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01-GENETICA

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La técnica de Southern blotfue descripta a fines de la década de 1970 por E. M. Southern con el
fin de detectar un fragmento particular de ADN de entre una gran cantidad de secuencias, gra-
cias al uso de una sonda molecular(en inglés, probe). Esta sonda es un fragmento de ADN cuya
secuencia es complementaria a la que estamos buscando. Los pasos básicos de la técnica son: (i)
El ADN blanco (aquel que estamos estudiando) es digerido por una enzima de restricción por lo
cual obtenemos una mezcla de cientos de miles de fragmentos de distinto tamaño. (ii) El ADN
es migrado en un gel de electroforesis (normalmente de agarosa) para separar los fragmentos en
función de su tamaño. (iii) Se transfieren las muestras de ADN del gel de agarosa hacia una
membrana (nylon o nitrocelulosa), donde quedarán fijadas tal cual migraron. (iv) Previa desnatu-
ralización del ADN por medio del calor, se coloca la sonda (marcada con una sustancia radioacti-
va o quimoluminiscente) sobre la membrana. La sonda va a unirse a la secuencia complementaria
del ADN que estamos estudiando (fenómeno de hibridación) y, una vez expuesta a un film sen-
sible, dará una marca positiva (una banda/s) en el lugar/es donde se encuentre, según el tamaño
(peso molecular) del fragmento (Figura 1.7). En los animalarios, esta técnica está muy ligada a la
detección de animales transgénicos, en particular a la evaluación de la cantidad de copias del
transgén (ver capítulo VIII). Como veremos en el Capítulo VI, la llegada de la técnica de Southern
blot
fue cardinal en el descubrimiento de los primeros polimorfismos en las secuencias de ADN
(los RFLPo polimorfismos de longitud en fragmentos de restricción), cuya presencia revolucionó
el desarrollo de los mapas genéticos. En el caso de querer estudiar la expresión de un gen (usan-
do directamente el ARN), la técnica es básicamente la misma y se denomina Northern blot, un
guiño al nombre del autor de la técnica de hibridación en ADN.

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