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microscopio

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18/03/2011

Biología Celular y Molecular. PRACTICA # 1. “USO DEL MICROSCOPIO.” Objetivo: El alumno utilizara distintos tipos de microscopios, tomando en cuenta sus cuidados y las técnicas adecuadas para su manejo, además de llevar a cabo la tinción de Gram e identificara organismos Gram positivo y Gram negativos en una muestra problema que le brindara el instructor. Introducción: El microscopio es un excelente auxiliar de gran precisión en el desarrollo de los trabajos microbiológicos de un laboratorio. El microscopio es un instrumento capaz de amplificar cientos y hasta miles de veces la imagen de los microorganismos, los cuales no son visibles a simple vista. Su nombre deriva de las raíces “Micros” que significa pequeño y “Scopeo” que significa ver, por lo tanto significa ver lo pequeño. Existen diferentes tipos de microscopios tales como: Microscopio de luz ultravioleta. Microscopio de contraste de fases. Microscopio electrónico. Microscopio compuesto: se denomina así porque los del objeto se logra mediante la combinación de dos juegos de lentes: los objetivos y los oculares. El microscopio compuesto es el más comúnmente usado en los laboratorios escolares e incluso industriales, por lo que a continuación describiremos más detalladamente su estructura. Sistema de soporte.(pie y brazo) sostiene a todo el microscopio Sistema eléctrico de iluminación. Depende de los caprichos de cada productor. Sistema mecánico. Todo accesorio capaz de moverse para optimizar las funciones de las diferentes partes Sistema óptico. Conjunto de elementos que posibilitan el incremento de visibilidad: oculares, platina, condensador, corredera de platina, revolver, diafragma, oculares, espejos de conducción, objetivos (2.5x lupa débil. 5x lupa fuerte, 10x

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Montar la preparación a observar. 40-60x seco fuerte. 2 . Cambiar al objetivo seco fuerte y aclarar la imagen con el tornillo micrométrico. 100x inmersión) OBJETIVO LUPA SECO DEBIL SECO FUERTE INMERSION Manejo del microscopio:     AUMENTOS 5X 10X 40-60X 100X DISTANCI FRONTAL 20-25 mm 5-6 mm 0.15 mm 0.    Mover el condensador si la luz es inadecuada. Terminar de aclarar la imagen moviendo el tornillo micrométrico. observando la operación lateralmente. para ello se debe colocar una gota de aceite de inmersión entre la lente del objetivo y el cubreobjetos. Este objetivo tampoco tiene tope por lo que se debe cuidar no bajarlo demasiado.15-0. enfocar la imagen usando para ello el tornillo micrométrico. Este objetivo no tiene tope por lo que es necesario cuidar de no romper el cubreobjetos con la lente del objetivo.  Hacer esquemas y anotaciones de lo observado.  Observar la preparación. cambiar al objetivo de inmersión. mediante observación lateral de la operación. hasta que la imagen sea lo más clara posible.02 mm El banco y la mesa deben estar a la altura que le permita al observados usar el microscopio en posición vertical de manera confortable. Encender la fuente de iluminación.18/03/2011 seco débil. Con la lente objetiva de menor aumento en el eje. anotando el objetivo con el que se observa.5-0. Para cambiar de campo de observación se debe mover la preparación mediante el carro de la platina arriba-abajo o hacia la derecha o la izquierda.  Finalmente si es necesario.

ocasionalmente el tornillo micrométrico se limpiara con aceite o grasa especial. si lo transportas será en posición vertical y sujetándolo contra tu cuerpo. teniendo cuidado de no usar la mezcla en exceso. alcohol y acetona. por lo que debe tomar los siguientes cuidados:    El microscopio debe ser guardado en un lugar seco y fresco al cubierto del polvo. puesto que el pegamento con el que se fija las lentes es soluble en esta mezcla. de no ser así limpiarlas usando solamente papel especial (papel ceda) para evitar el rayado de las lentes  En caso de haber usado aceite de inmersión deberá limpiarse con un papel ceda impregnado con una solución de éter. Los diez mandamientos del microscopio. Antes de su uso hay que revisar que las lentes estén limpias. ya que solamente deben hacerlo personas calificadas. de preferencia destilada para evitar la precipitación de sales. No lo golpearas. 1. En caso de alguna duda.    Las preparaciones a observar deben estar siempre limpias de grasa de las manos. el tornillo micrométrico no requiere de aceite. 3 .   Por ningún motivo se desarmara alguna parte del microscopio. Toda persona que maneje un microscopio deberá tener en cuenta que es un instrumento de alto costo de precisión y delicado. Para su traslado debe ser tomado con una mano del brazo y con la otra mano por debajo del soporte o base.18/03/2011 Cuidados del microscopio. o falla deberá preguntarle al profesor a cargo. Las lentes del microscopio deberán quedar limpias la terminar de trabajar con el microscopio. Las partes del soporte deben ser limpiadas con una franela húmeda con agua.

5. Al iniciar tu observación comenzaras con el seco débil. 8. pasaras al seco fuerte o inmersión. No lo arrastraras sobre la mesa cuando se encuentre encendido o recién apagado. siempre apagaras la lámpara inmediatamente y no moverás el microscopio hasta que la lámpara se haya enfriado. 4. ni lo guardaras junto con sustancias corrosivas. usando un poco de vapor de aliento. Limpiaras el microscopio periódicamente. ni tampoco intentes desarmarlo y menos forzar su funcionamiento. 10.5x. excepto el ocular y eso si te lo pide el maestro 6. No lo colocaras en el borde de la mesa ni lo tendrás cerca de la llama del mechero. porque se funde el foco. si se encuentra alguna avería o cualquier otra irregularidad. Nunca usaras disolventes para limpiar las lentes.18/03/2011 2. luego si es necesario. notificaras al encargado para que t asignen otro microscopio. Lo inspeccionaras siempre antes de usarlo. nunca le pondrás grasa o aceite en sus partes mecánicas. MATERIALES MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO MICROSCOPIO (SENCILLO) PICETA ASA MICROBIOLOGICA O ALAMBRE DE PLATINO GOTEROS CUBREOBJETOS Y PORTAOBJETOS PUENTE DE TINCIONES MECHERO FISCHER 4 . 9. 3. No le desmontaras ninguna pies. 7. Limpiaras siempre las lentes con papel ceda. Cuando termines de hacer tus observaciones. siempre y cuando no tengas un ocular menor de 8X ni mayor a 12. solo en caso de que sea muy necesario para retirar el exceso de aceite de inmersión y lo harás muy rápidamente.

5 .18/03/2011 UN PORTA ASA REACTIVOS: SAFRANINA LUGOL ALCOHOL-CETONA CRISTAL VIOLETA MUESTRAS: LEVADURA DE CERVEZA CULTIVOS DE QUESO CEBOLLA (TELA DELGADA) SANGRE Preparación de reactivos: Cristal violeta: es una solución utilizada para teñir bacterias. Disolver 1g de yodo y 3g de KI en 300 ml de H2O destilada. Safranina: el coloran6te de safranina es útil en la tinción de Gram principalmente para teñir bacterias. a) *cristal violeta alcohol etílico al 95% preparación: disolver 2 g de cristal violeta en 20ml de alcohol. Dejarlo reposar y filtrar. estas adquieren un color morado. Solución de yodo yoduro “lugol”: esta solución identifica el almidón en los alimentos y tejidos vegetales. mezclar con un volumen igual de solución “B”. *Yodo *Yoduro de potasio. b) *oxalato de amonio *agua destilada preparación: diluya 0. y sirve como mordiente en la tinción de bacterias por la técnica de Gram. Diluya la solución en 4 partes de agua destilada (20-80ml respectivamente).8 de oxalato de amonio en 80 ml de agua destilada. *Agua destilada.

El calor se controla pasando cada vez el portaobjetos sobre el dorso de la mano para cuidar que este tenga una temperatura soportable. *alcohol etílico al 95%. Tinción de Gram. A esto se le llama extensión de los microorganismos o frotis. Una vez que el frotis se ha secado completamente. cuidando que no hierva la preparación. *agua destilada. para esto pasar varias veces el portaobjetos sobre la flama. Preparación: mezclar 60ml de alcohol absoluto y 40 ml de acetona. Elaboración del frotis: Colocar una gota de agua sobre un portaobjetos y en ella disolver una pequeña parte de colonia. *cetona. colocarlo sobre una caja Petri o sobre un puente de tinción y practicarle la tinción de Gram. Fijar el frotis a la flama. Cubrir el frotis con cristal violeta (dejar actuar 1 minuto) Lavar el exceso de colorante con la piseta Cubrir el frotis con lugol (dejar actuar 1 minuto) Lavar el exceso de lugol con la piseta Decolorar la preparación. 6 . Observar al microscopio con todos los objetivos.5g de safranina en100 ml de alcohol etílico al 95%. *alcohol. agregando alcohol-cetona (15-30 segundos) Cubrir el frotis con safranina (15-30segundos) Lavar con agua corriente y dejar secar al aire. Colocando un portaobjeto en Angulo de 45ᵒ con el portaobjetos. Disolver 2. Alcohol-cetona: utilizado como diluyente y decolorante en las tinciones. Mezclar 25ml de esta solución con 75 ml de H2O destilada.18/03/2011 *safranina. extender la suspensión de microorganismos.

diferentes tipos de microorganismos tanto en su estado natural. Muestra de levadura de cerveza hidratada en agua y vista al microscopio. Se aprendieron y reconocieron las partes del microscopio además de manejarlo correctamente. puesto que pude observar en el microscopio. como en tinciones. observada al microscopio. Es una pequeña tela extraída de la cebolla.18/03/2011 Resultados. Se lograron los objetivos de la práctica. Cocos vistos en la muestra del cultivo de queso son Gram negativas por su 7 .

8 . no toman en cuenta algunos microscopios. Aunque la mayoría de los libros de biología manejan la microscopia. Muestra de sangre vista al microscopio sin aplicar ninguna técnica de tinción. el polarizante y el de interferencia. para ser utilizado con eficacia en el laboratorio. y es en donde se pueden conocer las partes del microscopio fácilmente. En el manual se nos habla un poco sobre la historia del microscopio. Encontramos que en “Biología celular” de Jack Burke.C. En “fisiología celular” de A. Muestra de sangre vista al microscopio con la tinción de Gram aplicada. Discusión. microscopio electrónico y el microscopio de contraste de fases. donde se hablan de lo importante de las características de la luz para ser manipuladas de la mejor manera que nos convenga. Giese solo encontramos el microscopio de campo oscuro. También se dan a conocer los cuidados que se deben tomar en cuenta para el buen funcionamiento del microscopio. en el manual (microbiología general) aparecen varios. explican perfectamente tres microscopios que son: microscopio de luz. Realmente se dan las bases físicas principalmente en el primer libro citado.18/03/2011 pared celular pintada en rosa.

Tales tinciones son: Tinción de Gram. Produce una imagen casi tridimensional y es útil para observar organismos vivos en el interior de animales vivos. Tinción Zielh-Nielssen 9 . En Microbiología encontré otro microscopio que no se había mencionado: Microscopia de Normanski. Dado que en una tinción simple no se pueden apreciar distintos tipos de microorganismos y en las tinciones diferenciales siempre se podrán diferenciar mínimo dos tipos de organismo en el frotis. además de poder identificar algunos organelos que contienen los antes mencionados.. Esta utiliza las diferencias de e índices de refracción y produce el contraste por interferencia. y todos tienen principios físicos. ya que utilizan la luz para amplificar una imagen. pero hablan poco de cómo utilizarlo en el laboratorio ya que esto es muy importante. radica en el sistema mediante el cual se paran los rayos interferentes (Un prisma). pero su diferencia con el microscopio de fases. se podrán observar los organismos. Dependiendo del tipo de tinción.18/03/2011 esto es difícil de encontrar en algún libro . porque los demás libros sólo dan el fundamento de la microscopia. En este libro se menciona su utilidad primordial de diferentes microscopios. Conclusiones. Las tinciones son de gran ayuda en microscopia debido a que gracias a los colorantes utilizados en las tinciones se logran apreciar con más claridad los microorganismos.

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