cBilirrubinas (tecnica de 3 Sepúlveda-Osterberg):

1.- Fundamento: El acido sulfanilico diazotado se une a la bilirrubina para formarla

azobilirrubina de culor rosa, proporcional a la cantidad de bilurrubina presente.

2.-: Material y aparatos:

Sustancias: alcohol etílico, acido sulfanilico q.p. Acido cloridrico q.p. nitrito de
sodio q.p. sufato de sodio q.p. cloroformo. Q.p. versatol pediátrico.

2.2.- Reactivos:

Diazo-blanck, 111a, Diazo ³A´ de Ehrlich, 111b. Solución ³B´ niutrto de sodio 50%,
111c, sulfato de sodio al 12%. Versatol pediátrico o similar con una concentración
de bilirrubina de 20mg./ 100ml. Sokluciójn diluida de bilirrubina 0.004 mg/ml.

El Diazo reactivo del Ehrlich se prepara en el momento de usarse: mezclar 10 ml.

De reactivo 111b con 0.3 ml. De reactivo 111c diludo 0.1: 10.

Preparación de los reactivos

Reactivo 111a.

Acido Clorhidrico q.p. 15 ml.

Agua c.b.p. 1000 ml.

Mezclar y aforar

Reactivo 111b.

Acido sulfanilico 1 g.

Acido Clorhídrico q.p. 15 ml.

Agua c.b.p 1000 ml.

Disolver el acido sulfanilico, añadir el acido corhidrico y aforar.

Reactivo 111c.

Nitrito de sodio q.p. 500g.

Agua c.b.p. 1000 ml.

Disolver y aforar.

Reactivo de sulfato de sodio.

Sulfato de sodio q.p. 120 gr.

Agua c.b.p. 1000 ml

Disolver y aforar

Solución diluida de bilurrubina 0.004 mg./ml.

Versatol o similar 20 gr./100ml. 1.ml

Agua c.b.p. 50 ml.

Mezclar.

2.4. Materiales y aparatos:

Los habituales en un laboratorio de química clínica.

3 Metodo:

3.1. Matrial biológico: 3 ml. De suero sanguinio

3.2. Tecnica para bilirrubina directa: marcar dos tubos con los números 1 y 2.
Colocar en cada tubo 1.0 ml. De suero. Y 7 ml da agua destilada.

En el tubo 1 agregar 2 ml. De diaso-reactivo. En el tubo 2 agregar 2 ml. De diazo

blanck Mezclar.

Dejar reposar durante 5 min. Y leer a una longitud de honda de 550 M! Ajustando
a 100% de transmitancia con el blanco de reactivos.

3.3. Para b