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CENTRIFUGACIÓN

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CENTRIFUGACIÓN

Se habla de centrifugación cuando tenemos partículas de distinto tamaño en un medio acuoso, éstas sedimentan hacia el fondo a una velocidad que depende de su peso. Este efecto podría utilizarse para separar componentes de distinto peso si no fuera porque las velocidades de sedimentación son pequeñísimas, por lo que el sistema no es útil. Así, pues lo que se hace es aumentar dichas velocidades de sedimentación haciendo girar muy rápidamente la mezcla. En este caso, la fuerza centrípeta hace el papel de la gravedad (peso) y puede ser mucho mayor que éste haciendo girar muy rápido la mezcla: este es el principio de la centrifugación y de la ultracentrifugación. Se coloca la mezcla en un aparato que la haga girar a velo cidad angular constante muy elevada. Una vez está girando, la mezcla experimenta una aceleración centrípeta que puede llegar a ser, en ultracentrifugadoras de laboratorio, unas 500000 veces la aceleración de la gravedad. Esta fuerza empuja a sedimentar, a distinta velocidad, a las partículas de distinta masa de la mezcla, creándose distintos estratos con las partículas de cada clase. Este método es muy utilizado en biología y medicina.

Centrifugación
La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa , la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de los principios en los que la densidad: Todas lículas, por posa, sectadas por cualquier y una extensa variedad de técnicas derivadas de esta. Donde la fuerza es mayor a la gravedad.

Fundamento teórico
El objetivo de la centrifugación es separar sólidos insolubles(de particulas muy pequeñas dificiles de sedimentar)de un liquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrífugo, con lo cual las partículas tenderán a desplazarse a través del medio en el que se encuentren con la aceleración G. E=velocidad angular2 x radi

Tipos de centrífuga
Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugación son las centrífugas. Una centrífuga tiene dos componentes esenciales: rotor (donde se coloca la muestra a centrifugar) y motor. Existen dos tipos de rotores:
y

De ángulo fijo: Los tubos se alojan con un ángulo fijo respecto al eje de giro. Se usa para volúmenes grandes.

y Basculante: t l i tí l i i t t t i ií l t tí t i l t tí it t i l i h ll t t i li t i t j l tí tí l l i i t i ti t t l l l l l t l i ti í ll t l ti i i i t l li 4ºC i i t t t it Analíticas: C i t i Preparativas: C ti : y l í " lt tí tí : t t " A il h t í l t l ti l l l l i i t íl ii l t H 4 ti tí De mesa: Al i t i 1 000-15 000 5 000 i H ti tili lt l i t l ti i it l i l i i t ll ti l l l lt 4 6 lit t i i ll y De alta capaci ad: Al h t 6 000 De alta vel cidad: i 5 000 Ultracentrí ugas: i ti y y l t h t 100 000 i i t Tipos de centri ugaci n y y y Centri ugaci n di erencial: l i i l i l l t i i l tí l i i il l l i i j t t t i íi l ti ti t l l j l it i l til l Centri ugaci n isopícnica: tí l l i i i t i t i l i i t i i A N h i Centri ugaci n zonal: tí l l i l i i t i l i i t l i i t i tí l tí l i t i ti t l i t l l ti t i l l i l i t l .

ribosomas y microsomas) y biomol culas. sin refrigeraci n. densidad y forma. y p- m) Coeficiente de sedimentaci n : variable según condiciones experimentales ! s de la partícula en un medio estándar ! agua pura a 20ºC ! s 20.000 rpm y tubos muy cortos->volúmenes muy peq. IV.g) d2 ( s=. porque varia en f(x)del medio. Existen diferentes maneras de monitorear la sede las partículas en la ultracentrifugaci n.. Utili a rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. el caso de macromoléculas :valores del orden de 10-13 segundos ! el Svedberg.(eppendorf ->+ velocidad) Motor crea la fuerza centrífuga. símbolo S. Velocidades altas : > de 10. .tipos en f(x) velocidad: 1. Útil : partículas grandes (células. INSTRUMENTACIÓN: centri uga . está acoplado al rotor q tiene celdillas donde se coloca la muestra en tubos. Conocer su comportamiento en centrifugaci n ! facilita el diseño de métodos para su aislamiento. 1S = 10-13 segundos. CENTRIFUGACION Técnicas de separaci n de partículas. d2: volumen de la partícula p: densidad de la partícula m : densidad del medio g: fuerza centrifuga relativa : la viscosidad s: velocidad sedimentaci n Dimensiones: de tiempo a pesar de ser una vel. de sobremesa o clínicas: pequeñas. etc. Se debe tener en cuenta el tiempo de centri ugaci n ya que si se excede.w Informaci n obtenida con s : Caracterizar a la partícula y obtener informaci n sobre su tamaño.000 rpm.De baja velocidad. el más común de ellos mediante luz Uerfresones. Base : distinta velocidad de desplazamiento de las partículas en un medio líquido al ser sometidas a un campo centrífugo.g 18.) Micrófugas : variante de las anteriores. precipitados de sales insolubles. COEFICIENTE DE SEDIMENTACIÓN: velocidad a la que se desplaza una partícula en el campo centrífugo unidad (1.y densidad según su masa. todas las mol culas podrían sedimentar en el fondo del tubo. Ultracentri ugaci n: Permite estudiar las características de sedimentaci n de estructuras subcelulares (lisosomas. máxima velocidad : 5.

datos obtenidos no tan precisos Rotores: la pieza q sufre el giro y sobre la cual colocamos la muestra. Materiales : Vidrio: ventaja es transparente.-oscilantes. porque evita el rozamiento. para controlar mejor la tº.000 g Soluciones solventes alcalinas Policarbonato S Plásticos. sistemas auxiliares : sistema de refrigeración. Útil : fracciones celulares.De alta velocidad: velocidad máxima : 18. y Inerte. problema es caro. macromoléculas). 3.-de ángulo fijo: celdillas con una inclinación.000 rpm. S S S dietilpirocarbonato fenol . macromoléculas.Ultracentrífugas: velocidad máxima : 50.25. estimaciones cuantitativas de S. La mayoría son aleaciones de Al. los tubos tienen q estar perfectamente balanceados.. se corroe. Tienen que ser materiales ligeros y resistentes a las altas velocidades. virus.-verticales: rotores macizos con celdillas esculpidas paralelas al eje. y Preparativas :aislamiento de partículas de bajo S (microsomas. o fibra de carbón. tipo de muestra. PM). Tubos: condiciones : inertes. volumen y tipo de fraccionamiento. Alternativa Titanio. 3. pequeño tamaño. refrigeradas para evitar el calentamiento del rotor por rozamiento con el aire .80. a más se rompen y Vidrio Corex : hasta 25. el AND se pega a sus paredes y Hasta 3000 g. sistema de alto vacío (obligatorio).000 . Insuficientes : ribosomas. Tipos : y Analíticas : obtención datos precisos propiedades de sedimentación (s. tipos: 1.2. duraderos y caros..000 . flotantes o basculantes: las celdillas no están ancladas de 2. problema q tiene una vida media corta. algunas con sistemas de vacío. virus. q no interaccionen con la muestra y resistentes para q no se deforme a altas velocidades.000 rpm . son ligeros. Elección depende : tipo de rotor.

-C.. Útil : aislamiento de células y orgánulos subcelulares Para evitar la baja resolución podemos colocar la muestra en una banda estrecha. no está incluido en el gradiente de densidad empleado.transparen Polisulfano No muy trasparente Polipropileno y polialomero eppendorf S: sensible R: resistente TIPOS DE CENTRIFUGACION: 1. la dmax es menor q la dmedia de las partículas.. abundaran las de mayor s ->no hay pureza. Separación de los componentes de la muestra en bandas o zonas 3.Velocidad de centrifugación mucho más alta que en la centrifugación zonal. y min.por todo el tubo. Se pueden producir corrientes de convección . pero con densidades similares 4.C. porque influye en la distancia q recorre.C. Método de equilibrio-> la partícula se detiene cuando p= m .. ISOPICNICA: Gradiente de densidad. va de la parte superior con la d min hasta el fondo con la d max ->variación gradual de la densidad en el medio. así todas las partículas parten de un mismo pto-> fraccionamiento. en el rango de las densidades de las partículas a separar. Útil : separación partículas con " s por " tamaño y forma. EN GRADIENTE DE DENSIDAD: Muestra : parte superior como una fina banda. Tiempo parámetro a controlar. DIFERENCIAL: La muestra se distribuye homogénea. ZONAL EN GRADIENTE DE DENSIDAD: El valor de densidad de las partículas. Capacidad de separación pobre. R R R S R R R R . ya q como se distribuyen por todo el tubo en el pellet habrá de todas las partículas. Separación en función del coeficiente de sedimentación (s). Separación de las partículas en función de su s.C. reorganización del líquido -> evita usando gradientes de densidad. Función del gradiente : estabilizar el medio. max. 2. No dependencia del tiempo .

neutros : metrizamida y Nycodenz . Más estable Inconveniente : ! viscosidad. Útil para la separación de cél sanguíneas. Sacarosa y glicerol Ventajas: coste. afecta al movimiento de la particula Útil : partículas grandes (células y orgánulos celulares) *Derivados iodados del ácido benzoico Derivados ácido triodobenzoico (sustituciones para ! solubilidad) Biológicamente inertes.000).No provocar modificaciones biológicas en la muestra 2.Fácilmente separable de la muestra 5.No interacción con el método de detección (visible -UV) 3. 5. inerte. > densidad con sacarosa. pureza.No difusible 6. aún con tamaños similares. alta viscosidad Util : fraccionamiento orgánulos celulares y virus Ficoll Sacarosa polimerizada (PM 400.Valores mínimos de viscosidad 4.Bajo coste. iónicos : metrizoato.Aplicación de la muestra : no es relevante. Utilidad : partícula de " densidades. carácter no iónico Desventajas: activos osmóticamente. ahí se coloca la muestra. GRADIENTES DE DENSIDAD: y Características necesarias : 1..C. COLCHON: busca diferencias en las d de el componente a separar y el contaminante. Centrífuga sobre una disolución homogénea más densa q la d de las cel a aislar. densidad max.

Útil para estructuras sensibles a la fuerza iónica.91 g/cm3 . < densidad max. Capaz de bandear RNA Cloruro de cesio (más usadas) densidad max : 1. gran estabilidad.15 nm) de ácido silícico con Revestimiento de polivinilpirrolidona (PVP) Útil : partículas grandes (tamaño de las partículas coloidales y sensibles osmóticamente) *Sales de metales alcalinos pesados : cesio y rubidio Altas concentraciones : 6 . 2.01 g/cm3. bromuro de etidio *Otras sales : Trifluoracetato de cesio ! separar topoisómeros de ADN Rubidio : similar al cesio. Inconvenientes : coste. Muy corrosivas->ojo rotores Sulfato de cesio (más usadas) densidad max. corrosión. Útil : separación de ADN ! distamicina. variación de densidad del ADN por % G+C. interferencia con UV afecta a la absorvancia Percoll suspensiones de partículas (5. fácil formación. Inconvenietes : coste.. mem . las otras precipitan.Densidad máxima : 1. Útil para macromoléculas resistentes a la fuerza iónica ! ácidos nucleicos.8 M. virus.cel. TIPO Y FORMACION DE GRADIENTES En f(x) de la variación de la densidad: y Discontinuos y y Comenzando por la disoluci n más densa (³overlaying´) Comenzando por la disoluci n menos densa (³underlaying´) B) Continuos . elevada fuerza iónica.4 g/cm3. .

y y y Por di usi n Utilizando formadores de gradientes Por centrifugación : gradientes autogenerados FRACCIONAMIENTO Y ANALISIS DE LOS GRADIENTES. Condiciones : y y y Evitar turbulencias y distorsiones del gradiente Recomendable mantener la temperatura del tubo = temp. Extracción directa de la banda y Por desplazamiento de ³abajo a arriba´ y Por desplazamiento de ³arriba a abajo´ y Por corte del tubo Detección de la muestra : y Espectofotométrica (ácidos nucleicos. . proteínas) y Seguimiento actividad enzimática y Por marcaje radioactivo.tras cent. de centrifugación Evitar la inversión del gradiente Métodos : y Extracción directa del contenido del tubo y Perforación . 2 casos: *centrifugación diferencial (verde): muestra distribuida homogénea-. Obs. y CI : necesario densidad! directamente con picnómetro o índice de refracción Manera fija al eje de la centrífuga-> móvil Inconveniente si la centrífuga no esta bien balanceadaa oscilación del tubo es incontrolada se puede perder la muestra. Hay sobrenadante y pellet.

Cuando la fuerza acaba el contenido recupera su posición.Farmacéutica. Este proceso utiliza. al igual que la filtración es una operación ampliamente utilizada en la Industria Químico . §©¨ ¤  paraci La separación sóli o .lí i a la lí i . El contenido es impulsado por la fuerza de la centrífuga y se dispone perpendicular a la dirección del eje de giro.INTRODUCCION La centrifugación.sólido sólo puede basarse en la diferencia de densidades entre los lí uidos estos con el posible sólido presente. no siendo necesaria la existencia de una diferencia de densidades entre el sólido el lí uido. El pellet se coloca en el ext inferior del tubo + alejado del eje de giro. SEDIME TA I Por su parte. li .lí uido . diferencial: reorientación del líquido. cambio de posición del. en cambio tambi n puede basarse en la diferencia de densidades encontrarnos ante la denominada E TRI A. el contenido del tubo no sufre reorganización tubo vuelve su posición.lí i o puede basarse en la retención de las partículas en un edio filtrante. para lograr la separación deseada. la fuerza centrifuga que se genera en un recinto que gira. Jesús García 2. Si lo ue se desea es obtener        ¥               ¥                       ¨¤      ¨   § ©¨ ¨ ¦ ¡ ¢ § ¡  ©¨ ¤  ©¨ ¦ § ¦ ¢ ¨ ¨ § ¡ ¡ § § ¦ ¡¢ § § ¡ ¢ ¤ ¥ £ ¢¡   La t if i i cibl aci aplicabl a la paraci con o in la presencia e sóli os. uando en una separación lí uido . La Centrifugación en la industria químico farmacéutica Ing. denominamos al proceso P RI I A I pesada libre de fase li era lo denominamos O E TRA I .lí uido nuestro objeti o es lograr un efluente puro libre de partículas sólidas estamos ante un proceso de LARI I A I . lo q sufre un cambio de posición es el contenido del tubo. gradiente de densidad: cuando comienza y acaba la fuerza centrífuga se reorganiza el líquido -> mecanismo para iniciar y acabar la centrifugación.1 .*gradiente de densidad (rojo):muestra no homogénea.lí uido nuestro objeti o es obtener la fase li era libre de cuando lo interesante es aislar la fase fase pesada. la separación sólido . el pellet se dispone en la superficie del tubo más alejada al eje de giro (1º dibujo) *C. en el caso de centrifugación diferencial (1ºdibujo) En gradiente de densidad la muestra queda paralela al eje de giro (2º y 3º dibujo) Malos para sedimentar . proceso al cual se le denomina ILTRA I E TRI A. tubo provoca mov de las particulas x gradiente d.lí uido la lí uido . *C. Si en una separación sólido .

m = masa del cuerpo Kg. c.1 . todo cuerpo sometido a un movimiento giratorio según una trayectoria circular de radio R con una velocidad angular W experimenta una fuerza c. 2 1 1 & 2 & & P = Peso del objeto o partícula Kg. 2. w = velocidad angular radianes/ seg. = uerza centrífuga Kg.2. 1 2 1 2 2 ) & ' ( 2 & ' 1 A y su valor vendrá expresado por: . . .2. % $ #" $ # " ! Esta fuerza se conoce como ERZA CE TRI donde: m = masa del cuerpo.una suspensión pero con mayor contenido de sólido nos referiremos a un proceso de ESPESAMIE TO.81 m/ seg . g = aceleración de la gravedad = 9. el cual nos permite evaluar la eficiencia de una centrífuga operada bajo estas condiciones al compararla con el proceso regulado a gravedad. El ACTOR O se expresa como: CE TRI & ) & 0 ' ( ) & ' ( & donde: C = actor centrífugo.PRINCIPIOS Y TEORÍAS DE LA CENTRIFUGACIÓN Como se conoce Ver ig. El número de veces ue la fuerza centrífuga supera a la fuerza de gravedad se denomina ACTOR CE TRI O. ue tiende a alejar el cuerpo del centro de giro. . .

2B se presentan nomogramas para calcular el actor Centrífugo a altas revoluciones. 6 8 . En la figura 2. 3 4 5 Para el cálculo aproximado puede utilizarse la expresión: Debemos destacar ue el actor Centrífugo se denomina tambi n como " " ó "Z". 8 7 6 6 5 En la figura 2.2A se presentan nomogramas para calcular el actor Centrífugo a bajas revoluciones. planteando ue tal o mas cual centrífuga genera un campo centrífugo de tantas " ". = RPM.R = Radio de giro m).

El líquido que atraviesa el medio filtrante abandonará el rotor a través de la perforaciones del cesto. sobre la cual queda una capa de líquido retenido. también conocido como aro superior. . F E D BBB B @ C BBB B BBB @ 9 C BBB BB @ A C BBB BB H A Al igual que el proceso de separación por filtración empleando un filtro. 2.RL).Carga. el cual posee perforaciones en su superficie cilíndrica.Rb corresponde al ancho del borde superior del cesto. .En dependencia de la magnitud del actor Centrífugo.4 podemos observar el corte de un cesto filtrante de radio Rc. o espalda que determina el máximo espesor de sólido o líquido retenible en la centrífuga. súper centrífugas 4 . Sobre esta pared perforada se coloca un medio filtrante el cual retendrá las partículas sólidas contenidas en la suspensión a procesar. el proceso de filtración por centrifugación puede ser dividido en las siguientes etapas: . de espesor Rs .1 .Descarga. labio. G H . Todo líquido o sólido cuyo radio sea inferior a Rb rebosará por encima del aro superior.Lavado. para realizar una filtración centrífuga. La dimensión Rc .2.2. .Filtraci n Centrí uga Como se observa en la ig.Escurrido final. Esto será estudiado con mayor detalle en el punto 2. en el que se a retenido una torta de espesor Rc . requerimos de un recinto denominado cesto filtrante.3.4.Rs). En la figura 2.2 ) y ultra centrífugas 3 ). .Escurrido inicial. las centrífugas se clasifican en: centrífugas -4 ).

Rb )h Ec. el caudal de alimentación debe ser tal que en todo momento RL sea ligeramente mayor a Rb para evitar el rebose del cesto y la consiguiente pérdi a de sólido y d suspensión.2. y detenida la suspensión de suspensión.El escurrido inicial Una vez formado el espesor de torta deseado.La superficie del cesto = 2 P Rc h = S Ec.Los principios técnicos de la filtración a presión constante pueden ser modificados para su aplicación a la filtración centrífuga.2.1. pero sólo son aplicables después que la torta ha sido depositada y durante el flujo de filtrado claro o lavado a través de dicha torta. lo cual invertirá un tiempo determinado conocido como tiempo de escurrido tei).2 .2.El contenido de sólidos en la suspensión a procesar. 2. Q P I I 2 2 I .4) . ) .1 La Carga Por lo antes expuesto.2.El caudal de alimentación .La capacidad del cesto = P Rc . Durante la carga. 2. será necesario desplazar el líquido sobrenadante. El tiempo de carga necesario para que el sólido alcance un punto entre Rc y Rb dependerá de: . el tiempo de carga necesario para que el sólido retenido alcance Rs tendrá que ser estimado experimentalmente ya que el cálculo teórico se dificulta por la variación del espesor de la torta y su permeabilidad. 2. así como la disminución de la presión de la columna de líquido.

).seg. que la torta está completamente llena de líquido. /m . que la resistencia del medio filtrante es constante y que la torta es prácticamente incompresible. que el flujo de líquido es laminar.).Si se desprecian los efectos de la fuerza de gravedad y los cambios de energía cinética del líquido.7) m 2 ). 2. Aa = área media aritmética de la torta = Rs + Rc) P h Ec. si se asume que la caída de presión de la acción centrífuga se iguala con el arrastre del líquido que fluye a través de la torta./m ). Por ende: R R 2 3 -1 2 donde: VL = Volumen de líquido sobrenadante en el cesto = P(RL .). r = densidad del líquido Kg. mt = masa de la torta retenida en el cesto Kg.2.). 3 R R R R R R R 3 R R R . a = resistencia específica de la torta m/ Kg. Al = área media logarítmicas de la torta = 2Ph Rc . El tiempo de escurrido inicial será el tiempo necesario para que el volumen de líquido sobrenadante atraviese la torta al **** volumétrico calculado según la ecuación anterior. S = superficie filtrante del cesto m ). m = viscosidad del líquido Kg.Rs))/l n(Rs/Rc) (Ec.8) (m ). Rm = resistencia del medio filtrante m ). podemos obtener la siguiente expresión: donde: q = velocidad de flujo volumétrico m /seg.Rs)h q = velocidad de flujo de filtración en M /seg.

Rs )h Ec.2).2.11 y 2. etc. su estimación dependerá en primera instancia de la experiencia del ingeniero o de los resultados experimentales. Este tiempo se puede calcular según la siguiente expresión: S Debe tenerse en cuenta que cuando se ha realizado el lavado. 2. . el tiempo de escurrido final corresponderá a la suma del tiempo de escurrido previo del líquido de lavado (teol) retenido en la centrífuga y del tiempo de escurrido final del líquido de lavado (t fl).2.12 y utilizado los valores de la viscosidad y claridad del líquido de lavado.11 2.3. el tiempo de escurrido inicial podrá estimarse según la siguiente expresión: donde: rs = densidad aparente del sólido = MT /(P(Rc . 2. Estos tiempos se e calcularán empleando las ecuaciones 2.2.4 ESCURRIDO FINAL El tiempo de escurrido final (tef) se inicia cuando el nivel de líquido alcanza rs y concluye cuando RL = Rc.tei = tiempo de escurrido inicial en minutos.1. habilidad del operador.1. automático).1. El volumen de lavado y por ende el tiempo empleado para ello (tl) se determinará experimentalmente (ver punto 2. tales como: características y destino del sólido. .5 Descarga El tiempo de descarga (td ) del sólido depende de varios factores. período en el cual la resistencia al desplazamiento del líquido es variable.6 TIEMPO TOTAL DE UN CICLO A los tiempos anteriores por lo general hay que adicionarle los tiempos de aceleración (t ) y a frenado (tf) del equipo a menos que la centrífuga esté diseñada para su descarga en movimiento.3 El Lavado Por lo general la etapa de lavado es optativa y de realizarse se iniciará inmediatamente al concluir el escurrido inicial (cuando RL llega a RS) para evitar rajaduras de la torta que generen canalizaciones.2. Por ende. Si despreciamos la resistencia del medio. 2.1.. método empleado (manual. 2.. mecánico.

que depende a su vez de la forma de la partícula. 2. sobre todo para aislamiento de células y orgánulos subcelulares. Es una técnica muy útil. Para lograr la separación. en H2O a 20 ºC m/f La centrifugaci n diferencial En este método. Se define coeficiente de sedimentación (s) como la velocidad de sedimentación por unidad de fuerza centrífuga. el ciclo de centrifugación será: T = ta + tc + tlo + tef + tf + td Cuando optemos por incluir el ec. Tras la centrifugación se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado... B. Ésta depende de la masa y densidad de la partícula.14 Los procesos de centri ugado Existen dos métodos de separación en centrifugación: A.. Los precipitados obtenidos luego de cada centrifugación estarán enriquecidos en una determinada partícula. Es un tipo de separación logrado en base al tamaño de las partículas. (S) 1 S= 10-13 seg. S La unidad se denomina Svedberg. el tiempo total se calcula como: T = ta + tc + tlo + tl + teol + tefl + tef + tf + td ec. los coeficientes de sedimentación de las partículas deben diferir en al menos un factor de tres (moléculas con s mayores precipitan primero).Por ende.Centrifugación en gradiente de densidad.13 lavado. 2. Es un parámetro útil para caracterizar una partícula y puede ser determinada en una ultracentrífuga. el tubo de centrífuga se llena con una mezcla uniforme problema. . Coeficiente de sedimentaci n (s) La velocidad de sedimentación de una partícula depende del campo centrífugo aplicado. Esta técnica consiste en someter a una muestra heterogénea de partículas a fuerzas de centrifugación crecientes por períodos de tiempo crecientes. El coeficiente de sedimentación(s) es directamente proporcional a la masa de la partícula (m) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) de la misma.Centrifugación diferencial. de la densidad del medio y del coeficiente de fricción.

cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior.La centrifugaci n en gradiente de densidad El método de gradiente de densidad implica la utilización de un soporte fluido. En esta técnica la muestra es disuelta en una solución isocrática y bajo la fuerza centrífuga el soluto forma el gradiente al distribuirse en el tubo durante la centrifugación. por lo cual también se le llama centrifugación isopícnica. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular en un solvente en el que la muestra a analizar pueda ser suspendida. En este punto no se producirá una sedimentación posterior debido a que flotan sobre un "colchón" de material que posee una densidad superior que la suya propia de tal manera que aunque se prolongue el tiempo de centrifugación. Existen dos variaciones dentro de la centrifugación en gradiente de densidad: y y Centrifugación de equilibrio en gradiente o isopícnica Centrifugación zonal Estas técnicas permiten la separación de partículas y moléculas que difieren en masa o densidad. La separación de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas. las partículas . La condición fundamental es que la densidad máxima del gradiente final debe siempre exceder a la densidad de las partículas. se denominan autoformados. La centrifugación de equilibrio en gradiente o isopícnica La centrifugación de equilibrio en gradiente separa las partículas con base en sus densidades diferentes. La muestra se sitúa en la parte superior del gradiente como una fina banda. La centrifugación de equilibrio en gradiente permite que las especies sedimentantes se muevan por el gradiente hasta que alcanzan un punto donde su densidad y la del gradiente son idénticas.

Los gradientes de CsCl permiten separar moléculas cuyas densidades difieren en por lo menos 0.1. bajo grado de ionización. más densos en el fondo que en la parte superior del tubo. si la centrifugación se prolonga en el tiempo las partículas se recuperan en el pellet. sedimenta lentamente en los altos campos gravitacionales aplicados durante la centrifugación y se establece un gradiente con la mayor concentración en el fondo del tubo (el ión Cl. En general se usan rotores de tipo swing-out. Las muestras son centrifugadas lo suficiente como para separar las moléculas de interés. y ser buen solvente para las moléculas que se intentan resolver. del DNA 1. y la densidad y viscosidad del medio.1. Esta técnica se emplea para separar partículas similares en tamaño pero distintas en densidad. Los gradientes de densidad impiden que las bandas de cada componente se ensanchen por efecto de corrientes convectivas y se mezclen durante la aceleración y desaceleración del rotor.de las ribosas de manera que la densidad de las moléculas de RNA se incrementa más que la del DNA. A diferencia de lo que ocurre en la centrifugación isopícnica. como se muestra en el siguiente gráfico: . con el propósito de aumentar las diferencias entre las densidades de las moléculas (a pH neutro el Hg++ se une a T y A.85 g/ml.1.098] 100 La centrifugación zonal La muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidad preformado. transparencia a la luz UV. La densidad de la partícula en ese punto se conoce como ³buoyant density´. baja viscosidad y alta densidad. y no su densidad.6 .no van a ir al fondo del tubo. La migración depende de: el tamaño y forma de las partículas.66)/0. Frecuentemente se usan con este propósito gradientes de sacarosa. Por otro lado el Cs+ se une a los fosfatos del DNA y RNA y a los grupos OH. Se requieren las siguientes características en los solutos usados para formar el gradiente: bajo PM (de manera que el tiempo requerido para lograr el equilibrio sea corto).75 . El agregado de compuestos intercalantes como el bromuro de etidio permiten separar moléculas de DNA de distinta conformación aunque tengan la misma composición de bases. el Cs+. La siguiente ecuación relaciona el % de G+C con la densidad (?) de la molécula: % (G+C)= [(?.3 g/ml. así como diferentes orgánulos celulares. La densidad aproximada en CsCl de proteínas es 1. En los medios de separación suelen incluirse también Hg++ o Ag+.02 g/ml. La propiedad física sobre la que se fundamenta la separación es la masa de las partículas. por ser un ión compacto. moviéndose cada partícula a diferentes velocidades dependiendo de su masa. tales como ácidos nucleícos. Ficoll. Bajo fuerza centrífuga las partículas comenzarán a sedimentar a través del gradiente. la densidad máxima del gradiente no debe exceder la de las partículas a separar. y el ión Ag+ se une a G y C). Frecuentemente se usa CsCl.lo sigue de manera de mantener la neutralidad de las cargas). la fuerza centrífuga aplicada. otros medios usados con este fin son: glicerol. Esto es cierto para moléculas. Moléculas con una alta proporción de G y C poseen mayor densidad como consecuencia de los tres puentes H formados. Percoll.7 g/ml y del RNA es 1.

es una empresa con la misión de proporcionar servicios de calibración y calificación de la más alta calidad a equipos e instrumentos. cumpliendo con los requerimientos de normas y recomendaciones nacionales e internacionales. para lo cual Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB). A. O bien. V. en cuanto a revoluciones por minuto y a tiempo de centrifugado. de C.. Conozca el Perfil.Diagrama de representación de la velocidad de la centrifugación zonal e isopicnica 1: Densidad boyante de partículas de menos densidad 2: Densidad boyante de partículas de más densidad Con la finalidad de obtener separaciones adecuadas de los componentes de las mezclas es necesario que la velocidad y el tiempo de centrifugado sea el adecuado para lo cual el equipo en el cual se llevará a cabo el proceso deberá estar debidamente calibrado. cuenta con personal calificado para verificar y calibrar este tipo de equipos Instrumentos Científicos y de Laboratorio S. Productos. . (ICLAB). Dirección y Teléfono de ICLAB. haga contacto directo con ICLAB para solicitar mayor información sobre servicio de calibración de equipos.

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