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METODOS DE SIEMBRA

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COLORACIONES COMPUESTAS O DIFERENCIALES Y METODOS DE SIEMBRA

19 de marzo de 2011
ASOCIACION PRIVADA UNIVERSIDAD SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE ENFERMERIA

Nombre: Vanessa Otero Yparraguirre Curso: Tema: Microbiología y Parasitología Coloraciones compuestas o diferenciales y métodos de siembra.

Docente: Esther Valencia. Aula: Año: 29 2011

1. Tinción de Gram: Microbiologia y Parasitologia Página 1

COLORACIONES COMPUESTAS O DIFERENCIALES Y METODOS DE SIEMBRA
19 de marzo de 2011

La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste o diferencial, que se desarrolló en 1844 y se utiliza en microbiología para la observación de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan las paredes de los microorganismos a los colorantes usados con esta técnica, se les califica en gran positivos y gran negativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas, otra ventaja es que se puede efectuar una percepción primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfología (Cocos Bacilos y Espirilos). Los elementos que interviene son: • • • •

Violeta de Genciana: Colorante primario. Bicarbonato de sodio. Lugol Decolorante Fucsina Básica

La violeta de genciana actúa como colorante primario y se une a la pared celular primaria luego del tratamiento del Lugol (mordiente) después de la acción de la acetona ( decolorante). Las bacterias que retienen la violeta de genciana y se denominaran Gram + de color purpura o morado, Otras bacterias por tener mayor cantidad de lípidos en su pared celular pierden la violeta de genciana cuando se tratan con el decolorante y se teñirán con la Fuccina básica que es un colorante secundario dando un color rojo como observación. Material:
• • • • • Cultivos bacterianos Portaobjetos Asa de platino Mechero Microscopio

Microbiologia y Parasitologia

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19 de marzo de 2011 • Aceite de inmersión

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Reactivos:

• • • •

Colorante primario: Violeta de genciana Lugol ( mordiente) Acetona (decolorado) Fucsina básica ( colorante de contraste) Página 4

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PROCEDIMIENTO: • Extension del cultivo, desecación, fijación.

Cubrir con violeta de genciana durante 1 a 2 minutos.

Sin lavar reemplazar el colorante por el Lugol por 1 minuto.

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Lavar con agua.

Decolorar con alcohol por 30 segundos.

Teñir con Fucsina básica diluida durante 3 minutos, lavar, secar.

2. Coloracion de Ziehl Neelsen Microbiologia y Parasitologia Página 6

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Este tipo de coloración nos permite identificar bacterias acidoresistentes las cuales no colorean bien con la tinción Gram ya que presentan alto contenido de lípidos y acido micotico en la pared celular, en este grupo encontramos el Mycobacterium tuberculosis.

Material:

Laminas con frotices de esputo con BAAR.

NOTA: En este caso no se utilizo una muestra de esputo, solo se hizo un raspado en la mano de un voluntario para poder verificar si tenía o no microorganismos.

Reactivos:

• • • •

Colorante primario: Fucsina básica fenicada. Decolorador o diferenciador: Alcohol acido. Colorante de contraste: Azul de metileno. Mechero de alcohol, varillas portalaminas.

PROCEDIMIENTO:

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Cubrir el frotis con fucsina fenicana, calentando hasta la emisión de vapores, 3 emisiones.

Lavar con agua.

Decolorar con alcohol etílico.

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Otra vez lavar con agua.

Colorear con azul de metileno.

Lavar con agua, secar y observar.

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