P. 1
Interespecifica

Interespecifica

|Views: 287|Likes:
Publicado porMarcos Palavecino

More info:

Published by: Marcos Palavecino on Feb 17, 2011
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

11/06/2012

pdf

text

original

TEMA 7: INGENIERIA GENETICA
• Objetivo: Conocer medios alternativos para liberar variabilidad genética. • 36. Cultivo de tejidos. Fundamentación y aplicaciones en el Mejoramiento Genético. Variación Somaclonal y Gametoclonal • 37. Transferencia de genes. Fusión de protoplastos. • 38. Haploides. Obtención y Utilización • 39. Plantas transgénicas. Obtención. Técnicas de transformación.

Cultivo de Tejidos

Definición • Técnica mediante la cual un explante se cultiva asépticamente en un medio de composición química definida y en ambiente controlado. .

Aplicaciones
• • • • • • • • Producción Comercial Saneamiento de Cultivares Conservación de Germoplasma Obtención de Variación Somaclonal Rescate de Embriones Obtención de Híbridos Somáticos Obtención de Haploides Transformación de Plantas

Variación Somaclonal

Aspectos
• Cambios fenotípicos en la plantas regeneradas a través del cultivo de tejidos • Algunas de esas variaciones eran persistentes y heredables • El cultivo de tejidos apareció entonces como una fuente alterna de variación genética. A esta variación se la denominó Variación somaclonal (Larkin and Scowcroft, 1981).

tales como aneuploidía o polipliodía .: con la aplicación de 2.4 D • Acumulación de mutaciones en tejidos indiferenciados mas las que podrían ocurrir luego en los diferenciados • Cambios en el cariotipo.Origen de la variación • El ciclo y/o el medio de cultivo producen variación. ej. implica cambios bruscos.

que puede ser particularmente importante si los cambios son asimétricos o entre cromosomas no homólogos. debido a la "presión" del medio de cultivo. translocaciones de cromosomas no homólogos • Transposición de elementos (Transposones) • Incremento del crossing over.: ruptura y fusión. pequeños cambios asociados con reacomodamiento de los cromosomas. ej. .Origen de la variación • Cambios cripticos.

en contraste con los somaclones que deben ser autofecundados y su progenie analizada para detectar mutaciones recesivas. las mutaciones controladas por genes recesivos pueden ser observadas en las plantas regeneradas (diploides homocigotas).Variación Gametoclonal • Los gametoclones son. en principio individuos haploides. .

el número cromosómico debe ser doblado para restaurar la fertilidad para la formación de semillas.Variación Gametoclonal • La plantas derivadas del cultivo de gametas son haploides. .

Haploidía .

Hermsen y Ramanna. pero que posee una constitución cromosómica igual a la de los gametos normales de la especie (Lacadena. • Estos individuos se llaman monoploides si derivan de una planta diploide y polihaploides si provienen de una planta alo o autopoliploide (Sánchez Monge. .Definición • Un haploide es un organismo que se asemeja a un esporofito. 1970. 1974). 1974).

Origen e Inducción de Haploides • Origen in vivo • Origen in vitro .

.Origen in vivo • La modalidades tienen en común que se originan después de la autopolinización o de la polinización cruzada • Los individuos haploides deben ser seleccionados a partir de poblaciones mezcladas (Diploides más haploides).

Origen in vivo • • • • Ginogénesis (seudogamia) Androgénesis Semigamia Eliminación del genoma .

(maíz 0-3%) X X . Tubo polínico 2X CH X Monoploide en Endosperma 3X.Ginogénesis (Seudogamia) Célula haploide (CH) del saco embrionario desarrolla una planta completa. con o sin formación del endosperma.

Androgénesis Núcleo paterno .embrión haploide – Eliminación del núcleo materno. (maíz 1:80000) Núcleo Femenino Eliminado 2X X X X X Núcleo paterno por mitosis Desarrolla un embrión haploide .

Semigamia Embrión quimérico con tejidos materno y paterno haploides. No existe fusión de los núcleos materno y paterno (algodón y cacao). .

.Eliminación del genoma La eliminación natural de un genoma completo de uno de los padres después de la fecundación origina individuos haploides (Hordeum).

bulbosum Hordeum monoploide 2n=x=7 .Eliminación de cromosomas en Hordeum Hordeum vulgare 2n=2x=14 (Anual) Emasculación X Hordeum bulbosum 2n=2x=14 (perenne) Donor de polen Cigoto F1 Cultivo de embriones Eliminación de cromosomas de H.

bulbosum Triticum aestivum n=3x=21 Polihaploide .Obtención de haploides en trigo Triticum aestivum 2n=6x=42 X Hordeum bulbosum 2n=2x=14 (perenne) Donor de polen Eliminación de cromosomas de H.

Detección de Haploides en Cruzas mm X MM Plántulas marcadas Mm se desechan Plántulas no marcadas mmóm Recuento de cromosomas y selección de haploides Duplicación cromosómica .

Origen in vitro • Los haploides in vitro pueden ser obtenidos por cultivos de anteras y ovarios .

• Genotipos que respondan al tratamiento en alta frecuencia. • Que el agente para la duplicación cromosómica no provoque mutaciones . • Buena regeneración de plantas a partir de células o callos.• Se requiere: • Un medio de cultivo de micrósporas estandarizado.

• Duplicación inducida: para diploidizar un elevado número de haploides rápida y eficientemente. la técnica utilizada debe ser: .Duplicación • Duplicación espontánea: esta se produce. pero en frecuencias muy bajas para las necesidades del experimentador.

• Segura. simple y rápida • Permitir el manejo de grandes cantidades de individuos • Que no se produzcan daños fisiológicos y que no sea selectivo • Que no produzca daños o cambios genéticos • Que no origine otros niveles de ploidía • De alta eficiencia y repetibilidad .

Utilidad de los haploides • Obtención de plantas diploides homocigotas a partir de individuos heterocigotas. • Obtención de series monosómicas para estudios genéticos. por ejemplo en ornamentales por su prolongada floración. • Utilización directa. ej. especialmente plantas alógamas y plantas dioicas.: Pelargonium. .

.• Los haploides androgenéticos permitirían la incorporación de núcleos en citoplasma de otra célula • Dado que no existe relación de dominancia el genotipo del recesivo se expresa. • Para transferencia génica de sp poliploides a sp diploides. siendo de utilidad en la mejora por mutación • En alopoliploides como paso intermedio en la duplicación cromosómica a fin de conseguir homología.

S7 Líneas Puras Método Haploide Haploidía Espontánea Detección de Haploides Diploidización Líneas Puras L P con alta frecuencia de haploides espontáneos Intercruzamiento ACG ACE Cultivo de Anteras Obtención de Haploides ACE Líneas Puras de 2° Ciclo . . .Esquema de Obtención de líneas puras Población de Partida Método Clásico (autofecundación) S1 S2 . . .

Hibridación Interespecífica e Intergenérica .

Utilidad La introducción de genes de especies silvestres en especies cultivadas .

(Harlan and De Wet. producen descendencia viable. 1971) I Especies que se hibridan libremente. .Concepto de pozo génico. sus cromosomas se aparean regularmente e intercambian sus genes.

alteraciones cromosómicas ó barreras genéticas a la hibridación. . un cierto grado de esterilidad en la primera generación (F1) de los híbridos.II Los híbridos son difíciles de obtener debido a diferentes niveles de ploidía. Existe también.

El porcentaje de cigotos viables es bajo. . Las cruzas se pueden efectuar a altos niveles de ploidía. existen altos niveles de esterilidad en las progenies.III Mayor dificultad para obtener híbridos y sus individuos a menudo pertenecen a distintos géneros.

Barreras a La Hibridación –Barreras externas –Barreras internas .

.Barreras externas Diferencias en el tiempo y la duración de la floración Susceptibilidad al fotoperíodo y al frío.

.Barreras internas Autoincompatibilidad Diferencias en cruzas recíprocas Niveles diferentes de ploidía Degeneración del endosperma Muerte de embriones Eliminación de cromosomas.

Cruzas Puente
Obtención de resistencia a Cercosporella
Triticum turgidum x Aegilops ventricosa x=7, 4x x=7; 2x Triticum aestivum x x=7, 6x (Susceptible) Retrocruza F1 F1

Germoplasma con alelos para resistencia

• • • •

Metodología complicada Selección del carácter dificultosa Solo para monogenes dominantes Alta probabilidad de pérdida de genes en el proceso de evaluación

Fusión de Protoplastos
• Combinar genomios de especies distantes genéticamente • Se emplean células desprovistas de su pared celular ó protoplastos • Estos protoplastos son inducidos a fusionarse mediante diversas técnicas • Se obtiene una mezcla de los genomios nuclear y de las organellas

• Esta mezcla puede segregar en diferentes vías • El híbrido somático resultante es cultivado in vitro para producir callos a partir de los cuales se trata de regenerar la planta completa .

1993) .• Es factible obtener híbridos nucleares simétricos y combinaciones de los genomios de las organellas en diferente proporción de cada padre (Jacobsen.

luego de la remoción de la pared celular originando cuerpos multinucleados.Técnicas De Fusión • Fusión espontánea. . • Centrifugación a bajas r.M. • PEG con la mezcla de protoplasma. • Impulsos eléctricos.P. actúa como un puente molecular.

Desventajas • Frecuente inestabilidad del Cíbrido • Falta de regeneración • Necesidad de repetidas retrocruzas y selección para fijar los caracteres deseados. .

Identificación Y Selección De Células Híbridas • Células parentales • Células heterocarióticas o híbridos .

Las Células Híbridas Pueden Ser Diferenciadas De Las Otras Por Selección Basada En La Complementación .

con alelos recesivos en distinto locus. .Fusión de albinos. y posterior selección para individuos fotosintéticos.

Fusionar protoplastos con distintos requerimientos para el desarrollo. para obtener híbridos somáticos autótrofos para auxinas en sp del género Nicotiana. ej. . se puede identificar lo híbridos al ponerlos en un medio que no suplemente esos requerimientos.

• Empleo de marcadores morfológicos en combinación con mutantes albinos • Selección visual (microscópica) y aislamiento mecánico. • Separación de los heterocariotes por diferencias de densidad bajo centrifugación. .

Protoplasto Donante CMS Protoplasto receptor Núcleo Mitocondrias Eliminación del núcleo Fusión Segregación CMS Fértiles .

Transferencia Génica Mediante Manipulación Directa De DNA • Agrobacterium • Absorción • Microinyección de DNA .

Agrobacterium .

Introducción Directa De DNA • Es una alternativa para especies que no admiten el empleo de Agrobacterium. .

Absorción • Es la absorción por parte de los protoplastos de DNA de un medio de cultivo con la ayuda de ciertos agentes como el PEG o pulsos eléctricos. .

. Se ha utilizado en alfalfa y en Brassica napus. Se inmoviliza la célula y mediante micropipetas se inyecta DNA sin alterar el organismo.Microinyección De DNA • Microinyección de DNA.

procumbens Resistencia a nemátodos G. Especie Cultivada Avena sativa Beta vulgaris Gossypium hirsutum Especie Donante A.Ejemplos de caracteres transferidos por hibridación interespecífica o intergenérica. raimondii Resistencia a roya . sterilis Carácter Incremento en rendimiento B.

a la roya squarrosa de la hoja . a la roya speltoides del tallo Aegilops Resis.Especie Cultivada Especie Donante Carácter Resis. al virus X Lycopersicum L. a nemátodos y virus TMV Resis. acaule Aegilops ovata Alto contenido de proteína Aegilops Resis. peruvianum sculentum Solanum tuberosum Triticum aestivum Triticum aestivum Triticum aestivum S.

monococcum Tripsacum dactyloide Carácter Tolerancia a sequía Resis. a la roya amarilla y al f Resis. a Helmintosphorium .Especie Cultivada Triticum aestivum Triticum aestivum Triticum durum Zea mays Especie Donante Agropyron elongatum Secale cereale T. a la roya del tallo Resis.

Plantas Transgénicas .

Organismos Modificados Genéticamente (OMG) • Caracteres de protección • Caracteres de calidad .

Caracteres de Protección • • • • • • Resistencia a Insectos Tolerancia a Herbicidas Resistencia a Hongos Resistencia a Virus Resistencia a Bacterias Resistencia a Nemátodos .

enzimas.Caracteres De Calidad • • • • Demora en maduración Aceites modificados Proteínas modificadas Producción vegetal de anticuerpos. etc. .

2. Identificación del carácter que no puede ser modificado por el mejoramiento convencional. Identificación del organismo que lo exprese.Etapas en la Obtención de Plantas Transgénicas (OMG) 1. .

4. Aislar el gen (del organismo) responsable del carácter deseado.3. . Combinar el gen con elementos regulatorios de planta para que sea funcional en vegetales (promotores y terminadores).

5. . Integrar el gen quimérico en el DNA (genómico) cromosómico de la planta a transformar. Identificar las células transformadas y regenerar plantas completas a partir de ellas. 6.

. • Para cortar el ADN en segmentos de distinta longitud se utilizan distintas enzimas. • El ADN “cortado” posee extremos cohesivos.Extracción Del Gen De Interés • Corte del ADN donante en sitios específicos con enzimas de restricción.

• Los ADN se pueden volver a unir.• Dos cadenas de ADN cortados con la misma enzima de restricción tendrán los mismos extremos cohesivos. .

GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG Enzima EcoRI G CTTAA AATTC G Extremos Cohesivos Ligasa GAATTC CTTAAG ADN Recombinante .

G.Transferencia de genes a plantas • • • • • • Agrobacterium (mas eficiente) Microproyectiles Fusión de Protoplastos P.E. Absorción de DNA Microinyección de DNA .

de transmitir DNA a un cromosoma hospedante • Transmite un set de genes de una región denominada T-DNA (Ti-plasmid) dentro de las células de una planta en los sitios de infección. .Agrobacterium • Se explota la habilidad natural de la bacteria de suelo Agrobacterium tumefaciens.

• El sitio de integración es aleatorio.• El patógeno tiene un amplio rango de hospedantes. • El resultado de la transferencia es un crecimiento tumoroso llamado corona en el cual el T-DNA es integrado en forma estable dentro del cromosoma huésped. .

• La técnica consiste en eliminar los genes que causan el tumor y reemplazarlos por DNA que codifique las características deseadas .• El tumor resulta de la expresión de los genes del T-DNA que altera el normal balance de fitohormonas en la célula.

• El período crítico es la recuperación de una planta completa a partir de una célula transformada (Goodman et al. .. tomate. 1987) • Se ha empleado con éxito en tabaco. soja y en petunia. Una gran desventaja es que no es activo en monocotiledóneas.

.• Aplicaciones mas importantes: • Transferencia de genes que anulan el efecto de herbicidas • Transferencia de genes que codifican proteínas obtenidas de Bacillus thuringiensis para prevenir el ataque de insectos.

. estas son predecibles.Ventaja Del Método Agrobacterium • Luego de una selección para obtener plantas regeneradas con las características deseadas. heredables y estables.

Vector de Transformación Gen Quimérico P-Gen de interés-T-P-Gen Marcador-T P: Promotor T: Terminador .

.

.

Maíz Bt Gen Bt Gen marcador Gen Bt + Marcador .

Inserción en células Microproyectiles .

Selección de células Medio de cultivo mas antibiótico .

Selección de células Medio de cultivo mas antibiótico Las células no transformadas mueren .

De célula a planta Cultivo de Tejidos Planta Transgénica .

Logros en Plantas Transgénicas .

Resistencia a Herbicidas • El glifoxato actúa sobre el ácido shikimico • Bacteria que producía una enzima resistente (no inhibida por el glifoxato) • La enzima se incorporó a plantas • El maíz además posee otra enzima que degrada al glifoxato .

.

Plantas de Canola Resistentes a Salinidad .

Resistencia a Virosis • Se utilizan virus atenuados (protección cruzada) • No hay plantas liberadas en Argentina • Se basa en la producción de una proteína viral que impide que el gen del virus se exprese • La planta elimina la secuencia de RNA viral .

Nuevas plantas • Alto contenido de oleico en canola y en soja para industria. • Soja con alto contenido de isoflavonoides (prevención del cáncer). . • Maíz con alta digestibilidad y con más nutrientes para alimentación animal. frutillas y tomates. • Papas con alto contenido de almidón • Mayor duración en bananas.

.

bacterias. u otras plantas • Efectos perjudiciales sobre otras eespecies y sobre el ambiente .Potenciales riesgos asociados con las plantas transgénicas • Introducción de compuestos alergénicos o proteínas dañinas en alimentos. • Transferencia de genes hacia virus.

Adición del gen Terminator a plantas transgénicas Gen 1 Promotor Tardío Gen 2 Bloqueador Gen 3 Toxina Semillas Viables .

Adición del gen Terminator a plantas transgénicas Inductor químico Gen 1 Promotor Tardío Gen 1 Promotor Tardío Gen 2 Bloqueador Gen 3 Toxina Gen 3 Toxina Muerte del Embrión .

Marcadores Moleculares Selección Asistida .

Que Son Los Marcadores Moleculares? • Una secuencia detectable de DNA o una proteína cuya herencia puede ser monitoreada .

Aplicaciones de los marcadores moleculares en el mejoramiento genético • Análisis de variabilidad genética • Marcadores ligados a genes de interés agronómico • Marcadores ligados a genes de resistencia a enfermedades • Marcadores ligados a caracteres de herencia cuantitativa (QTL) .

.

Mutation Breeding. In: Introduction to Plant Breeding II: Genetic Variation. Jacobsen. Dep. M. 123 pp. Wageningen. of Plant Breeding. Part IV: Genetic Modification in Vitro.Bibliografía Cubero. A.. J. The Netherlands. Mundiprensa.. Van Harten. In: Introduction to Plant Breeding II. 1999. Protoplastfusion. 1991.. Wageningen Agricultural University. Dep. Wageningen Agricultural University. 1993. E. Introducción al mejoramiento genético vegetal. . The Netherlands. Genetic Variation. Wageningen. Madrid. of Plant Breeding. 365 pp. 84 p.

You're Reading a Free Preview

Descarga
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->