GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA.

OBJETIVO:

Determinaciòn de la Hormona Gonadotropina Coriónica Humana (HCG) en orina por medio de una reacción inmunológica.

INTRODUCCIÓN.

El término ‘‘prueba de embarazo’’ es de hecho un término erróneo, ya que la mayoría de estos procedimientos lo que miden es la presencia de Gonadotropina Coriónica Humana (HGC) y no la de un feto

La HGC es una glucoproteína

producida por las células trofoblásticas después de

aproximadamente 10 días de la concepción. Recientemente se ha eludido la estructura y su secuencia de aminoácidos: la HGC es un dímero de peso molecualar aproximadamente de 28.000, compuesto de subunidades, a y b. Las subunidades a no son específicas, siendo compartidas con la de la hormona luteinizante (LH), la hormona estimulante del folículo (FSH) y la hormona estimulante del tiroides (TSH). Las subunidades b son únicas en la HCG.

Después de la concepción, se produce un rápido aumento en la cantidad de HCG en la orina aproximadamente a las 5 semanas de gestación (5 semanas después del último periodo menstrual), que alcanza los niveles máximos en un tiempo aproximado de 10 semanas de gestación.

Pregnosticon “All-in” 1000M es un equipo de diagnóstico para la detección inmunoquímica de gonadotrofina coriónica humana (hCG) en la orina. La adición simultánea de hCG libre, que está presenta en la orina de mujeres embarazadas, bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los eritrocitos. En tal caso, los eritrocitos sedimentarán en el fondo del tubo formando un dibujo característico en forma de anillo (reacción positiva). Si en la orina no hay hCG o está en pequeñas cantidades, se verá un dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). Los eritrocitos usados proceden de ovejas y se han estabilizado. Los anticuerpos son de origen monoclonal.

Se han revestido eritrocitos con hCG. FUNDAMENTO. Gradilla metálica . Si en la orina no hay hGC o está en pequeña cantidad. se verá un dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). Neo-Planotest 200 es una prueba de aglutinación de látex directa sobre portaobjetos para la detecciòn de la gonadotropina coriónica humana (hCG) en orina. utilizando partículas de látex recubiertas con anti-hCG. Al añadirse anticuerpos contra hCG a este reactivo tiene lugar una reacción de aglutinación y se forma un dibujo de sedimentación difuso en el fondo del tubo. La adición simultánea de hCG libre. En tal caso los eritrocitos se sedimentarán en el fondo del tubo formando un dibujo característico en forma de anillo (reacción positiva). Los eritrocitos usados proceden de ovejas y se han estabilizado. que se encuentra en la orina de mujeres embarazadas. Método en placa: La prueba esta basada en una reacciòn de aglutinación de látex directa. que está presente en la orina de las mujeres embarazadas. La hGC. Los anticuerpos son de origen monoclonal. bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los eritrocitos. Método en tubo: El test se basa en la reacción de inhibición de la hemaglutinación. se mezcla con el reactivo de látex y los anticuerpos reacionarán con la hCG para formar un patrón de aglutinación de látex granulosa (reaccón positiva). Tubo de ensaye de 13X100mm 3. no se producirá ninguna aglutinación al mezclarla con el reactivo de látex (reacción negativa).1mL 2. Si la hCG no está presente en la orina. Pipeta serológica de 0. Con esta prueba es posible detectar los niveles de hCG que se encuentran normalmente en las mujeres embarazadas a partir del 8º dìa de la menstruaciòn esperada en adelante. MATERIAL 1.La sensibilidad de la prueba es de 1000 UI de hCG/L.

Centrífuga 2. Colocar el portaobjetos sobre una superficie horizontal. cayendo libremente (50ml). Utilizando la misma pipeta. . Mezclar con un aplicador el reactivo de látex y la orina. Refrigerador REACTIVOS. apirar lentamente la muestra de orina y transferir dos gotas. 4. Agitar suavemente el reactivo de látex durante 15 segundos para obtener una suspensión homogénea (no es necesario llevar el reactivo a temperatura ambiente antes del uso). 5. 2. 6. Reactivo de látex (monoclonal) Tubo con anti hCG y glóbulos rojos MUESTRA. Orina DESARROLLO (MÉTODO EN PLACA) 1. a la misma área de prueba. 3. sobre el área de prueba del portaobjetos.APARATOS 1. Devolver al vial el reactivo de látex restante de la pipeta. y esparcir la mezcla sobre toda el área de prueba. Aspirar lentamente con una pipeta y una cápsula para succionar la cantidad suficiente del reactivo de látex y transferir una gota cayendo libremente (25ml).

. Agitar suavente la gradilla para la prueba (unos 30 segundos) para conseguir un mezclado a fondo y colocar el tubo fuera de vibraciones o del calor. DESARROLLO (MÉTODO EN TUBO) 1. Abrir el tubo y colocar en una gradilla para la prueba con el espejo adecuado.7. Balancear suavemente el portaobjetos dejando que la mezcla fluya lentamente dentro del circulo de prueba hasta 2 minutos 8. 4. a) Una reacciòn positiva viene indicada por la producción de una aglutinación de látex granulosa y roja. 6. Fitrar por lomenos 5-8mL de orina (de preferencia una muestra de las primeras horas de la mañana) a través de papel de filtro suave o centrifugar durante 5-10 minutos. Efectuar la lectura del punto final precisamente dos horas más tarde. 5. Pipetear 400ml de agua destilada en el tubo. la aglutinación ocurrirá en el plazo de un minuto y. en el plazo de 2 minutos. Añadir 100 ml de la orina centrifugada o filtrada en el tubo. 3. c) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones elevadas de hCG. b) Una reacción negativa corresponde al mantenimiento de una suspensión de látex uniforme y roja al final del periódo de 2 minutos. no es necesario continuar el balanceo hasta el final del periódo de 2 minutos d) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones bajas de hCG. o en el caso de orinas negativas. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS. Colocar el portaobjetos sobre una superficie orizontal bien iluminada para la lectura del resultado. por tanto. 2. el balanceo debe continuarse hasta 2 minutos.

Un sedimento pardo amarillento difuso indica que el resultado es negativo. Todas las pruebas con resultados negativos deben repetirse unos días después a no ser que se presente la menstruación. en la mayoría de los embarazos. En caso de ser necesario repetir la prueba con dilución 1:8(N=8) no se forma anillo <8 000 lU /l 1:2 1:4 . Un anillo pardo clara mente definido indica que el resultado es positivo. en que N es el factor de diluciòn y X es el nivel mínimo de hCG en la orina sin diluir.Punto final. a partir del 8° dìa de la menstruación esperada en adelante. Diagnóstico del embarazo La sensibilidad de Pregnosticon ‘All-in’1000M de 1000Ul de hCG/l. El nivel de hCG puede calcularse a partir de la fórmula. Método semicuantitativo La concentraciòn dehCG puede medirse semicuantitativamente prepararando una serie de diluciones usando agua destilada y ensayar cada diluciòn de la forma descrita en el procedimento para la prueba. La sensibilidad de la prueba es de 1000Ul/l. El espejo inclinado en la base de la gradilla de prueba permite que el resultado pueda leerse sin perturbar los dibujos de sedimentación . X = 1000N. el resultado debe considerarse negativa y la prueba debe repetirse unos dìas depués. Si el diámetro del anillo es mayor o dicho anillo es más vago y está menos claramente definido. se usa para medir el nivel de hCG en la orina. con la que se sigue obteniendo un resultado positivo. El siguiente esquema ofrece un ejemplo de una determinación semicuantitativa: Dilución. lo cual significa que puede esperarse un resultado positivo. La dilución superior de la serie.

orina anillo >8 000 lU/l 1:16 1:32 1:64(N=64) no se forma anillo <64 000lU/l anillo >64 000lU/l 1:128 1:256 1:512 1:1024 Si se realiza esta análisis semicuantitativo con una muestra de la orina recogida en 24 horas. Se obtiene una idea de la eliminaciòn diaria de gonadotrofina coriónica. .

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