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Inactivacion_de_PsBADH_(2)

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Universidad Nacional Autónoma de México.

Facultad de Química
Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular.
Arciniega Ruiz Juan Manuel, Calzadíaz Ramírez Liliana, Galindo Campos Luis, Ramírez Ibáñez Nancy Delia, Bohórquez Enrique

INTRODUCCIÓN Las Betaína Aldehído Deshidrogenasas (BADH EC 1.2.1.8) son enzimas que pertenecen a la superfamilia de las aldehído deshidrogenasas (ALDH´s). Catalizan la oxidación irreversible de los aldehídos a sus correspondientes ácidos carboxílicos, con la reducción del NAD+ o NADP+. Concretamente las BADH catalizan la oxidación reversible de la betaína aldehído a glicina betaína. Las BADH son enzimas de origen muy antiguo altamente conservadas, se encuentran desde arqueobacterias hasta en mamíferos, sin embargo una de las más importantes para la clínica es la BADH del patógeno humano oportunista Pseudomonas aeuroginosa (PaBADH). La PaBADH es una enzima tetramérica que cataliza un paso intermedio del catabolismo de la colina y de precursores de colina como acetilcolina, fosfatidilcolina, al mismo tiempo que provee a la bacteria del osmoprotector glicina Betaína importante para resistir el estrés osmótico existente en los tejidos infectados y de equivalentes de reducción como NADH y NADPH. La acción catalizada por la BADH es irreversible por lo que su actividad no es inhibida por la glicina betaina, sin embargo el otro producto de la reacción 1, el NADPH si es un inhibidor competitivo con respecto a NADP+ y mixto con respecto a NAD+, Las constantes de inhibición se encuentran en el intervalo de 50-180µM indicando una alta afinidad por la enzima. La inhibición competitiva puede ser revertida por un incremento de la concentración de sustrato, mientras que el componente incompetitivo de la inhibición mixta hace que el grado de inhibición no solo no disminuya sino que se incremente a medida que se acumula el sustrato.

OBJETIVO: Inactivar la enzima PaBADH mediante una inhibición por producción de NADPH. Empleando un vector de clonación en el bacteriófago PM2 que sobreexprese el gen de la enzima Glucosa deshidrogenasa (EC 1.1.5. 2) La enzima Glucosa deshidrogenasa cataliza la reacción:

por otro lado el virus en sí mismo es un agente terapéutico ya que causa la lisis de la bacteria y por consiguiente su muerte. Calzadíaz Ramírez Liliana. . La glucosa deshidrogenasa de Pseudomonas aeruginosa es una proteína de 803 amino ácidos codificada en el locus PA2290. *Unir ambos fragmentos mediante una DNA ligasa. PROCEDIMIENTO: *Extraer y purificar el DNA de Pseudomona aeruginosa. Arciniega Ruiz Juan Manuel. si logramos un exceso de NADPH en la célula no solo se inhibirá la enzima. Facultad de Química Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular. Galindo Campos Luis. *Separar el gen de la glucosa deshidrogenasa. Mediante enzimas de restricción específicas. Ramírez Ibáñez Nancy Delia. Bohórquez Enrique Reacción 1 JUSTIFICACIÓN: El NADPH es un producto de la reacción 1. sino que también se producirá un exceso de estrés oxidativo que matara a la bacteria. *Los vectores recombinantes del virus se empaquetan in vitro en las cápsides proteicas del fago. *Purificar el DNA del bacteriófago PM2 y cortarlo con la misma enzima de restricción que el gen de interés.Universidad Nacional Autónoma de México. El empleo de un virus como vectores de clonación posee diversas ventajas en primer lugar el bacteriófago PM2 infecta específicamente a Pseudomonas aeruginosa sin afectar las células del paciente.

pp 50-55. Bohórquez Enrique *Los bacteriófagos recombinantes pueden administrarse tópicamente o por vía oral previo tratamiento del paciente con antiácidos y gelatina para proteger al virus de la acidez gástrica. coli. Galindo Campos Luis. .es/ecastro. Madrid España 2007.dbbf/Descargas/Transparencias/DNA%20reco mbinante. Conclusiones: Actualmente algunos investigadores han demostrado que la terapia fágica es eficiente en el tratamiento de enfermedades causadas por bacterias como E. pneumoniae y P. incluso se han reportado éxito en un 90% de los casos. Arciniega Ruiz Juan Manuel.personales. *Brown Et.pdf http://www. Referencias: http://www. Calzadíaz Ramírez Liliana. Genomas.revistaaquatic. Al. Editorial Medica Panamericana.pdf. 3° Edición.ulpgc.Universidad Nacional Autónoma de México. S. aeruginosa. Aunado al hecho de que el bacteriófago por sí mismo promueve la muerte de la bacteria al sobreexpresar la enzima glucosa deshidrogenasa que como producto genera NADPH se llevara a cabo una inhibición por producto de la Betaína aldehído deshidrogenasa una enzima esencial para el desarrollo y supervivencia de la bacteria. Ramírez Ibáñez Nancy Delia.com/aquatic/pdf/18_2. Facultad de Química Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular.

Facultad de Química Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular. Calzadíaz Ramírez Liliana.Universidad Nacional Autónoma de México. Galindo Campos Luis. Bohórquez Enrique . Ramírez Ibáñez Nancy Delia. Arciniega Ruiz Juan Manuel.

Galindo Campos Luis.Universidad Nacional Autónoma de México. Arciniega Ruiz Juan Manuel. Ramírez Ibáñez Nancy Delia. Bohórquez Enrique . Facultad de Química Aplicaciones de la bioquímica y la biología molecular. Calzadíaz Ramírez Liliana.

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