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1
El prefijo ³BIO´ se refiere a
bacterias, levaduras y otras
células vivas, así como a
componentes de estas
células.
La ³TECNOLOGIA´
consiste en relucientes
depósitos de acero, llenos de
microbios, conectados a sus
fuentes de alimentación y
oxígeno mediante una
intrincada red de válvulas
que se cierran y abren según
los ritmos que marca una
computadora.
&
ïegún la Organización de
Cooperación y Desarrollo
Económicos:
Es la aplicación de los
principios científicos y de la
ingeniería al procesamiento de
materiales por agentes
biológicos para proveer bienes y
servicios.
Ä INCIÄIOï
CIENTIFICOï Y DE LA
INGENIE IA:
Conjunto muy amplio
de disciplinas que ponen
especial énfasis en la
Microbiología,
Bioquímica, Biología
Molecular, Genética,
Inmunología e
Ingeniería Bioquímica y
Química.
MATE IALEï:
Incluye a aquellos
orgánicos e
inorgánicos, en tanto
los agentes biológicos
son, en general,
catalizadores
biológicos; en
particular,
microorganismos,
células animales,
células vegetales, virus
y enzimas.
BIENEï:
Todos los productos
(alimentos, productos
farmacéuticos, recuperación
de metales, etc.)
ïE ICIOï:
Lo relacionado
específicamente con las
prestaciones tales como
purificación de agua o
tratamiento de efluentes y
extracción de derrames de
petróleo.
A EAï TEMATICAï
Ä IO ITA IAï
ïALUD:
acunas (desarrollo de
vacunas por procedimientos
que utilicen ingeniería
genética).
eactivos de diagnóstico:
Desarrollo de reactivos por
técnicas inmunológicas
(enzimo-inmunoensayos o
por ingeniería genética).
A EA AG ICOLA:
Diagnóstico de fitopatógenos en plantas
de interés económico.
Desarrollo de agentes de control biológico
y plantas.
Desarrollo de plantas transgénicas
resistentes a las plagas, enfermedades y
herbicidas. Modificación del contenido
celular en macromoléculas.
Métodos de mejoramiento de especies a
través de técnicas no convencionales.
Aceleración en la obtención de híbridos.
Utilización de marcadores moleculares.
Identificación y caracterización de genes
de interés.
A EA ÄECUA IA:
ïANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de métodos para
el diagnóstico de
enfermedades animales.
Äroducción de nuevas
vacunas virales, bacterianas
y parasitarias por técnicas de
avanzada.
Ä ODUCCION ANIMAL:
Manipulación y sexado de
embriones.
Hormonas para el
mejoramiento de la
producción animal.
Ä ODUCCION DE
INïUMOï
INDUïT IALEï:
Mejoramiento y control
de calidad de las industrias
de alimentos, incluyendo
derivados lácteos, vinos y
cervezas.
Tratamiento biológico de
efluentes.
!
&
c
m AC: Arte de fermentar.
Los sumerios y babilonios
usaban levaduras para
fabricar cerveza.
mIngeniería de fermentación.
EL FE MENTADO
DEFINICION OÄE ATIA:
mContenedor en el que se
mantiene un medio ambiente
favorable para la operación de
un proceso biológico deseado.
En cuanto al biorreactor:
Para cada proceso
biotecnológico, el sistema
de contención más
apropiado debe diseñarse
para brindar el mejor medio
ambiente, optimizado para
el crecimiento celular y
actividad metabólica.
Equipos accesorios.
málvulas de seguridad
mManómetros
málvulas de control
mTuberías
mControl de temperatura
mControl de pH
mControl de espumas
mÄuntos de muestreo
El medio ambiente puede
considerarse en tres aspectos:
mBIOLOGICO
mQUIMICO
mFIïICO
AI EACION Y AGITACION.
1- incrementar la velocidad de
transferencia de oxígeno desde
las burbujas de aire al medio
líquido; los microorganismos
no pueden utilizar oxígeno
gaseoso, sino solamente el que
se encuentra en disolución.
2- aumentar la velocidad de
transferencia de oxígeno y
nutrientes desde el medio a las
células. Debido al movimiento
se evita que las células creen
áreas estancadas con bajos
niveles de oxígeno y
nutrientes.
- impedir la formación de
agregados celulares.
- aumentar la velocidad de
transferencia de productos
metabólicos de las células al
medio.
5- aumentar la tasa o la
eficiencia de la transferencia
de calor entre el medio y las
superficies de refrigeración
del fermentador.
Tipos de fermentador:
mCrecimiento en suspensión.
Êiempo de generación:
Se refiere al tiempo
necesario para duplicar
el número de células.
En un proceso biotecnológico,
existen tres formas de hacer
crecer a los microorganismos en
un biorreactor:
-Por lotes (batch)
-Semi-continuo
-Continuo
Modos de operación de los
fermentadores:
m
2 El
reactor se carga con la especie
reactiva y, a medida que
procede la reacción, cambian
las condiciones en el reactor al
consumirse los reactivos y
formarse los productos.
Cuando se ha alcanzado el
nivel deseado de reacción, se
vacía el reactor, se limpia y el
proceso se repite. ïon
procesos que no se encuentran
en estado estacionario.
El ambiente nutricional
dentro del biorreactor
cambia en forma continua y,
por lo tanto, fuerza
cambios en el metabolismo
celular.
Eventualmente, la
multiplicación celular cesa
por desaparición o
limitación de nutrientes y
acumulación de productos
tóxicos de excreción.
La naturaleza compleja del
crecimiento de
microorganismos por lotes,
se muestra tal como sigue:
La fase 1 o ´lagµ, es un tiempo
de aparente no crecimiento,
pero estudios bioquímicos
demuestran actividad
metabólica, indicando que las
células están en proceso de
adaptación a las condiciones
ambientales y que un nuevo
crecimiento comenzará,
eventualmente.
Existe, luego, una fase de
aceleración transitoria
cuando el inóculo comienza a
crecer que es seguida,
rápidamente, por una fase
de crecimiento exponencial.
En la fase exponencial, el
crecimiento microbiano
ocurre a la máxima
velocidad posible para ese
microorganismo, con
nutrientes en exceso,
parámetros de crecimiento
ideales y ausencia de
inhibidores.
Sin embargo, en cultivos por
lote, el crecimiento
exponencial es de duración
limitada y, a medida que las
condiciones nutricionales
cambian, la velocidad de
crecimiento disminuye y se
entra en la fase de
deceleración, seguida de la
fase estacionaria, donde el
crecimiento global no se
obtiene, por falta de
nutrientes.
La fase final del ciclo es la
fase de muerte, cuando la
velocidad de crecimiento ha
cesado.
La mayoría de los procesos
biotecnológicos por lotes se
detiene antes de esta fase,
debido a la disminución en el
metabolismo y a la lisis
celular.
Algunos medios para prolongar
la vida de un cultivo por lotes:
-Adición gradual de
componentes nutritivos
concentrados (carbohidratos),
aumentando el volumen del
cultivo (utilizado para
producción industrial de
levadura).
-Adición de medio al cultivo
(perfusión) y extracción de un
volumen igual de medio usado,
libre de células (utilizado para
cultivos de células animales).
m
2 Existe
un flujo continuo de reactivos
frescos hacia el reactor y el
producto fluye continuamente
hacia fuera. En algunos
sistemas continuos el medio
nutriente es inoculado con el
cultivo microbiano al entrar al
reactor y los organismos llevan
a cabo su actividad a medida
que el líquido fluye a través del
sistema y salen del sistema
junto con el medio.
Los organismos pueden
separarse de la corriente
que lleva al producto y
reciclarse para inocular el
líquido de alimentación.
En un sistema continuo con
mezcla completa, las
condiciones son uniformes
en todo el reactor, en un
equilibrio de mezcla de
nutrientes, organismos y
productos.
La alimentación del sistema
es medio nutriente libre de
organismos y, en algunos
casos, un inóculo de
organismos reciclados.
Esta práctica de cultivo
continuo, provee un
crecimiento casi
balanceado, con pequeña
fluctuación de nutrientes,
metabolitos, número celular
o biomasa.
Esto consiste en medio
fresco entrando un sistema
por lotes, en fase de
crecimiento exponencial,
con una remoción
correspondiente de medio
más células.
Este método de cultivo
continuo, permite a los
organismos crecer en
condiciones de estado
estacionario, en las que el
crecimiento ocurre a una
velocidad constante y en un
medio ambiente constante.
En un sistema de cultivo
perfectamente mezclado,
se pasa medio estéril al
biorreactor, a un flujo
constante y una mezcla de
cultivo (medio, productos
de desecho y organismos)
emergen del mismo a la
misma velocidad,
manteniendo el volumen
total del cultivo, dentro del
biorreactor, constante.
_entajas de un proceso
por lotes:
Las principales son: menor
riesgo de contaminación,
flexibilidad operacional
cuando los fermentadores
se utilizan para distintos
productos, un control más
cercano de la estabilidad
genética del organismo, una
mejor coordinación con
estadios del proceso entre
lotes previos y posteriores.
Desventajas del proceso
por lotes:
La principal es la alta
proporción de tiempo
improductivo en la operación
del fermentador, dificultad de
diseño y la operación de
procesos que no están en
estado estacionario y la
variabilidad entre lotes.
Los fermentadores deben
ser vaciados, limpiados,
esterilizados y recargados
antes de cada
fermentación, operaciones
todas esenciales pero no
productivas.
En procesos por lotes,
estas operaciones pueden
tomar tanto tiempo como
la fermentación misma.
En un proceso continuo,
por el contrario, una
corrida puede durar
semanas o meses, es decir
que el tiempo no
productivo es, en
proporción, pequeño.
Esterilización:
mEsterilización de fermentadores.
mEl calentamiento se
consigue mediante:
mInyección de vapor en el
medio, por lo que el medio
se prepara ligeramente
más concentrado para
compensar la dilución por
el vapor condensado.
mEl medio se calienta por
conducción, haciendo
pasar vapor por la camisa
de termostatización.
mEsterilización por separado del
fermentador y el medio.
-Cambio de escala
-Diseño de medios para
procesos de fermentación
-Fermentación en
sustratos sólidos
-Êecnología de cultivos de
células de plantas y
animales
-Procesamiento posterior
de la muestra
Procesamiento
posterior de la
muestra.
Purificación.
El diseño y la operación
eficiente de los procesos de
purificación, son elementos
vitales para obtener los
productos deseados para
uso comercial.
Deberían reflejar la
necesidad de no perder más
que lo absolutamente
necesario del producto
final.
Este procesamiento final
involucrará, principalmente,
la separación inicial de la
mezcla de cultivo hacia una
fase líquida y una sólida, con
la subsecuente
concentración y purificación
del producto deseado.
El procesamiento involucrará
más de una etapa:
-Destilación
-Centrifugación
-Filtración
-Ultrafiltración
-Extracción con solventes
-Adsorción
-Êamices moleculares
-Electroforesis
-Cromatografía de afinidad
-Liofilización
ÊECNOLOGIA
UÊILIZANDO
ENZIMAS
La tecnología de enzimas
involucra la producción,
aislamiento, purificación, uso
en forma soluble y,
finalmente, la inmovilización
de las enzimas para su
utilización en gran variedad
de biorreactores.
La utilización de sistemas
enzimáticos libres de
células, presenta ventajas
respecto de los procesos
químicos que involucran un
número de reacciones
secuenciales.
En fermentación, el uso de
microorganismos como
catalizadores puede
presentar las siguientes
limitaciones:
1. Una alta proporción del
sustrato será utilizada
para convertirse en
biomasa
2. Pueden ocurrir reacciones
secundarias inútiles
3. Las condiciones para el
crecimiento de los
microorganismos pueden
ser diferentes de las
requeridas para la
formación del producto
4. El aislamiento y
purificación del producto
deseado, a partir de la
mezcla de fermentación,
puede ser dificultoso.
INGENIERIA
GENEÊICA E
INGENIERIA
PROÊEICA DE
ENZIMAS
La utilización de estas
técnicas ha posibilitado
producir enzimas
industriales con muy buena
calidad y pureza.
Crecimiento de microorganismos
conteniendo la enzima de utilidad
Determinación de
la secuencia parcial mARN ADN
de aminoácidos
Identificación de clones
Êransformación de microorganismos
F = t * 10(Ê-121)/z
Donde t= tiempo de aplicación del
tratamiento letal; Ê= temperatura
en oC y z= aumento de temperatura
requerido para reducir el período de
calentamiento en un 90% (es decir
el valor z).
En la industria alimentaria el
peligro más serio para la salud
es la presencia de Clostridium
botulinum, el formador de
esporas patogénico más
resistente al calor, así como el
agente más tóxico.
En esterilización clínica:
Calor húmedo:
_apor a 134oC (30 psi), 3 min
_apor a 126oC (20 psi), 10 min
_apor a 121oC (15 psi), 15 min
_apor a 115oC (10 psi), 20 min
Como los valores de D para
las esporas son, a 121oC, del
orden de 0,2 min, un tiempo
de mantenimiento de 15 min
de vapor a 121oC equivale a
75xD, lo que hace la
probabilidad de fallo en
relación a la supervivencia de
C. botulinum casi
imposiblemente remota.
Procesos discontinuos:
Autoclaves:
Êodo el aire debe ser
eliminado antes del ciclo de
calentamiento, ya que mezclas
de aire y vapor a una presión
determinada alcanzarán una
temperatura más baja que la
del vapor puro a la misma
presión.
Inyección directa del vapor:
Si se utilizan inyecciones
directas de vapor se debe
tener en cuenta que entre el
10 y el 20% del volumen final
se deberán a condensación.
Mientras la eficiencia térmica
de este proceso es alta, la
fuerte formación de espuma
durante el burbujeo puede
limitar la transferencia del
calor.
Calentamiento indirecto:
Pasando vapor de agua a través
de una espiral de intercambio
de calor o de una camisa. El
calor en este procedimiento es
menos eficiente que por
inyección directa y, en ambos
casos, permanecen los
problemas de enfriamiento,
generalmente conseguido
mediante espirales.
Esterilización por flujo continuo:
En el diseño del equipo deben
considerarse las tres etapas
del ciclo, para conseguir:
1. Un rápido calentamiento
2. Un tiempo de mantenimiento a
la temperatura de
esterilización
3. Un rápido enfriamiento
Esterilización por
radiaciones:
Normalmente se lleva a cabo
con una fuente de cobalto-60
o de cesio-137.
El efecto letal es siempre
mayor en presencia de
oxígeno y alto contenido en
agua.
La unidad de medida de la
dosis de radiación es el rad,
equivalente a una energía de
absorción de 100 ergs/g de
aire. El Roentgen (R) es 83
ergs/g de aire.
Esterilización química:
Formaldehído: solamente
efectivo si se puede
garantizar que entre en
contacto con los organismos
contaminantes. Pobre
difusibilidad y poder de
penetración. Olor picante y
duradero. Solamente en
casos especiales.
Peróxido de hidrógeno:
poderoso agente oxidante
que mata células vegetativas
y esporas con actividad
creciente con la
concentración, temperatura
y normalmente pH. Sus
productos de degradación
son inocuos.
Oxido de etileno y de
propileno: pueden utilizarse en
forma gaseosa. El de etileno
es más efectivo pero
altamente tóxico, irritante y
violentamente explosivo en
mezclas con aire. Su efecto
letal sobre las bacterias
depende de la humedad; las
condiciones óptimas incluyen
40-80% de humedad relativa
y temperatura de 60oC
durante 3-4h, para una
concentración de gas de 800-
1000 mg/l. El proceso se
utiliza cuando el equipo puede
ser dañado por altas
temperaturas.
Esterilización por filtración:
Filtros profundos: capa
relativament gruesa de fibra
de vidrio, algodón, lana
mineral, celulosa moldeados
como planchas, tapones o
cilindros.
Filtros de pantalla:
membranas hechas de
ésteres de celulosa u otros
polímeros
Evaluación de la eficiencia de
esterilización:
1. Êermosensores
2. Êubos de Browne: tubos de vidrio
cerrados con 0,15 ml de un fluido
rojo que cambia a verde al aumentar
el calor
3. Êiras de papel impregnadas con
esporas: bioindicadores. Se incuban
luego del tratamiento para evaluar la
supervivencia
4. Êiras indicadoras: responden al calor
húmedo entre 115-123oC. Indican la
dosis de calor por distancia recorrida
de un colorante azul
5. Cinta adhesiva de autoclave: indica
que el vapor, a un mínimo de 120oC,
alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan
de blancas a negras. No asegura
esterilidad sino que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.
Pruebas de eficiencia de filtración:
1. Prueba del azul de metileno:
para distribución de partícula de
0,02-0,2 micrones
2. Prueba del cloruro sódico: para
que haya esterilización, el filtro
debe retener el 99,997%
3. Esporas de Bacillus: rango de
tamaño 0,7-1 micrón
4. Prueba del bacteriófago Ê3:
0,03 micrones. Un filtro con
penetración de llama de sodio de
0,001% tiene un equivalente de
0,000005% B. Subtilis y de
0,00005% de Ê3.