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INTRODUCCIÓN
Las substancias húmicas son macromoléculas orgánicas diferentes y más estables que los
compuestos de donde provienen, constituyen al humus e incluyen los ácidos húmicos (AH),
ácidos fúlvicos (AF) y huminas residuales (HR). En el mundo hay dos corrientes de estudio de
acuerdo a su origen:
La primera es en Estados Unidos de América, ya que los ácidos húmicos y fúlvicos
empleados para su estudio son extraídos de minas de carbón y provienen de minerales fósiles
tales como la leonardita, turbas y lignitos, inclusive ya desde fines de la segunda guerra mundial,
los productores de los Estados de California, Texas, Atlanta y Pensilvania, molían estos
minerales y el polvo lo aplicaron como fertilizantes a cereales y pastos con excelentes resultados.
La segunda corriente se ha desarrollado en Rusia, Francia, Alemania, Italia y Canadá, desde
inicios del siglo anterior, donde han estudiado con amplitud el proceso de humificación en suelos
de bosque, es decir, el papel de la materia orgánica ya transformada en humus en la génesis de los
suelos. Esto ha generado que una gran cantidad de investigadores hayan establecido lo conocido
hasta ahora, en cuanto a las características y el modo de acción de las moléculas de las
substancias en los suelos agrícolas y en la fisiología y nutrición vegetal.
En México, sobre todo en el Norte, el uso de ácidos húmicos en la agricultura con fines de
fertilización, inicia a fines de los años 80’s, ya que empresas dedicadas a la venta de productos
agroquímicos expenden los compuestos mencionados, aunque todos estos productos orgánicos
provienen de los minerales fósiles, los cuales se importan de Estados Unidos (California,
Pensilvania y Atlanta), Europa (Alemania, Italia y España) y el Medio Oriente (Israel). Lo
anterior provoca altos precios de estos productos.
En toda materia orgánica se deben presentar los procesos de mineralización
(transformación de compuestos orgánicos en inorgánicos) y humificación (síntesis y/o unión
química y/o biológica de compuestos de degradación de residuos de origen vegetal y animal),
para transformarse en humus, pero, éstos en condiciones naturales son lentos, de varios meses a
decenas de años, en función del tipo de materia orgánica y los factores del medio ambiente. Para
acelerar la humificación, en un “reactor” se mezclaron estiércol de bovino y de caprino con
residuos orgánicos de cocina y agua y en 60 días, se obtuvieron aceptables cantidades de ácidos
húmicos y ácidos fúlvicos con la adecuación de una metodología, cuya eficiencia consiste en usar
una solución acuosa de hidróxido de sodio.
La gran mayoría de los investigadores de las substancias húmicas, concuerdan en que
gracias a los grupos funcionales de éstas, se debe su actuación en las propiedades físicas y
químicas del suelo, así como en las funciones fisiológicas de las plantas y en la nutrición vegetal.
Se cree que las substancias húmicas intervienen directamente en una gran cantidad de procesos
fisiológicos involucrados con el crecimiento de las plantas e indirectamente en la nutrición
vegetal en forma similar a los intercambiadores de iones sintéticos (agentes quelatantes), sin
embargo, este mecanismo no está bien dilucidado. Por lo comentado, el objetivo general fue
obtener en el menor tiempo posible la mayor cantidad de ácidos húmicos y fúlvicos extraídos de
la humificación de residuos de origen animal y establecer su comportamiento en la nutrición,
crecimiento y desarrollo de algunas hortalizas.
Introducción
Trabajo de Laboratorio
Introducción
Metodología
En un invernadero del Campus sede de la Universidad Autónoma Agraria “Antonio
Narro”, ubicado en la Ex – Hacienda de Buenavista, Saltillo, Coahuila, México, la cual se ubica a
los 25º 22’ de latitud norte, a los 101º 01’ de longitud oeste y a una altura de 1743 msnm, fueron
colocadas charolas germinadoras de poliestireno de 200 cavidades, con el sustrato denominado
“perlita” (material inerte) y sembradas semillas del híbrido de tomate “Río Grande”. La forma fue
de “charolas flotantes”.
Una charola fue usada para cada tratamiento, los cuales fueron 0.2 y 0.4 mL L-1 de agua
de cada ácido fúlvico, lo que representa una cantidad real (con base en sus porcentajes) aplicada
de 0.58 y 1.16 mg L-1 de agua de los AFC y 3.20 y 6.40 mg L-1 de agua para los AFL,
respectivamente. Estos fueron mezclados con diferentes niveles de la solución nutritiva Douglas
para hidroponía (Sánchez y Escalante, 1988) y se usaron como testigos cuatro niveles de la
solución nutritiva sola. Esto proporcionó un total de 20 tratamientos, los cuales fueron
distribuidos de acuerdo a un Diseño Experimental Completamente al Azar con arreglo Factorial
2x2 con tres repeticiones. La distribución de los tratamientos se presenta en el Cuadro 2.
Se muestreó cada 10 días, después de que la plántula presentó dos hojas verdaderas, en
tres ocasiones y se colectaron 10 plántulas por repetición. El análisis estadístico que se efectuó,
consistió en el análisis de varianza (ANVA) y la prueba de medias de Tuckey (p<0.05%), con el
uso del paquete de computo MINITAB versión 13 para WINDOWS.
Las variables de respuesta medidas fueron: longitud de la plántula (LP) y raíz (LR) área
foliar (AF) (Automatic Area Meter, Model AAM-7, HAYASHI DENKOH Co., LTD, Tokio,
Japan) y peso seco total de la plántula (PS). Además, cuando las plántulas alcanzaron 15 cm-1 de
longitud en promedio (35 días después de la siembra), se midió por vía húmeda (mezcla de ácido
nítrico con ácido perclórico) con el espectrofotómetro de absorción atómica (AA) (Perkin Elmer-
2380) el contenido de potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), manganeso (Mn), hierro (Fe),
cobre (Cu) y zinc (Zn) y por colorimetría (Método Olsen) (colorímetro MILTON ROY,
Spectronic 20D) el fósforo (P) del tejido vegetal de follaje, es decir, al momento de alcanzar las
dimensiones para trasplante.
Cuadro 2.- Tratamientos aplicados a plántulas de tomate en “charolas flotantes”, en invernadero.
Resultados
En el Cuadro 3 se muestra un concentrado del ANVA realizado a las diversas variables
medidas en el experimento. Aquí se puede apreciar que en la longitud del tallo no hay
significancia estadística de ningún tratamiento, sin embargo, desde el punto de vista gráfico, al
agregar 0.58 mg L-1 de agua de los AFC, mezclados con el 25 por ciento de la solución nutritiva,
superaron en 180 por ciento a la solución nutritiva sola. También, en el cuadro se puede observar
que al aplicar 6.40 mg L-1 de los AFL con el 25 por ciento de la solución nutritiva, la longitud de
la raíz fue 32 por ciento mayor, que al adicionar la solución nutritiva sola al 100 por ciento. En el
área foliar, 1.16 mg L-1 de los AFC con el 75 por ciento de la solución nutritiva, aventajaron en
40 por ciento al 100 por ciento de la solución nutritiva. Al adicionar 3.20 mg L-1 de los AFL
mezclados con el 25 por ciento de la solución nutritiva, el peso seco de la plántula sobrepasó en
550 por ciento a la aplicación del 100 por ciento de la solución nutritiva sola.
Cuadro 3.- Concentrado del análisis de varianza del efecto de ácidos fúlvicos y sus dosis en las
variables de respuesta medidas a plántulas de tomate, en invernadero.
Metodología
Las substancias húmicas obtenidas de la manera descrita con anterioridad se aplicaron en dosis de
0.2, 0.4 y 0.6 ml L-1 de agua y mezcladas con la solución nutritiva Douglas para tomate en
hidroponía (Sánchez y Escalante, 1988). El cultivar empleado fue el “Río Grande”, de hábito
determinado. La solución nutritiva presenta tres niveles: dosis mínima, óptima y máxima y para
el presente trabajo fueron usados sólo dos niveles que se refieren al 100% (dosis mínima) y el
50% (la mitad) de ésta, todo bajo un diseño experimental completamente al azar, con arreglo
factorial 4x3x2, con tres repeticiones. El análisis estadístico consistió en análisis de varianza
(ANVA) y prueba de medias (Tukey. P>0.05 y 0.01), para lo cual se empleó el programa de
computador MINITAB, versión 13 para Windows. El Cuadro 5, muestra la distribución de los
tratamientos.
Las substancias húmicas, a partir del trasplante, fueron aplicadas cada 15 días (seis en total) y
mezcladas con la solución nutritiva, esta mezcla fue adicionada a las plantas cada cinco días.
Cada tercer día sólo riegos con agua, cuyo pH fue de 7.2.
Las variables de respuesta medidas fueron: número de racimos y frutos, peso seco de planta y
peso de fruto por planta. El número total de cortes fue de ocho practicado de forma manual. A
tejido vegetal de follaje y raíz se le determinó, mediante el espectrofotómetro de absorción
atómica el contenido de potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), hierro (Fe), cobre (Cu) y zinc
(Zn). El fósforo (P) por colorimetría.
Cuadro 5.- Distribución de los tratamientos de substancias húmicas de diversos orígenes
aplicados a tomate, en invernadero.
Cuadro 6.- Concentrado de análisis de varianza del efecto de substancias húmicas y sus dosis en
las variables de respuesta medidas a plantas de tomate, en invernadero.
La figura 5 precisa cómo al aplicar los ácidos húmicos de leonardita a razón de 0.6 ml por L-1
de agua mas la solución nutritiva al 100 % (AHL6+100%) y los ácidos fúlvicos de leonardita a
una cantidad de 0.4 ml L-1 de agua combinados con la solución nutritiva al 100% (AFL4+100%),
el número de frutos fue superior en 184 % que cuando se adicionó la solución nutritiva sola al
50% (SN50) y en 117% a la solución al 100% y al adicionar este último tratamiento
(AFL4+100%), el número de racimos superó en 70 % a la solución nutritiva al 50% y en 20 % a
la de 100%. Lo anterior se comprobó al llevar a efecto la prueba de medias Tuckey, 0.5 %).
Figura 5.- Número de frutos y racimos de tomate al adicionar substancias húmicas de diverso
origen, en invernadero.
6
5
4
Nº 3
N°Frutos
2 N°Racim.
1
0
AHC2+50
AHC6+50
AHC4+100
AHL2+50
AHL6+50
AHL4+100
AFC2+50
AFC6+50
AFC4+100
AFL2+50
AFL6+50
AFL4+100
SN50
Tratamientos
Figura 6.- Peso de fruto por planta de tomate al adicionar substancias húmicas de diverso origen,
en invernadero.
300
250
200
g-1 pta. 150
Peso
100
50
0
AHC2+50
AHC4+50
AHC6+50
AHC2+100
AHC4+100
AHC6+100
AHL2+50
AHL4+50
AHL6+50
AHL2+100
AHL4+100
AHL6+100
AFC2+50
AFC4+50
AFC6+50
AFC2+100
AFC4+100
AFC6+100
AFL2+50
AFL4+50
AFL6+50
AFL2+100
AFL4+100
AFL6+100
SN50
SN100
Tratamientos
Figura 7.- Contenido de hierro, calcio y manganeso de tejido vegetal de raíz a) y tejido
vegetal de follaje b) de tomate al adicionar substancias húmicas de diverso origen, en
invernadero.
a)
1000
800
600
%ppm Fe
400 Mn
Ca
200
0
AHC2+50
AHC4+50
AHC6+50
AHC2+100
AHC4+100
AHC6+100
AHL2+50
AHL4+50
AHL6+50
AHL2+100
AHL4+100
AHL6+100
AFC2+50
AFC4+50
AFC6+50
AFC2+100
AFC4+100
AFC6+100
AFL2+50
AFL4+50
AFL6+50
AFL2+100
AFL4+100
AFL6+100
SN50
SN100
b)
1000
800
ppm 600
Fe
400 Mn
Ca
200
0
AHC2+50
AHC4+50
AHC6+50
AHC2+100
AHC4+100
AHC6+100
AHL2+50
AHL4+50
AHL6+50
AHL2+100
AHL4+100
AHL6+100
AFC2+50
AFC4+50
AFC6+50
AFC2+100
AFC4+100
AFC6+100
AFL2+50
AFL4+50
AFL6+50
AFL2+100
AFL4+100
AFL6+100
SN50
SN100
Tratamientos
La misma Figura muestra cómo la cantidad superior de calcio en los tejidos de follaje fue
al adicionar los ácidos fúlvicos de composta a la dosis de 0.6 ml L-1 de agua, mezclados con la
solución nutritiva al 100 % (AHC6+100), esto es un 654 % más que cuando se aplicó solo la
solución nutritiva al 100 %, mientras que al combinar los ácidos húmicos de leonardita al 0.6 ml
L-1 con la solución nutritiva al 50 % (AHL6+50), el contenido de manganeso en el tejido
mencionado fue superior en 175 % a la aplicación de la solución nutritiva sola al 100 %. Al
agregar los ácidos húmicos de composta a una cantidad de 0.2 ml L-1 de agua mas la solución
nutritiva al 100% (AHC2+100), la cantidad de hierro superó en un 75% a la aplicación de la
solución nutritiva sola al 100%.
Comportamiento de Tres Substancias Húmicas Extraídas de Compostas en la
Nutrición y Crecimiento de Chile, en Invernadero
Resultados
Grupos Funcionales de los Ácidos
La cantidad de grupos funcionales libres carboxilos (-COOH) de los ácidos fúlvicos
extraídos de la composta de EC+PS, superaron al testigo (K-tionic) en 624 por ciento, mientras
que la cantidad de los grupos funcionales libres oxidrilos fenólicos (-OH) de los ácidos húmicos
obtenidos de la composta de EB+DC, sobrepasaron también al testigo en 251 por ciento (Cuadro
8). Los ácidos fúlvicos extraídos de las compostas EB+DC y EB+HM, presentaron mayor
contenido de grupos -OH (356 y 366 cmolc kg-1), mientras que los obtenidos de la composta de
EC+PS de –COOH (536 cmolc kg-1). Lo anterior significa que estos últimos compuestos son los
más oxidados y polimerizados, de acuerdo con lo establecido por Fründ et al., (1994), Orlov
(1995) y Schnitzer (2000), al decir que cuando un tipo de substancias húmicas presentan mayores
cantidades de grupos funcionales libres –COOH, son los más capaces de complejar y/o quelatar
iones con carga eléctrica positiva, principalmente los metálicos, en función del material orgánico
original.
Cuadro 8.- Porcentaje de substancias húmicas (SH), acidez total (AT), grupos funcionales libres
carboxilos (-COOH) y grupos funcionales libres oxhidrilos (-OH) de ácidos húmicos y ácidos
fúlvicos de tres compostas y un producto comercial.
Cuadro 9.- Diámetro de tallo (DT), número de frutos amarrados (NFA) y cosechados
(NFC), peso de fruto (PF) y peso fresco (PFP) y seco de planta (PSP) de chile Anheim, al
adicionar substancias húmicas extraídas de tres compostas y mezcladas con una solución
nutritiva, en invernadero.
Figura 8.- Rendimiento de chile Anaheim al adicionar tres substancias húmicas extraídas
de diversas compostas y mezcladas con diferentes cantidades de una solución nutritiva, en
invernadero.
30
25
20
EB+CD
EB+HM
t ha-1 15
EC+PS
K-tionic
10
SN 0
0
SN 0 SN 50 SN 100
Tratamientos
DISCUSIÓN GENERAL
Los grupos funcionales libres de los ácidos fúlvicos (–COOH), actuaron como ligantes
naturales de los iones y posteriormente los colocaron disponibles para las plantas. Esto quiere
decir que las substancias húmicas están bien polimerizadas (Fründ et al., 1994; Orlov, 1995;
Schnitzer, 1991, 2000) y bien oxidados (AF=859 meq/100g). Aquí es necesario considerar el
número de cargas eléctricas negativas (de 1 a n: donde n es el número total de sitios aniónicos
disponibles) de las moléculas orgánicas, las cuales pudieron ser equilibradas por cargas positivas
de los cationes (Schnitzer, 1991; Orlov, 1995; Harter y Naidu, 1995) de la solución nutritiva
adicionada. Además, es necesario considerar la capacidad de intercambio catiónico de la raíz
(Marschner, 1995).
La gran importancia de precisar la química de la unión de metales traza con las
substancias húmicas es la extensión de la complejación, la estabilidad de los complejos y el
efecto de la formación de los complejos en propiedades como su solubilidad. La acidez total es
generalmente considerada como la que provee una adecuada medida de la habilidad de las
substancias húmicas para unirse con metales, sin embargo, existe la posibilidad de que grupos
funcionales no oxigenados podrían estar involucrados. Además, cationes polivalentes como el
hierro, el cobre y otros elementos traza es probable que sean utilizados para formar puentes entre
las cadenas de moléculas de ácidos fúlvicos, hasta que su tamaño molecular produzca
insolubilidad (Linehan, 1985). Cabe mencionar que el hierro y el manganeso son esenciales en la
molécula de clorofila, es decir, intervienen en la fotosíntesis, además, lo anterior provoca un
aumento en el área foliar y por consiguiente en el peso del fruto (Rauthan y Schnitzer, 1981;
Salisbury y Ross, 1994; Reyes et al., 1999). El calcio (de baja movilidad), es determinante en la
rigidez de tallos y consistencia de los frutos (Marschner, 1995).
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