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13/04/2010

ENZIMAS III
REGULACION ENZIMATICA

LIC. ESTELA RIVAS DE CARRILLO

CINETICA DE MICHAELIS-
MICHAELIS-MENTEN

CARACTERÍSTICAS DE Km

 Cada enzima tiene una Km específica,


y refleja la AFINIDAD DE LA ENZIMA
POR SU SUSTRATO.

 Km es la concentración de sustrato en
la que la velocidad inicial de
la reacción es igual a ½ de la Vmax

 Km no varía con la concentración de


enzima

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GRAFICA DE LINEWEAVER-BURK o DEL DOBLE


RECIPROCO
V = Vmax. [ S ]
Km + [ S ]

y= ax + b

GRAFICA DE
LINEWEAVER-BURK o DEL DOBLE RECIPROCO
1 / V contra [S] usado para valorar Km y Vmax

Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax


es más sencillo utilizar la representación doble
recíproca 1/v0 frente a 1/[S]

Esta gráfico de doble recíproca recibe el nombre de


representación de Lineweaver-Burk
El resultado es una recta en la cual:

•La pendiente es KM/Vmax

•La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM

•La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se


puede calcular gráficamente, los valores de KM y Vmax
de un enzima para diversos sustratos.

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Regulación enzimática a través de


los inhibidores

 Los inhibidores enzimáticos son agentes moleculares


que interfieren en la catálisis haciendo más lenta o
deteniendo la catálisis

 Las enzimas catalizan la mayoría de los procesos


celulares por lo que los inhibidores enzimáticos se
encuentran entre los agentes farmacológicos mas
importantes

IMPORTANCIA DE LOS INHIBIDORES

Los inhibidores enzimáticos proporcionan agentes farmacológicos como


herramientas de investigación para el estudio del mecanismo de acción
enzimática

El estudio de los inhibidores enzimáticos ha proporcionado información sobre


los mecanismos enzimáticos y ha ayudado a definir algunas rutas metabólicas

La inhibición de la actividad enzimática por moléculas específicas pequeñas e


iones es importante porque, sirve como el mayor mecanismo de control en los
sistemas biológicos

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LAS ENZIMAS ESTAN SUJETAS A INHIBICION


REVERSIBLE E IRREVERSIBLE
 Los inhibidores enzimáticos son agentes moleculares que interfieren en la catálisis,
HACIENDO MAS LENTAS O DETENIENDO LA REACCIÓN

 Los inhibidores pueden ser: iones, átomos, moléculas, compuestos que se fijan y se
unen a la enzima

Competitivo
Los inhibidores pueden ser: a.- Reversibles
No competitivo

b.- Irreversibles:

INHIBIDORES REVERSIBLES
COMPETITIVOS
CARACTERÍSTICAS
 El inhibidor se parece estructuralmente al sustrato

 El inhibidor compite con el sustrato por el sitio activo de


la enzima

 Para superar el efecto del inhibidor competitivo se eleva


la concentración de sustrato

 La KM aumenta

 La Vmax. No cambia

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INHIBIDORES REVERSIBLES COMPETITIVOS

Competitiva: El inhibidor se parece en


estructura al sustrato por lo tanto compite
con el sustrato por situarse en el sitio activo
de la enzima.

Si el inhibidor se combina con la enzima


forma el complejo E – I, afectando
negativamente la función de la enzima

La unión del inhibidor es reversible por lo


tanto si se agrega más sustrato se desplaza al
Inhibidor y se forma el producto.

La acción de un inhibidor competitivo es disminuir el número de moléculas de


enzima libre disponibles para enlazarse con el sustrato formar el complejo E –
S y finalmente formar el producto

Malonato

La enzima Succinato Deshidrogenasa es inhibida en forma competitiva


por un análogo de su sustrato EL MALONATO

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INHIBICION COMPETITIVA: METOTREXATE


ES ANALOGO ESTRUCTURAL DEL DIHIDROFOLATO.

LA ENZIMA DIHIDROFOLATO REDUCTASA ES INHIBIDA EN FORMA


COMPETITIVA POR UN ANÁLOGO DE SU SUSTRATO EL METOTREXATE

INHIBICION COMPETITIVA: LAS ESTATINAS


SON ANALOGO ESTRUCTURAL DEL HMG CoA

LA ENZIMA HMG CoA REDUCTASA ES INHIBIDA EN FORMA


COMPETITIVA POR UN ANÁLOGO DE SU SUSTRATO LAS
ESTATINAS

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GRAFICA DE LINEWEAVER – BURK PARA LA INHIBICION


COMPETITIVA
Las gráficas de doble recíproca facilitan la evaluación de los
inhibidores

Un inhibidor competitivo AUMENTA LA KM


y PERMANECE CONSTANTE LA Vmaxima

A.- Efecto de un inhibidor competitivo B.- Gráfica de Lineweaver-


sobre la Vr en comparación con la Burke de la inhibición
gráfica del [S] competitiva de una enzima

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INHIBICION NO COMPETITIVA

o El inhibidor no se parece estructuralmente al sustrato

o El inhibidor no compite con el sustrato por el sitio activo de la enzima

o La velocidad máxima disminuye

o La KM no se altera.

INHIBICION NO COMPETITIVA
El inhibidor no competitivo no afecta la
fijación del sustrato, por tanto es posible la
formación de los complejos E-I y E-I-S.
El complejo E-I aún puede enlazarse con el
sustrato disminuyendo su efectividad para
transformar el sustrato en producto

El Inhibidor NO COMPETITIVO se une a un


sitio diferente al sitio activo de la enzima y
por lo general no tienen ninguna semejanza
estructural con el sustrato

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GRAFICA DE LINEWEAVER – BURK PARA LA INHIBICION NO


COMPETITIVA
Las gráficas de doble recíproca facilitan la evaluación de los inhibidores

Un inhibidor no competitivo DISMINUYE LA Vmáxima


y PERMANECE CONSTANTE LA KM

A.- Efecto de un inhibidor No B.- Gráfica de Lineweaver- Burke de la


competitivo sobre la Vr en inhibición No competitiva de una
comparación con la gráfica del enzima
sustrato [S]

Un inhibidor no competitivo DISMINUYE LA Vmaxima


y PERMANECE CONSTANTE LA KM

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REGULACION POR INHIBICIÓN IRREVERSIBLE


Son los venenos enzimáticos que se unen fuertemente a la enzima
por enlace covalente muy estable

Los inhibidores irreversibles son una herramienta útil para


estudiar los mecanismos de reacción enzimática

Ejemplos: Mercurio
Plomo
Penicilinas
Beta lactamicos
Diisopropilfluorofosfato
Deprenilo, inhibe a la MAO
Aspirina, inhibe a la ciclooxigensa
Penicilina, inhibe a la transpeptidasa.
Órgano fosforados, inhiben a la acetilcolinesterasa

INHIBICION IRREVERSIBLE DE LA OXIGENASA CICLICA POR LA ASPIRINA

LA ASPIRINA SE USA COMO MEDICAMENTO ANTIINFLAMATORIO Y ANTIPIRETICO

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ENZIMAS REGULADORAS
Y
SU IMPORTANCIA MEDICA

La actividad de las enzimas reguladoras debe dar respuesta


a señales para que la velocidad de cada ruta metabólica se
ajuste a los cambios en las necesidades de la célula con
respecto a la energía, al crecimiento celular y en la
reparación de lesiones de nuestro organismo

ENZIMAS REGULADORAS
Existen dos clases principales de enzimas reguladoras en
las rutas metabólicas

ENZIMAS ALOSTERICAS

ENZIMAS MODULADAS
COVALENTEMENTE

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REGULACION ALOSTERICA
CARACTERISTICAS
 Las enzimas alostericas son reguladas por moléculas
llamadas efectores

 La regulación es mediante pequeñas moléculas señal que


desencadenan cambios conformacionales en la enzima

 Los efectores alostericos alteran la afinidad de la enzima


por el sustrato y modifican la actividad catalítica máxima

 Los moduladores alostéricos pueden ser inhibidores o


estimuladores

 Las enzimas reguladoras cuando el sustrato y el


modulador son idénticos se llaman HOMOTROPICAS

 Las enzimas reguladoras cuando el modulador es diferente


del sustrato se llaman HETEROTROPICAS

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LAS ENZIMAS ALOSTERICAS EXPERIMENTAN CAMBIOS


CONFORMACIONALES EN RESPUESTA A LA UNION DEL MODULADOR

LOS MODULADORES ALOSTERICOS PUEDEN SER


INHIBIDORES O ESTIMULADORES

LA UNION DEL MODULADOR ( + ) PRODUCE CAMBIOS


CONFORMACIONALES EN LA ENZIMA AFECTANDO LA
ACTIVIDAD DE OTROS SITIOS EN LA ENZIMA.

CAMBIOS CONFORMACIONALES INDUCIDOS POR UNO O


MAS MODULADORES TRANSFORMAN LAS FORMAS MAS
ACTIVAS Y MENOS ACTIVAS DE LAS ENZIMAS

POSEEN UNO O MAS SITIOS REGULADORES Y CADA SITIO


MODULADOR ES ESPECIFICO

ENZIMAS ALOSTERICAS
Contienen sitios reguladores en espacios diferentes al sitio activo de la
enzima
PROPIEDADES
 Las enzimas alostericas experimentan
cambios conformacionales en respuesta a
la unión del modulador

 No siguen la Cinética de Michaelis Menten

 Presentan una curva sigmoidea


Presentan cooperativismo: La fijación de una
molécula de sustrato a un sitio de fijación altera la
conformación
Son oligoméricas
Generalmente catalizan la primera reacción
El enlace entre la enzima y los moduladores
es débil y reversible

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TIPO DE REGULACION ALOSTERICA: INHIBICION POR


RETROALIMENTACION

Sitios de inhibición por la retroalimentación en una vía metabólica


ramificada

REGULACION POR MODIFICACION


COVALENTE

A- IRREVERSIBLE: PROTEÓLISIS PARCIAL

B- REVERSIBLE: FOSFORILACIÓN

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Activación irreversibles por proteólisis


específicas
Ejemplos:

Las enzimas digestivas

La coagulación sanguínea

Algunas hormonas proteicas

Regulación irreversible por proteólisis parcial


Ciertas enzimas se sintetizan y secretan como enzimas inactivas
llamadas ZIMOGENOS

La proteólisis selectiva convierta una pro enzima mediante


segmentaciones proteolíticas en una enzima activa

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ACTIVACION POR ESCISION PROTEOLITICA ESPECIFICAS DE UN


ZIMÓGENO
Es un mecanismo diferente de
regulación enzimática, es irreversible
solo tiene lugar una vez en la vida de la
molécula enzimática.

No se necesita ATP para la ruptura

Los cimógenos se activan fuera de la


célula.

La proteólisis produce cambios


conformacionales que crean el sitio
catalítico de la quimotripsina
alineando los residuos de his asp y ser
del sistema de relevo de cargas.

REGULACION REVERSIBLE POR


MODIFICACION COVALENTE

Fosforilación
Adenilación
Uridililación
Difosforibosilación
Metilación

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REGULACION POR MODIFICACION COVALENTE


o POR ENZIMAS INTERCONVERTIBLES
 Consiste en la unión covalente de otra enzima que Regulación de la
modifica la actividad de la enzima reguladora. GLUCOGENO FOSFORILASA
 La regulación es llevada a cabo por otras ENZIMAS
 La mayoría son reversibles
 La fosforilación y la desfosforilacion son más
habituales, pero no las únicas, este es un
mecanismo muy eficaz para controlar la actividad
de las enzimas reguladoras

 Las enzimas que catalizan la fosforilación se llaman


CINASAS, transfieran el fosforilo terminal del ATP,
estas reacciones se dan dentro de la célula

 En la desfosforilacion intervienen las FOSFATASAS

Ejemplos de enzimas reguladas


por :
fosforilacion - desfosforilacion

Acetil CoA Carboxilasa


Glucogeno Sintasa
Piruvato Deshidrogenasa
HMG – CoA Reductasa
Glucogeno Fosforilasa
Citrato Liasa
Etc..

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OTRAS FORMAS DE
REGULACION
1- LA COMPARTIMENTALIZACION ASEGURA LA EFICIENCIA Y SIMPLIFICA LA
REGULACION. EJ.: ENZIMAS LISOSOMALES, CITOSOLICAS

2- AL CONTROLAR UNA ENZIMA QUE CATALIZA UNA REACCION QUE LIMITA


LA VELOCIDAD, SE REGULA TODA LA VIA METABOLICA.

LA CAPACIDAD CATALITICA DE UNA ENZIMA SE VE AFECTADA POR:

1- LA CANTIDAD DE ENZIMA PRESENTE

2- ALTERACIÓN EN LA CAPACIDAD CATALÍTICA.

REGULACION DE LA CANTIDAD DE ENZIMA

A-CONTROL DE LA SÍNTESIS DE ENZIMA

Enzimas Constitutivas: Las concentraciones son


constantes, ejemplo glucolisis, ciclo de Krebs, etc.

Enzimas Inducibles: la concentración depende de la


presencia de inductores ejemplo beta galactosidasa,
pirolasa de triptófano, enzimas del ciclo de la urea,
citocromo p450 etc.

Enzimas Reprimibles

B- CONTROL DE LA DEGRADACIÓN DE LA ENZIMA


La cantidad absoluta de una enzima refleja el equilibrio
entre la síntesis y la degradación ejemplo, vía ubiquitina.

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ISOENZIMAS
Son diferentes enzimas que catalizan la misma reacción
por lo que son diferentes en parámetros cinéticos,
diferentes KM , diferentes propiedades reguladoras,
diferentes propiedades bioquímicas tales como
DIFERENTE MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA
EJEMPLOS:
 LACTATO DESHIDROGENASA: 5 ISOENZIMAS

• CREATINCINASA: 3 ISOENZIMAS
CPK BB
INFARTO CPK MB
CPK MM

• FOSFATASAS: 2 ISOENZIMAS
FOSFATASA ALCALINA
FOSFATASA ACIDA
• TRANSAMINASAS: 2 ISOENZIMAS AST
ALT

La Lactato Deshidrogenasa

LDH-1: La isoenzima H4 abundante en el corazón, alta


afinidad por su sustrato, un aumento en sangre es
indicativo de infarto
LDH- 5: La isoenzima M4 abundante en hígado y músculo
esquelético , un aumento indica enfermedad
hepática

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