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manual de procedimientos de hematologia(2)

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE HEMATOLOGIA

E.S.E. CENTRO DE SALUD RICAURTE LABORATORIO CLINICO

DERLY MILENA AYA BACTERIOLOGA Y LAB. CLINICO 2006

TOMA DE MUESTRA ♦ Se elige la vena que favorece la toma de la muestra, preferiblemente de la región venosa antecubital, porque a este nivel la piel es fina y móvil y las venas son de grueso calibre y relativamente superficiales. Cuando este lugar no favorece para la punción, se observan otras venas como de la mano o de la cara anterior del antebrazo. ♦ El personal encargado de la toma de muestras se colocara los guantes de látex, previo lavado de las manos. ♦ Si las venas no son muy superficiales se coloca un torniquete 5cc arriba del sitio elegido para puncionar, se le pide al paciente que empuñe la mano y si es necesario se frota suavemente con la mano de quien va a puncionar el lugar de la vena elegida. Si la vena es superficial solo se le pide al paciente que empuñe la mano. ♦ Una vez elegida el área de punción se esteriliza con algodón empapado con alcohol antiséptico, se emplea jeringa desechable y se procede a la punción. ♦ La cinta elástica debe retirarse después de introducida la aguja en la vena, se aspira la sangre con la jeringa y una vez retirada, se presionará la zona puncionada con un algodón empapado en alcohol antiséptico. ♦ Cuando se va a tomar únicamente para exámenes de hematología, se toman 2cc de sangre, cuando además el paciente tiene orden para exámenes de química clínica y/o inmunología se toman 5cc. La muestra para CH se almacena en los tubos tapa lila que son previamente organizados y deben contener 2 gotas de EDTA.

es aconsejable que la sangre no llegue a los lados del portaobjetos. pero a temperatura ambiente en el momento de emplearlo) por 6 minutos. sobre la superficie del primer portaobjeto. si es superior a 45° será gruesa y corta y si es inferior será larga y fina. ♦ Deslizar suavemente y a velocidad moderada un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal. formando un ángulo de 45 grados y desplazarlo suavemente hacia atrás. . ♦ Esperar que por capilaridad toda la sangre se distribuya uniformemente. una vez seco el extendido no se deja pasar más de una hora: ♦ Se aplica 1 cm colorante de Wright por 1 minuto. ♦ Colocar el canto de otro portaobjetos. Se deja secar a temperatura ambiente y en posición horizontal. sobre la superficie del primer portaobjetos. Para la coloración. El grosor del frotis sanguíneo puede variar de acuerdo al ángulo empleado durante la extensión. se seca por la parte posterior y se deja secar a temperatura ambiente en posición vertical. ♦ Colocar una pequeña gota de sangre no más de 3 mm de diámetro de un portaobjetos a 2 cm de uno de los extremos. ♦ Se aplica buffer Giordano (que debe mantenerse en la nevera. hasta que alcance la gota de sangre.FROTIS SANGUINEO Y COLORACION Para el frotis sanguíneo se emplea el método de los dos portaobjetos: ♦ Identificar la lámina. sobre el que se realiza la extensión. ♦ Se lava la lámina con agua de chorro. hasta que la gota de sangre quede bien extendida. por la parte anterior a la gota de sangre.

partículas en el reactivo y el blanco son indicaciones de deterioro. Para preparar otros volúmenes mezclar en proporción 1 ml de reactivo concentrado + 49 ml de agua destilada. llevando a cero con el blanco del reactivo y calibrando con el patrón de hemoglobina. además de lecturas superiores de 0. REACTIVOS Reactivo concentrado y patrón de Hb.HEMOGLOBINA Servir en un tubo de ensayo 2. . deben guardarse en refrigeración. agitar. protegidos de la luz y evitar su contaminación durante su uso para que se conserve hasta la fecha indicada en la etiqueta. Dejar en reposo de 5 a 10 minutos. La hemiglobina reacciona con el cianuro para formar cianhemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometría. limpiar muy bien la punta y llevar al fondo del tubo y aplicar. Reactivo de trabajo: Diluir el contenido del frasco de reactivo concentrado hasta 1000 ml con agua destilada. Homogeneizar el tubo por inversión con movimientos suaves. Conservar en frasco oscuro siendo estable 6 meses a 15-30°C: No congelar. bien cerrados. Presencia de turbidez.010 a 540 nm del blanco. enjuagar la punta con el reactivo en la parte superior. MUESTRAS Sangre capilar o venosa recogida con EDTA o heparina. Leer a 540 nm. HEMOGLOBINA: ESPECTROFOTOMETRICA ICSH FUNDAMENTO El ión ferroso de la HB se oxida a ión férrico por acción del ferricianuro potásico formándose hemiglobina (metahemoglobina). La Hb en sangre es estable 6 días de 2-8°C.5 ml de Drabkin y tomar 10 ul de sangre con anticoagulante.

7/15.5-15.2 g/dl de Hb. .5 g/dl MUJERES 11. La lipemia puede elevar falsamente los resultados debido a la turbidez. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir.X C patrón = C muestra A patrón Sin patrón: A muestra X 37.0-16.3 g/dl 12.  Interferencias: La bilirrubina no interfiere. Cálculos: Con patrón: A muestra -----------.5 ml CARACETERISTICAS METROLOGICAS  Límite de detección: 0. Leer las absorbancias a 540 nm frente al blanco. El color es estable por varias horas.0 g/dl 11. Para valores superiores diluir la muestra ½ con agua destilada y repetir.7-16.0-16.0 g/dl BLANCO --2.5 = C muestra VALORES NORMALES: 12-14 años 15-17 años 18-74 años HOMBRES 12.5-17.PROCEDIMIENTO PATRON MUESTRA REACTIVO TRABAJO Agitar y dejar por 3 minutos a temperatura ambiente.0 g/dl 11.5 ml PATRON 10 ul -2.6 g/dl 13.5 ml MUESTRA -10 ul 2.  Límite de linealidad: 20 g/dl.

ni burbujas.m. hasta las 3/4 partes y sellar por este extremo con plastilina. colocarla en la microcentrifuga de 5 a 10 minutos entre 10. .000 r. Tomando el punto cero donde la plastilina se une con la muestra hasta la línea superior que marque con sangre en el capilar.HEMATOCRITO Se llena el capilar de la muestra tomada con anticoagulante. Solamente se lee si no han quedado espacios. Cuando la centrifuga pare. leer el valor en la tabla de hemotocrito.p.000 y 5.

♦ Contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes (los de las 4 esquinas). . se cuentan las células contenidas en el interior del área de recuento y las que sean tangente o secantes a las líneas de demarcación superior y derecha. ♦ El total de leucocitos en los 4 cuadrados se multiplica por 50 y este será el valor del recuento de leucocitos. ♦ Desechar las tres primeras gotas. ♦ Con el dedo índice tapar la parte superior de la pipeta y con el dedo pulgar la parte inferior y mezclar suavemente. ♦ Realizar la observación y conteo en 10X.5 y limpiar la punta de la pipeta. ♦ Aspirar líquido de turk hasta el enrose de 11. ♦ Llenar la cámara.RECUENTO DE LEUCOCITOS ♦ Aspirar mediante la pipeta de Thoma sangre total hasta el enrose de 0.

 Linfocitos: El citoplasma puede ser escaso o abundante y de color azul claro.  Eosinofilos: Su citoplasma esta lleno de granulaciones de color naranja que se observan de gran tamaño. ♦ Células anucleadas (hematíes) con función respiratoria. bien individualizados y redondos. ♦ Seudofragmentos citoplasmáticos (plaquetas) con función hemostática.  Neutrofilos: Es el más predominante. cuando el puente es muy ancho adquiere forma de C siendo propio de los cayados o células inmaduras de esta línea granulocítica. Mononucleares: núcleo único y redondo como los linfocitos y monocitos. dando la apariencia de tener varios núcleos. Los leucocitos tienen la característica de tener núcleo y organélos citoplasmáticos lo que permite su diferenciación morfológica con los hematíes y las plaquetas. en la parte media del frotis. Estos pueden ser: Polinucleares: de núcleo lobulado de apariencia múltiple como los neutrofilos. casi nunca cubren el núcleo. Es importante diferenciar los tres tipos de células que podemos observar: ♦ Células nucleadas (leucocitos) con función defensiva. el que se observa de un violeta más tenue que el neutrofilo y por lo general de dos masas.RECUENTO DIFERENCIAL En la lámina una vez coloreada se lee con objetivo de 100X las células vistas hasta llegar a 100 células contadas. el núcleo es de color violeta oscuro y de cromatina densa y esta divido en lóbulos unidos por puentes de cromatina. se observan pequeñas y escasas ganulaciones de color . Cada valor se dará en porcentaje de células vistas.  Basofilos: Es el menos abundante. La lectura se realiza en sentido vertical y de derecha a izquierda buscándose con anterioridad en 10X la zona ideal. su citoplasma se observa de gránulos irregulares que cubren completamente el núcleo y se observan de color muy oscuro entre azul y morado. su citoplasma es ligeramente acidófilo (rosa pálido) y contiene abundantes granulaciones distribuidas en todo el citoplasma. eosinófilos y basofilos.

restos nucleares o normoblastos. se pueden observar espacios en el núcleo que están compuestos por cromatina laxa. . Su núcleo es redondo y abarca gran parte de la células. Se debe informar la presencia de neutrófilos con granulación tóxica. cayados. su cromatina es laxa.rosado a rojo. Ante la presencia de normoblastos realizar la corrección de leucocitos. Posee granulaciones finas azurofilas por todo el citoplasma . el núcleo es central por lo general redondo aunque con una o más escotaduras ocupa gran parte del citoplasma. linfocitos atípicos (cuando es superior a el 10% del total de linfocitos). filamentosa e irregular. reacción leucoeritoblástica que serán contados dentro de las 100 células del recuento diferencial. Aveces posee vacuolas.  Monocitos: De citoplasma abundante y color gris azulado.

se divide por 10 y se multiplica por 21. siendo este el valor del número total de plaquetas por milímetro cúbico. el número de plaquetas observadas. Así. . se suman. siendo 10 en total. se cuenta la presencia de 100 de estos por campo. se contara en cada campo.RECUENTO DE PLAQUETAS Se busca entre el cuerpo y la cola del frotis sanguíneo una zona de distribución uniforme de hematíes (que no estén amontonados y no se observen grandes espacios en blanco entre ellos).000.

• Cualitativamente: el diferencial. miramos 3 campos en forma vertical en 10X. morfología normal o las alteraciones observadas en las diferentes líneas. . eosinófilos y basófilos hiperlobulados. dándonos el valor de leucocitos en mm3. núcleos picnóticos. Cifras mayores se pueden considerar fuentes de error y es necesario realizar el recuento total por líquido de turk confirmando el valor repitiendo la prueba. monocitos vacuolados. hacia la parte de la pluma y el cuerpo del frotis. hipolobulación (síndrome de Pelger – Huet) vacuolas. restos nucleares. macropolicitos (hipersegmentados). homógenos en cuento a número de hematíes. Observar la morfología de los leucocitos en 100X e informar: • Cuantitativamente: la cantidad por mm3 como normales.ANALISIS DE FROTIS DE SANGRE PEIFERICA Seleccionamos la zona ideal de lectura en 10X. presencia de células inmaduras. Si es menor del 10% del total de linfocitos solo se anotan como: se observan linfocitos atípicos escasos. si hay disminución o aumento en alguna de las líneas. con alteraciones en los gránulos. cuerpos de Dohle. leucopenia. Anotar la presencia de neutrófilos con granulación tóxica. sumándolos al total de los linfocitos) se deben informar en el diferencial de los 100 leucocitos. Promediar y multiplicar este valor por la constante 250. donde las células se endosan unas con otras observándose bien delimitados sus contornos. contar la cantidad de células blancas en cada uno de ellos. linfocitos atípicos. vacuolados. degranulados.  Para valorar el recuento total de blancos. Para linfocitos atípicos se debe informar: si son mas del 10% (es decir.000 mm3. leucocitosis. (a+b+c) / 3 X 250 = leuc / mm3 Estos datos son confiables cuando la cantidad de blancos no sobrepasa los 20.

Microcitosis: Ligera 76 – 80. De acuerdo al VCM: Macrocitosis: Ligera H 95 – 108. el color. un glóbulo rojo normal debe tener el mismo tamaño de un linfocito. Además la presencia de normoblastos deberán incluirse como se menciono. Esta última se determina en 10 campos Ligera 6 – 15 Moderada 16 – 30 Marcada mayor 30 • Para la poiquilocitosis se debe informar la forma prevalente y cuantificar así: Normal Ligera Moderada Marcada 0 1–5 6 – 15 mayor de 15 . microcítico o macrocítico. En caso de reacción leucoblástica o desviación a la izquierda también se deberá incluir en el recuento diferencial). moderada o marcada. marcada menor de 65. la variación de formas o poiquilocitosis y.5 por la cantidad de hemoglobina presente puede ser o hipocromía. Se cuantifica en 10 campos: Normal Ligera Moderada Marcada 0–5 6 – 15 16 – 30 mayor 30 El tamaño se relaciona con el VCM 76 – 96 fl.En caso de reacción leucoeritoblástica se incluyen por aparte dentro del recuento diferencial. para estos dos últimos se informa ligera. • El color dado normocrómico como: Normal 0. marcada mayor de 120. Puede ser normocítico.  Observar en 100X los eritrocitos para determinar y valorar: el tamaño o anisocitosis. moderada 109 – 120. la inmadurez globular o policromatofilia que es la presencia de hematies con tonalidad gris azulada y de mayor tamaño. M101 – 108. • La anisocitosis se puede cuantificar así: Se determina al compararlos con los linfocitos pequeños. moderada 66 – 75.

restos nucleares. queratocitos. en casos contrarios se informa trombocitosis o trombocitopenia y la morfología cuando se encuentran mas de 3 macroplaquetas lo que se debe informar o por el contrario microplaquetas. codocitos. . acantocitos. célula falciforme. pero solo determinaremos la policromatofilia como: Normal Ligera Moderada Marcada 0–2 2–3 3–4 mayor 4 • Además se debe informar la presencia de inclusiones como punteado basófilo. • La policromatofilia y los reticulositos (se valoran con coloración de azul de cresil brillante) son proporcionales en 10 campos. estomatocitos. cuerpos de Heinz. knizocitos. parásitos y normoblastos si los hay. dacriocitos.Pueden ser: esferocitos. esquitocitos. anillos de Cabot. ovalocitos.  Para las plaquetas se debe informar si son normales en número y morfología. Si no se solicito antes un recuento de plaquetas que nos de un valoración de la cantidad se observa 100X. 10 campos en proporción cada uno de 100 hematíes y se debe encontrar de 7 a 21 plaquetas por campo para considerarlas normal. . cuerpos de Howell Jolly.

2. Hacer el recuento diferencial.500 mm3 de leucocitos X 100% total de células contadas en el diferencial / 120% = 6.250 mm3 de leucocitos corregidos. Conocer el recuento total de blancos. automatizado o manual por líquido de Turk. FORMA DE CORRECCION: 1. En este recuento interfiere los normoblastos y los restos nucleares. 3.NORMOBLASTOS Ante la presencia de normoblastos se debe realizar la corrección de leucocitos. Se corrigen siempre que se encuentren mas del 10% al realizar el recuento diferencial.500 mm3 de leucocitos por líquido de turk 100 % de células contadas para el diferencial 20% de restos nucleares o normoblastos hallados en el diferencial 7. Ejemplo: 7. Deberán ser anotados a medida que se realice el recuento diferencial anotándolos apearte y se informa la cantidad de normoblastos en100 células blancas contadas. Saber cuántos normoblastos o cuantos restos nucleares se obtuvieron en este recuento. Leucocitos corregidos: número de leucocitos contados X 100 / número de normoblastos + 100 Recuento total de leucocitos por mm3 por cualquier método. . es decir. X 100 % que es le número de leucocitos contados para el diferencial / (100 % que es el número de leucocitos contados para el diferencial + el % de restos nucleares o normoblastos contados en el diferencial).

LINEA MEGACARIOCITICA  MEGACARIOBLASTO: De tamaño grande. La fragmentación final del citoplasma dará origen a las plaquetas. presenta prolongaciones a modo de seudópodos útiles para su identificación morfológica. citoplasma basófilo con abundantes granulaciones y desflecado. . sin gránulos.  PROMEGACARIOCITO: De mayor tamaño que la anterior. citoplasma intensamente azul. núcleo multilobulado.  MEGACAROCITO: Es el de mayor tamaño. núcleo con cromatina laxa. de color rosado y con gránulos en su interior. Gran citoplasma de color grisáceo y repleto totalmente de gránulos azurófilos.  PLAQUETAS: Se observan de pequeño tamaño. gran número de los cuales se agrupan y rodean lo que se denomina una membrana de demarcación. presencia de nucleolo.

citoplasma de tono azulado. la cromatina es más burda como grumos y los nucleolos poco distinguibles o completamente ausentes.LINEA ERITROIDE La maduración eritropoyética se caracteriza por: 1. 3.  ERITOBLASTO POLICROMATICO: Es de menor tamaño que la anterior.  ERITOBLASTO BASOFILO: Es de menor tamaño que la anterior. Desaparición de todos los organelos citoplasmáticos. cromatina gruesa e irregularmente condensada se nota como un tablero de ajedrez. más pequeño y más condensado. núcleo grande con cromatina laxa. citoplasma gris rosado. 2. intensa basofilia citoplasmática. núcleo picnótico. aunque son muy difusos. más que la línea mieoloide. no tiene núcleo. .  PROERITOBLASTO: Gran tamaño. El citoplasma conserva su intensa basofilia.  RETICULOCITO: Tiene un tamaño un poco mayor que el hematie. núcleo más central. El aumento progresivo de la acidofilia celular. alrededor del núcleo se observa como encaje. en el que pueden apreciarse dos o más núcleolos. Su núcleo es más central y pequeño que la línea granulocítica.  ERITOBLASTO ORTOCROMATICO: Su tamaño es un poco menor a la anterior sin ser muy notoria la diferencia. con coloración supravital revela un retículo granulofilamentoso. su citoplasma es de color gris azulado.

eosinófilo o basófilo según los gránulos que se observan cerca del núcleo. presenta una ligera invaginación dando aspecto de frijol. citoplasma rosado. eosinófilo y basófilo. el núcleo ocupa la mayor parte de la célula quedando solo una pequeña cantidad del citoplasma.  MIELOCITO: De menor tamaño que la anterior.  METAMIELOCITO: De menor tamaño que la anterior con núcleo excéntrico.  PROMIELOCITO: De mayor tamaño que la anterior. que se va a lobular generalmente a neutrófilo.LINEA GRANULOPOYETICA Es característico que el núcleo disminuya de tamaño en relación al citoplasma.  MIELOBLASTO: Citoplasma azulado y granulaciones primarias o azurófilas muy escasas o inexistentes. Núcleo redondo y relativamente grande. . Cromatina muy laxa con dos o tres nucleolos definidos y oscuros. la cual se caracteriza por la gran abundancia de granulaciones específicas citoplasmáticas. Es de forma redonda u ovalada. Según su naturaleza se clasifican en neutrófilo. con abundante granulación azurófila (se observan rojos.  EN BANDA O CAYADO: La invaginación es más pronunciada arqueando la totalidad del núcleo. es excéntrico y no posee nucleolos. El núcleo contiene una cromatina más condensada que la del promielocito. toscos y grandes) citoplasmática. Los gránulos son visibles en el núcleo como en el citoplasma. El citoplasma es azul con una zona relativamente clara alrededor del núcleo. aún se pueden distinguir los nucleolos.

LINEA MONOCITICA  MONOBLASTO: Son similares a los mieloblastos y difícil de diferenciar entre sí. Escasos gránulos azurófilos. . Casi siempre contiene gránulos azurófilos. El citoplasma es de color azul – grisáceo. El citoplasma es basófilo y tienen un halo pálido alrededor del núcleo.  PROMONOCITO: Tiene un núcleo regular e irregular.  MONOCITO: Núcleo irregular en forma de frijol. que pueden ser de 2 a 4 redondos y de color azul claro. el citoplasma presenta ligeras prolongaciones simulando pseudópodos. Un pliegue en el núcleo es bastante característico. citoplasma azul grisáceo más abundante que en el monoblasto. La cromatina es fina e irregularmente distribuida. suave y homogénea que se ve interrumpida por los núcleolos. El núcleo tiene una cromatina fina.

Algunos pueden presentar seudópodos obtusos. de núcleo excéntrico. con o sin gránulos. . Sus características dependen del tejido al cual ha migrado: NOMBRE TEJIDO Histiocitos Conjuntivo Células de Kupfer Hígado Macrófagos alveolares Pulmón Macr. sin gránulos. con actividad macrofágica.HISTIOCITOS Son los monocitos que de sangre periférica pasan a los diferentes tejidos. Otros bordes citoplasmáticos dilacerados. El citoplasma es azul claro o gris azulado. de cordones y senos esplénicos Bazo Células sinusoidales Ganglio linfático Macrófagos medulares Médula ósea Macrófagos de las serosas Pleura y peritoneo Osteoclastos Hueso Células de la microglia Sistema nervioso Los histiocitos son células grandes con abundante citoplasma que contiene vacuolas digestivas y/o partículas fagocitadas bien visibles. característicos de células tisulares fijas que han sido arrancadas de su sitio normal.

escaso citoplasma azul. de núcleo ligeramente excéntrico. con un nucleolo. citoplasma de color azul oscuro y algunas veces se puede observar una zona clara perinuclear.  PROLINFOCITO: Más basófilos que los linfocitos. LINEA PLASMOCITICA  PLASMOBLASTO: Célula de tamaño intermedio. . mayor cantidad de citoplasma que presenta color azul intenso y la zona clara perinuclear se observa mejor.  PROPLASMOCITO: forma ovalada. El citoplasma no es granuloso pero sí de gran tamaño contrario al linfocito. se tiñe de azul oscuro y presenta una brillante translucidez o zona clara.LINEA LINFOIDE  LINFOBLASTO: Tiene la cromatina homógena y delicada pero es un poco más burda que la de los mieloblastos y monoblastos. sin gránulos y un halo claro perinuclear. el citoplasma ha tomado forma ovalada. cromatina menos densa que el linfocito. Por lo general es redonda pero no necesariamente. más grandes. el citoplasma a veces parece rugoso y granular.  PLASMOCITO: el núcleo es muy excéntrico con una cromatina muy condensada da el aspecto de radios de rueda. núcleo excéntrico grande que contiene el nucleolo. Tiene uno o dos nucleolos. de núcleo grande con cromatina fina y presencia de nucleolo bien definido.

Si solo se observa aglutinación en la zona A. Anti D produce una reacción específica de antígeno . Si la orden además indica otro examen que implique la toma de tubo con EDTA. separadas entre sí. se descarta la primera gota y se toma tres gotas en una lámina portaobjetos. se toma la muestra del pulpejo de su dedo índice. se colocara una torunda de algodón en la zona puncionada y se le dirá al paciente que la sostenga por un minuto. el paciente es grupo B. la muestra será tomada del mismo tubo y no se puncionara al paciente en su dedo índice.anticuerpo. el paciente es grupo sanguíneo O. Se limpia la zona con algodón impregnado con alcohol antiséptico. si solo se observa aglutinación el la zona B. B y D. el paciente es grupo AB y si no se observa aglutinación para ninguna de las dos zonas. se aplica una gota de Anti A. en la zona A. en la zona B una gota de Anti B y en la zona d una gota de Anti D. Cada gota se coloca debajo de cada letra y se aplican los reactivos del juego de hemoclasificadores. Para los dos primeros espacios se determina el grupo sanguíneo y para el último el Rho. si el correspondiente antígeno esta presente en los hematíes muestra. en cada una en la parte superior se marca como A. La incubación de los hematíes muestra con el reactivo Anti A. Anti B. si la aglutinación es para las dos zonas. se deja secar a temperatura ambiente toma una lanceta y se punciona por la zona del lado del pulpejo del dedo. En la zona D la presencia de aglutinación nos indica rho positivo y la no aglutinación un rho negativo. La lámina portaobjetos en su posición horizontal se divide en 3 partes.HEMOCLASIFICACION Si el paciente llega únicamente con orden de hemoclasificación. La reacción es demostrada por la . el paciente es grupo A. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO PRINCIPIO BOLOGICO DE LA PRUEBA Se basa en la hemaglutinación directa.

DESCRIPCION DEL PRODUCTO Los reactivos son preparados de pool de suero humano obtenidos de donantes inmunizados. Lavado de glóbulos rojos de pueden almacenar en solución preservante de 2-8°c por no más de 35 días. tampoco usarlo después de la fecha de vencimiento. no congelar.aglutinación visible. sin embargo. Se puede tomar muestra venosa (usando anticoagulante) o por punción capilar en este caso si la prueba se realiza de una vez sin retrasos para evitar que la muestra se seque. MUESTRA No se requiere preparación especial del paciente para obtener la muestra. . La no aglutinación indica ausencia del antígeno para cada uno de los reactivos siempre que se hayan cumplido correctamente la indicaciones del procedimiento. Deben almacenarse de 2-8°C. puede presentar contaminación bacteriana o deterioro del producto. se deben manipular como si fueran material sospechosos de infección. Si se observa turbidez no emplearlo. El material biológico con los que se preparó el reactivo fue sometido a pruebas de HBsAg y Anti VIH dando negativo.

Se coloca dos gotas en una lámina portaobjetos sin tocar la piel.5 cm. que se obtienen de la parte lateral de la yema del dedo medio de la mano y en niños pequeños del dedo gordo del pie. se deja actuar por 9 minutos. se punciona con lanceta desechable y se limpia la primera gota con algodón seco. Enjuagar con solución amortiguadora rápidamente La coloración se realiza colocando la lámina boca abajo en una superficie cóncava. el alcohol o el calor pueden fijar la hemoglobina. haciendo inadecuada la muestra para el diagnóstico de malaria.5 a 0. examinando la gota a partir de uno de sus bordes. se deja secar.GOTA GRUESA Puede hacerse con sangre con anticoagulante o de gotas obtenidas por punción. se hacen 2 laminas que se dejan secar a temperatura ambiente en posición horizontal. Se extiende la sangre de cada gota utilizando el ángulo y los primeros 5 mm del borde longitudinal de otro portaobjetos se extiende la gota amanera de “N” para formar un rectángulo de 1. Primero se hace una precoloración: Se sumerge durante 1 segundo la lámina en azul de metileno fosfatado. Se presiona para obtener una gota pequeña. y mover la lámina en breves trazados horizontales y . Se debe limpiar la piel con alcohol. allí se adiciona el colorante de Field evitando la formación de burbujas que se ha preparado previamente adicionando 3 ml de solución amortiguadora. Es importante tener en cuenta que el exceso en el tiempo de secado. luego se escurren sobre el papel absorbente y se deja secar. se deben colorear antes de 2 horas de tomadas empleando la coloración de Field. la cual se ha divido imaginariamente en 3 partes. La observación se realiza en 100X. una gota de solución A y una gota de solución B. se deja escurrir sobre una toalla de papel en posición vertical. Limpiar con alcohol la lámina que se utilizó para las gotas gruesas con el fin de evitar la contaminación de las siguientes muestras. una para marcarla en el extremo derecho y los otros dos espacios para colocar cada gota.

Conociendo el número de leucocitos por mm3 se puede calcular la cantidad de parásitos en este volumen de sangre. En gota gruesa se cuentan los trofozoitos.5 de buffer Giordano por 6 minutos. se lava con agua de chorro.  Con base en el número de sangre de la gota gruesa. Un buen campo microscópico es aquel en donde se encuentran de 10 a 20 leucocitos. Para hacer el diagnóstico por la lectura de extendido se debe realizar hematocrito al paciente. y/o trofozoitos y/o gametocitos.000 leuc/ul de sangre. LECTURA:  Con base en el número de leucocitos. Se busca campos en donde la . Se calcula que en una preparación bien hecha. Puede determinarse la parasitemia contando en los 100 campos. También se puede hacer extendido coloreando la lámina con 2 ml Wright por 1 minuto y luego 0. presentes en los campos microscópicos determinados con 10X y 40X donde se encuentre mayor número de leucocitos. su especie en caso de observarse y el recuento del plasmodium. Se establece la proporción de parásitos en 100 leucocitos encontrados: # de parásitos X 8. vivax. De no visualizar el parásito. mirando los campos hasta que estos sumen 100 leucocitos. equivalen a 0. los trofozoitos y esquizontes presentes. se deben observar 200 campos para calificar la muestra como negativa. se escurre y se deja secar a temperatura ambiente en posición vertical. asumiendo que cada campo tiene igual cantidad de eritrocitos.000 eritrocitos. 100 campos microscópicos en 100X. En un extendido de sangre periférica se busca el porcentaje de eritrocitos parasitados por trofozoitos y esquizontes presentes en 10. esquizontes y gametocitos para P. aunque ocasionalmente esquizontes para P.2 mm3 de sangre.000 luec/ul de sangre / 100 leucocitos = # de parásitos/ul de sangre.verticales (zig – zag) en la que se identifica la presencia del parásito.  Con base en el número de eritrocitos. lo que equivale a 100 campos microscópicos. falciparum. Ejemplo: paciente con malaria con un recuento de 8.

• Hemoparásitos: Positivo para P. vivax (5. falciparum ( 2. • Hemoparásitos: Positivo para P. • Hemoparásitos: Positivo aunque no se puede precisar la especie.000 trofozoitos/ul). falciparum se debe informar por separado las formas sexuadas y asexuadas. si hay 300 eritrocitos por campo. . • Hemoparásitos: Positivo para P. INFORME DE RESULTADOS:  Con base en el número de leucocitos: Para los casos de P.distribución de los eritrocitos sea homogénea y no se encuentren superpuestos. En las infecciones mixtas se debe registrar primero el parásito prevalente y luego la especie subordinada. falciparum (50.000 trofozoitos/ul). • Hemoparásitos: Positivo para P. por la facilidad en el reconocimiento de los gametocitos de los trofozoitos. Se sugiere nuevo examen. vivax no se debe hacer recuento ni diferenciación entre las formas sexuadas y asexuadas.000 parásitos/ul) y P. falciparum (200 gametocitos/ul). hacia el segundo tercio del extendido. es posible informar separadamente las forma sexuales de las asexuadas. vivax. falciparum. Así: 1 – 10 en 100 campos microscópicos + 11 – 100 en 100 campos microscópicos ++ 1 – 10 por campo microscópico +++ mayor de 10 por campo microscópico ++++ En las infecciones por P. Ejemplos: • Hemoparásitos: Negativo.  Con base en el número de sangre de la gota gruesa. En los casos de P. El recuento semi cuantitativo consiste en informar la especie de Plasmodium que ocasiona la infección y el número aproximado de parásitos encontrados. • Hemoparásitos: Positivo para infección mixta: P. falciparum (100 trofozoitos/ul y 5 gametocitos/ul). Ejemplo: serían necesarios 33 campos microscópicos.

R parasitados P. Punteado fino (punteado de Schuffner. candelabro.000 eritrocitos parásitos/ul de sangre. Punteado grueso (hendiduras de Maurer. Para determinar el número de parásitos en 10. puntos rojos generalmente escasos.000 eritrocitos = parásitos/ul de sangre 3 eritrocitos/ul = hematocrito x 100. Color normal. X hematocrito X 10 = # Se indica la presencia y la cantidad de formas presentes. falciparum: trofozoitos ++ y gametocitos + Hemoparásitos Positivo para P. vivax ++. falciparum No agrandados. Invade todos los eritrocitos.Ejemplo: Hemoparásitos: Positivo para P.000 eritrocitos serian necesarios 33 campos si hay 300 eritrocitos por campo microscópico. numerosas).000 reemplazando y simplificando: # de parásitos en 10. Para un hematocrito de 40% estimamos que el paciente tienen 4. * Forma especiales del parásito Tamaño del parásito Fase de anillo de los En “i”.  Con base en un extendido de sangre periférica.000. COMPARACION DE LAS ESPECIES DE PLASMODIUM EN EXTENDIDO G. puntos pequeños de rosa a rojos que aumentan con intensidad con el crecimiento del parásito. Marginales raras P. Ejemplo: # parásitos X # de eritrocitos/ul de sangre / 10. pálidos. Grande Pequeño Anillos grandes (1/2 a 1/3 Anillos muy pequeños (1/5 . “”. Inicialmente invade los reticulocitos. vivax Agrandados.000 eritrocitos/ul de sangre.).

las etapas consecutivas a la fase de . rico en citoplasma muy ameboide. vacuolados. falciparum. anillos delicados y regulares. periférica Parasitemia habitual Hasta 30. aumenta el tamaño del eritrocito. en el citoplasma del parásito. Gametocitos Redondos u ovales. Muy raros en sangre periférica pero puede llegar a tener de 8 y 40merozoitos. Comúnmente 50. Generalmente un gránulo de cromatina. grandes. Masa de cromatina central rodeada por pigmento malárico en forma de bastones. diseminados. Muchas veces dos gránulos o dos puntos de cromatina. escasos. Pigmento en los trofozoitos Partículas finas de color en desarrollo pardo ligero carmelito. En los esquiozontes se condensa en una masa única. ocasionalmente granulaciones de Shuffner.000 /ul de sangre. ocupa por lo general todo el eritrocito. trofozoitos (T. cromatina abundante laxa puede se claramente distinguible (macrogametocito femenino) o difusa (microgametocitomasculino) Distribución en sangre Todas las formas. vacuolado.del diámetro de los eritrocitos) a veces con citoplasma ameboide o amorfo. Grumos burdos de color negro o carmelito oscuro. * Semilunares o salchicha. De 12 a 24 merozoitos. infecciones múltiples. pueden adherirse a los eritrocitos. Solamente anillos y semilunas (gametocitos). amarillento. granulaciones Shuffner. * Hasta más de 200. presencia de granulaciones de Maurer * De 2 a 4 merozoitos. en los esquizontes se condensan en una masa única.000 / ul * Ordinariamente solo se observan etapas de anillo o gametocitos en sangre periférica con P.000 / ul. Esquizontes maduros Ocupa generalmente todo (segmentados) el glóbulo rojo. Posee una masa de pigmento malárico. dispersos en el citoplasma del parásito. Trofozoitos viejos Muy pleomorfos.. Compactos y redondeados. Jóvenes) del diámetro de los hematies).

candelabro. Raro de encontrar. color carmelito.anillo hacen adherentes a los eritrocitos y tienden a ser retenidos en los lechos capilares profundos en infecciones masivas. Se puede diferenciar el femenino del masculino. redondos. P. VIVAX Formas de anillo pequeño. regulares. Redondos ovalados con una única cromatina grande. aveces abierto mostrando un citoplasma regular o ameboide. finos y delicados. también pueden demostrase redondeados. Pequeños. Compacto con aspecto sólido. granulaciones de Shuffner como halo rosado. Pigmento malárico. Con 2 o más merozoitos. De 12 a 14 merozoitos distribuidos irregularmente. Forma creciente de media luna o salchicha. “”. Cromatina central rodeada de pigmento malárico de color negro a manera de bastones. usualmente contiene pigmento. una sola masa de pigmento malárico. redondos y compactos. Vacuola presente. Grande con variedad de formas ameboides. CARACTERISTICAS DEL PLASMODIUM EN GOTA GRUESA PARASITO Trofozoitos jóvenes P. Granulaciones de Shuffner Grandes. Granulaciones de Shuffner a manera de halo rosado. A veces abierto formando figura de i. pigmento malárico distribuido en el citoplasma. Gránulos de pigmento marrón o negro esparcidos por el citoplasma. Trofozoito maduro Esquizonte Gametocitos . En infecciones severas acompañado de un gran número de trofozoitos. FALCIPARUM Anillos muy pequeños. vacuola pequeña.

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