GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA.

OBJETIVO:

Determinaciòn de la Hormona Gonadotropina Coriónica Humana (HCG) en orina por medio de una reacción inmunológica.

INTRODUCCIÓN.

El término ‘‘prueba de embarazo’’ es de hecho un término erróneo, ya que la mayoría de estos procedimientos lo que miden es la presencia de Gonadotropina Coriónica Humana (HGC) y no la de un feto

La HGC es una glucoproteína

producida por las células trofoblásticas después de

aproximadamente 10 días de la concepción. Recientemente se ha eludido la estructura y su secuencia de aminoácidos: la HGC es un dímero de peso molecualar aproximadamente de 28.000, compuesto de subunidades, a y b. Las subunidades a no son específicas, siendo compartidas con la de la hormona luteinizante (LH), la hormona estimulante del folículo (FSH) y la hormona estimulante del tiroides (TSH). Las subunidades b son únicas en la HCG.

Después de la concepción, se produce un rápido aumento en la cantidad de HCG en la orina aproximadamente a las 5 semanas de gestación (5 semanas después del último periodo menstrual), que alcanza los niveles máximos en un tiempo aproximado de 10 semanas de gestación.

Pregnosticon “All-in” 1000M es un equipo de diagnóstico para la detección inmunoquímica de gonadotrofina coriónica humana (hCG) en la orina. La adición simultánea de hCG libre, que está presenta en la orina de mujeres embarazadas, bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los eritrocitos. En tal caso, los eritrocitos sedimentarán en el fondo del tubo formando un dibujo característico en forma de anillo (reacción positiva). Si en la orina no hay hCG o está en pequeñas cantidades, se verá un dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). Los eritrocitos usados proceden de ovejas y se han estabilizado. Los anticuerpos son de origen monoclonal.

Se han revestido eritrocitos con hCG. se verá un dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). MATERIAL 1. Al añadirse anticuerpos contra hCG a este reactivo tiene lugar una reacción de aglutinación y se forma un dibujo de sedimentación difuso en el fondo del tubo. Tubo de ensaye de 13X100mm 3.1mL 2. Gradilla metálica . La adición simultánea de hCG libre. Los eritrocitos usados proceden de ovejas y se han estabilizado. utilizando partículas de látex recubiertas con anti-hCG. Si en la orina no hay hGC o está en pequeña cantidad. La hGC. que está presente en la orina de las mujeres embarazadas. Si la hCG no está presente en la orina. no se producirá ninguna aglutinación al mezclarla con el reactivo de látex (reacción negativa). Neo-Planotest 200 es una prueba de aglutinación de látex directa sobre portaobjetos para la detecciòn de la gonadotropina coriónica humana (hCG) en orina. Los anticuerpos son de origen monoclonal. Método en tubo: El test se basa en la reacción de inhibición de la hemaglutinación. Pipeta serológica de 0.La sensibilidad de la prueba es de 1000 UI de hCG/L. FUNDAMENTO. Con esta prueba es posible detectar los niveles de hCG que se encuentran normalmente en las mujeres embarazadas a partir del 8º dìa de la menstruaciòn esperada en adelante. bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los eritrocitos. se mezcla con el reactivo de látex y los anticuerpos reacionarán con la hCG para formar un patrón de aglutinación de látex granulosa (reaccón positiva). que se encuentra en la orina de mujeres embarazadas. Método en placa: La prueba esta basada en una reacciòn de aglutinación de látex directa. En tal caso los eritrocitos se sedimentarán en el fondo del tubo formando un dibujo característico en forma de anillo (reacción positiva).

. y esparcir la mezcla sobre toda el área de prueba. cayendo libremente (50ml). Agitar suavemente el reactivo de látex durante 15 segundos para obtener una suspensión homogénea (no es necesario llevar el reactivo a temperatura ambiente antes del uso). sobre el área de prueba del portaobjetos. 5. apirar lentamente la muestra de orina y transferir dos gotas. Refrigerador REACTIVOS. 4. Utilizando la misma pipeta. a la misma área de prueba. 6. Aspirar lentamente con una pipeta y una cápsula para succionar la cantidad suficiente del reactivo de látex y transferir una gota cayendo libremente (25ml). 3. Centrífuga 2. Colocar el portaobjetos sobre una superficie horizontal. Reactivo de látex (monoclonal) Tubo con anti hCG y glóbulos rojos MUESTRA. Mezclar con un aplicador el reactivo de látex y la orina.APARATOS 1. Orina DESARROLLO (MÉTODO EN PLACA) 1. Devolver al vial el reactivo de látex restante de la pipeta. 2.

no es necesario continuar el balanceo hasta el final del periódo de 2 minutos d) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones bajas de hCG. 3. Agitar suavente la gradilla para la prueba (unos 30 segundos) para conseguir un mezclado a fondo y colocar el tubo fuera de vibraciones o del calor. Efectuar la lectura del punto final precisamente dos horas más tarde. Fitrar por lomenos 5-8mL de orina (de preferencia una muestra de las primeras horas de la mañana) a través de papel de filtro suave o centrifugar durante 5-10 minutos. 5. 6. Añadir 100 ml de la orina centrifugada o filtrada en el tubo. Abrir el tubo y colocar en una gradilla para la prueba con el espejo adecuado. Balancear suavemente el portaobjetos dejando que la mezcla fluya lentamente dentro del circulo de prueba hasta 2 minutos 8. el balanceo debe continuarse hasta 2 minutos. c) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones elevadas de hCG. la aglutinación ocurrirá en el plazo de un minuto y. a) Una reacciòn positiva viene indicada por la producción de una aglutinación de látex granulosa y roja. 2. b) Una reacción negativa corresponde al mantenimiento de una suspensión de látex uniforme y roja al final del periódo de 2 minutos. por tanto. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS. o en el caso de orinas negativas. . DESARROLLO (MÉTODO EN TUBO) 1. Pipetear 400ml de agua destilada en el tubo. en el plazo de 2 minutos. Colocar el portaobjetos sobre una superficie orizontal bien iluminada para la lectura del resultado.7. 4.

El espejo inclinado en la base de la gradilla de prueba permite que el resultado pueda leerse sin perturbar los dibujos de sedimentación . el resultado debe considerarse negativa y la prueba debe repetirse unos dìas depués. La dilución superior de la serie. en la mayoría de los embarazos. lo cual significa que puede esperarse un resultado positivo. con la que se sigue obteniendo un resultado positivo. Si el diámetro del anillo es mayor o dicho anillo es más vago y está menos claramente definido. Un anillo pardo clara mente definido indica que el resultado es positivo. La sensibilidad de la prueba es de 1000Ul/l. Un sedimento pardo amarillento difuso indica que el resultado es negativo. se usa para medir el nivel de hCG en la orina. a partir del 8° dìa de la menstruación esperada en adelante. El nivel de hCG puede calcularse a partir de la fórmula. En caso de ser necesario repetir la prueba con dilución 1:8(N=8) no se forma anillo <8 000 lU /l 1:2 1:4 . El siguiente esquema ofrece un ejemplo de una determinación semicuantitativa: Dilución. Diagnóstico del embarazo La sensibilidad de Pregnosticon ‘All-in’1000M de 1000Ul de hCG/l.Punto final. Todas las pruebas con resultados negativos deben repetirse unos días después a no ser que se presente la menstruación. en que N es el factor de diluciòn y X es el nivel mínimo de hCG en la orina sin diluir. Método semicuantitativo La concentraciòn dehCG puede medirse semicuantitativamente prepararando una serie de diluciones usando agua destilada y ensayar cada diluciòn de la forma descrita en el procedimento para la prueba. X = 1000N.

.orina anillo >8 000 lU/l 1:16 1:32 1:64(N=64) no se forma anillo <64 000lU/l anillo >64 000lU/l 1:128 1:256 1:512 1:1024 Si se realiza esta análisis semicuantitativo con una muestra de la orina recogida en 24 horas. Se obtiene una idea de la eliminaciòn diaria de gonadotrofina coriónica.

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