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6610531-GuiaPracticasFinal2007

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PRIMERA PARTE: BIOSEGURIDAD

El trabajo en el Laboratorio requiere la observación de una serie de normas de seguridad que eviten
posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se está haciendo o a una posible negligencia de
los alumnos que estén en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.

A continuación alistamos una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse durante
las prácticas de laboratorio.

NORMAS PERSONALES

1.Lea con atención, antes de cada práctica, las indicaciones de su guía. Siga todas las instrucciones a
menos que el profesor realice alguna modificación.
2.Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. Se trabajará con
cuidado y de manera organizada. Así mismo se mantendrá cada mesa de trabajo limpia, seca y
ordenada.
3.Es obligatorio la utilización de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y pies. Están prohibidos el uso
de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. en el laboratorio. La persona
inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio le será negado el ingreso.
4.No deben llevarse las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas.
5.Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.
6.Está terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas ni comidas.
7.En caso de derrame, accidente o daño avise inmediatamente al profesor.
8.Al término de cada práctica limpiar el área de trabajo y lavar los materiales utilizados con agua de
caño. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabón. Finalmente cerciorares que las llaves de
gas y agua estén cerradas.

REACTIVOS QUIMICOS

1.Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos químicos peligrosos que puedan salpicar o
derramarse.
2.Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de que es el que se necesita, fijarse bien el rótulo.
3.Como regla general, no coger ningún producto químico. El profesor o profesora te lo proporcionará.
4.Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor.
5.Es muy importante que cuando los productos químicos de desecho se viertan en la pila de desagüe,
aunque estén debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
6.No tocar con las manos y menos con la boca, los productos químicos.
7.No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succión.

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8.Los ácidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el ácido
sobre agua.
9.Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay que
calentar tubos con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama.
10.Manipule con precaución los solventes volátiles e inflamables como el éter, acetona y metanol. Nunca
evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensación eficiente.
11.Si se vierte sobre ti cualquier ácido o producto corrosivo, lávate inmediatamente con mucha agua y
avisa al profesor.
12.Al preparar cualquier disolución se colocará en un frasco limpio y rotulado convenientemente.
13.Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona
que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con
solventes inflamables en el laboratorio.

MATERIAL DE VIDRIO

1Use material de vidrio limpio y no rajado.
2El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frío. Para evitar quemaduras use guantes o
trapos.
3 Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas
dos normas:

-Ten sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningún compañero.
Puede hervir el líquido y salir disparado, por lo que podrías ocasionar un accidente.
-Calienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente (mira la figura).

EQUIPOS ELÉCTRICOS

1Manipule cualquier equipo eléctrico con las manos secas y asegúrese que el área de trabajo también
este seca.
2Ningún cordón electrifico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3Cuando desconecte algún equipo de tomacorriente, jálelo por el enchufe y no por el cordón.

UTILIZACION DE BALANZAS

1Cuando se determinan masas de productos químicos con balanza, se colocará papel sobre los platos de
la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizará una luna de reloj.
2Se debe evitar cualquier perturbación que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.

MANIPULACIÓN DE ESPECÍMENES
1Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con extremo cuidado.
Siempre utilice técnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estériles, etc.).
2Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.

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S

EGUNDA PARTE: MICROSCOPÍA

I.

FUNDAMENTO

La invención del microscopio se atribuye a Johannes y Zacharias Jansen
(1590) y el descubrimiento de la estructura celular de los organismos a Robert
Hooke (1665). Posteriormente, en 1683 y con un microscopio muy rudimentario Leeuwenhoek descubrió
un universo enmarcado sólo por decenas de micrómetros. Desde aquel entonces, el perfeccionamiento
continuo al microscopio ha permitido a la Ciencia profundizar cada vez más en el conocimiento de la
ultraestructura celular y de las relaciones intercelulares.

MICROSCOPIO COMPUESTO

El microscopio es un instrumento óptico que se compone de una serie de lentes para conseguir
imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeñez no son visibles al ojo humano.
El microscopio compuesto está constituido de un SISTEMA OPTICO destinado a obtener una
imagen aumentada del objeto, un SISTEMA MECANICO que sostiene los distintos elementos ópticos y los
objetos que se van a examinar y un SISTEMA DE ILUMINACIÓN.

CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO

Dado que la imagen del microscópio no es real sino virtual, se han determinado algunos términos

de medida microscópica:

En cualquier microscopio el poder de resolución define su rendimiento óptico, porque es su
capacidad para ver como separados dos puntos que realmente lo están pero que nuestro ojo sólo puede
ver como una entidad única (es decir es su capacidad de entregar imágenes bien nítidas).

El máximo poder de resolución del microscopio óptico es de 0,2 micrómetros(0,2 µm), debido a
que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 µm) es un factor limitante. El ojo humano tiene un
poder de resolución de aproximadamente 100 micrómetros.
El límite de resolución puede definirse como la distancia mínima que debe existir entre dos puntos
para que se puedan distinguir como separados. El límite de resolución se puede calcular a partir de la
siguiente ecuación:


L.R. = K = constante = 0.61
A.N

λ = longitud de onda de luz AN = apertura numérica de cada lente
objetivo es su capacidad para captar la máxima cantidad de la luz
difractada por el objeto. Depende del índice de refracción del medio.

Recuerda: A menor límite de resolución mayor será el poder de resolución

Resolución y magnificación Máximas

Instrumento óptico

Resolución

Magnificación

Ojo humano

0,1 mm

Microscopio óptico

0,2 u

2500

Microscopio electrónico

0,1 nm

1000 000

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II. OBJETIVOS

Reconocer las partes del microscopio óptico. -Conocer su utilización para la observación de
distintas muestras biológicas.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

En el laboratorio encontrarás:

- Microscopio compuesto
- Aceite de inmersión
- Colorantes

IV. PROCEDIMIENTO.

Se reconocerán las partes de un microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto.

1. SISTEMA OPTICO. El sistema óptico está constituido por:

Objetivos: sistema de lentes convergentes que actúa como una lente que se encuentran montados en el
revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x,
10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:

Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparación.

Objetivos de inmersión: en el cual un líquido ( aceite) se interpone entre la lente y la preparación.

Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y
forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto número de veces (X veces,
según se indica en el propio ocular). Los aumentos más comunes son 10X y 16X.

2.-SISTEMA DE ILUMINACIÓN.

Condensador: Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparación.

Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparación.

Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta).

Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.

3.-SISTEMA MECANICO

Tubo óptico: Cilíndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos
montados en el revólver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa.

Revólver: Pieza metálica situada en la parte inferior del tubo que por rotación sitúa los diferentes objetivos
en posición de trabajo.

Platina: Superficie plana con una perforación central para permitir el paso de la luz hacia preparación.
Posee un carro que sostiene la preparación y que puede desplazarla hacia delante y hacia el
lado izquierdo o hacia el lado derecho.

Tornillo Macrométrico: Mecanismo de enfoque de avance rápido.

Tornillo Micrométrico: Mecanismo de enfoque con precisión o ajuste fino.

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Base o Pie: Estructura sólida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento.

Columna: Vástago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo
de movimiento del mismo.

NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atención al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes
hacerlo cuidadosamente porque son aparatos muy delicados y dejarás a consigna tu documento de
identificación.

Manejo del microscopio óptico

1Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.
2Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3Comenzar la observación con objetivo de menor aumento. Si la preparación es de bacterias emplear el
objetivo de mayor aumento (objetivo de inmersión, ver punto 6).
4 Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto

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debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar
el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación
con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta
obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover
un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino.
4El empleo del objetivo de inmersión es siempre utilizando aceite de inmersión.

CUESTIONARIO

1Mencione 3 normas de bioseguridad que no se hayan incluido en la práctica de hoy.
2Esquematice mediante un dibujo grande las 3 normas de bioseguridad que usted crea más importantes.
3Calcular la magnificación de las imágenes que observa
4Comparar el microscopio óptico con el microscopio electrónico
5Como se forma la imagen en el microscopio óptico

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PRACTICA Nº 3

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