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Manual de Procedimientos Hematologicos

Manual de Procedimientos Hematologicos

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS HEMATOLOGICOS

OBJETIVO: Establecer y estandarizar los procedimientos realizados en el área de hematologia que sirvan de ayuda diagnóstica al clínico. ALCANCE: Será de utilidad para todos los profesionales y personal técnico.

2 2.1 3.3 3.INDICE SECCION 1: OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS 1.2 3.1 2. SECCION 2: ANTICOAGULANTES 2.1 4.6 RECUENTO LEUCOCITARIO EN CAMARA DETERMINACION DE HEMATOCRITO DOSAJE DE HEMOGLOBINA FROTIS DE SANGRE PERIFERICA FORMULA LEUCOCITARIA PREPARACION DE LA SOLUCION DE TURK .2 4.4 OBJETIVO OBTENCION DE SANGRE VENOSA OBTENCION DE SANGRE VENOSA CON TUBOS AL VACIO OBTENCION DE SANGRE CAPILAR.1 1.3 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES USADOS EN HEMATOLOGIA ANTICOAGULANTES SOLIDOS ANTICOAGULANTES LIQUIDOS.2 1.3 4.5 4.3 1.4 METODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS COLORACIONES USADAS PREPARACION DE COLORANTES TINCION CON COLORANTE WRIGHT SECCION 4: HEMOGRAMA 4. SECCION 3: REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEOS 3.4 4.

SECCION 5: VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR 5.9 RECUENTO DE PLAQUETAS .3 EXPLORACION DE LA COAGULACION 8.1 METODO DE IVY TIEMPO DE COAGULACION 8.3 INTERPRETACION SECCION 8: PERFIL DE COAGULACION 8.1 METODO DE WINTROBE SECCION 6: RECUENTO DE RETICULOCITOS 6.5 TIEMPO DE SANGRIA 8.8 FIBRINOGENO 8.6 TIEMPO DE PROTROMBINA 8.4 ONTENCION DEL PLASMA 8.1 DEFINICION 7.5.2 INDICE DE PRODUCCION MEDULAR (IPM) SECCION 7: PORCENTAJE DE CELULAS LE 7.1 PRINCIPIOS GENERALES 8.1 METODO DE RECUENTO DE RETICULOCITOS 6.7 TIEMPO DE TROMBINA 8.2 METODO 7.2 MECANISMO DE COAGULACION 8.

la cefálica mediana y la basílica mediana. ya que de ello depende que el resultado del análisis de la muestra sea el correcto. Las venas deben inspeccionarse y evaluarse aplicando un torniquete en la parte superior del brazo.OBTENCION DE MUESTRAS SANGUINEAS OBJETIVO: Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtención de muestras sanguíneas con un adecuado control de calidad . unos cuatro centímetros por encima del lugar de . Las venas indicadas son la cefálica. Si está sentado. el brazo debe tener un buen apoyo. La mejor postura para el paciente es el decúbito dorsal. 1. móvil y venas de un grueso calibre y relativamente superficiales. dependiendo de la prueba a usar. El lugar de elección es generalmente la región venosa antecubital la cual posee piel fina.2 OBTENCION DE SANGRE VENOSA Materiales y Equipos requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Ligadura de 25 a 30 cm. Se efectuará en ayunas o no . De largo • Agujas de 20x1 • Tubos con anticoagulante EDTA tripotásico o dipotásico Fundamento Constituye el tipo de extracción sanguínea más comúnmente empleado.

Procedimiento • Verificar que los elementos por utilizar estén listos. y que el paciente se sienta cómodo • Aplicar el torniquete aprox. Este debe apretarse sólo lo necesario para impedir la circulación venosa de retorno.la puntura. Se coloca el algodón seco encima de la punción y se retira la aguja. • El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos segundos y después la mantendrá cerrada. • Se retira el estuche protector de la aguja • Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena. en un área de 2 pulgadas. .5 -1 cm en el tejido subcutáneo . • Limpiar la zona con Alcohol de 70% o alcohol yodado. se perfora la piel haciendo avanzar la aguja 0. Cuatro dedos por encima de la flexión del codo. esto ayudará a visualizar las venas superficiales. • Tapar y agitar el tubo por inmersión para homogenizar la muestra con el anticoagulante. luego se perfora la vena • Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer puño.

„ Proceder a la técnica de la extracción .3 OBTENCION DE SANGRE VENOSA AL VACIO Materiales y equipos requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Ligadura • Tubos al vacío con anticoagulante EDTA • Agujas con dispositivo para extracción de sangre al vacío.TOMA DE MU SANGRE VEN „ Tranquilizar al paciente „ Distraerlo „ Colocarle cómodamente 1.

• Se debe evitar la hemólisis pues se puede obtener una disminución en el recuento de eritrocitos. • Mezclar por inmersión suave la sangre con el anticoagulante. se inserta el tubo al vacío por la aprte posterior y no preocuparse por la cantidad de sangre extraída ya que el mismo sonido del vacío avisará que la extracción de sangre terminó. • Retirar la ligadura • Colocar un pedazo de algodón seco sobre la parte donde se encuentra oculta la aguja. En el tejido subcutáneo. pacientes obesos y pacientes en schock. pues puede producir hemólisis y otros cambios que ponen la sangre en un estado inadecuado .PROCEDIMIENTO • Repetir los pasos 1 al 4 • Se retira el estuche protector de la aguja y éste se enrosca al dispositivo para la extracción de sangre al vacío • Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena . VENTAJAS DE LA EXTRACCION DE SANGRE VENOSA • Pueden hacerse repetidos exámenes con la misma muestra • Parte de la muestra puede congelarse para referencia futura. DESVENTAJAS DE EXTRACCION DE SANGRE VENOSA • La punción es técnicamente difícil en niños. Sacar la aguja con un movimiento rápido y depositarla en un descartador de agujas. • Pedir al paciente que presione firmemente el algodón durante 3 minutos.se perfora la piel haciendo avanzar la aguja entre 0. • Evitar éxtasis venosa producida por el torniquete.5 y 1 cm.

• Desinfectar la zona zona con alcohol al 70%. Materiales Requeridos • Algodón • Alcohol al 70% • Lancetas desechables Procedimiento • La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en los adultos y del dedo gordo del pie o talón en niños. secar con algodón estéril • Punzar la piel con una lanceta estéril desechable • Desechar la primera gota y recoger las siguientes en tubos capilares. Ventajas • Puede obtenerse con facilidad • Preferible para extensiones de sangre periférica Desventajas • Sólo se puede obtener pequeñas cantidades de sangre • La sangre en capilares frecuentemente se hemoliza • Los resultados no pueden ser comparados con los resultados de pruebas venosas • El recuento de eritrocitos y leucocitos así como el recuento de plaquetas y reticulocitos no debe realizarse en sangre capilar debido a la difícil estandarización del flujo sanguineo capilar. debe recurrirse a la punción capilar. .1.5 OBTENCION DE SANGRE CAPILAR Fundamento: Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequeña o cuando por diferente motivos no pueda practicarse una punción venosa.

Muestra capilar .

Ventajas: • Respeta morfología eritrocitaria y leucocitaria • Asegura la conservación de los elementos formes sanguíneos • Al inhibir la aglutinación de las plaquetas. • La concentración recomendada es de 1. .5mg/ml de sangre.ANTICOAGULANTES OBJETIVO: Mantener la sangre extraída incoagulable mediante la adición de un anticoagulante. facilita su recuento o su expresión semicuantitativa a través del frotis.1 CARACTERISTICAS DE ANTICOAGULANTES No alterar el tamaño de los hematíes • No producir hemólisis • Evitar al máximo la agregación plaquetaria • No alterar la morfología de los leucocitos. 2.2 ANTICOAGULANTES SOLIDOS • EDTA: Es la sal disódica o tripotásica del ácido etilendiaminotetra acético. • 2. al fijarlo impiden su activación y por ende la coagulación sanguínea. Realizan su acción a través de un efecto quelante sobre el calcio. DEFINICION: Sustancias que inhiben la formación del coágulo mediante diversos mecanismos.

La concentración para las pruebas de hemostasia es en proporción de 1:9 (0. por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante. a los cuales les produce encogimiento y cambios en su forma.Desventajas • Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos.5ml de sangre total) .5 de anticoagulante para 4. 2.3 ANTICOAGULANTE LIQUIDO • CITRATO DE SODIO: Es ideal para las pruebas de hemostasia .Actúa a través de la precipitación del calcio.

• • • • Microscopio Portas y cubre-objetos Soporte de preparaciones Cubeta • • • • Lanceta Alcohol Metanol Giemsa .REALIZACION Y TINCION DE FROTIS SANGUINEO Fundamento: Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos empleando el canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensión.

limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol. 3. Seguidamente. hacer una punción para conseguir una gota de sangre. Depositar la gota de sangre. 4. de forma continua e ininterrumpida.Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo 1. La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico. con el fin de seleccionar para la tinción la mejor lograda. 2. La rápida desecación evita la deformación de los glóbulos sanguíneos. nunca soplando o por calor. con el empleo de un porta de borde esmerilado se hace un frotis o extensión de sangre. . Es conveniente realizar dos o tres extensiones. El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que se hace la extensión. Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente posible. Sólo debe pasarse una vez. en un lado y en el centro de un porta bien limpio.

2. .El citoplasma: de color azulado o gris en los linfocitos y monocitos. 4. leucocitos (células nucleadas) y plaquetas (pequeños corpúsculos). basado en una combinación de eosina y azul de metileno. 3. Aunque cada laboratorio emplea su receta..El núcleo: de color púrpura 3.La forma.Sumergir en solución de Giemsa (1 volumen de colorante y 9 de PBS) durante 10 minutos. 4. en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de Romanowsky. se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados. Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de células..Granulaciones: mezcla de colores pardos (neutrófilos). los colorantes y los métodos de tinción más empleados son los siguientes Tinción de Giemsa: 1. 2. TINCION DEL FROTIS SANGUINEO El frotis..Fijar con alcohol absoluto durante 3 minutos.. Generalmente.Secar el frotis.. anaranajadas (eosinófilos) y azul oscuro (basófilos). una vez seco..En esta región existe un exceso de granulocitos y monocitos. Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensión y termina en un área donde las células adoptan una posición acartonada (barbas). dimensión y contorno de los hematíes (de color rosa pálido).PARTES DE UN FROTIS SANGUINEO Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediata al punto de partida de la extensión (cabeza)..Lavar con abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio.. Con la tinción de los elementos formes de la sangre se pueden distinguir los siguientes aspectos morfológicos de las células: 1. En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos.

Teñir con colorante de Wright durante 1 minuto. sin colocar un cubreobjetos sobre el portaobjetos.Teñir con una mezcla de colorante en 2 ó 3 volúmenes de tampón (PBS) durante 10 minutos.. 4...Secar el frotis.. 2. si éstas desean ser conservadas. Si ésto se realiza después de observar el frotis con aceite de inmersión. hay que limpiar la extensión con xilol para eliminar todo resto de aceite.Lavar en abundante agua y dejar secar antes de observar al microscopio. Generalmente. . el frotis se observa después de haberse secado después de la extensión y tinción. Pero si deseamos conservar las extensiones hay que colocar un cubreobjetos tras depositar sobre el portaobjetos una substancia adherente. 3. Conservación de las extensiones de sangre periférica: Para evitar que las extensiones se deterioren con el paso del tiempo.Tinción de Wright: 1. hay que aplicar algunas procedimientos adicionales.

Filtrar antes de usar Observaciones Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados: Glóbulos Rojos: rojo amarillento.8g 1 lt 15ml Disolver en un mortero el colorante con la glicerina Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasando a un frasco oscuro . Monocitos: cromatina púrpura medio. Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro. citoplasma rosa pálido y gránulos lila. gránulos azul oscuro.PREPARACION DEL COLORANTE WRIGHT REACTIVOS: • Colorante wright • Metanol • Glicerina PROCEDIMEINTO 3. Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro. . citoplasma azul pálido y gránulos rojo brillante. citoplasma azul grisáceo y gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta o púrpura. hialómero azul claro. Linfocitos: cromatina púrpura oscuro. Agitar. citoplasma azul cielo. Basófilos: cromatina púrpura oscuro.

Extensión gruesa. es muy importante no esperar más de 2 horas de la extracción. Puede evitarse mediante filtración del colorante antes de su empleo. Tiempo tinción excesivamente prolongado. Extensión delgada. . Empleo de colorante excesivamente alcalino Una coloración excesivamente rosada (acidófila). Exceso de buffer. Lavado insuficiente. Una extensión excesivamente azul (basófila). Apreciación de artefactos morfológicos debido al anticoagulante. Presencia de precipitados. Cuando el frotis se realiza con sangre recolectada con EDTA.Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo. Empleo de colorante excesivamente ácido. ya que pueden aparecer alteraciones morfológicas imprevisibles de las células sanguíneas.

HEMOGRAMA El Hemograma de Shilling constituye uno de los exámenes de laboratorio más usados en el campo de la hematología comprende las siguientes pruebas: RECUENTO LEUCOCITARIO .

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