanílico) (+ color rojo).-------> NO2. se descarta el grupo de enterobacterias.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 78 III. Derivados de aminoácidos: Urea 9 1. Butanodiólica.6) 11 OX . Prueba de RM II. Fermentación (amplia variedad de tipos) I. NH3. La producción de sustancias alcalinas provocan el viraje del azul de bromotimol (amarillo pH<6 y azul pH>7. Las sales de estos ácidos grasos se emplean como única fuente de carbono (agar citrato10) . LÍPIDOS La lipasa actúa sobre los lípidos dando ácidos grasos . en un papel de filtro. Prueba VP 6 ODC . Al unirse a las sales de hierro da un precipitado de color negro 9 URE . VÍAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA: a.H2N-CO-NH2 -----------------ureasa------------> CO2+NH3+H2O (+ rojo fenol) 10 CIT. La capacidad de metabolizar lípidos se evidencia utilizando ácidos grasos (o mejor sus sales) como única fuente de carbono.

2. palillo de madera). dos placas de agar sangre o TSA (no utilizar medios glucosados) con inóculos de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa.6 . 5. Reactivos Tetrametil-p-fenilen diamida en solución de alcohol isoamílico al 1. DNAasa: La desoxiribonucleasa desdobla el DNA en sus nucleótidos constituyentes. 6. en la siembra por picadura en un tubo con agar blando (0. DESCRIPCIÓN DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS. una vez preparado. El reactivo. A causa de la capacidad de autooxidación que tiene. La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-pfenilendiamina de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. 4. Fig. Tomar una colonia y extenderla encima de un papel de filtro Whatman nº 1 (utilizar asa de platino. 3. d. apareciendo una coloración azul (forma oxidada). Las bacterias productoras de oxidasa.1 Esta prueba permite diferenciar el grupo Enterobacteriacea (que carece de citocromo c) del género Pseudomonas (que posee citocromo c). oxidan rápidamente el reactivo y la colonia se vuelve de color violeta (durante los primeros 30-60 seg) . pipeta de plástico. al inhibir el efecto anticoagulante del EDTA o del oxalato presente en el plasma. Incubar a 37 ºC durante 48 h. Procedimiento 1. se debe guardar a 4 ºC y preservarlo de la luz. 6. OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS a. para obtener colonias aisladas.1 %. PRESENCIA DE OXIDASA Fundamento La prueba se basa en comprobar la existencia de proteínas citocromo c que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones propias del metabolismo respirador. Motilidad Observación de la difusión lateral de la turbidez.4 % de agar). e.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 79 1. torunda algodón impregnada. b. Coagulasa: Lo poseen las bacterias que coagulan el plasma. c. no tiene color o es ligeramente rosado. Sembrar en estría escocesa. Producción de pigmentos: Determinados medios estimulan a las bacterias a producir pigmentos. Hemólisis: Capacidad de producir la lisis de los hematíes de la sangre.6 A. Dejar caer una gota de reactivo sobre la colonia a determinar.

Añadir a 1 ml. PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento. 2. PRUEBA DEL INDOL Fundamento. que contienen oxígeno disuelto.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 80 B. Esta prueba se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en las bacterias. de los tubos incubados 5 gotas de reactivo de Kovacks. dejándolo caer por la pared interior del tubo. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar estas formas tóxicas. Lectura de resultados. compuesto que se determina en el ensayo. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Si la reacción es positiva. como el citoplasma de las células.5 % (medio especialmente rico en triptófano). El genero Enterobacter da negativo en la prueba del indol y Escherichia coli positivo. Esta enzima degrada el aminoácido triptófano a indol. Incubar 24 h. a 37 ºC 3. que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. este formará un complejo con el indol y se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis. 3. 6. En caso dudoso incubar hasta un máximo de 5 días. Fig 6.1 Procedimiento 1.1. la bacteria se cultiva en un caldo de triptona con NaCl al 0. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa. . Procedimiento 1.6 . Si la bacteria tiene la enzima triptofanasa. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno (3%). Tomar una colonia con un palillo de madera y depositarla en el centro de un porta. se produce inmediatamente un apreciable burbujeo de O2. Para realizar esta prueba. C.Fig. al añadir al medio el reactivo de Kovacks. caldo de triptona (BTW) sendos inóculos de Enterobacter y Escherichia coli. 2. aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. En los ambientes acuosos.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 81 Fig. Fundamento.3. Shigella.0). Fermentación ácido-mixta. b. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. 6. Fermentación característica de los géneros Enterobacter. Si la fermentación que se ha llevado a cabo es del tipo butilén-glicólica.1 D-E.2 y 6. Salmonella. . Las bacterias que en anaerobiosis fermentan los azúcares pueden realizar esto por distintas rutas. para. Serratia y la mayoría de especies Erwinia. PRUEBAS DEL ROJO DE METILO (RM) Y VOGES-PROSKAUER (VP). continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. Proteus.6 . Los productos finales son ácidos orgánicos (fórmico. Yersinia.Fig. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente. láctico y succínico) y etanol. Fermentación característica de los géneros Escherichia. 6. Esta fermentación puede ser de dos tipos: a. en segundo lugar. La liberación de ácidos orgánicos en el primer tipo de fermentación (ácido-mixta) generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH de alrededor 4. Fermentación butilén-glicólica. acético. la producción de acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol (prueba Voges-Proskauer) que reaccionará con este compuesto produciendo un color rojo característico. produciéndose acetoína como intermediario.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 82 Fig.6 .2. Fermentación ácido-mixta Fig.3 Fermentación butano-diólica . 6. 6.

más. Observar a las 2. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. El medio permanece amarillo o color amarillo naranja (indica que hay productos ácidos débiles): (-) Prueba de Voges-Proskauer Glucosa --> Ác. 5. sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli. la cantidad total de ácido que se forma por mol de Glucosa fermentada es considerablemente más pequeña en una fermentación butanodiólica que en una fermentación ácido-mixta. Añadir a 1 ml. 3. de los tubos incubados cinco gotas de rojo de metilo. 5. (facilita la difusión del O2 atmosférico). MOLES POR CADA 100 MOLES DE GLUCOSA FERMENTADA FERMENTACIONES ÁCIDOFERMENTACIONES MIXTAS BUTANODIÓLICAS Esch Aeromonas Vibrio Enterobacter Serratia erich punctata cholerae aerogenes marcescens ia coli Etanol 2. de los tubos incubados 10 gotas de -naftol al 5 % y 10 gotas de KOH al 40 % (por este orden) 4. Sembrar en 2 tubos con 5 ml. Observar el color resultante: Interpretación: Aparición del color rosa eosina: (+). más. Observar el color resultante: En caso de duda incubar 48 h. de de caldo RMVP. Añadir a 1 ml. 2. En caso de duda incubar 48 h. 4. Interpretación: El medio de cultivo toma color rojo: (+). como consecuencia.5 75 88 129 64 62 43 22 105 232 51 39 53 28 73 193 70 66 0. de de caldo RMVP. Productos de la fermentación de glucosa por bacterias entéricas PRODUCTOS. Incubar 48 h a 37 ºC 3.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 83 Prueba del Rojo de metilo (RM). Incubar 48-72 h a 37 ºC. pirúvico -->Acetoína --->Diacetilo ---->Complejo rojo + KOH (aire)+ naftol Procedimiento: 1. 6. Los productos finales neutros (butanodiol y en menor cantidad etanol) predominan sobre los ácidos.6 . Agitar para mezclar y colocar los tubos en posición de máxima inclinación durante 10-15 min. Procedimiento: 1. 2.5 3 17 35 172 20 46 64 4 10 8 48 116 70 . sendos inóculos de Enterobacter aerogenes y de Escherichia coli.3 butanodiol Äcido acético Ácido láctico Ácido succínico Ácido fórmico H2 CO2 Total ácidoformado 50 36 79 11 2. 12 y 24 horas.

unidos por el enlaces -1. depende de la presencia de la enzima galactosidasa. Resumen de los patrones de fermentación del grupo entérico FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. existen colonias de Escherichia coli (especie típicamente productora de gas) que no son productoras de gas.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 84 Fermentación de la lactosa Lactosa C12H22O11 ------(hidrólisis por enzima lactasa)-------> ´n) d − Glu cos a (fermentacio + d − Galactosa La capacidad de fermentar la Lactosa (disacárido formado por dos monosacáridos. La fermentación de Lactosa es especialmente característica de Escherichia y Enterobacter. Salmonella y Proteus. también requiere la presencia de la Galactósido permeasa que favorece la entrada de la lactosa en el interior de la célula. Las bacterias que producen -galactosidasa pero les falta permeasa no pueden incorporar Lactosa a una velocidad suficiente para producir una fermentación rápida y vigorosa. La utilización efectiva de la Lactosa. La producción de gas refleja la presencia de Hidrogenoliasa fórmica. entre la glucosa y la galactosa).4. ya que permite diferenciar entre los formadores de gas del género Escherichia y los patógenos del grupo Shigella y Salmonella typhi. se clasifican como NO fermentadores de lactosa. La formación de Gas en la fermentación de azúcares es un carácter de valor considerable para la diferenciación taxonómica de estos grupos. Producen CO2+H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Escherichia Proteus Salmonella (la mayoría de especies) Photobacterium (algunas de las especies) B. En una fermentación ácido-mixta simple. No producen gas (carecen de hidrogenoliasa fórmica): Shigella Salmonella typhi Yersinia Vibrio Aeromonas (algunas especies) Photobacterium (algunas especies Beneckea (la mayoría de las especies) .6 . Las bacterias que realizan la fermentación Butanodiólica también presentan diferencias respecto a la presencia de la Hidrogenoliasa fórmica. los del género Serratia no lo presentan y en ellos la producción de gas es inapreciable. Esta enzima no es esencial para el metabolismo fermentativo. y ausente de Shigella. solamente se puede formar gas por descomposición del ácido fórmico. que fermentan sin producir gas. La colonias del género Enterobacter casi siempre tienen esta enzima y son intensos productores de gas. y generalmente.

Es también un medio diferencial. Photobacterium phosphoreum B. E. H. se habla de hemólisis tipo gamma. Efectuar una siembra en estría de un cultivo fresco. 2. Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. Resultados: Color inicial del medio (-). Las bacterias capaces de fermentar este azúcar producirán un cambio en el pH del medio por la liberación de productos ácidos. Únicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato (indica presencia de la enzima citrato permeasa) podrán multiplicarse en este medio y. Los tres tipos de hemólisis se manifiestan de la siguiente manera: -hemólisis: Halo verde alrededor de la colonia. F.. Además es un medio diferencial. Producen CO2 + H2 (poseen hidrogenoliasa fórmica): Enterobacter. I. Es un medio general rico en nutrientes. junto con la eliminación del citrato (ácido). Como consecuencia sus colonias aparecerán de color violeta. -hemólisis: Halo intensamente claro alrededor de la colonia por la lisis total de los hematíes. AGAR MC CONKEY. por lo que permitirá el crecimiento de una amplia variedad de bacterias. -hemólisis: Ausencia de halo claro. Algunas bacterias. carotovara. La acción de esta encima se evidencia por la aparición en el medio del producto resultante (ácido fenilpirúvico). y es empleado para determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en las bacterias. ya que permite comprobar si la bacteria es capaz de hemolizar los eritrocitos del medio de cultivo.6 . de verde a azul. y cuando no existe. al hacerlo. G. generará una fuerte basificación del medio que se manifestará por un cambio de color del indicador de pH. AGAR CITRATO DE SIMMONS. 4. AGAR SANGRE. pueden romper los hematies de la sangre (Hemólisis). Esperar hasta 5 min. debido a una destrucción parcial de los hematíes. En este medio el aminoácido presente es la fenilalanina. fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de pH. formación de gas ligeramente apreciable o indetectable: Serratia. liberando al medio los grupos amino (desaminación). . Si la hemólisis que se produce es total . Añadir varias veces cloruro de hierro (III) al 10 %. se denomina betahemólisis.. porque contiene lactosa y un indicador de pH. Producen únicamente CO2 (carecen de hidrogenoliasa fórmica). que se detecta mediante la adición de cloruro de hierro (III). resultando un compuesto de coloración verde oscura. Color verde intenso (+).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 85 MODIFICACIÓN BUTANODIÓLICA DE LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-MIXTA A. AGAR FENILALANINA. Incubar a 37 ºC 18-24 h. Erwinia herbicola. utilizarán los fosfatos presentes liberando iones amonio. La mayoría de las bacterias poseen enzimas capaces de hidrolizar específicamente algún aminoácido. Aeromonas hydrophila. contrastando con la coloración amarillenta de las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa. Estos iones amonio que evolucionan a amoníaco. sobre todo los estreptococos. Contiene citrato como única fuente de carbono. si es parcial alfa-hemólisis. Incubar 18-24 h a 37 ºC 3. Es un medio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entéricas. Procedimiento: 1.

el medio permanecerá de color rojo. Este medio diferencial complejo (de color rojo) es muy útil. rotura o elevación del agar del fondo del tubo. provocándose un descenso de pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo. donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente. Producción de gas en la fermentación: aparición de burbujas. AGAR KLIGLER (KIA). el color del medio en la superficie cambiará a amarillo. Si la bacteria. e.1 % y lactosa al 1 %). degradándose completamente hasta CO2. Como consecuencia. c. Algunas bacterias respiradoras anoxibiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódico como aceptor final de electrones de la transportadora. las bacterias crecidas en la profundidad del tubo inclinado emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa. en la superficie del tubo inclinado la utilizará por vía respiratoria. a su vez. Esta compuesto principalmente por dos azúcares en distinta proporción (glucosa al 0. empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. Los iones Fe2+ proceden de los Fe3+ del citrato férrico y aparecen debido a los cambios en los potenciales redox producidos al someter al autoclave al medio de cultivo. Como consecuencia. Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora). Fermentación de la lactosa: viraje a color amarillo en la superficie del tubo inclinado. Por el contrario. produciendo el viraje del indicador a un rojo intenso. como. al no haber cambio de pH. fermenta la lactosa. reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro (fig. Producción de ácido sulfhídrico: aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. que. Si la bacteria fermenta sólo la glucosa. el medio mantendrá su color rojo en la superficie. y. . que se elimina y no modifica el pH. En este caso. este compuesto se reduce a ácido sulfhídrico.6 . citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH. d.1). Fermentación de la glucosa: viraje a color amarillo en el fondo del tubo inclinado. b.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 86 J. No fermentación de los azúcares: el tubo inclinado no cambia de color. además. La degradación de las peptonas (aeróbica o anaeróbicamente) origina un proceso de descarboxilación que produce amoníaco. los ácidos producidos modifican también el pH de la superficie del medio. f. tiosulfato sódico. los azúcares son respirados. generando ácidos que no serán neutralizados. Enzima hidrogenoliasa fórmica. Para estudiar el comportamiento de las bacterias en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis. La información que podemos obtener es la siguiente: a. Como resultado. el género Pseudomonas. ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. la siembra en este medio de cultivo se realizará tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de este (anaerobiosis). Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la descarboxilación oxidativa de las proteínas (proceso que depende del oxígeno). 6. ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria. por ejemplo. En este caso las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS 87 TABLA DE LECTURA E INTERPRETACIONES DE RESULTADOS EN AGAR TRES-AZÚCARES-HIERRO Género y especie Escherichia coli Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri Salmonella typhi Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi B Salmonella enteritidis Salmonella paratyphi A Salmonella gallinarum Salmonella choleraesuis Shigella flexneri Shigella dysenteriae Shigella boydii Shigella sonnei Pseudomonas aeruginosa Fondo inclinada AG AG AG AG A/AG R/K AG(1) AG(1) AG(1) A/K A A/G A/G A/G A/G A A/G A A A A R/K Superficie Producción de SH2 A A A A R/K R/K K/A K/A R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K R/K + + + +.6 .(2) + + + + - .

No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA R SH2 No hay cambio del color No fermentación de GLUCOSA original (Rojo anaranjado). sin producción de gas. Formación de ALCALI. y a veces formando anillo a las 48 h. (2) Sólo en parte superior de la columna.Sin ennegrecimiento No formación de SH2 NOTAS: (1) Algunas cepas son A.6 . . + Enengrecimiento Formación de SH2 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 88 CLAVE Color y aspecto A G K Amarillo Aparición de burbujas o grietas Rojo intenso INTERPRETACIÓN Fondo Fermentación de GLUCOSA y formación de ÁCIDO Formación de GAS a partir de GLUCOSA No fermentación de GLUCOSA y formación de ALCALI Superficie inclinada Fermentación de LACTOSA y/o SACAROSA con producción de ÁCIDO No fermentación de LACTOSA ni SACAROSA.

Además. Éste es un medio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus. Es una enzima semejante a la protrombina. que únicamente son capaces de fermentar las cepas patógenas de este género bacteriano. La alta concentración de sal (NaCl al 7. crecerá en el medio dando lugar a colonias grandes rodeadas de un halo amarillo. ya que sólo este tipo de microorganismos osmotolerantes y los microorganismos osmófilos pueden multiplicarse en él. diferenciándolas así de las que no lo son. L. PRUEBA DE LA COAGULASA. mientras que Staphylococcus hepidermidis.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 89 K. Incubar 4 h a 37 ºC. Homogeneizar con asa Kolle. que transforma el fibrinógeno en fibrina. 4 y 24 h. Es ejemplo de coagulasa positivo Staphylococcus aureus.6 . Añadir con asa Kolle 1 colonia bacteriana. 3. 4. Staphylococcus aureus. Lo producen las bacterias que coagulan el plasma. 5. Procedimiento 1. AGAR MANITOL SAL. dando un coágulo visible. Fundamento. dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis. Comprobar si presenta coagulación por hemólisis del plasma de conejo . 2. en su composición el único azúcar presente es el manitol. pero con un crecimiento muy pobre). Lecturas a la 1/2 .5 %) le proporciona su carácter selectivo. fermentador del manitol. En tubos de 5 ml colocar 0. que no fermenta el manitol. inhibiendo el efecto anticoagulante del EDTA (etilendiamino tetracético) presente en el plasma.5 ml de plasma de conejo-EDTA rehidratado. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por un viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo.

Para una diferenciación más exacta de las dos especies se ha acostumbrado a seguir un método rutinario denominado "IMVIC". . I: Indol M: Rojo de metilo I + V: Voges Proskauer M + V + C: Citrato C + Escherichia coli Enterobacter cloacae Procedimiento: 1. 4.6. o lactosa y peptona.coli se diferencian porque sus colonias son planas de 2-3 mm de diámetro de color violeta oscuro y centro negro con un brillo metálico característico de color verdoso con luz reflejada. PRUEBAS IMVIC.6.C. por lo que podrían falsear los resultados. Tomar una colonia y resuspenderla en un tubo de ensayo con 5 ml de solución Ringer. enzima utilizado por coliformes y bacterias lácticas. Preparar dos placas de agar nutritivo. se utiliza la lactosa. Como algunas bacterias del ácido láctico son capaces de desdoblar la lactosa formando gas. 6. (ver 6. Escherichia coli crece bien sobre medios de cultivo que contengan glucosa. 6.7. a 37 ºC.D-E. La utilización de lactosa supone la capacidad de escindir la lactosa con formación de gas. 2. Si se siembran en placa organismos de un cultivo de este tipo sobre agar eosina-azul de metileno Levine (lactosa-peptona-eosina-azul de metileno) las colonias de E. cloacae por siembra escocesa en las placas de agar nutritivo. Observar al microscopio mediante una tinción Gram los diversos tipos de colonias aisladas. 3. son necesarios otros procedimientos para la diferenciación.6 . coli y E. Para establecer ya desde un principio condiciones selectivas para que puedan crecer pocas bacterias.H) . Realizar la batería de pruebas IMVIC.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 90 6. DIFERENCIACIÓN ENTRE E.6. Preparar un cultivo puro de E. mediante la -galactosidasa. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.COLI Y ENTEROBACTER CLOACAE. 5. 6. Incubar 48 h.

Conkey si ha sido fermentada la lactosa. Con un palillo de madera tomar una colonia Gram .del agar sangre y extenderla en el papel de filtro. Realizar en una placa de agar TSA una siembra escocesa de la muestra de partida (cultivo mixto de un bacilo Gram negativo (E. colocar un trocito de papel de filtro sobre un portaobjetos limpio. que permite diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. Todos estos medios se siembran tal como se explicó en el capítulo 4 . excepto el agar de Kliger. sembrar en el medio agar manitol sal . 6.. caldo de triptona con NaCl al 0. 5. que se siembre con una aguja de inoculación como muestra la fig. realizar un agotamiento por estrías en placas de agar sangre y de agar Mc. Para ello tomar con palillo de madera una colonia Gram+ del agar sangre y colocarla sobre un portaobjetos limpio.epidermidis). 2. A partir de cada tipo de colonia. 4. dos caldos de RMVP y agar de Kliger (KIA). Comprobar el aspecto de las colonias. Las pruebas del citrato. Añadir los distintos reactivos (4 gotas/tubo) a sus correspondientes cultivos. Incubar a 37 º C durante 48 h. 7. .5 %. 6. Incubar a 37 ºC durante 24 h. 9.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 91 6. Para ello. 8. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UN CULTIVO MIXTO. agar fenilalanina. 10.Conkey. Incubar a 37 º C durante 24 h. Verificar que en la placa de agar sangre se multiplican ambas bacterias y en la placa de agar Mc. manitol y KIA no requieren la adición de ningún reactivo. y en la placa de agar Mc.Conkey sólo crecerá el bacilo Gram negativo. A partir de las colonias de los cocos Gram positivos se realiza la prueba de la catalasa.8.4. Añadir una gota de reactivo de la catalasa (peróxido de hidrógeno) . Confirmar que el bacilo Gram negativo es una enterobacteria (citocromo c oxidasa negativa). A partir de las colonias de los bacilos Gram negativos se realiza la prueba de la citocromo c oxidasa. Procedimiento 1. Incubar todos los medios a 37 ºC durante 24 h.coli) y un coco Gram positivo S. Realizar una Tinción Gram de cada tipo de colonia aislada. y 6-2 identificar las bacterias analizadas. Anotar los cambios de color en las distintas pruebas.6 . 3. Añadir encima una gota del reactivo oxidasa Observar si aparace coloración azul. Con la ayuda de la tabla nº 6-1. Observar en la placa de agar sangre si se ha producido hemólisis y de qué tipo es. A partir de una colonia del bacilo Gram negativo sembrar los siguientes medios diferenciales: agar citrato de Simmons. Si la prueba es positiva (aparición de burbujas).

6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 92 Aislamiento e identificación bacterianas Fig. 6.4 Tabla 6.1 .

SISTEMA API. ARA (arabinosa): la utilización de hidratos de carbono por las bacterias produce ácidos.) miniaturizadas y estandarizadas de los procedimientos convencionales para la identificación de miembros de la familia de las Enterobacterias y otras bacterias Gram negativas relacionadas. LDC: actividad lisina descarboxilasa. La siembra se realiza con una pipeta a partir de una suspensión bacteriana procedente de un cultivo puro.. El sistema API comercializa diversas versiones (API 20 E.9 MÉTODOS MINIATURIZADOS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA La batería de pruebas bioquímicas descrita es la forma clásica y general de identificación de enterobacterias y cocos Gram + . Transforma la lisina en una amina llamada cadaverina que incrementa el pH. API 10 S. ni llenar los microtubos demasiado.6 . salvo indicación. liberando ortonitrofenol de color amarillo. Algunos microtubos se cubren con parafina para crear anaerobiosis. mezclar líquido de microtubos distintos.. El reactivo de Kovacs forma un complejo rojo con el indol. actualmente estos métodos están siendo sustituidos por micropruebas en sistemas semiautomáticos. . El indicador azul de bromotimol virará de azul a amarillo. Esto produce un aumento de pH y que el indicador (azul de bromotimol) vire de verde a azul. ODC: actividad ornitina descarboxilasa. Esta enzima libera amoníaco a partir de la urea. etc. Sin embargo. GLU (glucosa). Esta enzima forma ácido indol pirúvico a partir del triptófano. TDA: actividad triptófano-desaminasa. que permiten una identificación más rápida y menos laboriosa. (BIOMERIUX) Las características bioquímicas que se estudian son: ONPG: hidrólisis del ortonitrofenolgalactosidasa por la ß-galactosidasa. la enzima transforma la ornitina en una amina llamada putrescina. que originan una caída del pH. En un soporte de plástico están alineados los microtubos que contienen los medios deshidratados (liofilizados). imprescindible en grandes laboratorios (sistema API. Consiste en una colección de microtubos (pocillos) donde se puede reproducir una serie de pruebas bioquímicas con una sola colonia de bacterias. El sulfhídrico producido reacciona con las sales de hierro. . produciéndose un incremento del pH y un viraje de indicador de amarillo a rojo. vire de amarillo a rojo. Procurar no producir burbujas. API 10 S.). H2S: producción de sulfhídrico a partir del tiosulfato. obteniéndose un precipitado negro. El ácido producido forma un compuesto marmáceo en presencia de cloruro de hierro (III). produciéndose un incremento de pH y que el indicador (rojo de fenol). URE: actividad ureasa. El indicador virará de amarillo a rojo. CIT: utilización del citrato como única fuente de carbono. IND: producción de indol a partir del metabolismo del tritófano.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 93 6.

añadir en el microtubo TDA 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 % B. Procedimiento: 1.5 % (NIT 2). La presencia de citocromo c se manifiesta por la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamida de oxidarse frente al citocromo c.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 94 Pruebas complementarias: OXI: prueba de la oxidasa. Anotar los resultados obtenidos según la tabla adjunta. URE . para evitar evaporación.añadir en el microtubo IND 1 gota de reactivo de Kovacs C. 4. Humedecer la tapa con agua. NO2 . Llenar la sección tubular y la cúpula de los microtubos CIT 7. Con asa de Kolle se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 24 h. Se basa en comprobar la producción de la enzima citocromo c oxidasa por parte de las bacterias. . 3. Esta enzima reduce el nitrato a nitrito. y se emulsiona en agua estéril. el sistema API 10 se complementa con las siguientes pruebas bioquímicas: A. Una vez anotados los resultados obtenidos.añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0. Nota: Respetar el orden indicado para la 4 pruebas. con aceite de parafina. Con la pipeta Pasteur se inocula la galeria API. IND . 10.6 . NO2: nitrato reductasa. 9. ODC . Llenar la sección tubular del microtubo colocando la punta de la pipeta contra el lado de la cúpula. 5.8 % (NIT 1) y 2 gotas de N. ya que se liberan productos gaseosos que podrían interferir en otros microtubos de la galería. OX . 6. TDA . apareciendo una coloración azul (forma oxidada). H2S . Sacar la galería API de la envoltura y colocarla en la cubeta en posición inclinada. D. La aparición de nitritos se manifiesta por la coloración de rojo que adquiere el medio tras añadir los reactivos ácido sulfanílico y N. Después de inocular. Anotar nº de identificación de la muestra 2.añadir 1 gota del reactivo de la oxidasa (tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %) en el microtubo ONPG o al H2S si es negativo. llenar completamente las cúpulas DE LOS MICROTUBOS LDC .N dimetil-alfa-naftilamina al 0.N dimetil-alfa-naftilamina. tapar y dejarlo incubar en estufa 24 h a 37 ºC. Eliminar el exceso de agua. 8. Preparar una cubeta de incubación con tapa.

Esto sucede con organismos TDA positivos. Un viraje a marrón del medio es una reacción negativa a menos que haya un depósito negro.añadir 1 gota de cloruro de hierro (III) al 10 %. . La reacción se leerá a los dos minutos después de añadir el reactivo de Kovacs. (5) TDA . observar si el tubo GLU (positivo o negativo) presenta burbujas. Examinar cuidadosamente el fondo del tubo antes de considerar la reacción negativa. Esperar 20 min antes de considerar la reacción negativa. el HCl liberado por el reactivo de Kovacs puede reaccionar con el material plástico de la cúpula resultando un cambio de amarillo (negativo) a rojo pardusco (se continúa considerando negativo). Después de varios minutos. (7) Añadir en el microtubo H2S o ONPG 1 gota de tetrametil-p-fenilendiamina al 1 %. (2) La producción de H2S puede variar de un depósito negro denso a una línea negra muy fina alrededor del fondo del tubo. confirmar un posible test negativo añadiendo polvo de zinc. Después de haber añadido los reactivos de reducción de nitratos.5 %.añadir 1 gota de reactivo de Kovacs. Estas burbujas son indicio de la reducción de nitratos a N2. (8) NO2 . (4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos.2 TEST ONPG GLU ARA LDC ODC SUBSTRATO Ortonitrofenolgalactosido Glucosa Aarabinosa Lisina Ornitina citrato sódico tiosulfato de sodio Urea Triptófano Triptófano En microtubo: ONPG o H2S En microtubo: GLU REACCION O ENZIMAS ß-galactosidasa fermentación / oxidación (4) fermentación / oxidación (4) lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilización del citrato producción de H2S ureasa triptófano desaminasa producción de indol citocromo oxidasa reducción de nitratos a NO2 reducción a gas N2 RESULTADOS NEGATIVO POSITIVO incoloro azul/ azul verdoso azul/ azul verdoso amarillo/ naranja amarillo verde palido/ amarillo Incoloro/ grisaceo amarillo amarillo amarillo incoloro / violeta claro amarillo rojo amarillo (1) amarillo o gris amarillo rojo/ naranja rojo/ naranja (3) azul-verde/ azul (3) depósito negro (2) rojo/ naranja marrón oscuro anillo rojo violeta oscuro (2 min) violeta amarillo CIT H2 S URE TDA (5) IND (6) OXI (7) NO2 (8) (2-3 min) (+Zn) (1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo. Antes de añadir los reactivos. (6) IND .añadir en el microtubo GLU 2 gotas de ácido sulfanílico al 0.N dimetil-alfa-naftilamina al 0.6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 95 Tabla 6. (3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis). un color amarillo indica la reducción de los nitratos a un estado de nitrógeno. Un color rojo después de 10 min confirma la reacción negativa.8 % y 2 gotas de N. la oxidación en la cúpula.

Negativo: Se anota un 0. Ejemplo: Citrobacter freundii ONPG GLU ARA + + + | | | 1 2 4 \ | / / \ | LDC ODC CIT + | | | 0 0 4 \ | / \ | / H2S URE TDA + | | | 1 0 0 \ | / \ | / IND OX NO2 + | | | 0 0 4 \ | / \ | / 7 4 1 4 . Tabla 6. Con la secuencia de 4 números encontrados. Los resultados pueden ser: A.3. Codificación del germen. 1. se suman los test de la oxidasa (OXI) y el de reducción de nitratos (NO2).PRUEBAS BIOQUÍMICAS 96 IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS: A los test contenidos en API 10 S. se busca en las tablas a que bacteria corresponde. 4) B. Positivo: Se anota el valor correspondiente (1. 2. Sumando los 3 valores obtenidos en cada triada se obtiene un número. como test 11 y 12.6 .

005 7. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii 2.007 3.665 2.234 7. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.074 2.305 3.040 7.724 2.004 2.414 Enterobacter agglomer Enterobacter agglomer Escherichia coli Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Enterobacter agglomer agglomer.224 2. Enterobacter Enterobacter agglom.007 7.604 6.704 6.124 7. agglomer.715 Salmonella (2) Klebsiella / Serratia Enterobacter cloacae Citrob.402 3.214 7.000 7.045 2.405 7.704 3.614 6.422 4.502 3.254 2. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomagglomer.707 2.234 2.044 7.114 2.105 3.707 3.774 Proteus Proteus mirabilis Proteus mirabilis Vibrio Salmonella (2) Serratia Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.402 4.125 7. arizonae(2) Escherichia coli Enterobacter agglom.614 3.034 7.241 2.065 2.315 7.014 3.014 7.314 7.204 3.245 2.407 3.001 7.674 3.500 1.005 2.075 2.224 7.064 2.524 3.406 4.105 7.105 2.307 3.055 2./Salmon.524 6. Escherichia coli Aeromonas hydrophila Escherichia coli Klebsiella / Serratia Kleb.225 3.675 2. pneumon.(2) Proteus mirabilis Salmonella (2) Vibrio Salmonella (2) Salmonella (2) .714 6.764 2.674 6.006 7.025 7.221 2. agglomer.freund.107 7. Enterobacter agglom.507 3.404 3.504 2.426 Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 3.261 Pseudomonas putrefaciens Proteus vulgaris Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas putrefaciens Proteus mirabilis Proteus mirabilis Pseudomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia Shigella (2) / Klebsiella Shigella Proteus vulgaris Providencia Proteus vulgaris Proteus Proteus Proteus Proteus vulgaris Salmonella typhi (2) Escherichia coli Salmonella (2) Proteus morganii Yersinia enterocolítica Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Proteus morganii 4.3 DIRECTORIO DE PERFILES PARA INTERPRETACIÓN TEST API 10 S OO16 OO75 O206 O216 O221 O225 O261 O265 O274 O412 O416 O422 O475 O500 O504 O616 O664 O674 1.104 2. Enterobacter Enterobacter agglomer agglomer.305 7. oxytec Shigella/Enterobacter Escherichia coli Citrobacter freundii Yerinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Citrobacter freundii Escherichia coli Salmon.724 Shigella (2) Escherichia coli/Shigella (2) Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Yersinia pseudotuberculosis Escherichia coli Aeromonas hydrophila Shigella (2) Escherichia coli Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Escherichia coli Aeromonas shigell.401 7.045 7.205 3.407 7.714 2.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 97 TABLA Nº 6.406 3.004 3.107 3.041 7.205 7.005 3./Vibrio(2) Pseudomonas cepacia Klebsiella / Serratia Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Proteus rettgeri Pseudomonas cepacia Aeromonas hydrophila Klebsieella / Serratia Citrobacter freundii Proteus mirabilis Serratia marcescens Vibrio (2) Serratia marcescens 7.465 3.225 7.514 6.204 7.674 2.6 .400 7.707 6.115 7.224 3.035 2.024 3.

624 7.000 6.004 6.314 6.505 7.445 2.464 2.365 2.105 6.400 6.274 6. cloac/Serratia Citrobacter Citrobacter freundii Citrobacter freundii Enterobacter cloacae Citrobacter freundii Salmonella (2) Pseudomonas cepácea Enterobacter / Serratia Pseudomonas cepácea Salmon.714 7.114 6.475 2.445 7.634 7. pneumon.702 7. Klebsiella / Serratia Kleb.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 2.422 2.664 Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus mirabilis Edwardsiella tarda Vibrio Salmonella (2) Edwardsiella tarda Enterobacter hafniae Proteus morganii Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella ozaenae Providencia Pseudomonas Proteus rettgeri Pseudomonas aeruginosa Providencia Providencia Proteus Proteus rettgeri Proteus Proteus Providencia Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis 6.214 6.307 2. oxytec Enterob.724 7.261 6.441 7.274 2.414 6.045 6.444 7.315 2. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.474 2.524 7.725 98 Citrobacter freundii Kleb.065 6.624 2.314 2. freund.304 6.444 2.307 6.604 7.704 7.6 .305 2.406 6.422 6.440 7. hafniae/Salmon(2) Escherichia coli Vibrio Salmonella (2) Acinetobacter calcoacéticus Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens Citrob. Enterobacter agglom agglomer.445 6.225 6.425 2.614 7.654 2.265 6.605 7.706 7.305 6. pneumon.714 7.224 6.405 2.507 7. oxytec Citrobacter freundii Enterobacter agglom agglomer. Enterobacter Enterobacter agglom agglomer.434 7.265 2.634 2. oxytec Aeromonas hydrophila Klebsiella pneumoniae Kleb.324 2.425 7.644 2.205 6.615 7.426 6./Salmon. coli Salmonella (2) Salmonella (2)/Shigella (2) Escherichia coli Citrobacter / Salmonella (2) Yersinia enterocolítica Yersinia enterocolítica Proteus morganii Proteus morganii Proteus mirabilis Enterob.402 2.404 2.415 7.426 2.264 2. pneumon.(2) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Providencia Proteus vulgaris 7.525 7.104 6. oxytec .475 Acinetobacter calcoacéticus Shigella (2) Shigella (2)/Escherichia coli Providencia Proteus Salmonella (2) Salmonella (2)/ E.374 2. arizonae (2) Enterobacter / Serratia Kleb.545 2.402 6. pneumon.005 6.204 6.504 7.465 2.

rettgeri Y. Se procede entonces a completar un cuadrante con el conjunto de pruebas realizadas.0 Identificación aceptable 90. E.2535607 0. 6475.6 . Calculo probabilístico.5 % se trata de la bacteria Y.marcenses P. 72 % Y.93 % 0. enterocolitica. Galería API 10 S La bacteria Proteus vulgaris correspondería a cualquiera de las siguientes secuencias numéricas: 0075. 2055. Edward tarda.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 99 6.. etc.99 % % % + 0.2542495 Conclusión: Con una probabilidad de un 99. Salmonella sp.2542495 Cálculo de probabilidad porcentual: S.2542495 % 100 = 0.98 0.0003948 % 0.enterocolítica + 0.oxytoca.10. Este descarte de bacterias permite reducir el número de candidatas. 2075. Suponiendo que después de aplicar este criterio selectivo se centraran las posibilidades en las bacterias siguientes: K.0 " muy buena 99.enterocolítica = 0.81 % % % 0. rettgeri y Y.enterocolítica.2535607 Suma total = 0.. Por ejemplo. % Identificación % Identificación % Identificación % Identificación = = = = 80. P.25442495 0.marcenses = 0. K.94 0.9 " excelente .30 0. 11 % % 100 = 99.rettgeri Y.rettgeri = % 100 = 0.0002940 0. neumoniae.34 = 0. Shigella sp.vulgaris.10 = 0.0003948 0.05 = 0. S. figuran las frecuencias con que una bacteria determinada dará positivo en la prueba bioquímica considerada. ONPG 94 1 81 CIT 97 70 0 URE 28 98 93 IND 95 90 66 S. En la tabla adjunta.01 0.marcenses P.0 " buena 99.28 0.enterocolítica Pruebas bioq. La fiabilidad del resultado obtenido no es igual en todos los casos. si la bacteria que queremos identificar ha dado: POSITIVO a ONPG: descartamos como candidatas a las bacterias que nunca dan positivo (0 % de pruebas).03 0. NEGATIVO a NO2: descartamos las que siempre dan positivo (100 % de pruebas).0002940 % 0. A modo de ejemplo. por lo que es preciso realizar un cálculo probabilístico.coli. 15 % P. Ello nos indica un margen de fiabilidad. el cuadro siguiente lo realiza con 4 de las pruebas. Edward tarda y P. 0475.

C. cloacae H.Proteus vulgaris 4 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 100 TABLA 6. freundii K.4. liquefac. Edward. enterocolítica 95 26 0 3 93 99 99 99 71 98 94 95 1 0 1 81 10 0 10 0 10 0 10 0 98 10 0 10 0 10 0 10 0 10 0 95 99 93 10 0 98 98 Agar Mc Conkey A. ácido mixta) Formación de indol Formación de gas 3 . butanodiólica) Fermentación lactosa RM (F. Fenilalanina Agar Citrato Formación de acetoína Fermentación glucosa VP (F.6 . pneumoniae K. mirabilis P. vulgaris Prov.Escherichia coli + + K/A A/A A/A + + + + + + ! + + - + + - + - ! + + + - + + + - + - Proteólisis Agar KIA H2S . alvei S. tarda Salmonella sp. CÁLCULO PROBABILÍSTICO O N P G G L U 100 99 100 100 100 99 99 100 99 100 100 100 96 97 99 99 A R A 83 50 1 94 96 99 96 99 90 98 19 95 1 1 1 69 L D C 77 0 100 96 0 74 86 1 100 87 98 97 1 0 0 0 O D C 70 0 100 95 32 0 1 96 97 99 95 43 98 0 0 90 C I T 0 0 0 74 62 95 84 94 13 85 97 87 57 31 70 0 H2S U R E 3 0 94 85 65 0 0 0 0 0 0 0 83 83 0 0 1 0 0 0 3 63 60 1 4 5 28 0 99 98 98 93 T D A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 98 99 99 0 I N D 94 38 100 3 6 0 100 0 0 0 1 99 2 94 90 66 O X I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 N O 2 E. S. odorífera P. oxytoca E. rettgeri Y.Klebsiella 5 . marcescens S. coli Shigella sp.

Distingue entre los términos: metabolismo.6 . 4. anaerobias facultativas c. aerotolerantes 2. en un agar que se mantiene líquido a 45 ºC. anaerobias obligadas b. Se agita hasta homogeneizar los tubos y se enfría rapidamente. 3. Se incuban los tubos 48 h. Considerando que los medios satisfacían todos los requerimientos químicos de los metabolismos de los diversos microorganismos. Se siembran 2 gotas de inóculo de 5 tipos de microorganismos con diferentes tipos de requerimientos de O2. catabolismo. De acuerdo con el esquema que refleja los diversos tipos de crecimiento que ha habido en cada tubo.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 101 Cuestionario pruebas bioquímicas 1. En que se distinguen las bacterias según sean: a. Efectúa una asociación entre los términos siguientes : fotolitotrofo fotoórganotrofo Quimiolitotrofo Quimioórganotrofo Champiñón Lechuga Escherichia coli Bacterias nitrificantes . a 37 ºC. explica que tipo de microorganismo ha crecido y que metabolismo ha utilizado. anabolismo. Distingue entre Fototrofo y quimiotrofo 5.

RMVP i. Solución Ringer g. Citrato f.Prueba del Rojo Metilo (RM) 4 . A.Fermentación butanodiólica F .Enzima -galactosidasa 6 .Agar Sangre 10 . Exigencia de O2 Tipos de enzimas que posee la bacteria c. respecto a: a.Coenzima Citocromo c 7. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . A.6 . ¿Porqué la fermentación desprende menor energía que la respiración? 10.Agar KIA (por picadura en tubo) 3 . Levine e. Qué información nos aportan las siguientes pruebas bioquímicas: Prueba del Indol Prueba de la Oxidasa Prueba de la Catalasa Agar Citrato 15. ¿Qué es la glicólisis? ¿Cuáles son las sustancias que forma en su degradación? 7.Fermentación de proteínas E . El medio RMVP: ¿A qué pruebas bioquímicas se aplica? ¿Qué sustancias se buscan en cada caso?¿Cómo las identificamos? 14. ¿Cuáles son las diferencias más significativas entre respiración y fermentación? 9.Fermentación de lactosa C . Describe la función del ATP 8.Prueba de la ONPG 2 .Agar Citrato .Respiración I . A. Mc Conkey d. TSA b.Fermentación de lípidos G .Prueba de Voges Proskauer (VP) 8 .Prueba de la catalasa 9 .Fermentadoras tardías de lactosa H . Clasifica en selectivos o generales los siguientes medios: a.Respiración anaeróbica J . TSB h. Sangre c.Hemólisis 1 . Tipo de sustrato que ha fermentado b.Aerobios/Anaerobios facultativos D . Manitol sal 13. A.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 102 6. ¿Qué procesos bioquímicos se pueden observar en un hemocultivo tipo Agar sangre? 12.Desaminación/descarboxilación 5 .Fermentación ácido-mixta B . 11. ¿Qué información del metabolismo de una bacteria nos permite conocer la siembra por picadura en un agar KIA.

32. 22. SO32-.. no puede respirar. 18.coli. Salmonella sp..4 ). Si una bacteria da negativo con la prueba de la oxidasa. podemos asegurar que ha habido respiración.Fermentación butanodiólica F .N02.Respiración C . 21. Las bacterias aerobias estrictas no pueden fermentar.Fermentación ácido-mixta B .ácidos orgánicos 3 -C02 + H20 4 . Si una bacteria da positivo en la prueba de la oxidasa puede respirar. 28. nunca respiración. Una bacteria que de negativo a las pruebas de oxidasa y catalasa será anaerobia estricta.Respiración anaeróbica D . En la respiración anaeróbica el amonio no puede actuar como aceptor final de electrones. 26.Acetoína 5 . 31. 30...Indol 7 . Todas las bacterias aerobias o anaerobios facultativos darán positivo con la catalasa..Fermentación de proteínas E .Fermentación heteroláctica 1 . Indicar para las siguientes afirmaciones Verdadero o Falso: 17. Si hay producción de ácidos la bacteria ha respirado. La fermentación no se produce en condiciones de aerobiosis.. los nitratos pueden actuar como aceptores finales de electrones. En una fermentación. Pueden obtener energía por respiración y por fermentación. 20. Las bacterias aerotolerantes pueden respirar. Las enterobacterias son anaerobias facultativas. 19.ácido láctico 2 . Proteus vulgaris . En ausencia de oxígeno molecular siempre se producirá fermentación. Si se produce CO2 . 29..ácido láctico y otros ácidos orgánicos 6 .PRUEBAS BIOQUÍMICAS 103 16. justifica el comportamiento previsto en el agar KIA (superficie/fondo/gas/H2S) . 27. La fermentación se puede producir en condiciones de anaerobiosis. 23. Efectuar las asociaciones adecuadas entre los términos siguientes: A . 24.6 . de las bacterias: E. Las bacterias aerotolerantes nunca darán positivo en la prueba de la oxidasa. 25.Fermentación homoláctica G . De acuerdo con los perfiles bioquímicos correspondientes (tabla 6.

.PRUEBAS BIOQUÍMICAS 104 33. Los resultados de un test API lOS han sido: ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX + + + + + - + - - + - N02 + a. Describe los procesos bioquímicos que se habrán producido 34. 35. Utilizando la tabla 6. b. Determinar el código que corresponde al perfil bioquímico obtenido y buscar en la tabla 6. 87-88) con Pseudomona aeruginosa. Consultando la tabla pag. justifica la procedencia del nombre de la bacteria "enterobacter aerogenes". 83.6 .3 a que bacteria corresponde.4 determinar por cálculo probabilístico cuál sería el nivel de identificación obtenido. Consulta los resultados que se obtienen en el agar TSI (pag.

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