INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

CECYT 15"Diódoro Antúnez Echegaray“

Análisis Inmunológicos
“Técnica de Western Blot”
Presentan:
Garcés Jurado Verónica
González Naranjo Adriana Laura
Méndez Rizo Roció
Ruiz Martínez Laura
Zeferino Córdova Linda Gabriela
Antecedentes
La aparición del Western no fue posible hasta la
aparición de las membranas. En 1975, Edwin
Southern demostró que la nitrocelulosa era capaz
de capturar ácidos nucleicos separados
previamente por electroforesis. De esta forma, se
permitía el análisis de una mezcla compleja de
moléculas de ADN, como un genoma tratado con
enzimas de restricción. Se desarrolló así el
Southern Blot, usando el nombre del descubridor
como epónimo; es por ello que tanto esta técnica
como sus derivadas (Western Blot, Northern Blot)
se escriben con mayúscula.
¿En que consiste Western Blot?
 La técnica consiste en transferir
proteínas desde un gel de poliacrilamida
a un filtro de nitrocelulosa, en el cual las
mismas pueden ser identificadas con un
sondeador adecuado, por ejemplo, un
anticuerpo específico.
Western Blot VIH
Es una prueba en la cual se determina
la reactividad de los anticuerpos, con
cada una de las proteínas estructurales
del VIH. Está diseñada para verificar la
especificidad de las pruebas ELISA
reactivas (positivas) y confirmar un
diagnóstico de infección por VIH.
Fundamento

Es una discriminación de los

antígenos frente a los que se
dirigen los anticuerpos presentes
en la muestra .
Procedimiento

En esta técnica se separan las proteínas de la muestra

mediante una electroforesis en gel de SDS-
poliacrilamida. Seguidamente se transfieren las
proteínas a una membrana de nitrocelulosa en el
interior de una cámara de transferencia. Posteriormente
se añade a la membrana un anticuerpo especifico para
el antígeno que estamos estudiando, que llevara
acoplada en su fracción Fc, una enzima. Seguidamente
se retirara el anticuerpo sobrante y se añade un
cromógeno que cambiara de color en presencia de la
enzima, lo que nos permitirá detectar en la membrana
la presencia de las bandas correspondientes al
antígeno en estudio.
Especificidad

Se considera que es una prueba

altamente específica con menos
de 1 falso positivo. La tasa de
falsos negativos es, en población
donante de sangre, de 1 por
cada 250.000 o más.
De un modo muy esquemático se puede decir que el WB puede ofrecer tres tipos de
resultados diferentes:

 Positivo: Cuando cumple los criterios de

positividad adoptados por la técnica que se
está empleando (presencia de ciertas
bandas).
 Negativo: Cuando ninguna de las bandas
presenta reacción.
 Indeterminado: Cuando no es positivo o
negativo.
Diagnóstico
 Prueba de VIH: se buscan, mediante
Western blot, los anticuerpos anti-VIH en
una muestra de suero humano.
 Se emplea como prueba definitiva de la
encefalopatía espongiforme bovina,
comúnmente llamada "enfermedad de las
vacas locas".
 Algunas clases de la prueba para la
enfermedad de Lyme usan el Western blot.
Aplicaciones
El Western Blot tiene aplicaciones clínicas más
allá de la prueba de HIV SIDA. Por ejemplo, en
diagnóstico prenatal, puede servir para
diagnosticar enfermedades genéticas
tempranamente, como ser varias metabolopatías,
al detectar mutaciones puntuales (deleciones,
inversiones cromosómicas, etc). También es útil
para el diagnóstico de infecciones por virus,
bacterias y parásitos (detectando su ADN o ARN
de forma directa), así como de oncogenes,
amplificaciones de secuencias en leucemias y
linfomas, por mencionar algunos.
GRACIAS POR
SU ATENCIÓN