Bioquímica hepática

(II) El metabolismo del glucógeno.

Glucogenolisis

El hepatocito muestra abundantes

gránulos de glucógeno

1
 Ultraestructura de los grá
gránulos de glucó
glucógeno
35nm
Rosetas de glucógeno Partícula β

Estructura de cadenas
macromolécula ramificadas
de
glucógeno
Lado catalítico

Capa exterior de enzimas

implicados en el
metabolismo del
1 µm glucógeno Lado regulador

Glucógeno
fosforilasa

El glucógeno...

¾ Está presente en la mayoría de las células animales

¾ Abunda en el hígado (10% peso) y en músculo esquelético (fibra
muscular blanca, 3% peso)
¾ Es un polímero de la glucosa y, por tanto, una forma de
almacenamiento de glucosa dentro de la célula que le sirve de
reservorio energético
¾ Es de elevado peso molecular, y sin embargo es soluble en agua
¾ Una función similar la desempeña el almidón en el mundo vegetal

2
 El glucógeno es una macromolécula de estructura muy ramificada. Las
ramificaciones son más frecuentes en la zona central que en la periférica. La
molécula de glucógeno tiene un peso molecular ≥ 10.000.000. En su núcleo
central existe una proteína, la glicogenina. Puede formalmente hablarse de que
se trata de una glicoproteína extraordinariamente glicosilada.

Dos tipos de enlace en la estructura del Glucógeno

CH2OH CH2OH
H O H H O H
H H
OH H OH H 1
O
OH
O
H OH H OH

CH2OH CH2OH 6 CH2 CH2OH CH2OH

H O H H O H H 5 O H H O H H O H
H H H H H
OH H OH H OH H 1 4 OH H OH H
4 O O
O O OH
OH
3 2
H OH H OH H OH H OH H OH

El glucógeno es un polímero formado por unidades de glucosa

unidas por dos tipos de enlaces:
Š α(1Æ4) glicosídicos (mayoritariamente)
Š α(1Æ6) glicosídicos (en las ramificaciones)

3
La degradación del glucógeno ocurre desde los extremos 4-OH de las cadenas.
El enzima clave es la glucó
glucógeno fosforilasa

Glicogenina

Extremo 4-OH (reductor)

CH2OH
H O H
H
OH H
OH OPO32−

H OH
glucosa-1-fosfato

El enzima glucógeno fosforilasa cataliza la fosforó

fosforólisis de los
enlaces α(1Æ4) glicosídicos, liberando glucosa-1-fosfato:

glucógeno(n) + Pi Æ glucógeno (n–1) + glucosa-1-fosfato

Hidrólisis: R-O-R' + HOH Æ R-OH + R'-OH

HO-PO32- Æ R-OH + R'-O-PO32-
Fosforólisis: R-O-R' + HO-

4
 La reacció
reacción de fosforó
fosforólisis catalizada por la glucó
glucógeno fosforilasa

Glucógeno (N)

Pi
Glucógeno fosforilasa

Glucógeno (N-1)

α-D-Glucosa 1-fosfato

El piridoxal fosfato, un derivado de la

vitamina B6, actúa de grupo prostético de la
glucógeno fosforilasa

H O El coenzima está anclado al sitio activo

−O
O− C
del enzima a través de un enlace de base
H2
P C OH Schiff (formado por la condensación del
O
O aldehído y un ε-amino de una lisina.
+
N CH3
H
piridoxal fosfato Enz

(CH2)4

N+
O− HC H
−O H2
P C O−
O
O
+
N CH3
H
Enzyme (Lys)-PLP Schiff base

5
 ¿Cómo actúa la glucógeno fosforilasa?

Glucógeno
fosforilasa
Glucosa 1-P

¿Cómo actúa el enzima desramificante? (I)

α-1,4/α-1,4 trans-glicosidasa

6
 ¿Cómo actúa el enzima desramificante? (II)

α1-6 glicosidasa

Glucógeno
fosforilasa Glucosa 1-P

El enzima desramificante tiene dos centros catalíticos

independientes, resultante del plegamiento de una única cadena
polipeptídica:
Š La actividad transferasa permite hidrolizar un trisacárido de
glucosa, y transferirlo al extremo de otra cadena.Queda una
glucosa unida por un enlace α(1Æ4).
Š La actividad α(1Æ6) glucosidasa hidroliza el enlace
α(1Æ6) y libera glucosa. Es la única ocasión en la que se
libera glucosa del glucógeno.

7
 Lugar de hidrólisis de la α-1,6 glucosidasa

La acción coordinada de los tres enzimas...

α-1,4/α-1,4 transferasa

α-1,6 glucosidasa

Glucógeno
fosforilasa

8
 Una visió
visión global de la degradació
degradación del glucó
glucógeno

Glicogenina

El producto resultante Fosforilasa

del catabolismo del
glucógeno es:

glucosa-1-fosfato

y una pequeña cantidad

de glucosa Transferasa

α-1,6-glucosidasa

La glucosa-1-fosfato no puede utilizarse directamente en el

metabolismo celular

Fosfoglucomutasa

α-D-Glucosa 1-fosfato α-D-Glucosa 6-fosfato

Glucosa Glicolisis
• La glucosa-6-fosfato sí puede ser sanguínea (Ciclo Krebs)
utilizada en otras rutas metabólicas...

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 •El enzima fosfoglucomutasa cataliza la reacción reversible:
glucosa-1-fosfato ÅÆ glucosa-6-fosfato

Enzyme-Ser-OPO32− Enzyme-Ser-OH Enzyme-Ser-OPO32−

CH2OH CH2OPO32− CH2OPO32−

H O H H O H H O H
H H H
OH H OH H OH H
OH OPO32− OH OPO32− OH OH

H OH H OH H OH
glucosa-1-fosfato glucosa-6-fosfato

La serina-OH, en el centro activo del enzima, es el lugar en el que se fija el Pi.

Destino metabólico de la glucosa 6-fosfato en el hígado

Glucógeno Glucosa
Glucokinasa
G-6-Pasa
Glucosa-1-P Glucosa-6-P Glucosa + Pi
Glicolisis

Piruvato

La glucosa-6-fosfatasa, que solo existe en el hígado, cataliza la reacción:

glucosa-6-fosfato + H2O Æ glucosa + Pi

Es clave para la función reguladora de la homeostasis de la

glucosa que ejerce el hígado. Los demás tejidos carecen de ella

10
 Destino metabólico de la glucosa 6-fosfato en otros tejidos

Glucógeno Glucosa
Glucokinasa
G-6-Pasa
Glucosa-1-P Glucosa-6-P Glucosa + Pi
Glicólisis

Piruvato

La regulación de la glucogenolisis

¾La glucógeno fosforilasa es, de entre los varios enzimas que participan en el
catabolismo del glucógeno, el enzima que más eficazmente regula la
glucogenolisis.
¾La regulación de la glucógeno fosforilasa hepática y la muscular es diferente
¾La regulación de la glucogenolisis puede tener lugar por tres vías diferentes:
™ Interconversión enzimática de la glucógeno fosforilasa (mecanismo
dependiente de cAMP; hígado)
™ Activación del enzima por mecanismos dependiente de Ca2+ (músculo
e hígado)
™ Activación alostérica (AMP)
¾Dado que el destino metabólico del glucógeno es diferente, la glucogenolisis
está regulada por señales hormonales diferentes en cada tejido (glucagón en
el hígado y β-adrenérgicos en el músculo). El glucagón se produce en
respuesta a niveles bajos de glucosa. La epinefrina es parte de la respuesta ,
de “alerta” del individuo ante el peligro.

11
 Regulación de la glucogenolisis (I)

Š La glucógeno fosforilasa (hígado y músculo) existe bajo dos

formas:
Š "a" es una forma activa del enzima fosforilada, cuya
actividad es poco sensible a reguladores alostéricos. La de
músculo es sensible a glucosa
Š "b" es una forma desfosforilada del enzima que es mucho
menos activa, pero que puede ser activada por efectores
alostéricos (más en músculo que en hígado).

Regulación de la glucogenolisis (II)

¾En el hígado y músculo, la glucógeno fosforilasa es fosforilizada,
y activada, por la fosforilasa kinasa
¾Este enzima existe también bajo dos formas, una fosforilizada
que es activa y otra no fosforilizada que es mucho menos activa
¾En hígado, la fosforilización y activación del enzima es
catalizada por la proteína kinasa A, dependiente de cAMP

12
El cAMP es un mensajero intracelular que es sintetizado por la adenilato
ciclasa, a partir de ATP, y rápidamente degradado por la 3’-5’ fosfodiesterasa

ATP

3’-5’ fosfodiesterasa
5´

3´
adenilato ciclasa

5´AMP

Glucagó
Glucagón y epinefrina, actuando
desde el exterior, activan la
formació
formación de cAMP

13
 Cascada de activación de
la glucógeno fosforilasa

El mecanismo en
cascada permite una
notable amplificación de
la respuesta al agonista

Regulación de la glucogenolisis en el músculo

tiene ciertas singularidades...

¾La glucógeno fosforilasa de músculo, además de su

interconversión y activación por fosforilización, es
también regulable alostéricamente por AMP, ATP, y
G6P.
ŠGlucosa es un efector alostérico negativo de la
forma “a” (fosforilizada) hepática.
ŠAMP, que aumenta cuando los niveles de ATP son
bajos, activa la forma “b” del enzima.
Š ATP y glucosa-6-fosfato, poseen sitios de unión
que se solapan con los de AMP, e inhiben la forma
“b” de la fosforilasa
¾La degradación del glucógeno se inhibe cuando existe
suficiente ATP y glucosa-6-fosfato.

14
 La doble regulación de la glucógeno fosforilasa muscular...

Fosforilasa “b” Fosforilasa “a”

Fosforilasa
quinasa

Fosfoproteína
fosfatasa Forma T
Forma T (parcialmente
Forma R Forma R
(inactiva) activa)
(activa) Glucosa (activa)

En el músculo, existe también una vía paralela de activación

a través de Ca++...

Ca++

...implica la activación de la fosforilasa quinasa a través de Ca++, sin

necesidad de su fosforilización

15
 Señalización ligada a canales de Ca2+ (I)
Ca2+ (10-3M)

10-7M Ca2+

Ca2+

La entrada de Ca2+ y su elevación

intracelular activa procesos en la célula

Señalización ligada a canales de Ca2+ (II)

10-7M Ca2+
Ca2+ (10-3M)

Ca2+

La salida de Ca2+ de los depósitos

intracelulares activa procesos en la célula

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 El mediador que activa los flujos
de calcio es el IP3

Activación de la fosforilasa a través de receptores α-adrenérgicos

1. Aumento de IP3
2. Aumento de Ca2+ intracelular
3. Unión de Ca2+ a calmodulina
4. La calmodulina es la subunidad δ del holoenzima fosforilasa quinasa

17
 Activación de la fosforilasa quinasa en músculo:
dos alternativas...
Fosforilasa “b”

Hormonas

Protein Parcialmente activa

kinasa A

Inactiva Totalmente activa

•Impulso nervioso Parcialmente activa

•Contracción muscular Fosforilasa “a”
•Hormonas

Fosforilasa Quinasa inactiva

Fosforilasa Quinasa-Ca++ parcialmente activa

P-Fosforilasa Quinasa-Ca++ totalmente activa

La Fosforilasa quinasa de músculo, cuya subunidad

δ es la calmodulina, puede activarse por dos vías: 1)
fosforilización de la subunidad β por la
proteinquinasa “A” dependiente de cAMP; 2) unión
de Ca++-calmodulina para formar el holoenzima.

18
 Los mecanismos de desactivació
desactivación de la glucogenolisis...
glucogenolisis...

¾ Los mecanismos descritos explican cómo tras una señal

apropiada, se pone en marcha la glucogenolisis pudiendo dar la
impresión de que una vez activada no cesaría hasta haber
degradado totalmente el glucógeno.
¾ Sin embargo existen en la célula toda una serie de mecanismos
de desactivación que garantizan que la glucogenolisis solo estará
activa si existe un estímulo continuado para que así sea.
¾ En cuanto cesa ese estímulo, cesa poco después la degradación
del glucógeno...

Los mecanismos de inactivación

actúan a varios niveles:

1. Disminució
Disminución de los niveles de cAMP
¾ Inactivación de la adenilato ciclasa por separación de G-GTP a
G-GDP y su separación del enzima
¾ Hidrólisis del cAMP por la fosfodiesterasa
¾ Inactivación de la Proteína quinasa A

2. Disminució
Disminución del Ca2+ intracelular por bombeo a los
correspondientes reservorios

3. Defosforilizació
Defosforilización de la glucó
glucógeno fosforilasa y la fosforilasa
quinasa por una fosfoproteín-fosfatasa que se inactiva por
efecto del glucagón y proteína quinasas

19
 El cAMP es un mensajero intracelular que es sintetizado por la adenilato
ciclasa, a partir de ATP, y rápidamente degradado por la 3’-5’ fosfodiesterasa

ATP

3’-5’ fosfodiesterasa
5´

3´
adenilato ciclasa

5´AMP

Normalización de los niveles Espacio extracelular

Ca2+ (≈10-3M) de Ca2+ intracelular

Ca2+ Ca2+
Na+/Ca2+ antipuerto Ca2+ -ATPase

Ca2+ (≈10-7M)
Na+ Citosol
ATP ADP + P
Bombeo por la Ca2+ -ATPase
hacia el retículo endoplásmico

Incorporación
ATP ADP + P Secuestro del Ca2+ por
activa de Ca2+ en
proteínas del citosol
la mitocondria

Ca2+
Ca2+
Ca2+

calmodulina

Retículo endoplásmico mitocondria

20
 La fosfoproteína fosfatasa es un enzima que desfosforila, e inactiva a la
fosforilasa quinasa y la glucógeno fosforilasa

Glucógeno
Fosforilasa
fosforilasa
quinasa

Pero el enzima esta inhibido por un inhibidor que, cuando está fosforilado,
bloquea su actividad

El inhibidor, fosforilado, es un mal substrato de la fosfatasa. No obstante

logra eliminar su grupo fosfato con lo que se disocia del enzima

Glucógeno
Fosforilasa
fosforilasa
quinasa

La fosfoproteína fosfatasa, liberada de su inhibidor, desfosforila, e inactiva

a la fosforilasa quinasa y la glucógeno fosforilasa

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 Proteína reguladora
Regulació
Regulación de la actividad de de unión al glucógeno
la fosfoproteí
fosfoproteína fosfatasa
Fosfoproteína
fosfatasa

Glucagón La fosforilización de la subunidad

reguladora hace que se suelte el
enzima del glucógeno

Fosfoproteína
fosfatasa
parcialmente
activa

La fosforilización del inhibidor por la PK-A

dependiente de cAMP, le hace capaz de Complejo
unirse a la fosfatasa e inactivarla totalmente
inactivo

22