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Guia de Lab Oratorio de Bioquimica 2011 Salud]

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GUÍAS DE LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA

PARA CARRERAS DEL ÁREA DE LA SALUD

Coordinadora: Mg. ©Karin Figueroa S.

LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011

CALENDARIO DE ACTIVIDADES

FECHA Carbohidratos

PRACTICO

Aminoácidos

Proteínas

Enzimas

Lípidos (Colesterol) y Glicemia

Extracción de ADN

Controles recuperativos

Examen

Examen de Repetición

2

LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011

REGLAMENTO INTERNO LABORATORIOS DEPARTAMENTO BIOLOGIA.

1. La Asistencia a Laboratorio es de un 100%. 2. El uso del delantal o cotona blanca es OBLIGATORIO, éste debe usarse abotonado, el pelo debe llevarse tomado, NO se debe ingerir alimentos ni bebidas en el laboratorio, LOS TELÉFONOS CELULARES SE DEBEN APAGAR. 3. Está prohibido ingresar al laboratorio con chalas o sandalias, se deben utilizar zapatos cerrados que sirvan de protección 4. Se prohíbe ingresar a laboratorio con falda, o pantalones cortos, SOLO se permitirán el ingreso con pantalones largos. 5. Se exige PUNTUALIDAD, 6. Los estudiantes que lleguen atrasados antes del término del control, podrán ingresar y rendir el respectivo control de laboratorio (solo se aceptarán dos atrasos en el semestre), los estudiantes que no tengan su delantal NO podrán ingresar al laboratorio, lo cual implica no rendir el control respectivo siendo calificado con nota 1.0 (uno coma cero). 7. NO se aceptará recuperar laboratorios. 8. El uso de la Guía de Laboratorio es OBLIGATORIO, los estudiantes que no tengan su guía de laboratorio se les calificará con nota 1.0 (uno coma cero). 9. EVALUACIONES: 9.1 En TODOS los laboratorios se realizará un control de entrada, que comprenderá materia del LABORATORIO ANTERIOR Y DEL LABORATORIO A EFECTUARSE. Este control tendrá una duración máxima de diez minutos. Para cada tema de laboratorio se deberá realizar un informe (ver anexo elaboración de informe)

9.2

9.3 9.4 • • • 9.5

Al final del semestre se realizará un EXAMEN DE LABORATORIO Las ponderaciones de Laboratorio son: 40% : Controles de Laboratorio 30%: Informes 30% : Examen de Laboratorio A LOS ALUMNOS QUE SEAN SORPRENDIDOS COPIANDO EN LOS CONTROLES, O EN EL EXAMEN, SE LES RETIRARA LA PRUEBA, SIENDO CALIFICADOS CON NOTA 1.0 (uno coma cero). Cualqueir información es NO SE ELIMINAN NOTAS.

9.6 9.7

3

Los polisacáridos forman mediante la hidrólisis un gran número de moléculas de monosacáridos. Todos poseen propiedades reductoras. La formula genérica de los monosacáridos es CnH2nOn. sirven de material para la biosíntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergética de la célula.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO Nº 1 CARBOHIDRATOS INTRODUCCION Mg. sobre todo en el reino vegetal.Según su grupo funcional se pueden clasificar en adosas. teniendo en sus moléculas átomos de carbono asimétricos . CLASIFICACION DE LOS HIDRATOS DE CARBONO a) Monosacáridos: Son generalmente sólidos bien cristalizados. de sabor más o menos dulce. Los monosacáridos. Patricia Arias Los hidratos de carbono pertenecen los compuestos poli-funcionales que contienen grupo carbonilo (aldehído o cetónico ) y grupos hidroxilo alcohólicos. no aptos para la acumulación de energía solar. . son ópticamente activos y giran en el plano de la luz polarizada. Todos los monosacáridos naturales. ©Karin Figueroa S. Los oligosacáridos y polisacáridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas. etc. Lic. aprovechan las sustancias acumuladas en las plantas. son insolubles en agua o forman diluciones coloidales. se clasifican en triosas. derivadas de grupos carbonilos. heptosas. solubles en agua. Los hidratos de carbono participan en la construcción de las estructuras de los organismos vivos. se obtienen monosacáridos. hexosas. terrosas. Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacáridos. además poseen una masa molecular muy elevada. las glicoproteínas. o cetosa si contiene el grupo cetona (>C=O) 4 . si contiene un grupo aldehído(-CHO). ellos poseen simultáneamente propiedades de aldehídos o cetonas y de alcoholes polidroxilicos. Los hidratos de carbono están muy difundidos en la naturaleza. Los hidratos de carbono estan en la composición de los ácidos nucleicos. Los animales. según el numero de átomos de carbono en la molécula. Por lo tanto. Ellos constituyen los productos finales de la síntesis fotoquímica en plantas verdes. glicolípidos y en algunas vitaminas y coenzimas. oligosacáridos y polisacáridos.

. almidón. Numerosos agentes oxidantes como Cu 2+ (Fehling. Ag+ (Tollens) y Ferricianuro (Park-Johnson) pueden oxidar a los azúcares reductores. Esta propiedad está condicionada a la presencia de un carbono anomérico libre. los que por bloqueo o no de las funciones reductoras se clasifican en: 1. un precipitado pardo-rojizo. En estas reacciones los carbohidratos sufren una serie de degradaciones oxidativas mientras que la sustancia oxidante es reducida. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LOS HIDRATOS DE CARBONO Usando las diferencias de las propiedades químicas es posible identificar algunos carbohidratos abundantes en la naturaleza a través de ciertos tests muy simples. Estos enlaces glicosícos. que es aquel más oxidado. Todos los Monosacáridos son reductores. 5 . siendo una excepción importante la Sacarosa. Los Polisacáridos son NO reductores por estructura. En polisacáridos donde los grupos aldehídos o cetónicos libres se encuentran comprometidos formando enlaces glicosídicos. Nelson). Ag+ y ferricianuro de potasio pueden oxidar a los azúcares reductores.Disacáridos no reductores ej: Sacarosa. Una propiedad de los carbohidratos y que se emplea en su determinación es el poder reductor. Los más comunes son: glicógeno.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 b) Disacáridos: Formados por dos unidades de azúcares simples siendo lo más importante aquellas derivadas de las hexosas. Una de las propiedades de los carbohidratos que se emplean en su determinación es el poder reductor (no todos los azúcares tienen esta propiedad). dextrinas y celulosa. c) Polisacáridos: Son grandes moléculas formados por condensación de unidades de monosacáridos. dan valores negativos con el test reductor. lactosa. liberando monosacáridos que dan reacción reductora positiva. 2. El poder reductor de los carbohidratos está condicionado a la presencia de un grupo aldehído libre o un grupo cetónico adyacente a un grupo hidroximetil. se emplean usualmente dos tipos de determinaciones para establecer la presencia de hidratos de carbono. como lo son también la mayoría de los Disacáridos. Numerosos agentes oxidantes como Cu2+. Cuando se obtienen materiales biológicos de estructuras desconocidas.Disacáridos reductores ej: Maltosa. son estables en medio alcalino pero se hidrolizan en presencia de ácido. Test de Fehling El complejo ión cúprico-tartrato (reactivo de Fehling) es reducido en ambiente alcalino para formar óxido cuproso (Cu2O). . Cualquier carbohidrato que dé positivo el test de Fehling se considerará como un azúcar reductor.

5 mL del A y luego 0. Fructosa.1 g) si ésta es sólida o 1 mL si ésta es líquida y agregue 1 mL de reactivo de Fehling (0. 6 . Esta deshidratación conlleva a la formación de Furfurales. Sacarosa. Sea metódico y ante alguna duda repita el análisis.5 mL del B). permite establecer si un azúcar es Cetosa o Aldosa. liberando Monosacáridos los que darán reacción reductora positiva al someterlos al test de Fehling. Test de Barfoed Este test diferencia entre Monosacáridos y Disacáridos reductores. Lactosa. OBJETIVOS Caracterizar cualitativamente los carbohidratos de acuerdo a su reactividad en presencia de reactantes específicos. Los iones cúpricos (Cu2+) son reducidos por los azúcares reductores para dar óxido cuproso. Se coloca el tubo de ensayo en un baño de agua a ebullición por 5 min. Almidón u otros que se indicaran. Test de Iodo para Almidón La fracción molecular de Amilosa del Almidón. Hidrólisis Acida Los enlaces glicosídicos son estables en medio alcalino pero se hidrolizan en presencia de ácidos inorgánicos enérgicos.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Test de Seliwanoff para Cetosas Este test está basado en las reacciones de deshidratación (eliminación de H2O). catalizada por ácidos fuertes. tiene estructura helicoidal y es capaz de atrapar moléculas de I2 (o I3 -) para dar un complejo de color azul oscuro. El test es positivo si se forma un precipitado pardo-rojizo de Oxido Cuproso una vez enfriado. Identificar carbohidratos reductores. En medio ácido los monosacáridos reaccionan más rápido que los disacáridos.(Use pinzas de madera y coloque en el vaso piedras de ebullición). las velocidades de desarrollo de color de un azúcar en presencia de HCI y Resorcinol (reactivo de Seliwanoff). En consecuencia.. Verificar la hidrólisis presentes en distintas muestras PARTE EXPERIMENTAL En este práctico cada grupo recibe una Muestra Problema que debe ser identificada y que puede ser cualquiera de los siguientes carbohidratos: Glucosa. Para la identificación se debe realizar los siguientes tests a cada muestra patrón y a la muestra problema. en que las Cetosas la acusan con mayor rapidez que las Aldosas. Estos Furfurales luego reaccionan con Resorcinol dando lugar a un compuesto coloreado. 1.Test de Fehling Tome 1 punta de espátula de muestra (˜ 0.

si ésta es sólida y en este ultimo caso agregue 1 mL de agua destilada al tubo. Tabla de resultado Test GLUCIDO Glucosa Fehling Seliwanoff Test de iodo Fructosa Lactosa Sacarosa Sacarosa Hidrolizada Almidon 7 . Este reactivo dá un color verdoso cuando en el medio hay pentosas. (¡Cuidado!). Colocar el tubo de ensayo en agua en ebullición por 10 a 15 min. Luego de enfriar neutralice con NaOH 10 % (p/v) midiendo con papel pH.Test de Iodo para Almidón Coloque 1 mL de muestra si ésta es líquida o 1 punta de espátula si esta es sólida y agregue 5 gotas de la solución de yodo/etanol (Lugol). La formación de un color azul intenso determina la presencia de Almidón.. 4.Test de Seliwanoff (Resorcinol: 3-hidroxi fenol) Tome 1 punta de espátula de muestra si ésta es sólida o 1 mL si ésta es líquida y agregue 8 mL del reactivo de Seliwanoff.5 mL de HCI conc.Hidrólisis Acida Tome 2 mL de muestra si ésta es líquida o el doble de lo que ha estado utilizando. Los carbohidratos superiores no reductores deben liberar azúcares más sencillas reductoras que se confirmarían por el test de Fehling..LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 2. Si la muestra contiene Cetosa aparece una coloración rosada.. 3. Colocar el tubo de ensayo en baño de agua en ebullición por 15 a 20 min. Acidifique la muestra con 0. agitar.

Glutamato (Glu). Glutamina (Gln). Arginina (Arg). polares con carga negativamente (Aspartato (Asp). Histidina (His). Triptófano (Tri). polares con carga positivamente (Lisina (Lis). Fig. Es así como los aminoácidos se clasifican en Grupos R: apolares alifáticos (Glicina (Gly). Alanina (Ala). ©Karin Figueroa S. Isoleucina (Ile). polares sin carga (Serina (Ser). Tirosina (Tir). Treonina (Thr). aromáticos (Fenilalanina (Fen). Prolina (Pro). Nº1: Estructura básica de un aminoácido Los α-aminoácidos difieren entre si por la cadena lateral (grupo -R) unida al carbono-α. Patricia Arias INTRODUCCION Los aminoácidos son moléculas que contienen un grupo básico (amino -NH2) y un grupo ácido (carboxilo -COOH) unidos por un átomo de carbono. Cisterna (Cys). Lic. Asparagina (Asn).LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO 2 TITULACIÓN DE AMINOACIDOS: Determinación de pK1. el carbono α Fig. Leucina (Leu). pK2. Las propiedades de los aminoácidos queda determinada por estructura de la cadena lateral R. Nº2: Ejemplos de estructuras de aminoácidos. 8 . PI Mg. Valina (Val). Metionina (Met).

El pH en el cual predomina la forma con carga neutra del aminoácido se llama el punto isoeléctrico (pI).1 M A 25ºC. 9 . Las especies iónicas predominantes en puntos clave de la titulación se muestran encima de la gráfica. Fig. Nº3: Estructura zwitterión. Nº4: Curva Titulación de Glicina 0. centrados alrededor de pK1 =2. son moléculas que puede donar y aceptar protones. Es decir. En una solución alcalina se encuentra mayoritariamente la forma con carga negativa.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Fig. la mayoría de los aminoácidos existen como iones dipolares. también llamados zwitterión. La carga neta de un ión dipolar es cero (la forma neutra).34 y pK2 = 9. En una solución ácida los aminoácidos están completamente protonados (la forma catiónica). Sí la solución es neutra. Dado que todos los aminoácidos poseen un grupo ácido y un grupo básico presentan propiedades anfóteras. completamente desprotonada (la forma aniónica).60 indican las regiones de máximo poder tamponante. Los recuadros sombreados.

025 Molar pH=2. pKa2. (Cuide que la agitación sea constante) 5.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 OBJETIVOS • • • Determinar el pKa1. Tome una alícuota de 25 mL de solución de glicina 0.025 Molar pH=2. pKa2 .10 Molar 1.00 Solución de Asp 0.025 Molar pH=2. 3.025 Molar y viértala en un vaso pp de 100 mL.10 Molar en fracciones de 0.00 Solución de Arg 0. pKR y pI de un aminoácido básico Materiales por grupo 1 vaso pp 250 mL 2 vasos pp de 100 mL 1 pipetas aforadas de 25 mL 1 pizeta 1 agitador magnético 1 barra magnética 1 bureta de 50 mL 1 soporte universal 1 pH-metro 1 pinza 1 doble nuez Parte Experimental Reactivos Solución de Gli 0.00 Solución de NaOH 0. Incluya la barra magnética y coloque sobre agitador magnético 2. Repita el paso 4 hasta llegar a pH 12. pKa2 de un aminoácido sin carga Determinar el pKa1.10 Molar (cuide que no queden burbujas en el vástago de la bureta y únala al soporte universal) 4.10 Molar. Ahora llene la bureta con NaOH 0. Agregue NaOH 0. Registre este valor. pKR y pI de un aminoácido ácido Determinar el pKa1.50 mL y mida el pH. Ambiente una bureta de 50.0 mL con NaOH 0.0 10 . Proceda a medir el pH.

LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 11 .

12 . junto a otras proteínas. β. Las moléculas de proteína neutras no se repelen eléctricamente y tienden a agregarse precipitando de la solución. La intensidad del color depende de la concentración de proteína. La Lactoalbúmina. la proteína primaria de la leche. es una fosfoproteína que existe en cuatro formas: α. El color resulta de la coordinación de los átomos de nitrógeno peptídicos con los iones Cu++. Se debe preparar una curva de calibración usando soluciones estándar de proteína. Cualquier agente que rompa estas interacciones proteínas/agua disminuirá la solubilidad de la proteína y precipitara. se forma un complejo de color púrpura. γ y δ caseína.0 donde la Lactoalbúmina es insoluble. Estas son tratadas con el reactivo de Biuret y se mide la absobancia a la longitud de onda adecuada. La muestra de la proteína desconocida se trata igualmente y su concentración se determina de la curva de calibración. La sal inorgánica más comúnmente utilizada es el Sulfato de Amonio que en solución se encuentra altamente solvatado reduciendo el agua disponible para interactuar con la proteína. donde la solubilidad es mínima. Cada proteína posee una concentración de sal.6. Las proteínas son solubles principalmente por los residuos de aminoácidos polares y cargados que establecen interacciones con el agua. permanece en solución de donde se puede separar por adición de HCl hasta pH 3. Introducción La purificación de proteínas es una actividad usual en el trabajo en Bioquímica. Por lo tanto la caseína es una mezcla heterogénea de componentes proteicos. sobre la cuál la proteína no podrá permanecer en solución y precipitará. cada una con composición aminoacídica diferente.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO Nº3 PROTEINAS: Extracción y cuantificación de la caseína de la leche Mg. Un cambio en el pH de la solución altera el estado iónico de una proteína pudiendo llevarla a un estado de carga neutra (punto isoeléctrico). La Caseína. El pH también ha sido utilizado efectivamente en la precipitación selectiva de proteínas. La Caseína puede ser separada por precipitación isoeléctrica a pH 4. La caseína puede ser extraída y purificada de la leche por precipitación con sales o por pH. Cuantificación de Proteínas en Solución Método de Biuret: cuando aquellas sustancias que contienen dos o más enlaces peptídicos reaccionan con sulfato de cobre alcalino. ©Karin Figueroa S.

0 3. 4 ml de reactivo de Biuret. La solución resultante se usa para la determinación de proteína disuelta por el método de Biuret.5 4. Construir el gráfico Absorbancia v/s concentración (mg/ml) de proteína en papel milimetradoCurva de calibración . Lave finalmente con 10 ml etanol dos veces. Si queda sólido en suspensión.5 (comprobar con pH metro).2 ml de HCl al 2%.0 2.0 1. Agite por 5 min. Deje decantar en reposo por 15 min. volver a centrifugar. b) Determinación de proteínas por el método de Biuret Preparar una solución estándar de proteína de concentración 10 mg/ml usando una proteína patrón (Albúmina de suero de bovino) BSA. Centrifugue. Se agrega lentamente (durante aprox.5 2.0 5.0 1. Estándar 0 0.5 1.5 3. En tubos de ensayo separados preparar cada una de las siguientes soluciones de proteína a partir de la solución standard de la proteína patrón: TUBO Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 ml de soluc. El residuo se lava dos veces con 10 ml H2O destilada centrifugando cada vez. El sólido centrifugado se redisuelve en 5 ml de NaOH 0. 13 . El pH debe alcanzar a 4.0 0 En tubos de ensayo separados se toma 1 ml de cada solución de proteína y se agrega.0 4. Descarte el sobrenadante.0 4.0 ml de agua 5.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 OBJETIVOS Realizar de manera experimental la extracción de la proteína (caseína) Cuantificar la concentración de proteína por el método de Biuret PARTE EXPERIMENTAL a) Separación de la caseína Cada grupo toma 5 ml de leche descremada y la diluyen a 25 ml con H2O destilada. Se dejan los tubos a temperatura ambiente por 20 minutos y luego se mide la absorbancia a 540 nm de cada solución usando el tubo Nº 1 como blanco. cada tubo. 5 min) 0. donde se observa precipitación de la caseína (pH isoeléctrico).0 3.01 M.

entonces se deben hacer diluciones a la muestra. Informe la concentración de proteína en mg/ml de muestra.Determinación de la concentración de una proteína en un muestra problema Tomar 1 ml de la muestra problema y tratarla de igual forma que la solución anterior. Informar los mg de caseína por litro de leche. . Si la absorbancia no cae en el rango de la curva de calibración. 14 .0 ml de solución de proteína aislada y tratarla de igual forma que las soluciones de proteína patrón.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 .Determinación de la concentración de caseína Tomar 1.

Se encuentran involucradas en el metabolismo de carbohidratos. Estas últimas. Las fosfatasas están presentes en prácticamente todos los órganos animales. 15 . Dependiendo del tipo de enlace que se hidroliza se clasifican en: a) Fosfomonoesterasa (enlace fosfoester) b) Fosfodiesterasa (enlace fosfodiester) b) Anhídrido fosfórico hidrolasa (enlace pirofosfato). En este práctico se estudiará una fosfomonoesterasa no especifica que se extraerá de la aorta de bovino y cuyo pH óptimo está en el rango ácido (fosfatasa ácida). disminuyendo la energía de activación de la misma. constante de Michaelis-Menten y de la Vmáx. Se caracterizan por medio de Km. fosfolípidos y en la formación de los huesos. El termino fosfatasa se utiliza para describir a aquellas enzimas que catalizan la hidrólisis de derivados del ácido ortofosfórico. se clasifican en alcalina o ácida. a su vez. ácidos nucleicos. La velocidad de una reacción se puede estimar: a) midiendo la desaparición de sustrato en el tiempo o b) midiendo la aparición de producto en el tiempo. velocidad máxima de reacción. Las fosfomonoesterasas se clasifican en específicas (un único sustrato) y no especificas (reconocen a varios sustratos distintos). dependiendo del pH óptimo.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO Nº4 ENZIMOLOGIA : Extracción y Caracterización de la Fosfatasa Acida de Aorta de Bovino INTRODUCCION Las enzimas son catalizadores biológicos. que aumentan la velocidad de una reacción.

es = 17500 M-1 cm-1. OE -OH + NO2 . Para determinar los parámetros característicos de una enzima con comportamiento de Michaelis Menten. εM.O-P=O O OE -O-P = O + NO2 O-OH Para determinar la concentración del producto coloreado.OH + H-P=O O- O- En este práctico se usará como sustrato p-nitrofenilfosfato el que al hidrolizarse genera para-nitrofenol. mediante la siguiente ecuación: V = [p-nitrofenol] / ∆t Donde v es la velocidad de la reacción enzimática.P = O OIntermediario O- Segunda etapa: el intermediario se hidroliza regenerando la enzima : OH2O + E-O-P=O OE . ε es el coeficiente de extinción molar. se mide la absorbancia a 410 nm.Beer : A = ε·c·l. Aplicando la ley de Lambert y Beer. c es la concentración en moles/L y l es el diámetro de la celda.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Mecanismo de reacción: Primera etapa: se une el grupo fosfato al grupo OH de un residuo serina del sitio activo de la fosfomonoesterasa : OE . La velocidad de reacción se obtiene al relacionar la cantidad de producto formado en el tiempo. Este compuesto a pH alcalino presenta un color amarillo el cual puede ser cuantificado por espectrofotometría a 410 nm. Ley de Lambert .P = O -O Enzima Sustrato R -OH + E -O . A esta longitud de onda el coeficiente de extinción molar. ∆t es el tiempo de incubación. se realiza el estudio del efecto de la concentración de sustrato frente a 16 .OH + R -O . donde A es la absorbancia. se calcula la concentración molar del producto formado. frente a un blanco que contiene todos los reactivos menos el sustrato.

extrapolar o interpolar. o calcular una pendiente o una intersección. hasta que llega un momento en que aunque se aumente la [S]. Esta es la Vmáx y se alcanza cuando la enzima se satura con sustrato : v [ sustrato] Sin embargo la determinación de Km y Vmáx desde este gráfico no es muy adecuada. ya que se requiere de gran cantidad de puntos para construir la zona curva. En un principio se observa que al aumentar la [S] aumenta la velocidad de reacción. esta queda determinada con tres puntos y es más fácil. Es así como Lineweaver y Burk.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 la velocidad de la reacción. En cambio si se tratará de una línea recta. linealizaron el comportamiento de Michaelis-Menten obteniendo una recta que queda representada en el siguiente gráfico: 1/v 1/Vm -1/Km 1/[S] 17 . la velocidad se mantiene constante.

7.1 M Procedimiento Experimental A: Preparación de un extracto crudo de la enzima: La enzima se extrae de aorta de bovino.5. 60ºC.6.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Objetivos * Cuantificar la velocidad de una reacción enzimática * Aplicar los conceptos teóricos adquiridos en la caracterización de una enzima. 5. con la ayuda de una tijera se extrae la capa externa y se deja solo la capa interna la cual se corta en trozos pequeños 18 . 3 gradillas solución p-nitrofenilfosfato 30 mM 1 juego de micropipetas P1000. 80ºC) 4 placas calefactoras con vaso pp de 250 mL Hielo Parafilm solución de TCA al 30% solución de NaOH 0.5. * Encontrar el pH y la temperatura optima de la fosfatasa ácida de aorta de bovino * Determinar Km y Vmáx de la fosfatasa ácida de aorta de bovino * Cuantificar la velocidad de la reacción enzimática en presencia de un inhibidor Materiales por Grupo 30 tubos de ensayos Reactivos solución tampón citrato pH: 3. 37ºC.P20 Solución MgCl2 50 mM puntas azules y amarillas 3 cubetas pipeta vidrio 5 mL+propipeta cronometro Material General espectrofotómetros 4 baños termorregulados ( a 20ºC. 4. Esta arteria se encuentra rodeada de una capa de grasa fácilmente extraíble. P200. 9. En el laboratorio se procede a retirar la capa de grasa.

0 1.5.0 4 1.0 Prepare una serie de tubos según indica la tabla 1.0 5 1. realice los siguientes pasos para cada tubo: 1.5 mL buffer pH H2O Enzima B: Blanco: No contiene sustrato C: Control: No contiene enzima y mide la hidrólisis espontánea del sustrato MgCl2: La enzima es dependiente del magnesio para su actividad.5 0 4. Los trozos fríos se homogeneizan junto con una cantidad adecuada de agua destilada a 0ºC. La mezcla se filtra usando gasa.5 9.0 C 1.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 que se dejan en hielo.0 1.0 0.5 y 9.0 1. A pH básico el producto p-Nitrofenol tiene un máximo de absorción a 410 nm. se enfría si es necesario.0 2 1.0 1.0 M. Se homogeneiza no más de un minuto (evitando el calentamiento). 5. B 0.0 1.0 0. este corresponde a la enzima cruda o extracto crudo.0 1.5 0 4. 2.0. La enzima debe agregarse en último lugar.0 1.0 0.5 0 1 1.5 5.5 1.6. Transferir una alícuota de 1mL a un tubo que contenga 5 ml de NaOH 1.6 1.0 0.0 Terminada la incubación.5 7.5 3.0 3 1. mezclar por inversión y dejar en hielo.5 4. Cada tubo debe mezclarse por inversión suavemente e incubar a 37ºC por 30 min.5 1. Tabla Nº1 Volumen (mL) p-nitrofenilfosfato MgCl2 2. 19 . el filtrado debe permanecer frío.0 0.0 0. Agregar 1 mL de solución de TCA al 30%. 7. 4. B: Efecto de pH Para determinar el efecto del pH en la actividad Enzimática se realizarán reacciones en distintos soluciones tampón citrato de pHs: 3. El ácido tricloro acético (TCA) detiene la acción enzimática por desnaturalización ácida de la enzima.5 1.

5 2.5 9. C1 y T1 a 0ºC) 20 . Una vez realizado los cálculos necesarios grafique V (velocidad) versus pH. Resultados Actividad Efecto pH Tabla resultados Nº1 Nº tubo a pH Absorbancia a pH 3. Se deberá obtener un valor máximo de velocidad que corresponderá al pH óptimo. 37ºC. Es decir un tubo C y tubo T para cada temperatura ( Ej.0 1. a las temperaturas indicadas.0 1.0 0. Al valor de la absorbancia de cada tubo experimental debe restarle la absorbancia del tubo C. Prepare los siguientes tubos según la tabla 2 Tabla Nº 2 Volumen (mL) p-nitrofenilfosfato MgCl2 buffer pH 5.0 C 1.6 7.0 1.6 H2O Enzima B O 0.0 4.0 Concentración Producto mM Velocidad de la reacción C: Efecto de la temperatura en la reacción enzimática Se estudiará la reacción a las temperaturas 0ºC. C2.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 3. Lea en el Espectrofotómetro cada tubo a 410 nm.0 0.5 5. 4. usando el tubo B como blanco. Anote los valores de absorbancia leídos con tres cifras. 80ºC y 100ºC.5 2.5 2. T2…T6).5 2.5 2. Mezcle cada tubo por inversión suavemente e incube 30 min.…C6) y seis veces el tubo T (T1. 20ºC.5 2.0 0 T 1. 60ºC. Prepare seis veces el tubo C (C1.

Determine la temperatura optima para la enzima 4. El ácido tricloro acético (TCA) detiene la acción enzimática por desnaturalización ácida de la enzima. Resultados Actividad Efecto Temperatura Tabla resultados Nº2 Nº tubo a T ºC Absorbancia a Tº 0 20 37 60 80 100 Concentración Producto mM Velocidad de la reacción Una vez realizados los cálculos correspondientes corregir los valores de cada tubo Ti con el correspondiente Ci.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 2. 3. Una vez realizado los cálculos necesarios grafique V (velocidad) versus temperatura. Se deberá obtener un valor máximo de velocidad que corresponderá a la temperatura óptima.0 M. Transferir una alícuota de 1mL a un tubo que contenga 5 ml de NaOH 1. mezclar por inversión y dejar en hielo. 2. Agregar 1 mL de solución de TCA al 30%. grafique V (velocidad) versus TºC. Determine la temperatura optima para la enzima. Al valor de la absorbancia de cada tubo (discuta con sus profesores la factibilidad de usar el tubo C como blanco). usando el tubo B como blanco. Una vez terminada la incubación se procede para cada tubo en forma idéntica a la descrita para el efecto del pH (desde el punto 1). Lea en el Espectrofotómetro cada tubo a 410 nm. Una vez realizados los cálculos correspondientes corregir los valores de cada tubo Ti con el correspondiente Ci. Es decir: 1. 21 . A pH básico el producto p-Nitrofenol tiene un máximo de absorción a 410 nm. Anote los valores de absorbancia leídos con tres cifras. grafique V (velocidad) versus TºC.

usando el tubo B como blanco. 1.0 1.6 agua Enzima Blanco 0.0 1. Lea en el Espectrofotómetro cada tubo a 410 nm.0 1 0. Determinación de Km y Vmáx de la fosfatasa ácida de aorta de bovino.0 0.5 2. por 30 Minutos (este será el ∆t y debe ser medido con precisión).0 3 1. Agregar 1 mL de solución de TCA al 30%.5 1. 3.5 2.5 0.0 1.0 2 1.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 D: Efecto de la concentración de sustrato. A pH básico el producto p-Nitrofenol tiene un máximo de absorción a 410 nm. Es decir: 2.5 2. Prepare los siguientes tubos.5 2. El ácido tricloro acético (TCA) detiene la acción enzimática por desnaturalización ácida de la enzima. Transferir una alícuota de 1mL a un tubo que contenga 5 ml de NaOH 1.5 0. mezclar por inversión y dejar en hielo. Anote los valores de absorbancia leídos con tres cifras.0 Para cada tubo mezcle por inversión suavemente e incube a 37ºC.5 1. 5.0 4 2. Se deberá obtener un valor máximo de velocidad que corresponderá a la temperatura óptima.5 1.5 1.5 2. Una vez terminada la incubación se procede para cada tubo en forma idéntica a la descrita para el efecto del pH (desde el punto 1). Al valor de la absorbancia de cada tubo.0 M.0 0.5 0. 4. según la tabla 3: Tabla Nº3 Volumen (mL) p-nitrofenilfosfato MgCl2 buffer pH 5.5 0. Una vez realizado los cálculos necesarios grafique V (velocidad) versus temperatura.5 2. 22 .

Proceda de la misma forma anterior para detener la reacción enzimática y medir la formación de producto.5 1.5 0.0 1.0 4 2.0 1.5 1.0 1.Burk.0 1.0 1.6 Agua destilada NaH2PO4 10 mM Enzima Blanco 0.0 1.0 0. Para calcular la concentración de sustrato recuerde que V1 x C1 = V2 x C2 Resultados Curva de Saturación Tabla Nº3 Concentración Sustrato Absorbancia A 410nm Concentración Producto mM Velocidad de reacción 1/[S] 1/v E: Efecto de un inhibidor en la cinética de una reacción enzimática.0 1 0.5 2.5 2. Con este valor y el tiempo de incubación calcule la velocidad de la reacción.5 1. Grafique según Lineweaver. 7. Determine el valor de Km y Vmáx. Se utilizará H2PO4.5 0. Volumen (mL) p-nitrofenilfosfato MgCl2 buffer pH 5.5 2.5 0.5 2. Conociendo la concentración inicial de sustrato.5 2.0 3 1. incube a 37 ºC por 30 minutos.0 1.0 1.0 1. Para ello se repite la experiencia anterior “Efecto de la concentración de sustrato” en presencia del inhibidor.( producto de la reacción) como inhibidor de la reacción catalizada por la fosfatasa ácida. calcule la concentración de este en cada tubo.0 2 1. 23 . Selle los tubos con parafilm.5 0. Con los valores de absorbancia calcule la [p-nitrofenol].5 2. 8.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 6.0 0.5 1.

En gráfico de Lineweaver. Determine el valor de Km y Vmáx. Construir la gráfica del efecto de la temperatura 3. Construir la gráfica del efecto del pH. Construir la gráfica de según Lineweaver.Burk trace los resultados de velocidad en presencia del inhibidor 3. Resultados 1. Determine el tipo de inhibición. 2. 24 .LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Resultados Cinética de Inhibición Tabla Nº3 Velocidad de Concentración Sustrato Absorbancia A 410nm Concentración Producto mM Reacción en presencia de NaH2PO4 1/[S] 1/v 1. En gráfico velocidad versus concentración trace los resultados de velocidad en presencia del inhibidor 2. Determine el tipo de inhibición. 4.Burk.

LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 25 .

GLICEMIA INTRODUCCIÓN La glucosa es la principal fuente de energía en el ser humano. b) almacenamiento de energía. gluconeogénesis). epinefrina. la concentración de glucosa en la sangre (glicemia) de los individuos sanos se mantiene en un rango estrecho (70 – 105 mg/dl en el adulto en ayuno). aumentan la liberación y producción endógena de glucosa (glicogenolisis. acoplado a una reacción colorimétrica catalizada por la enzima peroxidasa (POD). dependiendo de los requerimientos energéticos del individuo el metabolismo de la glucosa puede resultar en: a) producción de energía. Existen numerosos procedimientos analíticos para cuantificar la concentración de la glucosa en la sangre. En este trabajo práctico se utilizará el método de la glucosa oxidasa (GOD). al catabolizarse hasta CO2 y H2O a través de la glicólisis. cortisol y hormona de crecimiento. 26 . A pesar de las considerables fluctuaciones en la ingesta de carbohidratos (principal fuente de glucosa) y en su demanda. Por lo tanto. etc. y/o actividad biológica de estas hormonas resultan en cambios de los niveles sanguíneos de glucosa. dada su alta especificidad y sensibilidad. diabetes gestacional. y además inhibe la producción de glucosa endógena. Por esto la determinación de la concentración de glucosa en la sangre es fundamental en el diagnóstico y monitoreo de desórdenes del metabolismo de carbohidratos como por ejemplo diabetes mellitus. Por otra parte hormonas contrarreguladoras como glucagón. hipoglicemia idiopática. siendo rutinariamente utilizados los métodos enzimáticos.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO Nº5 GLICEMIA Y COLESTEROL A. La estricta regulación de la concentración sanguínea de glucosa depende de la acción de varias hormonas. secreción. generando glicógeno en el hígado o triglicéridos en el tejido adiposo. hipoglicemia neonatal. Sin embargo. alteraciones en la producción. c) utilización de la glucosa. carcinoma de islotes pancreáticos. convirtiéndola en amino ácidos o conjugándola con proteínas. La insulina estimula la captación de glucosa y promueve su conversión a glicógeno (glicogénesis) o triglicéridos.

Para conocer la concentración de glucosa de una muestra desconocida. TAREAS PREVIAS . Este valor de absorbancia puede ser interpolado en la curva de calibración para conocer la concentración de glucosa.Cálculos para preparar estándares de glucosa mediante dilución seriada de la solución stock.Cuantificar la concentración de glucosa de una muestra problema . se puede construir una curva de calibración generada a partir de soluciones de concentración conocida (estándar) de glucosa y las mediciones de absorbancia del producto final del ensayo enzimático.Evaluar las diferentes concentraciones de glucosa sobre el efecto que puede implicar en el organismo. realizamos el ensayo y medimos la absorbancia del producto. Dado que la producción de 4-(p-benzoquinonamonoimino)fenazona es directamente proporcional a la concentración de glucosa. por lo tanto puede absorber la luz visible y en consecuencia puede cuantificarse espectrofotométricamente (ver anexo de espectrofotometría). OBJETIVOS . 27 .LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Las reacciones involucradas en el ensayo enzimático son las siguientes: Glucosa (muestra) + O2 + H2O GOD gluconolactona + H2O2 2 H2O2 + 4-aminofenazona + fenol POD 4 H2O + 4-(p-benzoquinonamonoimino)fenazona El último producto generado en esta serie de reacciones es coloreado.

1 ml plasma A (muestra) 0. 100. Ensayo enzimático y medición de absorbancia rotular 8 tubos eppendorfs para preparar las mezclas de reacción preparar las mezclas de reacción. Obtención de plasma sanguíneo (ya fue hecho.5 ml suero fisiológico 1 ml glucosa 400 mg/dl (solución stock) 3 ml reactivo R1 0. 200.1 ml plasma B (muestra) Procedimiento experimental 1. Ud. agregando a cada tubo los volúmenes de reactivos indicados en la siguiente tabla 1. agregar el reactivo R1 a todos los tubos y luego comenzar a agregar los 3 µl de muestra a los tubos correspondientes. 28 . para sincronizar lo más que se pueda las reacciones. 50 y 25 mg/dl). Preparación de estándares de glucosa rotular 5 tubos eppendorfs para preparar las soluciones estándares de glucosa preparar 500 µl de los estándares de glucosa (400. haciendo diluciones seriadas en suero fisiológico a partir de la solución stock de glucosa. sin distorsionar el pellet celular recuperar el plasma en tubo eppendorf limpio rotulado 3. Luego de haber agregado la última muestra agitar todos los tubos simultáneamente. Es recomendable.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 PARTE EXPERIMENTAL Materiales 1 micropipeta p20 1 micropipeta p1000 puntas para p20 puntas para p1000 15 tubos eppendorfs 1 microplaca lector de microplaca rotulador 1. 2. recibirá el plasma) rotular 1 tubo eppendorf para colectar el plasma sanguíneo centrifugar 2 min a 800 x g (1500 rpm) la muestra de sangre heparinizada para separar el plasma de los elementos figurados aspirar con la micropipeta el plasma.

LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 - incubar 30 min. la estructura de las moléculas en solución capaces de absorber energía a la longitud de onda determinada (λ) y la concentración de la/s molécula/s absorbente/s. el solvente en el que se encuentra. El coeficiente de extinción molar es específico de cada molécula. Estas variables se integran en la ley de Beer-Lambert. a temperatura ambiente transferir 150 µl de cada reacción a un pozo de la microplaca. registrando la localización de cada muestra medir la absorbancia a 505 nm (A505) en lector de microplaca Tabla 1 Tubo 0 (blanco) 25 50 100 200 400 Muestra A Muestra B Reactivo R1 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl 300 µl Muestra 3 µl suero fisiológico 3 µl glucosa 25 mg/dl 3 µl glucosa 50 mg/dl 3 µl glucosa 100 mg/dl 3 µl glucosa 200 mg/dl 3 µl glucosa 400 mg/dl 3 µl plasma A 3 µl plasma B ANEXO ESPECTROFOTOMETRÍA La cantidad de luz monocrómática absorbida por las moléculas de una solución se relaciona directamente con: la distancia que debe recorrer el haz de luz para atravesar la solución. que puede ser expresada de la siguiente manera. si consideramos sólo una especie molecular en la solución capaz de absorber energía a esa longitud de onda:  Io  A = log  = ε × c × l  I  Donde: A : absorbancia Ιo: intensidad de la luz incidente Ι: intensidad de la luz transmitida ε: coeficiente de extinción molar (L mol-1 cm-1) c: concentración de la molécula absorbente (mol L-1) I: largo de la celda por la que pasa de luz (cm) La absorbancia es un valor empírico. determinado en un espectrofotómetro y es además un valor adimensional (sin unidades). la 29 . y depende de la naturaleza química de la molécula estudiada.

la absorbancia sólo dependerá de la concentración de esta molécula. De esta forma si medimos la absorbancia de soluciones con diferentes concentraciones de la molécula absorbente. del pH y de sí la especie absorbente se encuentra en equilibrio con otras especies. El largo de la celda depende del diseño de la celda y del espectrofotómetro utilizado. c la variable independiente (x) y K la pendiente. A = K ×c 30 .LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 longitud de onda de la luz incidente. donde A es la variable dependiente (y). en las mismas condiciones experimentales (ε y l constantes). Esta ecuación puede ser representada por una recta en un plano de ejes cartesianos. Por lo tanto la relación entre absorbancia y concentración puede ser representada por la siguiente ecuación: en donde los términos ε y l han sido reunidos en una única constante K. por ejemplo cambiando el estado de protonación.

ajuntando el espectofotrometro con el blanco del reactivo a 505 nm. 31 . El colesterol y los ésteres del colesterol son liberados desde las lipoproteínas por detergentes. Medir la Absorbancia del estándar y la muestra .LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 B.Kit de Determinación de colesterol . INTRODUCCION. La enzima colesterol esterasa hidroliza los esteres de colesterol formándose H2O2 en la siguiente reacción enzimática de oxidación de colesterol por la colesterol oxidasa según la siguiente ecuación: Colesterol esterasa Ester de colesterol + H2O Colesterol oxidasa Colesterol + O2 Peroxidasa H2O2 + 4AP+ fenol quinonimina + H2O colesterol-4-en-ona+H2O2 colesterol + ácidos.Muestra se suero Procedimiento BLANCO Standard ESTANDAR 20 µl MUESTRA - Muestra - - 20 µl Reactivo de trabajo 2ml 2ml 2ml 1. El color es estable por 30 minutos. Mezclar e incubar a 37ºC por 5 minutos o 10 minutos entre 15º y 25ºC 2. LIPIDOS: Determinación de colesterol Mg. ©Karin Figueroa S. Grasos La cantidad de quinonimina de color rojo formada es proporcional a la concentración de colesterol Reactivos : .

0258= mmol/l Concentración del estándar : 200mg/dl Linealidad del método: El método es lineal hasta una concentración de 600mg/dl (15. multiplicando el resultado por el factor de dilución. de la muestra * concentración del estandar Abs.7 mmol/l) Objetivos: Conocer el método de cuantificación de colesterol Relacionar los conocimientos teóricos con la aplicación práctica y clínica 32 . del estándar mg/dlx 0.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 Cálculos: Concentración de colesterol = Abs. diluir la muestra en solución salina y repetir la determinación. Valores de referencia Los siguientes limites hipercolesterolemia son recomendados para el reconocimeinto de una Sospechoso: 220mg/dl (5.4 mmol/l). Si la concentración de colesterol es mayor de 600mg/dl en el suero o plasma.7 mmo/l) De riesgo: 260 mg/dl (6.

uniéndose al ácido fosfórico. la unión de los nucleótidos entre sí en enlace diester nos da el polinucleótido. Este proceso se almacena en la secuencia de las 33 . Nº1: Estructura Bases Nitrogenadas. Se trata de una molécula de gran peso molecular (macromolécula) que está constituida por tres sustancias distintas: ácido fosfórico. un monosacárido aldehídico del tipo pentosa (la desoxirribosa). La unión de la base nitrogenada (citosina. y una base nitrogenada cíclica que puede ser púrica (adenina o guanina) o pirimidínica (timina. citosina o uracilo).LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 LABORATORIO 6 EXTRACCIÓN DE DNA Lic. adenina. éste. guanina o timina) con la pentosa (desoxirribosa) forma un nucleósido. Patricia Arias Introducción El ácido desoxirribonucleico. constituye el principal componente del material genético de la inmensa mayoría de los organismos. Fig. nos da un nucleótido. junto con el ARN. frecuentemente abreviado ADN. La función principal del ADN es mantener a través de un sistema de claves (código genético) la información necesaria para que las células hijas sean idénticas a las progenitoras (información genética). en este caso el ácido desoxirribonucleico. siendo el componente químico primario de los cromosomas y el material con el que los genes están codificados.

El medio de extracción de ordinario contiene un detergente.Conocer las diferentes funciones que tienen cada reactivo para realizar la extracción . que tiene una disposición que es copiada al ARNm (traducción) para que en el ribosoma sintetice determinada proteína. pelo. Las cadenas de polipeptídicas codificadas por el ADN pueden ser estructurales como las proteínas de los músculos. etc.Lograr la visualización de DNA Materiales Hojas de acelga Sal Agua fría Detergente líquido Licuadora Jugo de lechosa (papaya) o piña (ananá) Vasos precipitados limpios Colador o filtros Alcohol frío Palillos Cuchara Parte Experimental 34 . La función principal de la herencia es la especificación de las proteínas. como RNA y proteínas. que servirán para la síntesis de proteínas.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 bases (aparentemente aleatoria). El detergente inhibe también cualquier actividad nucleasa en la preparación. Este proceso es también denominado "dogma central de la biología molecular".Conocer los procedimientos básicos de purificación y extracción de DNA . El primer paso en la purificación del DNA consiste en homogeneizar las células y lisar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. cartílagos. siendo el ADN una especie de plano o receta para nuestras proteínas. y la trascripción o producción de los distintos tipos de ARN.. hecho que aumenta notablemente la viscosidad de la solución. OBJETIVOS . El núcleo dirige las actividades de la célula y en él tienen lugar procesos tan importantes como la autoduplicación del ADN o replicación. que sirve para lisar (romper) los núcleos y liberar el DNA. El objetivo de los pasos de purificación es separar el DNA de materiales contaminantes. Por medio de los mecanismos de recombinación y mutaciones se obtienen las variaciones necesarias para adaptaciones y evoluciones. como el SDS. antes de comenzar la división celular. bien funcionales como las de la hemoglobina o las innumerables enzimas del organismo.

Mezcle todo y deje reposar 10 minutos. licuar a alta velocidad por 15 minutos. .Añada a cada recipiente unas gotas de jugo de lechosa (enzima) y mezcla muy suavemente para no formar espuma. Con un palillo puedes manipular el DNA. . Información para la realización del informe Para el informe deberá averiguar lo siguiente: 1) Que función cumple el detergente 2) Que función cumple el alcohol 3) Que función cumple el jugo de lechosa Esta información debe ser incluida en la parte de discusión. 35 . .LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 En este práctico cada grupo contara con medio vaso de hojas de acelga al que se debe agregar una punta de espátula de sal y 250 ml de agua destilada fría.Cuele el contenido del vaso de la licuadora a un vaso limpio. Las cuchillas de la licuadora separar las células de los tejidos que forman parte de la hoja.Vierta esta mezcla en pequeños recipientes de vidrio limpios. Añada 2 cucharadas soperas de detergente líquido (solubiliza membranas). El DNA se elevará desde la mezcla hasta la capa de alcohol. . Deje reposar 2 minutos.Incline cada recipiente y añade lentamente desde su borde el alcohol frío hasta que veas una capa sobre el contenido.

Citar la bibliografía consultada en el caso de ser necesario. • Escritura a espacio simple. (Nombre y apellidos) Nombre docente: Fecha de realización del práctico 3) Introducción: Indicar el marco teórico del estudio realizado. 5) Resultados y Discusiones: En esta parte se mostrar en forma de tablas todos los resultados de las mediciones realizadas. Titulo. esquemas. El informe debe incluir: 1) Tapa: 2) Índice. Especificar la página en la que se encuentra cada uno de los capítulos del informe. 4) Materiales y Métodos: Presentar las actividades realizadas y los medios empleados en su desarrollo incluyendo fotos. • Márgenes 2 cm por cada lado. posibles 36 . Posteriormente realizar una discusión de los diferentes resultados que se obtengan. láminas. gráficos. Si entre dos muestras problemas observó un cambio de color cual es el principio químico que lo hizo cambiar y mostrar ese tipo de reacción para lo cual debe utilizar bibliografía. • Los títulos y subtítulos deben ir en negrita. Ej. • Letra Arial 10. (nombre de la guía) Integrantes.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 ANEXOS Formato de Entrega de Informes: • Papel tamaño carta. • El número total de hojas no debe sobrepasar las 15. Especificar los objetivos generales y específicos del trabajo realizado. - 6) Conclusiones y recomendaciones: Presentar las conclusiones obtenidas y recomendaciones que el alumno pueda aportar. incluyendo portada e índice. etc. comparándolos con fundamento teórico de lo observado en el laboratorio.

OCCEGUERA A. F. Título de la publicación. Año de publicación. APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE AUTOR 3. Título de la publicación. R. SORIA A.__ (páginas citadas). Disponible en: Página web. • Webibliografía: APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE DEL AUTOR.: __ . and A. oct. Ed.com www.cl/scielo. Acribia. vol. Ej: Matissek. Revistas u otra publicación periódica: APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE DEL AUTOR 1. no. N.436-443. Editorial. REYES E. Shubert.: pp. Ecosyst. y Steiner. APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE AUTOR 2. Ej: Mazziatelli. NOTA: No se aceptaran como bibliografía o fuente de información. (páginas del texto).. ETC. 29:279-283.4 [citado 02 Septiembre 2007]... [online]. • Libros. Cuidad y país de publicación. __ Pág. MICORRIZACIÓN DE PLANTAS MICROPROPAGADAS DE CAÑA DE AZÚCAR (Sacharum officinarum).0 37 . p.rincondelvago. Año de publicación. Téc. 1990. Effect of several VAM endophytes and artificial sustrate on vitropropagated Vitis berlandisi x rupestri 1103. pp. Disponible en la Web: http://www. APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE DEL AUTOR 1.com www..yahoo. 1998.. En revista: Agric. ETC. Análisis de los alimentos. Zenaida et al..altavista.61. Elia M. Zaragoza. 2001. Agric. • www.com Ni otro tipo de web de dudosa fuente Si se sorprenden informes en donde la información escrita es copiados y pegados textual desde las páginas web sin haber analizado u ordenado las ideas este informe será evaluado con nota 1. APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE AUTOR 3.wikipedia.LABORATORIO DE BIOQUIMICA 2011 7) Bibliografía: Al final de cada informe se deberá detallar la bibliografía consultada en base al siguiente modelo. Carlos. Environ. ISSN 0365-2807. APELLIDO E INICIAL DEL NOMBRE AUTOR 2. M.scielo. España. Schnepel.com www.php?script=sci_arttext&pid=S036528072001000400005&lng=es&nrm=iso>. EN REVISTA: Editorial. G. 1 y 229-232.

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