Facultad de Ciencias Químicas

Practica de Bacteriología

Urocultivo

Q. B. P. Ruth Fileto Sánchez

 Infecciones Urinarias
Las infecciones del sistema urinario son causadas por la bacteria que invade y se multiplica
en el sistema urinario. La infección puede ocurrir en cualquier parte del sistema urinario,
aunque generalmente se presenta en la uretra.

La mayoría de las infecciones provienen del mismo tipo de bacteria, la E. Coli, la cual suele
vivir en el colon.

Flora del aparato urinario

Salvo la uretra anterior, el aparato urinario es estéril. La orina contribuye a mantener la vía
urinaria libre de gérmenes, debido al arrastre, al pH ácido y a su elevada osmolaridad.
El sector anterior de la uretra se coloniza con gérmenes que provienen del perineo. Esas
bacterias son eliminadas al comenzar la micción, lo que se utiliza para obtener la muestra para
urocultivo por chorro medio, evitando así la presencia de contaminantes.
La gran mayoría de las infecciones se debe a gérmenes provenientes de la flora intestinal. En
las infecciones de pacientes ambulatorios el germen más común es la Escherichia Coli con una
frecuencia de alrededor de 85%. El resto de las infecciones corresponde a gérmenes entéricos
como Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae y Staphylococcus saprophyticus.

Urocultivo

El urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un método

excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparto urinario.
La combinación de piuria con bacteriuria considerable siguiere la presencia de una
infección urinaria.

Utilidad clínica
•Cuando los síntomas indican una posible infección urinario como: dolor y sensación de calor
al orinar, así como urgencia frecuente de orina.
•Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre síntomas de
infección.
•En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar
algún problema al bebe
Examen físico

Transparente
Aspecto Lechosa, alteración purulenta del aparato urinario; quiluria
Incolora, dilución; diabetes mellitus o diabetes insípida
Color Roja, pigmentos alimentarios (betabel) hematuria o hemoglobinuria, fenolftaleína.
Verdosa, ictericia, envenenamiento por fenoles.
Azul sucio o verde, se observa cuando existe putrefacción de la orina, en el tifus o
cólera. También debido a azul de metileno.
Parda obscura, parda rojiza o amarilla, orina muy concentrada. Se observa en los
trastornos febriles agudos. Puede deberse también a la presencia de bilis.
Parda amarillenta o parda rojiza (si es acida) o rojo brillante (si es alcalina), sangre,
ruibarbo, medicamentos.
Parda, parda negruzca o negra, hemorragia del aparato urinario.
Es significado solamente en la muestra fresca. Normalmente no es desagradable,
Olor aromático, debido a ácidos grasos volátiles. A la acción bacteriana sigue olor
amoniacal. El olor a fruta de la acetona se presenta en la cetosis. El esparrago es
una fuente de metilmercaptano en la orina, que produce un olor característico
Tinción
Se hacer una tinción tomando una pequeña gota de orina, con la tinción de Gram o azul
de metileno.

Aislamiento

Agar sangre (Gram +)

Es un medio diferencial para la recuperación y diferenciación de bacterias fastidiosas,
tales como las especies patógenas de Streptococcus.
Las bacterias son diferenciadas en base a su capacidad para provocar la hemolisis de las
células rojas.
Las bacterias alfa hemolíticas producen zonas claras de color verdoso alrededor de las
colonias, las bacterias beta hemolíticas producen una zona completamente clara
alrededor de la colonia.

Agar MacConkey (Gram -)

Al agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y reconocimiento de las
Enterobacterias y bacilos entéricos Gram negativos relacionados
 Los típicos fermentadores fuertes de lactosa, tales como las especies de Escherichia,
Klebsiella y Enterobacter, forman colonias rojas rodeadas de una zona de bilis precipitada.
Los fermentadores débiles o lentos de lactosa, tales como Citrobacter, Providencia,
Serratia y Hafnia, pueden formar colonias incoloras en 24hrs o ligeramente rosadas en 24
a 48hrs.
Las colonias de Proteus, Edwarsiella, Salmonella y Shigella, con raras excepciones, son
incoloras o transparentes.

Cuantificar

Método del asa calibrada

Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar sangre o con
CLED en una muestra de orina, el medio a utilizar es el Agar Métodos Estándar, se emplea
un asa de platino calibrada.
 En cada caso, el número de colonias es
equivalente al número de bacterias, que
será multiplicado por 1000 que es el múltiplo
de la dilución (porque se inocularon 0.001
ml), para dar una estimación del número de
bacterias por ml de orina.

•No hubo desarrollo microbiano

•Menos de 10 000 colonias por ml
•Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml
•Mas de 100 000
Antibiograma

Variados métodos de laboratorio pueden ser usados para determinar in vitro la

susceptibilidad de bacterias ante agentes microbianos. En muchos laboratorios de
microbiología clínica, el test de difusión en agar es usado en forma rutinaria para
bacterias de rápido crecimiento y algunas bacterias fastidiosas patógenas.

Agentes antimicrobianos

ß-lactámicos

•Penicilinas
•Combinación de ß-Lactámicos / Inhibidor de ß-Lactamasa
•Cefemes (incluyendo Cefalosporinas).
•Carbapenems
•Monobactams

Glicopéptidos Quinolonas
Aminoglicósidos Sulfonamidas y Trimetoprim
Macrólidos Clases de droga simple
Tetraciclinas
La técnica de Kirby-Bauer

Tablas
Morfología microscópica Morfología macroscópica
Por medio de la tinción de Gram Determinar para cada colonia en cada agar
Forma
Forma Borde
Arreglo Elevación
Color
Gram
Tamaño
Tamaño Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Sustrato

Pruebas bioquímicas
Para Gram –
Para Gram + TSI
Caldo nutritivo al 6.5% de Na LIA
Bilis Esculina RM
Prueba de coagulasa VP
Caldo de manitol Urea
MIO
 Kelbsiella Escherichia coli Pseudomonas spp. Proteus Staphylococcus
pneumoniae mirabilis aureus
Indol – Indol – Oxidasa + Indol – Catalasa +
Urea + Urea + En el agar sangre Urea + Coagulasa +
Lisina + Lisina + Colonias con brillo Lisina + En el agar sangre
En el agar sangre En el agar sangre metálico, azul En el agar colonias pequeñas,
presentan mucosa no presentan verdoso sangre velo blancas o gris no
mucosa gris mucoide

Enterococcus faecalis Enterococcus spp. Streptococcus del Streptococcu B-

grupo D hemoliticos
Bilis esculina + Bilis esculina + Bilis esculina + Bilis esculina –
NaCl al 6.5% + NaCl al 6.5% + NaCl al 6.5% - NaCl al 6.5% +
Cronograma

•Lunes
Con la muestra de orina realizar tinción de Gram o azul de metileno
Examen físico
Sembrar en el agar sangre y MacConkey para el aislamiento

•Martes
Leer morfología micro y macro
Sembrar en el agar Métodos estándar para el conteo
Realizar un antibiograma en el Mueller Hinton
Inocular pruebas bioquímicas

•Miércoles
Leer antibiograma
Contabilizar
Leer pruebas bioquímicas