ESCUELA POLITECNICA DEL EJÉRCITO

CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

MICROBIOLOGIA II

NOMBRE: Diana M. Martínez U.

CURSO: Quinto B
FECHA: 2011-04-28.

INFORME No. 2
1. TEMA: ANALISIS MICROBIOLÓGICO DE ORINA

2. INTRODUCCION:

2.1. JUSTIFICACION: Este estudio sirve para el diagnóstico de enfermedades que puedan
estar afectando al aparato urinario, como son: Uretritis, Cistitis, Pielonefritis, entre
otras, las cuales son causadas por microorganismos y es necesaria su identificación
para un correcto tratamiento y curación.
(www.aula2005.com)

2.2. MARCO TEORICO:

La orina es un liquido transparente amarillento de manera normal, que es el resultado de

la excreción, es decir la unión de varios órganos para eliminar los desechos de nuestro
organismo que vienen del proceso de nutrición; la deposición de la orina debe darse en
condiciones normales sin dolor, ardor o picazón de ningún tipo y con la coloración
normal descrita; de no ser asi, podríamos presentar una infección a las vías urinarias, para
lo cual es necesario realizar el urocultivo.

(www.ferato.com)

El urocultivo es utilizado para diagnosticar la bacteriuria, que es en síntesis la presencia

de patógenos en el tracto urinario más allá de la uretra anterior. Para que la bacteriuria
constituya un diagnostico confiable, debemos tener un recuento significativo de al
menos 105 de UFC.

(www.dominolandia.com)
La toma de la muestra es muy importante, por lo que se recalca que en personas
mayores de 4 años la muestra ideal es la primera muestra obtenida en la mañana
tomando la evacuación media, es decir, dejar caer un poco de orina y tomar lo siguiente,
ya que al permanecer más de 4 horas en la vejiga, tiene una mayor concentración de
microorganismos, en bebes o personas inhabilitadas, se puede usar una sonda uretral o
supra púbica; para el almacenamiento se requiere de un recipiente de 3 a 5 mL que este
estéril. El traslado debe realizarse lo más pronto posible, pero de no ser asi, la orina
puede ser refrigerada hasta 2 horas antes de ser sometida al cultivo.

(www.scribd.com)

Con la finalidad de contar y aislar y contar las bacterias que se hallan presentes en la
orina, se utiliza un agar CLED, que es un medio Cistina-Lactosa-Electrolitos-Deficiente,
que proporciona con la lactosa un medio para la fermentación, como indicador de pH se
usa el azul de bromofenol, y las fuentes de electrolitos han sido reducidas para minimizar
la proliferación de Proteus. También se usa un agar sangre o agar chocolate o agar
MacConkey para el cultivo en el caso de que existan sedimentos patológicos debido a sus
nutrientes.

(Manual BD CLED agar, 2009)

La mayor parte de las infecciones es causada por una clase de bacterias, Escherichia coli,
las   que habitan normalmente en el colon y son muy comunes debido a la cercanía entre
el orificio uretral y el colon. En la mayor parte de los casos, las bacterias comienzan a
crecer en la uretra y a menudo se desplazan a la vejiga, causando una infección de la
vejiga o cistitis. Si la infección no se trata rápidamente, las bacterias pueden ascender a
través de los uréteres e infectar los riñones. Esta grave afección se llama pielonefritis.
También hay otras enfermedades causadas por ejemplo, por Clamidia y micoplasmas, asi
como también una enfermedad a largo plazo llamada cistitis intersticial que es una
inflamación de la vejiga.

(www.4woman.gov)

2.3. OBJETIVOS:

 Realizar un análisis de bacteriuria en una muestra de orina.

 Determinar una bacteria en la muestra tomada y analizarla.
 Determinar la resistencia de la bacteria tomada a ciertos antibióticos.

2.4. HIPOTESIS:
  E. coli. Presentará susceptibilidad a amoxixilina.

3. MATERIALES Y METODOS:

MATERIALES:
 Asas.  Muestra transportada de orina
 Hisopos.  Medios de cultivo: CLED, agar
 Mechero y fósforos. sangre.
 Gradilla.  Portaobjetos
 Kit de tinción Gram

METODOS:
Antes de iniciar la práctica es importante tomar en consideración todas las medidas de
bioseguridad, como son el uso de guantes, verificación de mecheros, y para evitar cualquier
confusión el correcto marcaje de las cajas de agares.
1. Cerca del mechero, se homogenizó la muestra de orina infectada con E. coli para
luego sobre papel secante, abrirla y con usa desinfectada, se tomó una gota de la
orina, la cual se sembró trazando una línea de calibrado dividiendo el medio en 2
partes iguales, y luego mediante técnica de estriado se diseminó la muestra por
todo el agar, haciendo ese procedimiento para ambos agares.

2. En otro procedimiento, se tomó una gota, y se la fijó en el portaobjetos, lo cual se

llama técnica de gota fresca a la cual se le hizo la tinción Gram.

3. Para un tercer procedimiento, siendo E. coli la bacteria patógena mas común, se

realizó de la misma una dilucion en solución MacFarland, para con un hisopo,
sembrar en medio de Agar Nutriente, una vez sembrado, dividimos la caja petri en
5 partes para realizar el antibiograma con los siguientes antibióticos:
Streptomicina, Amoxicilina, Claritromicina, Cefotaxime, Kanamicina; tomando
cada uno de ellos con pinzas esteriles, y dejando incubar durante 48 horas para
luego medir los respectivos halos de inhibición.
4. RESULTADOS:
 En el agar sangre no obtuvimos una bacteriuria significativa de la muestra
infectada con E. coli además, que en los resultados se muestra indicios de
contaminación, en porcentaje podríamos decir que aproximadamente el 40%
de la caja tiene crecimiento.
 El agar CLED, sufrió un cambio en su coloración, de azul a amarillo, aun asi, no
presenta un crecimiento de 100000 UFC, notamos que aproximadamente el
55% de la caja presenta crecimiento.
 La tinción realizada indica que la bacteria en la muestra de orina es E. coli.
 De la prueba de antibiograma de E. coli podemos mostrar las dimensiones de
los halos en la siguiente tabla:

ANTIBIOTICO DISTANCIA DEL HALO (mm) RESULTADO

Streptomicina 40 Sensible
Amoxicilina 11 Sensible
Claritromicina 27 Sensible (e)
Cefotaxime 18 Intermedio
Kanamicina 11 Resistente
Tabla1. Valores de distancia del halo de sensibilidad en mm de cada uno de los antibióticos
aplicados.

5. DISCUSION:
 Como se indica en el marco teórico, (dominolandia.com) para que una bacteriuria sea
significativa, debe tener al menos 100000 UFC, es decir, la caja petri llena en su
totalidad por lo que con el crecimiento presentado en nuestra caja no podíamos decir
que era una bacteriuria significativa. Dato que podemos afirmar en los dos agares
sembrados.
 En el caso del agar sangre, se muestra contaminación por lo que no podemos
considerar este como un resultado valido, ya que no tenemos la certeza del
crecimiento de cada una de las bacterias y deberíamos identificar cada colonia
diferente encontrada para poder aislar la de interés, o en tal caso, repetir la practica.
 El resultado del antibiograma muestra una sensibilidad a Streptomicina y Amoxicilina,
aun asi, se ve un error en Claritromicina, pero estos resultados no son muy confiables,
debido a que pudo ocurrir un error con el manejo de los antibióticos, el
almacenamiento de los mismos, las fechas de caducidad, o el hecho de que el Agar
 Nutritivo si permite realizar un antibiograma, pero el mas indicado para esto es el
agar Mueller Hinton.

6. CONCLUSIONES:
 Las muestras presentadas por los estudiantes no presentaron infecciones, por lo que
para realizar la practica nosotros infectamos una muestra con E. coli

 De acuerdo con el antibiograma realizado, E. coli si presenta sensibilidad a

amoxicilina, lo que comprueba nuestra hipótesis, pero dicho resultado queda a
consideración por los problemas expuestos en la discusión.

 No se obtuvo bacteriurias significativas en ninguno de los agares.

 Pudimos mediante tinción gram identificar a E. coli en la muestra de orina por gota
fresca.

7. RECOMENDACIONES:
Tener mayor precisión al momento de realizar el antibiograma e intentar que se realice en
las condiciones más adecuadas, ya sea de medio, concentración de la bacteria o temperatura
para lograr obtener resultados mas acertados.

8. BIBLIOGRAFIA:
 http://www.aula2005.com/html/cn3eso/10excretor/10excrecioes.htm
 ENCICLOPEDIA MEDICA. FERATO, 2010. CONSULTADO 2011-04-25
http://www.ferato.com/wiki/index.php/Orina
 INFECCION DEL TRACTO URINARIO (ITU). 2007.
http://www.dominolandia.com/infectios/pdf/11.pdf
 http://www.scribd.com/doc/8555111/-Urocultivo
 BD. INSTRUCCIONES DE USO- MEDIO EN PLACAS LISTO PARA SU USO. JUNIO 2009.
BD CLED AGAR. PA-254003.04. http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8758
 CENTRO NACIONAL DE INFORMACION MEDICA DE LA MUJER.
http://www.4woman.gov/IVU. CONSULTADO 2011-04-25