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CIENCIA 11(4),265 - 269, 2003 Maracaibo, Venezuela

Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento y producci6n de pigmentos de la microalga marina Chroomonas sp.

Jose Luis Bermudez, Gloria Sal1chez, Gisela Fuenmaqor y Ever Morales" Laboralorio de Bioquimica !J Microorganismos Fotostnteucos. DJ)(o. de Biologia.. f"(ICllilac:l £'pt.·rimen.al d(~ Ciencias. La Uniuersidad del Zulia. Apartado 526. hlaracailx>. Edo. Zuh«.

RepUblica Boliuariana de Venezuela.

Recibido: 11...(}Q-()2. I\Ct •. -r'"ldu: ~=,-11 -o~

El carbona constiluye el principallTlaCronutriente pal a el crecimiento y productividad de las microalgas .. Par tal motivo es necesaIio evaluar las diferentes fuentes de carbona organico e tnorganieo en cultivos de microalgas .. En este sentido se estudi6 cl efccto del bicarbonato a 5 n1M y del acctato a 1. 5 Y 10 mM sabre el crecimiento y contenido de clorofila y carotcnoidcs de la nucroalga Chroomorms sp. utilizando culuvos discontinuos con mcdio Algal a 4.0 mM NaNO:, Los cultivos para cada t.ratamicnto sc reahzaron par triplicado y mantcnidos COl1 atrcacion constantc .. ctclo de luz.oscurtdad 12: 12h y 28±2°C. La mejor fucntc de carbona para la producci6n de biomasa fuc cl acetate, con densidades cclulares de 73.56: 78 .. 55 y 74 .. 82 x 10" ccl.rnl, I para 1. 5~' 10 mM rcspccuvamcnte. siendo estas densidades si~nificativamcntc supcriorcs (I) < 0.05) a la obtcnida con bicar-

~

bonato y en cl control. Sin embargo, en los cultivos con bicarbonato sc produjeron las conccntra-

cioncs mas clcvadas de clorofila y carotenoides con 254.77 y 106.22 f~.ccll respcctivamcntc y con difcrencia significativa (P< 0.05). rcspccto a los cultlvos con acetate y en el control. Adernas. cl contcnldo de ambos ptgmentos dismtnuyo con la conccntraci6n de acetate. Los resultados indican que el acetate estimula la producclon de biomasa en condiciones rruxotroflcas: micntras que el btcarbo-

nato cstimula la de clorofila y carotcnoidcs cn condiciones autotroflcas.

Palabras clave: Chroornonus: fuente de carbono: microalga ..

. Effect of the carbono Source on rowth and pigments production of marine microa ga Cl1roo111011as sp.

Abstract

Carbon constitutes the major macronutrtent for the growth and productivity of the n11· croalgac. For this reason It's necessary to evaluate the different sources of Inorganic and organic carbon in rntcroalgal cultures. For this purpose. the effect of 5 mM bicarbonate and 1. 5. and 10 rnM acetate on growth and chlorophyll and carotenoids content of the mtcroalga Chroomo· nas sp was studied. by using discontinuous cultures with Algal medium 4 rnM NaNO:1" Cultures for each treatment were cal I led out by trtpltcate and maintained with constant aer atlon. llght:dark cycle 12: 12 h and 28~2°C. The best carbon source for biomass producUon was aceta-

te with cell densities of73.56. 78.55y 74.82 x 10·' ce1.mL I for 1" 5 and 10 mM respccttvely. betru;

..

It Autor para la correspondencia. E-mail: c vcrm@iamnct.com

Scientific Journal from the Expcrirn c ,nt:tl J=clculty uf Scicnc c -!'io,

at La Uruversrdad del Zulia VOlume 11 ~4·.t October-Dec ... -rnbcr :!003

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Produccuni de J1i~"'ClltOS de In ,uicroalga marina Chroomonas sp.

this densities significantly higher than obtained in cultures with bicarbonate and control. However. with bicarbonate the concentration of total chlorophyll and carot cnords of 25~. 77 Y

106.22 fg.cell respectively were significantly higher (P<O.05) to acetate and control. Moreover. the content of chlorophyll and carotenoids decreased with acetate coriccrurn 1 ion. These Tc~ult~ suggest that acetate stimulates biomass production in mixotrophic conditions. While bicarbonate increased the chlorophyll and carotenoids production in autotrophic conditions.

Key words: Carbon source: C hroo monas: microalga.

Introducci6n

sados en biocncrgeuca del crccimteruo mi croalgal tanto expertrncntales como teoricos. en condiciones au totrofas, rruxotroficas y heterotr6ficas sugieren que la mayor pro-

ductividad se obtiene bajo condiciones rntxotroftcas (7).

En cultivos mixotr6ficos de la microalga Chlamydomonas humicola se ha descrtto que el acctato induce un crecimiento de 20 veces respecto a un control sin acetato, Micnlras que. en Scenedesmus obltquus es capaz de rnejorar su crccimiento y asimilaci6n de amonio (8. 9). Asi mismo. en AnkisLrodesmus

convulutus se encontr6 que la glucosa logra aumentar la velocidad de crecimiento y producci6n de biomasa en compai acton a la adicion de otras fuentes carbonadas. como acetato. citrate y bicarbonato (10).

Es de suma importancia evaluar cl efecto de compuestos carbonados sobre microalgas de tnteres econ6mico con la finalidad de comparar la producclon de biomasa en condiciones autotr6ficas y mtxotroflcas. En este sentido. hemos selecclonado a Ia mi-

croalga marina Chroomonas sp .. la cual presenta potencial por su excelente crectmtento en condiciones de laboratorto (11). Por tal rnottvo, en el presente trabajo se evaluo la influencia del acetato y del bicarbonato sabre el crectmtento y contenldo de pigmentos de la rntcroalga autoctona Chroomonas de

tmportancla en acutcultura.

Algunas microalgas son capaces de rcernplazar las fuentes de carbono y energia. utilizadas en sistemas autotr6ficos. por compuestos organicos como azucares. actdos organtcos, alcoholes. arninoacidos. extracto de Ievadura y peplonas (1. 2) tal como ocurre en bactertas y hongos (3. 4). Por ejernplo, en ambientes acuaticos los compuestos organicos podrian estlrnular una prolongada su pcrvtvcncia de ciertas rnicroalgas bajo una auscncia 0 deficiencia de iluminaci6n (3).

Los diversos tipos de nutrici6n organotroflca en microorganismos fotosintettcos estan relacionados con la utiltzacton de energia luminosa Y CO2, adernas de los compuestos organlcos astmtlados. Tal es el caso, de la condici6n heterotr6fica en rrucroalgas capaces de mantener un crectmtcnto establc y sostenldo en presencia de algun sustrato organico en ausencia de Ilumtnacton. En cambia. cuando uUliza stmultanearnente para su crecimiento luz y sustratos organtcos como fuente de energia. y como fuente de carbono

CO2 y sustratos organtcos, la mlcroalga rnaruftesta una capactdad mixotr6fica (5).

En los cultlvos mlxotr6ficos la astmilacion oxidativa de los compuestos organtcos y de CO2 a traves de las reacctones fotosmteUcas ocurre simultaneamentc. resultando una estlmulaci6n del crecimiento comparada con otras condiciones de cultlvos (7). Es dectr, la mtcroalga es capaz de mantener su crectrntento utllizando un componente autotroftco. a partir de dioxide de carbono y Iuz, y un componente heterotroftco a partir de un compuesto organlco. Los estudios ba-

Materlales y Metodos

Mleroorganlsmo

Sc utlltzaron culuvos untalgalcs de la mtcroalga marina Chroomonas sp .. aislada

Scientific Journal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 11 N" 4, October-December ~(l(lJ

I.L. Bermudez Ct. al. / Cicncia Vol. 11, N" 4 (2003) 265 - 26CJ

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al Norte de Maracaibo. Venezuela. Esta microalga sc caractertza por no prescntar pared cclular. ser planctonica. hiflagclada V de

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un tamailo hasta de 5 micras (11)_

Sistema de Cultivo

Todos los cultivos discontrnuos sc rcalizaron con agua de mar cnrtquccida COIl media de cultivo comercial AlGAl a una con cerrtracton equtvalerue de 4.0 mM NaN03• (12). Se utiliz6 como Iuente de carbono tnor-

ganico. cl bicarbonato de sodio a una concentraci6n de 5 mM v el acetate de sodio

.-

como fucnte de carbona organtco a 1. 5 v 10

....

mM: con respecto a cultivos controles con

s610 el media de cultivo comercial.

Los cultivos por tres replicas se iniciaron con una densidad celular de 2x 1 0·ccl-rnl. ' en frascos de 350 mlrde capacidad a un volumcn de cultivo de 150 mL. Estos expcrimcntos sc mantuvicron con tlumtnacion lateral a una intensidad luminosa de 156 urnol quanta. m J -s I. fotoperiodo de 12: 12 horas, atrcacton constaruc. salinidad de 35%0 y a una temperatura de 28.5 ± 1 °C d'urantc 18 dias.

tanol 2: 1 C/J. Los extractos se clarificaron mediante ccntrtfugacton y cl sobrcnadantc medido a: 480. 630 )' 663 nm en un espcctrofot6mctro contra un blanco de acctona:

rnetanol 2: 1 r /J.

La concentracton de Clorofila a v c v la

.. ,..

de- carotenotdcs obtcnidas (13) V (14) Iucron

..-

cxprcsadas en fg eel I.

An8lisis estadisticos

Los valores de densidad celular v de los

-

ptgrncruos se cornpararon mediante un analisis de varianza de una via para la dctcrrninaci6n de grupos significativamente dtferentes, En todos los casas donde la prueba F resulto stgruftcattva, se empleo la prueba de ranges multiples de Scheffe's a un riivcl de significancia del 95%. mediante el progranla Stat.Most for Windows vcrstori 3.0.

~

Resultados y Discusi6n

Densldad celular y pararnetxos de creclmlento

El crcctmicnto de la microalga sc sigui6 mediante recucnto cclular cada dos dias, hasta alcanzar la rase cstacionaIia uttlizando carnara de Neubauer. Los valores de densidad celular fueron expresados en cel.mL' y correspondcn al promedio de las producidas en fase estacionaria para cada tratarntento. En la rase exponcnctal se calculo la

veloctdad de crectrntento (pl. expresada en dtv-dia I y el ucmpo de dupltcacton (td).

.. Plgmentos

La determinacion del contentdo de clorofila y carotenotdes sc realiz6 directamente sabre culUvos frescos y por dupl1cado. Sc torno un 1 mL de culUvo en un tubo de reaccion. Luego de centrifugado a 5500 r.p.m. durante 15 minutos. sc dcscarto el sobrenadante. Los ptgmentos sc extrajeron del pellet mediante la adici6n de 1 ml. de acctona: me-

La nucroalga crccto cn todas las conccntraciones de acctato. COil densidades cclulares superiores significati\·anlcntc (1)< 0.05). a la del control y bicarbonato (Figura 1). El acetato a 5 luM produjo cl mayor crcctrnicnto con 78.55 xl 0·' cel-rnl, 1. Aun-

que. el test de rarigos multiples Tukcy

(1)< 0.05). indica que los tratamtcnto con acctato son bomogcneos .. Los oultivos con

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Figura 1.

Influencia de la fuente carbonada (acetato de sodio v bicarbonato de so-

~

dio) sobre el crecirniento de la mi-

croalga Clrr(l(l"'(l1l11S sr·

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at La Uruvcrsidod dl·t Zulia Volume 11 ~ .... , October-December :!OOJ

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Produccum de l'i~n,el1tos de la nticroalga marina Chroornonas sp.

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acctato tambien exhibicron una fase exponencial de inmediato sin rnnguna fase de adaptaci6n: con 10 eual produjeron una mayor velocidad de crecimiento respecto al bicarbonato. Es decir, a 1. 5 v 10 mM de aceta-

_.

to se alcanzaron valores de J..1 de 0.36: 0.35 y

0.33. respectivarnente en relacion a la obtenida con bicarbonato. de 0.23 rrabla 1). En la mtcroalga marina lsocnrusis sp. tarnbicn sc ha desctito un incremento del crecimiento y del peso seco hasta una concentracton de 1 0 mM de acetato de sodio. en culuvos mixotr6ficos crecidos entre 0 y 50 mM (15).

La baja densidad celular registrada en los cultivos con bicarbonato en relaci6n al control rrabla I), posiblemente sea debido a la poca eficiencia de la microalga en utilizar el HCO~~ a traves del mccanismo de concerttraci6n del CO2 para el crecimiento (16). A pesar de que esta microalga es marina y prescnta un excelente crecimiento a pH entre 7 y 9 (11). Es posiblc que, Chroomonas utilicc

cl bicarbonato al rango de concentraci6n encontrado en el agua de mar. El hecho de que esta microalga mantienc un crecimicnto sostenido con tan solo el CO2 (0.030/0) presente en cl aire del sistema de agttacton, sugicre que esta fucntc de carbono cs la uttlt-

zada con mayor eficiencia con respecto a otras fuentes de carbono tnorganicas.

Aun cuando el bicarbonato no favorc-

cia cl crecimiento de la microalga Chroorno nas .. en cambro si estimu161a produccton CC'lular de clorofila y de carotenoides con 254. 77 Y 1 06.22 Ig-cel ' rcspecuvamcntc. cuvos valorcs fueron significativamcn ic su-

...

periorcs (P > 0.05) al resto de los tratamien-

tos (fabla 1).

La disminuci6n del contenido celular de clorofila y de carotenoides por efecto del acetato ha sido reportada para otros compuestos organtcos. En Poterioochromonas , nalhamensis. la adici6n de glucosa. glicerol 0 eta-

nol a los cultivos induce un aumento de su crecimicnto. pero decrece la concentraci6n celular de la clorofila. Lewitus y Caron (17) propusieron un efecto inhibitorio de la sintcsis de cloroflla debido a la presencia de estos sustratos organicos en el media de cultivo.

En la rntcroalga Chlamydomonas hurrucola .. en cambia. el acetato logra mejorar la producci6n de clorofila en relact6n a las cclulas autotr6ficas (8). situaci6n dcscrlta de i~ual manera para Golenkinia sp .. (18) y

Cillamuyobotrys stellata (19). Esto stgntflca qllC el efecto de compuestos orgamcos pue-

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----.

Tabla 1

Densidad celular (10" cel-rnl, '±std), velocidad de crecimiento (u), tiempo de duplicacion (td)

- Y contenido de clorofila y de carotenoides (Ig-cel ') de la microalga CI.rOOIJIOIIQS sp. cultivada con acetato y bicarbonato

-- --_ .... - -----....-- ----_--- ------ ... .........- ........ ---- --- --------._. ._.---------.......,___ .... .. .___............_.. .-._-_... --- ...... _ .. - _ ..

Control

Bicarbonato Acetato Acetate Acetato

5 mM 1 mM 5 mM 10 mM

--- --- ...... -......-.....------ ------------ ----.... _ _....._ ........-----.......... --- __ .

61.29± 10.34 72.56±9.3 78.55±8.9

0.23 0.36 0.35

3.0 1 1.95 2.00

74.82:!: 15.5 0.33 2.10

- - • -- - - - - -... ~ .... - ___...... ~ - - ----.Ir-- ...-- ........... _. _ _....- ____", ____

Densldad Cclular 67.19±7.6

0.34

Td 2.02

Clorofila (fg·cel'±std)

Carotenoldes 88.49:t13.7 106.22±14.0 94.13%6.2 89.45±17.9 B4.27:!:8.9

(fg·_~e!I~~!Q.}_-~-.-_ .. _.___ _ _ ------_~--.-- .. . _a .• _ _ • __ . __ ~ __ ..

J.l= Velocidad de crccimicnto (divisioncs por dial. td= Ticmpo de duplicaci6n (dtas'). Control sin bicarbonato y sin

acetate. ·

191.92±33.6 254.77±29.0 200.07:21.2 lB4.73±42.3 168.90%18.0

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at La Univcrsidad del Zulia Volume 11 N" 4, October-December 2003

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de variar dcpendiendo de la microalga y condiciones de c ult ivo. Es dccir. la abundancta de carbona orgaruco en el medio puedc inhibir 0 cs tirmrlar la formaci6n de clorofilas en alaurtas rnicroalgas (20).

Los resultados indican que el acetate puede scr utilizado para cstimular cl erectmicnto de la microalga Chroomonas en condiciones nuxotroflcas, Micntras que. el btcarbonato parece canalizar la produccion de clorofila v la de carotenoides con una mavor efi-

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cacia que el acetato en cultivos autotr6ficos.

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Conclusiones

Agradecill1.iento

AI Consejo de Desarrollo Cicntifico y llumanistico (CONOES) y a La Universidad del Zulia por los aportcs al desarrollo de este trabajo. Tr abajo cofinanciado por CO'NI)ES- LUZ 0 1902-99.

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